Nghiên cứu đánh giá chất lượng và độ ổn định nguyên liệu Pidotimod tổng hợp tại Việt Nam

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá chất lượng và độ ổn định của nguyên liệu pidotimod. Nguyên liệu là pidotimod tổng hợp tại Việt Nam do Trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp. Trang thiết bị và hóa chất dùng cho nghiên cứu đã được hiệu chuẩn theo ISO/IEC 17025.

TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG VÀ ĐỘ ỔN ĐỊNH NGUYÊN LIỆU PIDOTIMOD TỔNG HỢP TẠI VIỆT NAM Quách Thị Hà Vân*; Nguyễn Hồng Hải* Nguyễn Hải Nam**; Trần Việt Hùng*** TÓM TẮT Mục tiêu: đánh giá chất lượng độ ổn định nguyên liệu pidotimod Nguyên liệu: pidotimod tổng hợp Việt Nam Trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp Trang thiết bị hóa chất dùng cho nghiên cứu hiệu chuẩn theo ISO/IEC 17025 Phương pháp: đánh giá chất lượng theo tiêu chuẩn sở (TCCS) xây dựng nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão o hóa cấp tốc (nhiệt độ 40  C độ ẩm tương đối 75  5%) Kết kết luận: chất lượng lô sản phẩm đạt yêu cầu theo TCCS Sản phẩm ổn định sau 12 tháng bảo quản theo dõi điều kiện lão hóa cấp tốc Như vậy, lý thuyết, nguyên liệu pidotimod ổn định o 24 tháng điều kiện bảo quản thường (nhiệt độ 25 C độ ẩm tương đối 75%) * Từ khóa: Pidotimod; Độ ổn định; Tiêu chuẩn chất lượng Evaluation of Quality and Stability of Pidotimod Synthetic Materials in Vietnam Summary Objectives: To test the quality and stability of pidotimod materials Materials: Pidotimod synthesized in Vietnam was supplied by the Hanoi University of Pharmacy The equipment and chemicals used for the study met the criteria according to ISO/IEC 17025 Methods: the quality was tested according to basic standard and stability was studied in aging-out conditions o (temperature 40  C and relative humidity 75  5%) Results and conclusion: The quality of the batches was good according to basic standard Products are stable after 12 months of storage and are monitored in aging-out conditions Thus, theoretically, pidotimod raw material will be o stable over 24 months at ordinary storage conditions (temperature 25 C and relative humidity 75%) * Key words: Pidotimod; Stability; Standard criteria ĐẶT VẤN ĐỀ Pidotimod thuốc có tác dụng tăng cường miễn dịch tổng hợp từ cuối năm 1980 [1] Trên thị trường Việt Nam có thuốc tăng cường miễn dịch Thuốc sử dụng nhiều interferon giá cao Chế phẩm axít (pidotimod) 400 mg/7 ml nhập với mức giá cao Tuy nhiên, Đại học Dược Hà Nội * Học viện Quân y ** Trường Đại học Dược Hà Nội *** Viện Kiểm nghiệm Thuốc TW Người phản hồi (Corresponding): Quách Hà Vân (quachhavan@gmail.com) Ngày nhận bài: 25/08/2015; Ngày phản biện đánh giá báo: 24/12/2015 Ngày báo đăng: 29/12/2015 62 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 xây dựng quy trình tổng hợp tinh chế pidotimod với độ tinh khiết đạt 98,0% Để nguyên liệu đưa vào sản xuất nhằm tạo dạng bào chế thích hợp [6], cho kết điều trị an tồn [8] chất lượng nguyên liệu vấn đề quan tâm hàng đầu [2] Vì vậy, chúng tơi tiến hành kiểm tra chất lượng [5] đánh giá độ ổn định nguyên liệu pidotimod theo TCCS xây dựng NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu thiết bị * Nguyên liệu: - Pidotimod tổng hợp Bộ mơn Hóa dược, Trường Đại học Dược - Chất chuẩn: pidotimod (chuẩn nhà sản xuất SICHUAN TONGSHENG AMINO ACID CO., LTD cung cấp, hàm lượng: 99,0%) * Thiết bị, hóa chất: dùng cho nghiên cứu hiệu chuẩn theo ISO/IEC 1702 Phƣơng pháp nghiên cứu * Kiểm tra chất lượng: Mẫu thử đánh giá theo TCCS xây dựng [3] với tiêu: - Tính chất: + Cảm quan: bột kết tinh màu trắng trắng ngà + Độ tan: tan dimethyl formamid, nước Rất tan ethanol methanol - Định tính: ứng với thời gian lưu píc sắc ký đồ dung dịch pidotimod chuẩn - Hàm lượng nước: không 0,5%, thử theo DĐVN IV, phụ lục 10.3, phương pháp Karl Fischer, dùng 1,000 g chế phẩm - Độ màu sắc dung dịch: + Phương pháp thử theo DĐVN IV, phụ lục 9.3 + Dung dịch S: hòa tan 0,5 g chế phẩm 50 ml nước khơng có carbon dioxyd Dung dịch S phải không đậm màu dung dịch màu mẫu VN6 - pH: thử theo DĐVN IV, phụ lục 6.2 Sử dụng dung dịch S: pH dung dịch S phải từ 2,0 - 3,0 - Điểm chảy: từ 193 - 195oC, thử theo DĐVN IV, phụ lục 6.7, phương pháp Sấy chế phẩm 105oC Để nguội bình hút ẩm tiến hành đo điểm chảy [5] - Năng suất quay cực: từ -137o đến -141o, thử theo DĐVN IV, phụ lục 6.4 Pha dung dịch mẫu thử có nồng độ 2% axít hydrocloric 5N - Kim loại nặng: khơng q 20 ppm Phương pháp thử theo DĐVN IV, phụ lục 9.4 Lấy 1,0 g chế phẩm tiến hành thử theo phương pháp Dùng ml dung dịch chì mẫu 10 ppm để chuẩn bị mẫu đối chiếu - Tạp chất liên quan: tạp không 0,5%, tổng tạp: không 1,0% Phương pháp HPLC theo TCCS + Phổ hồng ngoại chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại pidotimod chuẩn - Giới hạn dung môi tồn dư: + Dung dịch thử (phần định lượng) phải cho píc có thời gian lưu tương + Dicloromethan: không 600 ppm + Ethanol: không 5.000 ppm + Triethylamin: khơng q 320 ppm 63 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 Phương pháp: thử theo DĐVN IV, phụ lục 10.14 Xác định dung môi tồn dư, tiến hành phương pháp sắc ký khí (DĐVN IV, phụ lục 5.2) với kỹ thuật tiêm pha tĩnh (static head-space injection) Yêu cầu kết quả: diện tích píc trung bình píc tương ứng với píc triethylamin sắc ký đồ dung dịch thử không lớn diện tích píc triethylamin trung bình sắc ký đồ dung dịch chuẩn - Định lượng: chế phẩm phải chứa từ 96,0 - 102,0% C9H12N2O4S, tính theo chế phẩm khan Phương pháp HPLC (DĐVN IV, phụ lục 5.3) theo TCCS - Điều kiện sắc ký [7]: + Ct: Rp 18 - àm (4,6 ì 250 mm) + Pha động: dung dịch đệm - Acetonitril (95:5) + Detector: 210 nm + Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Trong đó: ST; SC: diện tích píc pidotimod sắc ký đồ dung dịch thử dung dịch chuẩn mT; mC: khối lượng cân mẫu thử mẫu chuẩn (mg) C: hàm lượng pidotimod chuẩn (%) a: hàm lượng nước chế phẩm (%) * Phương pháp đánh giá độ ổn định: - Độ ổn định nghiên cứu theo hướng dẫn ICH Harmonised Tripartite Guideline - International Conference on Harmanisation of Technical Requirements for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use [4] Cụ thể: + Nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão hóa: nhiệt độ 40°C độ ẩm 75% thời gian từ - 12 tháng + Định kỳ đánh giá chất lượng: lấy mẫu đánh giá thời điểm 6, 9, 12 tháng + Tuổi thọ dự đoán mẫu nghiên cứu 25oC tính theo cơng thức: + Thể tích tiêm: 20 µl + Nhiệt độ cột: 30 C Trong đó: (dung dịch đệm phosphat: hòa tan 0,5 g C: tuổi thọ thuốc (tháng) natri heptan-1-sulfonat 1.000 ml dung dịch kali dihydro phosphat 0,01 M Chỉnh pH 1,5 axít phosphoric 85%) Hàm lượng (%) pidotimod tính theo chế phẩm khan tính cơng thức: ST mC 100   C X%  SC mt (100  a) 64 C = K.Ctn + C0 Ctn: tuổi thọ thực nghiệm mẫu bảo quản nhiệt độ thường (tháng) Co: khoảng thời gian từ ngày xuất xưởng đến ngày bắt đầu bảo quản thực nghiệm (tháng) K = (với nhiệt độ bảo quản thực nghiệm 40oC nhiệt độ bảo quản thường 25oC) TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Kết kiểm tra chất ƣợng Bảng 1: Kết kiểm tra chất lượng nguyên liệu pidotimod Kết Yêu cầu Tính chất: bột kết tinh màu trắng trắng ngà Lô 614 Lô 714 Lô 814 Đạt Đạt Đạt Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đúng Đạt (0,12%) Đạt (0,13%) Đạt (0,14%) Đạt Đạt Đạt Đạt (2,3) Đạt (2,2) Đạt (2,2) Định tính: - Phổ hồng ngoại chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại pidotimod chuẩn - Dung dịch thử (phần định lượng) phải cho píc có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu píc sắc ký đồ dung dịch chuẩn Hàm lượng nước: không 0,5% Độ màu sắc dung dịch: dung dịch phải không đậm màu dung dịch màu mẫu VN6 pH: 2,0 - 3,0 o o Điểm chảy: 193 - 195 C Năng suất quay cực: -137 đến -141 Đạt (194,6 C) o o o Đạt (194,6 C) o o Đạt (194,5 C) o Đạt (-138,9 ) Đạt (-138,6 ) Đạt (-138,6 ) Kim loại nặng Đạt Đạt Đạt Tạp chất liên quan: Đạt Đạt Đạt (không xuất tạp) (không xuất tạp) (không xuất tạp) - Ethanol: không 5.000 ppm Đạt Đạt Đạt - Dicloromethan: không 600 ppm Đạt Đạt Đạt - Triethylamin: không 320 ppm Đạt Đạt Đạt Định lượng: chế phẩm phải chứa từ 96,0 102,0% C9H12N2O4S tính theo chế phẩm khan Đạt Đạt Đạt (99,7%) (99,8%) (99,7%) - Từng tạp: không 0,5% - Từng tạp: không 1,0% Dung môi tồn dư: Kết cho thấy 03 lô nguyên liệu pidotimod Bộ mơn Hố dược, Trường Đại học Dược Hà Nội tổng hợp đạt yêu cầu chất lượng theo TCCS xây dựng 65 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 Kết đánh giá độ ổn định Bảng 2: Kết theo dõi độ ổn định nguyên liệu pidotimod tổng hợp (lô 614) Thời gian bảo quản (tháng) Yêu cầu Tính chất: bột kết tinh màu trắng trắng ngà Định tính: dương tính Hàm lượng nước: khơng q 0,5% Độ màu sắc dung dịch: dung dịch phải không đậm màu dung dịch màu mẫu VN6 pH: 2,0 - 3,0 o 12 Đạt Đạt Đạt Đúng Đúng Đúng Đạt (0,12%) Đạt (0,11%) Đạt (0,09%) Đạt Đạt Đạt Đạt (2,3) Đạt (2,3) o o Đạt (2,3) Điểm chảy: 193 - 195 C Đạt (194,6 C) Đạt (194,1 C) Đạt (194,2oC) Năng suất quay cực: -137 đến -141o Đạt (-138,9o) Đạt (-138,3o) Đạt (-138,5o) Đạt Đạt Đạt (không xuất tạp) (không xuất tạp) (không xuất tạp) - Ethanol: không 5.000 ppm Đạt Đạt Đạt - Dicloromethan: không 600 ppm Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Tạp chất liên quan: - Từng tạp: không 0,5% - Tổng tạp: không 1,0% Dung môi tồn dư: - Triethylamin: không 320 ppm Định lượng: chế phẩm phải chứa từ 96,0 - 102,0% C9H12N2O4S tính theo chế phẩm khan Đạt Đạt Đạt (99,7%) (99,3%) (98,9%) Bảng 3: Kết theo dõi độ ổn định nguyên liệu pidotimod tổng hợp (lô 714) Thời gian bảo quản (tháng) Yêu cầu 12 Tính chất: bột kết tinh màu trắng trắng ngà Đạt Đạt Đạt Đúng Đúng Đúng Đạt (0,13%) Đạt (0,14%) Đạt (0,09%) Đạt Đạt Đạt Định tính: dương tính Hàm lượng nước: khơng q 0,5% Độ màu sắc dung dịch: dung dịch phải không đậm màu dung dịch màu mẫu VN6 pH: 2,0 - 3,0 o Đạt (2,2) Đạt (2,2) o o Đạt (2,2) Điểm chảy: 193 - 195 C Đạt (194,6 C) Đạt (194,0 C) Đạt (194,3oC) Năng suất quay cực: -137o đến -141o Đạt (-138,6o) Đạt (-138,2o) Đạt (-138,1o) 66 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 Đạt Đạt Đạt (không xuất tạp) (không xuất tạp) (không xuất tạp) - Ethanol: không 5.000 ppm Đạt Đạt Đạt - Dicloromethan: không 600 ppm Đạt Đạt Đạt - Triethylamin: không 320 ppm Đạt Đạt Đạt Tạp chất liên quan: - Từng tạp: không 0,5% - Tổng tạp: không 1,0% Dung môi tồn dư: Định lượng: chế phẩm phải chứa từ 96,0 102,0% C9H12N2O4S tính theo chế phẩm khan Đạt Đạt Đạt (99,8%) (99,2%) (98,8%) Bảng 4: Kết theo dõi độ ổn định nguyên liệu pidotimod tổng hợp (lô 814) Thời gian bảo quản (tháng) Yêu cầu Tính chất: bột kết tinh màu trắng trắng ngà Định tính: dương tính Hàm lượng nước: khơng q 0,5% Độ màu sắc dung dịch: dung dịch phải không đậm màu dung dịch màu mẫu VN6 pH: 2,0 - 3,0 o 12 Đạt (bột kết tinh màu trắng) Đạt (bột kết tinh màu trắng) Đạt (bột kết tinh màu trắng ngà) Đúng Đúng Đúng Đạt (0,14%) Đạt (0,14%) Đạt (0,09%) Đạt Đạt Đạt Đạt (2,2) Đạt (2,2) o o Đạt (2,2) Điểm chảy: 193 - 195 C Đạt (194,5 C) Đạt (194,1 C) Đạt (194,2oC) Năng suất quay cực: -137o đến -141o Đạt (-138,6o) Đạt (-138,1o) Đạt (-138,1o) Đạt Đạt Đạt Tạp chất liên quan: - Từng tạp: không 0,5% (không xuất tạp) (không xuất tạp) (không xuất tạp) - Tổng tạp: không 1,0% Dung môi tồn dư: - Ethanol: không 5.000 ppm Đạt Đạt Đạt - Dicloromethan: không 600 ppm Đạt Đạt Đạt - Triethylamin: không 320 ppm Đạt Đạt Đạt Định lượng: chế phẩm phải chứa từ 96,0 - 102,0% C H12 N2 O4 S tính theo chế phẩm khan Đạt Đạt Đạt (99,7%) (99,3%) (98,9%) Kết theo dõi độ ổn định cho thấy: sau 12 tháng nghiên cứu điều kiện lão hóa cấp tốc, tiêu chuẩn: tính chất, hàm lượng nước, pH, điểm chảy, suất quay cực, tạp chất liên quan hàm lượng lô sản phẩm tổng hợp gần không thay đổi so với ban đầu đạt theo yêu cầu TCCS 67 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 Dựa theo cơng thức tính tuổi thọ dự đoán mẫu nghiên cứu 25oC, với Co = 0, tính tuổi thọ dự đốn sản phẩm 24 tháng Tuy nhiên, theo kết nghiên cứu, tính chất lý hóa sản phẩm không thay đổi 12 tháng (theo dõi điều kiện lão hóa cấp tốc) nên chúng tơi dự đốn nguyên liệu pidotimod ổn định 24 tháng điều kiện bảo quản thường (nhiệt độ 25oC độ ẩm tương đối 75%) KẾT LUẬN Kết đánh giá chất lượng nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão hóa cấp tốc (nhiệt độ 40  2oC độ ẩm tương đối 75  5%) nguyên liệu pidotimod tổng hợp Trường Đại học Dược Hà Nội, rút số nhận xét: - Chất lượng lô sản phẩm đạt yêu cầu theo TCCS xây dựng - Sản phẩm ổn định sau 12 tháng bảo quản, theo dõi điều kiện lão hóa cấp tốc Như vậy, tuổi thọ dự kiến nguyên liệu pidotimod ổn định 24 tháng điều kiện bảo quản thường (nhiệt độ 25oC độ ẩm tương đối 75%) 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn Miễn dịch Sinh lý bệnh Miễn dịch học Trường Đại học Y Hà nội Nhà xuất Y học 1997 Bộ hồ sơ kỹ thuật chung ASEAN (ACTD) hướng dẫn kỹ thuật hồ sơ đăng ký thuốc 2010 Bộ Y tế Dược điển Việt Nam IV ICH Harmonised Tripartite Guideline - International Conference on Harmanisation of Technical Requirements for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use 2010 Crimella T, Orlandi R, Bocchiola G, Anders U, Stradi R Analytical and chemical profile of pidotimod Arzeim-Forsch/Drug Res 1994, 44 (II), 12A, pp.1405-1410 Manzardo S, Falcone A et al General pharmacology of Pidotimod and testing for drug interactions Arzeim-Forsch/Drug Res 1994, 44 (II), pp.1441-1447 Mailland F, Coppi G, Silingardi S Pharmacokinetics and oral bioavailability of pidotimod in humans Arzneimittelforschung Arzneimittelforschung 1994, 44 (12A), pp.14651459 Spotti D, Biffi M, Coppi G, Silingardi S, Mailland F Pharmacokinetics of pidotimod in elderly volunteers and in renal failure patients Arzneimittelforschung 1994, 44 (12A), pp.14701472  ... kiểm tra chất lượng [5] đánh giá độ ổn định nguyên liệu pidotimod theo TCCS xây dựng NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu thiết bị * Nguyên liệu: - Pidotimod tổng hợp Bộ... ngun liệu pidotimod ổn định 24 tháng điều kiện bảo quản thường (nhiệt độ 25oC độ ẩm tương đối 75%) KẾT LUẬN Kết đánh giá chất lượng nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão hóa cấp tốc (nhiệt độ 40... thể: + Nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão hóa: nhiệt độ 40°C độ ẩm 75% thời gian từ - 12 tháng + Định kỳ đánh giá chất lượng: lấy mẫu đánh giá thời điểm 6, 9, 12 tháng + Tuổi thọ dự đoán mẫu nghiên