Thông báo bốn bệnh nhân sán máng và xác định loài sán máng schistosoma hematobium ở Việt Nam bằng hình thái học và sinh học phân tử

Bốn bệnh nhân nhiễm sán máng Schistosoma hematobium từ Angola về Việt Nam đều có triệu chứng đái máu, trong đó có 1 bệnh nhân bị chẩn đoán nhầm với ung thư và bị cắt bỏ bàng quang. Trứng sán thu thập từ nước tiểu 4 bệnh nhân được xác định là loài Schistosoma hematobium bằng phương pháp hình thái học và sinh học phân tử. Đây là những bệnh nhân sán máng lần đầu tiên được thông báo ở Việt Nam.

TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC THƠNG BÁO BỐN BỆNH NHÂN SÁN MÁNG VÀ XÁC ĐỊNH LOÀI SÁN MÁNG Schistosoma hematobium Ở VIỆT NAM BẰNG HÌNH THÁI HỌC VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ Nguyễn Văn Đề1, Lê Văn Duyệt2, Phạm Ngọc Minh1, Radsapho Boua Saykham3 Trường Đại học Y Hà Nội; 2Bệnh viện Nhiệt đới quốc gia; 3Bộ Y tế Lào Sán máng Schistosoma ký sinh tĩnh mạch cửa gây tổn thương hệ tiêu hóa, gan, lách tĩnh mạch bàng quang gây tổn thương hệ tiết niệu Angola vùng dịch tễ sán máng Schistosoma hematobium gây tổn thương hệ tiết niệu có bàng quang Bốn bệnh nhân nhiễm sán máng Schistosoma hematobium từ Angola Việt Nam có triệu chứng đái máu, có bệnh nhân bị chẩn đốn nhầm với ung thư bị cắt bỏ bàng quang Trứng sán thu thập từ nước tiểu bệnh nhân xác định lồi Schistosoma hematobium phương pháp hình thái học sinh học phân tử Đây bệnh nhân sán máng lần thông báo Việt Nam Từ khóa: Đái máu, sán máng, Schistosoma hematobium I ĐẶT VẤN ĐỀ mạch bàng quang gây tổn thương bàng Sán máng Schistosoma ký sinh tĩnh quang; S japonicum, S mekongi, S intercala- mạch, chúng đẻ trứng trứng tum, S malayensisvà S mansoni chủ yếu ký xuyên vào ruột (đối với loài ký sinh tĩnh sinh tĩnh mạch cửa gây tổn thương hệ mạch cửa) để môi trường theo phân thống gan - mật, lách, ruột [1; 2] chui vào bàng quang (đối với loài ký sinh tĩnh mạch bàng quang) để theo nước tiểu Trứng sán máng xuống nước nở ấu trùng lơng xâm nhập vào ốc thích hợp để phát triển thành ấu trùng đuôi chẽ, ấu trùng Bệnh sán máng lưu hành 78 nước giới, 52 nước có bệnh sán máng lưu hành nặng vừa với 200 triệu người mắc bệnh có khoảng 20.000.000 người chết hàng năm bệnh sán máng Có 61,6 xâm nhập vào người qua da người triệu người điều trị sán máng 258 triệu tiếp xúc với nước [1] người điều trị dự phòng sán máng năm Bệnh sán máng (Schistosomiasis) 2014 [2] Đặc biệt nước có chung đường biết đến từ lâu qua việc phát trứng biên giới với Việt Nam Trung Quốc, Lào sán máng bị vơi hóa xương chậu Campuchia có bệnh sán máng lưu xác ướp người Ai Cập Trong số 19 loài sán hành cao Tại Trung Quốc, lưu hành sán máng thuộc giống Schistosoma có lồi máng S.japonicum với 900.000 người nhiễm, xác định gây bệnh người Schisto- Lào lưu hành sán máng S mekongi với tỉ lệ soma hematobium chủ yếu ký sinh tĩnh nhiễm vùng đảo Khong 14% Campuchia lưu hành sán máng S mekongi Địa liên hệ: Nguyễn Văn Đề, Bộ môn Ký Sinh trùng, Trường Đại học Y Hà Nội Email: ngvdeyhn@gmail.com Ngày nhận: 08/10/2018 Ngày chấp thuận: 10/12/2018 150 với tỉ lệ nhiễm Kratie 11,2% [3 - 5] Ở Việt Nam chưa có thơng báo bệnh sán máng người, xác định có ốc Tricular aperta, Oncomelania ốc Manillgila TCNCYH 117 (1) - 2019 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC spp trung gian truyền bệnh sán máng tương cytochrome C oxidase subunit (cox1) thuộc tự loài ốc Lào, Campuchia Trung hệ gen ty thể Quốc [6; 7;] Tuy vậy, cần đề phòng Sinh học phân tử theo quy trình kỹ thuật ca bệnh ngoại lai bốn trường hợp PCR bao gồm tách chiết DNA tổng số, chọn báo từ Angola vào Việt Nam mồi đặc hiệu (primer), chạy PCR theo quy Công bố nhằm mục tiêu mô tả triệu trình, giải trình tự gen, so sánh chuỗi gen chứng định danh lồi sán máng S chuẩn GenBank xác định tỷ lệ tương haematobium để cảnh báo cho bác sĩ lâm đồng nucleotide chủng sán máng sàng dịch tễ nghiên cứu với chủng giới sử dụng phần mềm ATGC 7.02 Clustal W Xác định II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP vị trí phả hệ sán máng nghiên cứuvới chủng sán máng khác Đối tượng GenBank sử dụng phần mềm MEGA Bốn bệnh nhân làm việc từ Angola trở Việt Nam năm 2014 - 2015 bao gồm hai Hải 6.1 Đạo đức nghiên cứu Dương hai Nghệ An Các bệnh nhân đồng ý tham gia nghiên Địa điểm thời gian nghiên cứu Nghiên cứu thực Bộ môn Ký cứu đảm bảo bí mật cá nhân cho họ III KẾT QUẢ sinh trùng, thời gian tháng năm 2016 Phương pháp Mô tả bệnh nhân - Lập bệnh án mô tả ca bệnh với triệu Bốn bệnh nhân nam giới, bệnh nhân chứng lâm sàng - Xét nghiệm cơng thức máu xét nghiệm nước tiểu tìm trứng sán máng theo phương pháp ly tâm lắng cặn - Chụp ảnh trứng sán qua kính hiển vi đo kích thước vi mét thị kính - Định danh lồi sán hình thái học sinh học phân tử sử dụng thị di truyền gen Số thứ tự bệnh nhân Đái máu Đau tức hạ vị thứ 30 tuổi bệnh nhân thứ hai 49 tuổi quê xã Diễn Hoa, Diễn Châu, Nghệ An Bệnh nhân thứ ba 43 tuổi quê xã Quang Minh, Gia Lộc, Hải Dương Bệnh nhân thứ tư 27 tuổi xã Cổ Thành, Chí Linh, Hải Dương Cả bệnh nhân lao động Angola năm 2015 đánh bắt cá vào ngày nghỉ cuối tuần Đầu năm 2016 Việt Nam có triệu chứng đái máu đau tức vùng hạ vị Trứng sán nước tiểu Eo tăng Chẩn đoán K bang quang + + + + - + + + + - + + + + + + + + + - * Eo = Bạch cầu toan; C/đoán K bq = chẩn đoán ung thư bàng quang TCNCYH 117 (1) - 2019 151 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Trong số bệnh nhân có đái máu, đau tức hạ vị, bạch cầu toan tăng cao tìm thấy trứng sán nước tiểu; có bệnh nhân (bệnh nhân thứ 3) vào bệnh viện K chẩn đoán ung thư bàng quang mổ cắt bàng quang, sau đến chuyên gia Ký sinh trùng tìm trứng sán máng nước tiểu Tất điều trị khỏi thuốc praziquantel Định loại ký sinh trùng - Định loại hình thái học: Trứng sán có kích thước165 x 65 mcm, có gai cuối chứa ấu trùng (miracidium) bên Đây hình thái trứng sán máng Schistosoma hematobium (hình 1) Hình Trứng sán máng Schistosoma hematobiumthu thập từ bệnh nhân (1 - 4) Định loại sinh học phân tử Bảng Giải trình tự đoạn gen cytochrome C oxidase subunit (cox1) loài Schistosoma Việt Nam* so sánh với chuỗi gen Schistosoma haematobium GenBank SchiVN Vietnam Người 180 bp Schistosoma haematobium - NC Schi1 Gabon - 180 bp Schistosoma haematobium KT354659 Mone et al, 2015 Schi2 Gabon - 180 bp Schistosoma haematobium KT354660 Mone et al, 2015 Schi3 Benin - 180 bp Schistosoma haematobium KT354661 Mone et al, 2013 Schi4 Kenya - 180 bp Schistosoma haematobium JQ397386 Webster et al, 2012 Schi5 South Africa - 180 bp Schistosoma haematobium JQ397397 Webster et al, 2012 Schi6 Mauritius - 180 bp Schistosoma haematobium JQ397398 Webster et al, 2013 Schi7 Tanzania - 180 bp Schistosoma haematobium GU257354 Webster et al, 2013 Schi8 Tanzania - 180 bp Schistosoma haematobium GU257355 Webster et al, 2009 Ghi chú: * Kết nghiên cứu 152 TCNCYH 117 (1) - 2019 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Bảng Tỷ lệ tương đồng nucleotide gen cox1 Schistosoma Việt Nam so với Schistosoma haematobium GenBank SchiVN Schi1 Schi2 Schi3 Schi4 Schi5 Schi6 Schi7 Schi8 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 SchiVN Schi1 99 Schi2 99 99 Schi3 99 99 99 Schi4 99 99 99 99 Schi5 99 99 99 99 99 Schi6 99 99 99 99 99 99 Schi7 99 99 99 99 99 99 99 Schi8 99 99 99 99 99 99 99 99 99 SchiVN Schistosoma Việt Nam; Schi1, Schi2, Schistosoma haematobium Gabon (GenBank số: KT354659 KT354660); Schi3 Schistosoma haematobium Benin (GeneBank số: KT354661), Schi4 Schistosoma haematobium Kenya (GeneBank số: JQ397386), Schi5 Schistosoma haematobiumNam Phi (GeneBank number: JQ397397), Schi6 Schistosoma haematobium Mauritius (GeneBank số: JQ397398), Schi7, Schi8 Schistosoma haematobium Tanzania (GeneBank số: GU257354, GU257355) Tỷ lệ tương đồng nucleotide sán máng Việt Nam so với chủng Schistosoma haematobium quốc tế 99% Hình2 So sánh 180 nucleotide chuỗi gen cytochrome C oxidase subunit (cox1) Schistosoma Việt Nam (SchiVN) với chuỗi gen S haematobium khác * S haematobium từ Gabon (Schi1 Schi2), từ Benin (Schi3), từ Kenya (Schi4), từ Nam Phi (Schi 5), từ Mauritius (Schi6), từ Tanzania (Schi7 Schi8) Các nucleotide giống với chủng Việt Nam biểu thị dấu chấm, khác biểu thị tên nucleotide TCNCYH 117 (1) - 2019 153 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Hình Vị trí Schistosoma haematobium Việt Nam phả hệ so với loài sán máng khác GenBank sử dụng Neighbor-Joining (NJ) với MEGA5.4 (Tamura et al., 2004) * SchiVN = Schistosoma Việt Nam; S haematobium khác (GenBank số: KT354659, KT354660, KT354661, JQ397386, JQ397397, JQ397398, GU257354, GU257355) Schistosoma japonicum từTrung Quốc (GenBank số: AM689521.1, AM689522.1, AM689523.1, AM689524.1, JQ004397.1, JQ004398.1 U22161.1), Schistosoma mansoni từ Ghana (GenBank số: AY896636.1, AY896640.1, AY896643.1, AY896645.1, AY896651.1, AY896652.1, AY896653.1) Schistosoma rodhaini từ Kenya (GenBank số: AY446142.1 AY446143.1) Schistosoma sinensium từ Trung Quốc (GenBank số: AY090786.1) Schistosoma intercalatum (GenBank số: AJ519515.1, AJ519519.1, U22160.1) Schistosoma guineensis từ Cameroon 154 TCNCYH 117 (1) - 2019 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC (GenBank số: AJ519517.1, AJ519522.1 AJ519523.1) Schistosoma adwardiense từ Uganda (GenBank số: AY197347.1) Schistosoma hippopotami từ Uganda (GenBank số: AY197346.1) Trong phả hệ, sán máng nghiên cứu nằm nhóm với Schistosoma haematobium giới IV BÀN LUẬN chuẩn GenBank (bảng 1, 2) kết Cả bệnh nhân sán máng schistosomiasis cho thấy có 99% nucleotide tương đồng (bảng cơng bố báo nhiễm 2, hình 2) Như vậy, loài sán máng sán máng Schistosoma hematobium từ An- nghiên cứu Schistosoma haematobium gola tiếp xúc với nước có mầm bệnh Trong phả hệ (hình 2) cho thấy rõ vị trí đánh bắt cá sau trở Việt Nam Schistosoma haematobium Việt Nam phát bệnh (biểu triệu chứng lâm sàng) Schistosomiasis gây bệnh Schistosoma hematobium bệnh ký sinh trùng lưu hành nặng Angola Đây bệnh gây tổn thương nặng nề hệ tiết niệu, đặc biệt bàng quang Nghiên cứu Monica cộng cho thấy điều tra 300 người tuổi từ 15 đến 75 năm 2017 - 2018 cho thấy tỷ lệ nhiễm sán máng S haematobium 71,7% (215/300) Triệu chứng chủ yếu bao gồm chứng đái khó (91,2%), đau vùng hạ vị (88,7 %) đái máu (87,1%) Schistosoma haematobium V KẾT LUẬN Bốn bệnh nhân sán máng Schistosoma haematobium gây nên trường hợp bệnh ngoại lai từ Angola bệnh sán máng xác định Việt Nam Triệu chứng chủ yếu tức hạ vị đái máu, có trứng sán nước tiểu bạch cầu toan tăng cao Trứng sán xác định lồi hình thái học sinh học phân tử Một bệnh nhân chẩn đoán ung thư bàng quang mổ cắt bàng quang bệnh ký sinh trùng phổ biến với 100 triệu Lời cám ơn người mắc, đặc biệt nước phát triển, chúng gây bệnh đường tiết niệu có liên quan đến ung thư bàng quang [8; 9] Trong nghiên cứu chúng tôi, bệnh nhân có tức vùng hạ vị đái máu, đặc biệt có trứng sán máng nước tiểu bạch cầu toan tăng cao, có bệnh nhân chẩn đoán ung thư bàng quang cắt bỏ bàng quang (đây vấn đề cần lưu ý) Trứng sán máng thu thập từ bệnh nhân xác định hình thái học (hình 1) thẩm định sinh học phân tử làSchistosoma haematobium Chỉ thị di truyền sử dụng cox1 (cytochrome C oxidase subunit 1) so sánh chủng Việt Nam với chủng TCNCYH 117 (1) - 2019 Kết nghiên cứu có tài trợ Quỹ phát triển Khoa học Công nghệ quốc gia (Nafosted) đề tài mã số 108-05-2017.301 TÀI LIỆU THAM KHẢO CDC (2017) Schistosomiasis infection.https://www.cdc.gov/dpdx/schistosomiasis/ index.html WHO (2016) Fact Sheet Updated February 2016 Attwood SW (2004) Schistosomes in the Me Kong river of Cambodia: the detection of Schistosoma mekongi in a natural population of snails and observations on the interme155 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC diate host's distribution Ann Trop Med Parasi- Nguyễn Văn Đề (2000) Thông báo tol, 3, 221 - 300 Attwood SW, Fatih FA, Upatham ES bước đầu số loài ốc điểm điều tra sán máng Việt Nam Thơng tin phòng, (2008) DNA-sequence variation among Schistosoma mekongi populations and related taxa; Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung phylogeography and the current distribution of ương, 1, 73 - 75 chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng- Asian schistosomiasis PLoS Negl Trop Dis, (3): e200 Mark Hofstetter (1981) Infection with Schistosoma mekongi in Southeast Asian Refugees Journals Medicine The Journal of Infectious Diseases, 144(5), 44 - 46 Botelho MC., Figueiredo J., Alves H (2015) Bladder cancer and urinary Schistosomiasis in Angola J Nephrol Res, 1(1), 22 24 Birgitte Bruun Jens Aagaard-Hansen (2008) The social context of schistosomiasis Đặng Tuấn Đat (2001) Bước đầu điều tra bệnh sán máng (Schistosomiasis) Tây and its control World Health Organization, Nguyên Tạp chí Y học Dự phòng, 4, 30 - 34 2008ISBN9241597186, 9789241597180: 39 Summary REPORT FOUR SCHISTOSOMIASIS PATIENTS AND IDENTIFICATION SPECIES OF Schistosoma hematobium IN VIETNAM BY MORPHOLOGY AND MOLECULAR METHODS Schistosoma lives as a parasite in the portal vein, causing intestinal, liver and spleen issues;it also can live in the vein of the urinary bladder causing lesions of the urinary system Angola is an endemic area of Schistosoma haematobium, which causes lesions of the urinary system, including the urinary bladder Four Vietnamese patients infected with Schistosoma haematobium in Angola returned to Vietnam All of the patients felt strange , reportedcystalgia and haematuria, and one of them was subsequently diagnosed with urinary bladder cancer In this case,surgery was necessary to remove the cancer Eggs obtained from the urine of these four patients were identified as Schistosoma haematobium by morphology and molecular methods These patients were the first reported cases of Schistosoma in Vietnam Key words: Hematuria, Schistosoma, Schistosoma haematobium 156 TCNCYH 117 (1) - 2019 ... (miracidium) bên Đây hình thái trứng sán máng Schistosoma hematobium (hình 1) Hình Trứng sán máng Schistosoma hematobiumthu thập từ bệnh nhân (1 - 4) Định loại sinh học phân tử Bảng Giải trình... hợp bệnh ngoại lai từ Angola bệnh sán máng xác định Việt Nam Triệu chứng chủ yếu tức hạ vị đái máu, có trứng sán nước tiểu bạch cầu toan tăng cao Trứng sán xác định loài hình thái học sinh học phân. .. máng thu thập từ bệnh nhân xác định hình thái học (hình 1) thẩm định sinh học phân tử l Schistosoma haematobium Chỉ thị di truyền sử dụng cox1 (cytochrome C oxidase subunit 1) so sánh chủng Việt