Đánh giá tính chính xác của phương pháp sinh học phân tử MTBDRplus trong việc xác định tính kháng thuốc ở bệnh nhân nghi ngờ lao trong năm 2015 - 2016 trên cở sở phương pháp tham chiếu là kháng sinh đồ trên môi trường lỏng BACTEC MGIT 960 và khảo sát tần suất của các loại đột biến kháng thuốc Rifampicin và Isoniazid.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học SO SÁNH PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ MTBDRplus VỚI PHƯƠNG PHÁP KHÁNG SINH ĐỒ TRONG VIỆC PHÁT HIỆN MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS KHÁNG ISONIAZID VÀ RIFAMPICIN Trương Thiên Phú*, Trần Thị Thanh Nga*, Ngô Minh Quân*, Nguyễn Đào Ngọc Lan*, Phan Thanh Tùng*, Lê Thị Kiều*, Huỳnh Thị Mỹ Nga*, Phạm Thị Phương Mai*, Nguyễn Thị Xuân Hỷ*, Lê Thị Kim Cúc*, Nguyễn Thị Ngọc Thảo*, Lê Nguyễn Hoàng Vũ*, Nguyễn Phong Phú* TĨM TẮT Mục tiêu: Đánh giá tính xác phương pháp sinh học phân tử MTBDRplus việc xác định tính kháng thuốc bệnh nhân nghi ngờ lao năm 2015 - 2016 cở sở phương pháp tham chiếu kháng sinh đồ môi trường lỏng BACTEC MGIT 960 khảo sát tần suất loại đột biến kháng thuốc Rifampicin Isoniazid Vật liệu phương pháp: Tổng số 17.158 bệnh phẩm bao gồm: đàm, dịch dày, dịch rửa phế quản… gửi đến phòng Xét nghiệm Lao, Khoa Vi sinh Lâm sàng, bệnh viện Chợ Rẫy năm 2015 2016 theo quy trình chẩn đốn thường qui Quy trình xét nghiệm bao gồm soi AFB, cấy định danh cụm khuẩn mọc môi trường lỏng MGIT môi trường đặc LJ phương pháp sinh học phân tử assay Mẫu cấy MTB dương tính thực kháng sinh đồ hàng môi trường lỏng BACTEC MGIT 960 Kết xác định tính kháng thuốc phương pháp sinh học phân tử đối chiếu với phương pháp chuẩn kháng sinh đồ Kết quả: Trong tổng số 17.158 bệnh phẩm có 1819 mẫu bệnh phẩm (10,6%) (gồm mẫu trực tiếp (n = 71) mẫu cấy (n = 1748)) thực với phương pháp MTBDRplus Có 681 mẫu cấy dương tính MTB thực kháng sinh đồ hàng Độ tương đồng kết phương pháp MTBDRplus phương pháp kháng sinh đồ việc phát lao đa kháng thuốc (MDR-TB), kháng Rifampicin (RIF) Isoniazid (INH) 98,8%; 99,0% 97,1% Độ nhạy độ đặc hiệu MTBDRplus việc xác định tính kháng RIF 96,6% 99,1%, xác định tính kháng INH 92,1% 98,2% Đột biến thường xuất gene rpoB (kháng thuốc RIF) S531L (58,8%); gene katG (kháng thuốc INH) S315T1 (75,4%) Sự khác biệt phương pháp kháng sinh đồ phương pháp sinh học phân tử giải thích diện số đột biến quần thể hỗn hợp vi khuẩn nhạy kháng thuốc Kết luận: Phương pháp sinh học phân tử Genotype MTBDRplus phương pháp sàng lọc nhanh số lượng lớn bệnh phẩm với độ nhạy độ đặc hiệu cao thời gian thực ngắn Kết từ nghiên cứu góp phần vào sách phát triển Tổ chức y tế giới (TCYTTG - WHO) việc sử dụng phương pháp sinh học phân tử sàng lọc nhanh lao đa kháng thuốc (MDR-TB) góp phần vào liệu dịch tễ học tần suất gen kháng thuốc vi khuẩn lao Từ khóa: Genotype MTBDRplus, MDR-TB, isoniazid, rifampicin *Khoa Vi sinh, Bệnh viện Chợ Rẫy Tác giả liên lạc: TS.BS Trương Thiên Phú, ĐT: 0906355534, Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2018 Email: truongthienphu78@yahoo.com 155 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 ABSTRACT COMPARISION OF GENOTYPE MTBDRplus MOLECULAR ASSAY WITH CONVENTIONAL DRUG SUSCEPTIBILITY TESTING METHOD FOR ISONIAZID AND RIFAMPICIN RESISTANCE IN TUBERCULOSIS PATIENTS Truong Thien Phu, Tran Thi Thanh Nga, Ngo Minh Quan, Nguyen Đao Ngoc Lan, Phan Thanh Tung, Le Thi Kieu, Huynh Thi My Nga, Pham Thi Phuong Mai, Nguyen Thi Xuan Hy, Le Thi Kim Cuc, Nguyen Thi Ngoc Thao, Le Nguyen Hoang Vu, Nguyen Phong Phu * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 22 - No 5- 2018: 155 – 161 Objectives: To evaluate the Genotype MTBDRplus kit with the conventional standard drug susceptibility testing of isoniazid and rifampicin by BACTEC MGIT 960 method Materials and methods: A total of 17,158 diagnosis clinical specimens (sputum samples, gastric aspirate, bronchoscopy aspirate…) sent to Mycobacteriology Laboratory, Department of Clinical Microbiology of Cho Ray Hospital in 2015 and 2016 during the clinical routine Laboratory algorithms included AFB smear, culture, and commercial Genotype MTBDRplus assay was implemented on MTB identification of positive growth on MGIT and Lowenstein-Jensen media The performance of Genotype molecular assay was compared to phenotypic DST method and analyzed the genetic of drug resistance patterns Results: Overall 1819 valid results were obtained for 17,158 clinical specimens (10.6%) with MTBDRplus 681 MTB positive cultures have been made drug susceptibility testing row The overall of concordance between the results of MTBDRplus assay and those of the drug susceptibility testing for the assessment of MDR-TB, RIF and INH resistance were 98.8%, 99.0% and 97.1%, respectively For specimens positive for M tuberculosis by MTBDRplus, this assay’s sensitivity and specificity for rifampin resistance were 96.6%, 99.1% For isoniazid resistance, they were 92.1% and 98.2% The frequency of rpoB mutations in RIF resistance strains were S531L (58.8%) Of INH resistant strains, the most prevalence resistance mutation was S315T1 (75.4%) in the katG gene Disagreement between phenotypical and molecular test results could be explained by the presence of rare mutations in strains caused the presence of mixed bacterial populations Conclusion: The Genotype MTBDRplus assay is a useful tool for screening large numbers of specimens rapidly with high sensitivity, specificity and short turnaround time Data of this study contributed to the development of WHO policy on the utility of this molecular assay for MDR-TB screening and the important of mutant distribution in epidemiology data Keywords: Genotype MTBDRplus, MDR-TB, isoniazid, rifampicin 100.000 dân Tỉ lệ lao đa kháng thuốc ĐẶT VẤN ĐỀ nhóm bệnh nhân 4,1% nhóm Vi khuẩn lao (Mycobacterium tuberculosis bệnh nhân lao điều trị 25%(12) Thêm vào MTB) nguyên nhân gây nên đó, bệnh lao trở nên nghiêm trọng số tử vong cao bệnh truyền việc điều trị lao đa kháng thuốc kháng thuốc nhiễm toàn cầu Việt Nam đứng thứ 12 phổ rộng (Extensively Drug Resistance –XDR) 22 nước có tỉ lệ nhiễm lao cao giới, gặp nhiều khó khăn việc điều trị tốn với 100.000 ca phát hàng thời gian dài với việc điều trị thất bại năm; đứng thứ 14 tổng số 27 nước có tỉ lệ tái nhiễm lao đa kháng thuốc (MDR-TB, kháng đồng thời loại thuốc hàng Isoniazid (INH) Rifampicin (RIF)) Theo báo cáo TCYTTG năm 2015, tỉ lệ nhiễm lao Việt Nam 137 156 Hiện nay, việc chẩn đoán lao lao đa kháng thuốc dựa phương pháp xác định kiểu hình ni cấy vi khuẩn thực Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 kháng sinh đồ thời gian từ – tuần Hơn để đạt qui trình tối ưu cho kỹ thuật nuôi cấy kháng sinh đồ phòng xét nghiệm cần có đủ trang thiết bị đào tạo nhân lực đạt chuẩn Do đó, nước có kinh tế phát triển gặp nhiều khó khăn việc tầm sốt bệnh lao Vì vậy, việc chẩn đoán sớm lao đa kháng thuốc kháng thuốc phổ rộng từ bệnh phẩm lâm sàng việc có ý nghĩa lớn cấp thiết cho việc rút ngắn thời gian chẩn đoán điều trị lao sớm, hướng, góp phần giảm tỉ lệ tử vong việc giảm tỉ lệ truyền nhiễm vi khuẩn lao kháng thuốc Trong năm gần đây, số phương pháp sinh học phân tử phát triển ứng dụng rộng rãi việc phát vi khuẩn lao xác định kiểu gene kháng thuốc bao gồm Line probe assays (Genotype MTBDRplus; Hain Lifescience GmbH, Germany, INNO LIPA Rif.TB, Belgium) real-time PCR (Xpert; Cepheid, USA) Với phương pháp xác định kiểu gene, Genotype MTBDRplus ứng dụng xác định gene kháng RIF INH mẫu bệnh phẩm cấy bệnh phẩm lâm sàng đánh giá có độ tương đồng cao với phương pháp kháng sinh đồ(3,5,13) Một nghiên cứu hồi cứu liệu nghiên cứu cho thấy độ nhạy độ đặc hiệu Genotype MTBDRplus việc phát gene kháng RIF 99% (95% confidence interval (CI), 96% - 100%) 99% (95% CI, 98% - 100%); kháng INH 96% (93 - 98%) 100% (99 - 100%) Vì vậy, TCYTTG hướng đến việc sử dụng rộng rãi phương pháp sinh học phân tử việc tầm soát lao đa kháng thuốc từ tháng năm 2008, Genotype MTBDRplus assay ứng dụng chẩn đoán thường qui nhiều nơi giới(2,6,9,10,13) Mục tiêu hướng đến nghiên cứu đánh giá việc ứng dụng Genotype MTBDRplus assay việc chẩn đoán nhanh bệnh lao gene kháng thuốc bệnh phẩm lâm sàng mẫu nuôi cấy Kết Genotype MTBDRplus assay so sánh với kết từ Nghiên cứu Y học phương pháp kháng sinh đồ để đánh giá độ tương đồng, độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị tiên đóan kháng nhạy hai phương pháp chẩn đoán Đồng thời, tần suất xuất đột biến phân tích để phản ánh mối tương quan kiểu gen đa kháng thuốc thể kiểu hình vi khuẩn kháng sinh đồ VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Quy trình xét nghiệm bệnh phẩm lâm sàng Tất xét nghiệm chẩn đóan bệnh lao thực Phòng xét nghiệm lao, khoa Vi sinh Lâm sàng, bệnh viện Chợ Rẫy Nghiên cứu phân tích dựa liệu xét nghiệm thực từ tháng năm 2015 đến tháng 12 năm 2016 Tổng số 17.158 bệnh phẩm bao gồm mẫu đàm, mẫu dịch dày, dịch rửa phế quản… gửi đến phòng xét nghiệm thực cấy định danh trực tiếp Bệnh phẩm lâm sàng khử nhiễm cô đặc phương pháp sử dụng N-acetyl-Lcystein (NALC) NaOH Đối với bệnh phẩm có định cấy, cặn lắng sau li tâm huyền phù ml nước cất 500 µL dịch huyền phù cấy vào môi trường lỏng MGIT cấy - giọt lên ống môi trường đặc LJ Bệnh phẩm trực tiếp xử lý phần huyền phù ml chứa vào tube để trữ đông -20oC dùng cho việc tách DNA Định danh vi khuẩn lao từ môi trường cấy kháng sinh đồ Vi khuẩn nghi ngờ lao mọc môi trường cấy định danh Genotype MTBDRplus assay (Version 2.0) Kháng sinh đồ thực theo định chủng vi khuẩn MTB định danh Kháng sinh đồ hàng thực môi trường lỏng máy BACTEC MGIT 960 theo hướng dẫn nhà sản xuất(7,8) Nồng độ thuốc INH RIF sử dụng 0,1 µg/ml 1,0 µg/ml Kết trả kháng thuốc có 1% vi khuẩn mọc ống chứa thuốc so sánh với ống chuẩn Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2018 157 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Xét nghiệm Genotype MTBDRplus assay Xét nghiệm Genotype MTBDRplus assay thực theo hướng dẫn nhà sản xuất để định danh MTB xác định đột biến gene rpoB, katG, inhA tương ứng với kháng thuốc RIF INH nồng độ cao nồng độ thấp Tóm tắt phương pháp DNA tách chiết Genolyse kit (Hain Lifesciences, Germany) từ ml bệnh phẩm trực tiếp xử lý ml mẫu cấy Phản ứng khuếch đại PCR thực 50 µL phản ứng bao gồm 45 µL master-mix nhà sản xuất cung cấp µL DNA tách chiết Sau đó, sản phẩm PCR lai với DNA que lai phân tích kết trực tiếp que lai ghi nhận vào file thống kê liệu excel KẾT QUẢ Nuôi cấy vi khuẩn định danh MTB Tổng số 17.158 gửi đến phòng xét nghiệm lao, có 17.087 mẫu bệnh phẩm định thực soi AFB, cấy, định danh 71 mẫu trực tiếp làm xét nghiệm MTBDRplus (hình 1) Có 1748 mẫu cấy có cụm khuẩn soi dương tính dạng cuộn thừng định danh MTBDRplus, 906 mẫu dương tính với MTB có 681 mẫu định làm kháng sinh đồ Bảng 1: Các loại mẫu chẩn đoán kít Genotype MTBDRplus assay năm 2015 – 2016 Loại mẫu Mẫu nghi ngờ lao phổi (phức hợp MTB dương tính/ tổng số mẫu thực hiện) Đàm (5/53) Mẫu bệnh phẩm lâm Dịch rửa phế quản (1/4) sàng trực tiếp Dịch màng phổi (1/3) Đàm (855/1,697) Dịch rửa phế quản Mẫu nuôi cấy (41/41) từ bệnh phẩm lâm sàng Dịch màng phổi (1/1) Mẫu nghi ngờ lao phổi (phức hợp MTB dương tính/ tổng số mẫu thực hiện) Mủ (0/1) Nước tiểu (0/3) Khác (1/7) Mủ (0/0) Nước tiểu (2/2) Mơ (4/4) Khác (3/3) Có 1.819 mẫu định danh với kít Genotype MTBDRplus năm 2015 – 2016 thể Bảng bao gồm mẫu bệnh 158 phẩm trực tiếp (n = 71) mẫu bệnh phẩm cấy (n = 1.748) Bên cạnh mẫu phân lập mơi trường MGIT LJ, có tổng 71 mẫu trực tiếp nghi ngờ lao phổi (84,5%) lao ngồi phổi (15,5%) gửi đến phòng xét nghiệm để xác định Tỉ lệ phát dương tính MTB 11,3% mẫu bệnh phẩm trực tiếp ca MDR-TB phát từ bệnh phẩm đàm Trong tổng số 1,748 mẫu cấy cần định danh kít Genotype MTBDRplus, kết dương tính MTB 906 (51,8%), 842 mẫu không phát phức hợp MTB sau định danh (48,2%) Trong số kết này, có số mẫu gặp khó khăn việc phân tích kết (1,5%) xét nghiệm lặp lại để đạt kết phân tích cuối So sánh độ tương đồng phương pháp kháng sinh đồ Genotype MTBDRplus assay Trong tổng số 906 mẫu cấy dương tính MTB có 681 mẫu thực kháng sinh đồ hàng phương pháp phương pháp BACTEC MGIT 960, 225 mẫu lại khơng có định thực Kết kháng sinh đồ tổng 681 mẫu có 29 ca MDR-TB (4,3%), 36 ca kháng loại thuốc Isoniazid (5,3%) khơng có chủng kháng loại Rifampicin Những chủng lại bao gồm nhạy với loại thuốc kháng nhiều loại thuốc Dựa kết phương pháp chuẩn kháng sinh đồ, kết Genotype MTBDRplus cho thấy có độ tương đồng cao việc phát MDR-TB 28 29 ca Kết phân tích độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị tiên đoán kháng giá trị tiên đốn nhạy trình bày Bảng Kết cho thấy có khác biệt ca MTBDRplus thể nhạy RIF không phát vạch đột biến kết kháng sinh đồ kháng RIF Vì thế, so sánh độ tương đồng chung phương pháp kháng RIF INH 99,0% 97,1% Kết độ nhạy INH có khác biệt có 10 mẫu thể kháng INH MTBDRplus kháng sinh đồ thể nhạy thuốc INH Tỉ lệ tính dựa phương pháp chuẩn Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 kháng sinh đồ; PPV-Positive predictive value (Giá trị tiên đoán kháng), Nghiên cứu Y học NPV- Negative predictive value (Giá trị tiên đoán nhạy) Bảng 2: Kết Genotype MTBDRplus assay việc phát MDR-TB, kháng nhạy RIF INH Độ nhạy Độ đặc hiệu Độ tương đồng Giá trị tiên đoán kháng Giá trị tiên đoán nhạy Isoniazid Rifampicin MDR-TB 92.1%(116/126) 98.2%(545/555) 97.1 (661/681) 92.1% (116/126) 98.2% (545/555) 96.6% (28/29) 99.1 (646/652) 99.0% (674/681) 82.4% (28/34) 99.8% (646/647) 96.7% (29/30) 98.9% (555/561) 98.8% (584/591) 82.9% (29/35) 99.8% (555/556) Hình Qui trình xét nghiệm nuôi cấy vi khuẩn kết (58,8%), ca có đột biến H526Y (5,9%), ca có Tần suất xuất đột biến gene kháng đột biến D516V (2,9%) INH RIF Trong tổng số 126 chủng kháng INH, tần Các đột biến kháng thuốc INH RIF xuất xuất đột biến S315T1 95 ca (75,4%) phát kít MTBDRplus (tổng số mẫu gene katG, 23 ca có đột biến C15T (18,3%) kháng phân tính n = 126) thể gene inhA Hình Trong tổng số 34 chủng MTB kháng RIF, tần suất xuất đột biến gene rpoB là: 11 ca có vạch wild type biến (32,4%), 20 ca có xuất đột biến S531L Kết MTBDRplus phân tích có ca kháng RIF kết kháng sinh đồ nhạy cho thấy chủng có vạch wild type biến Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2018 159 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 không phát vạch đột biến que lai DNA Hình Tần suất xuất đột biến chủng vi khuẩn kháng INH RIF (N=126) BÀN LUẬN Kết phương pháp sinh học phân tử Genotype MTBDRplus cho thấy độ nhạy (96,7%) độ đặc hiệu (98,9%) cao, độ tương đồng với phương pháp chuẩn kháng sinh đồ 98,8% việc phát lao đa kháng thuốc MDRTB Kết nghiên cứu tương đồng với số kết đạt từ nghiên cứu trước thực Việt Nam số nước khác(2,6,9,10) Thêm vào đó, thời gian thực phương pháp sinh học phân tử ngắn so với phương pháp cấy kháng sinh đồ truyền thống (2,5 ngày thực MTBDRplus so với 29 ngày cấy 12 ngày làm kháng sinh đồ) Hơn nữa, MTBDRplus sử dụng để phát MTB mẫu cấy bị tạp nhiễm không mọc cách sử dụng cặn lắng trực tiếp từ mẫu bệnh phẩm; mẫu có lẫn NTM Từ kết cho thấy phương pháp sinh học phân tử có ứng dụng cao việc phát ca lao quản lý lao đa kháng thuốc (MDR-TB) nước có tỉ lệ nhiễm lao cao Nhìn chung, kết MTBDRplus thể độ xác cao việc tìm chủng kháng INH (độ nhạy 92,1%, độ đặc hiệu 98,2%); chủng kháng RIF (độ nhạy 96,6%, độ đặc hiệu 99,1%) Tuy nhiên, độ đặc hiệu kít 160 việc phát MDR-TB 98,9% Kết thực nghiệm cho thấy ca có khác biệt phương pháp xác định kiểu gene (genotype MTBDRplus) phương pháp xác định kiểu hình (phenotype – kháng sinh đồ) Qua đó, cho thấy phương pháp xác định kiểu gene phát mức kháng thuốc so với phương pháp chuẩn Điều lí giải diện quần thể hỗn hợp vi khuẩn nhạy kháng thuốc (“heteroresistance”) mẫu bệnh phẩm lâm sàng Khái niệm “heteroresistance” báo cáo Rinder cộng sự(11) xem yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến độ xác tin cậy phương pháp kháng sinh đồ Sự khác biệt giải thích hỗn hợp vi khuẩn nhạy kháng thuốc tồn mẫu bệnh phẩm lâm sàng; kiểu gene đột biến phát MTBDRplus quần thể vi khuẩn nhạy thuốc phát triển lấn át mơi trường lỏng thể kiểu hình “nhạy” kháng sinh đồ Phương pháp sinh học phân tử thực nhanh có độ xác cao có ý nghĩa lớn việc quản lý bệnh lao thể việc chọn phác đồ điệu trị sớm thời kỳ đầu Việc phát đột biến cho thấy xuất khả kháng thuốc bệnh nhân lao thuốc trọng yếu Isoniazid Rifampicin Sự phát tần suất đột biến S315T1 gene katG C15T gene inhA giúp bác sĩ lâm sàng lựa chọn phác đồ điều trị hợp lí Nếu đột biến xuất gene inhA kháng INH nồng độ thấp, nồng độ INH cao đạt hiệu trình điều trị Mặt khác, thể đột biến gene katG kháng INH nồng độ cao, INH không bao gồm phác đồ điều trị Ở ca lao đa kháng thuốc, có đột biến S531L xuất gene rpoB Kết tương đồng với kết từ nghiên cứu trước quần thể người Việt Nam(9) Genotype MTBDRplus không phát ca lao đa kháng thuốc so với phương pháp kháng sinh đồ không phát Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 vạch đột biến từ chủng MTB Kết đột biến mà kít chẩn đốn khơng thể được đột biến khác xảy gene rpoB Nghiên cứu phát ca dương tính với MTB tổng số 71 mẫu bệnh phẩm trực tiếp, có trường hợp lao đa kháng thuốc mẫu đàm trực tiếp Kết cho thấy kít MTBDRplus ứng dụng để sàng lọc lao đa kháng từ mẫu bệnh phẩm trực tiếp để giúp chẩn đoán nhanh, điều trị sớm hạn chế lây lan trường hợp lao đa kháng thuốc Bên cạnh ứng dụng thuận lợi kít MTBDRplus, chúng tơi nhận thấy số hạn chế thực phân tích kết xét nghiệm từ bệnh phẩm lâm sàng trực tiếp Một số que lai khơng thể phân tích kết phải thực lặp lại Tuy nhiên, tỉ lệ xét nghiệm cần lặp lại (1,5%) thấp so với số nghiên cứu trước mẫu đàm trực tiếp (5 - 12%)(4) Kết nhấn mạnh xét nghiệm MTBDRplus đòi hỏi cẩn trọng từ người thực phân tích kết mẫu xét nghiệm trực tiếp để tránh trường hợp âm tính giả nhiễm chéo DNA gây trường hợp dương tính giả KẾT LUẬN Phương pháp sinh học phân tử MTBDRplus có độ tương đồng cao so với phương pháp kháng sinh đồ môi trường lỏng BACTEC MGIT 960 việc phát lao kháng thuốc INH (97,1%), RIF (99%), MDR-TB (98,8%) Các đột biến kháng thuốc hay gặp RIF S531L (58,8%) gen rpoB, INH S315T1 (75,4%) gen katG C15T (18,3%) gen inhA Phương pháp áp dụng bệnh phẩm trực tiếp để giúp chân đoán nhanh, điều trị kịp thời Nghiên cứu Y học hạn chế lây lan trường hợp lao đa kháng thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 12 13 Bwanga F, Hoffner S, Haile M, Joloba ML (2009): Direct susceptibility testing for multi-drug resistant tuberculosis: a meta-analysis BMC Infect Dis, 9:67 Cavusoglu C, Turhan A, Akinci P, Soyler I (2005) Evaluation of the Genotype MTBDR assay for rapid detection of rifampin and isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates J Clin Microbiol, 43(8):3699-3703 Cavusoglu C, Gursel D, Aktoprak HB (2011) Evaluation of the genotype MTBDRplus assay for the diagnosis of tuberculosis and rapid detection of rifampin and isoniazid resistance in clinical specimens Turk J Med Sci, 41(3):419-425 Hillemann D, Rusch-Gerdes S, Richter E (2006) Appication of the Genptype MTBDRplus assay directly on sputum specimens Int J Tuberc Lung Dis, 10: 1057-1059 Hillemann D, Rusch-Gerdes S, Richter E (2007) Evaluation of the Genotype MTBDRplus assay for rifampicin and isoniazid susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis strains and clinical specimens J Clin Microbiol, 45(8):2635-2640 Hillemann D, Weizenegger M, Kubica T, Richter E, Niemann S (2005) Use of the genotype MTBDRplus assay for rapid detection of rifampin and isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis complex isolates J Clin Microbiol, 43(8): 3699-3703 Kent PT, Kubica GP et al (1985): Public health mycobacteriology: a guide for the level III laboratory Atlanta: US Department of Health and Human Services; 30329-4027 Kruuner A, Yates MD, Drobniewski FA (2006) Evaluation of MGIT 960-based antimicrobial testing and determination of critical concentrations of first- and second-line antimicrobial drugs with drug-resistant clinical strains of Mycobacterium tuberculosis J Clin Microbiol, 44(3):811-818 Mai NT Huyen, Edine W Tiemersma, Nguyen TN Lan et al (2010) Validation of the Genotype MTBDRplus assay for diagnosis of multidrug resistant tuberculosis in South Vietnam BMC Infectious Disease, 10:149 Miotto P, Piana F, Penati V, Canducci F et al (2006) Use of genotype MTBDRplus assay for molecular detection of rifampin and isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis clinical strains isolated in Italy J Clin Microbiol, 44(7):2485-2491 Rinder H, Mieskes KT, Loscher T (2001) Heteroresistance in Mycobacterium tuberculosis Int J Tuberc Lung Dis, 5(4):339-345 Tuberculosis profile 2015 Tuberculosis report in Vietnam by WHO www.who.int/tb/data Vladyslav Nikolayevskyy, Yanina Balabanova, Tatyana Simak et al (2009) Performance of the Genotype MTBDRplus assay in the diagnosis of tuberculosis and drug resistance in Samara, Russian Federation BMC Clin Path, 9(2): 1472-6890 Ngày nhận báo: 26/02/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 07/03/2018 Ngày báo đăng: 25/09/2018 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Chợ Rẫy 2018 161 ... thực phương pháp sinh học phân tử ngắn so với phương pháp cấy kháng sinh đồ truyền thống (2,5 ngày thực MTBDRplus so với 29 ngày cấy 12 ngày làm kháng sinh đồ) Hơn nữa, MTBDRplus sử dụng để phát. .. hợp dương tính giả KẾT LUẬN Phương pháp sinh học phân tử MTBDRplus có độ tương đồng cao so với phương pháp kháng sinh đồ môi trường lỏng BACTEC MGIT 960 việc phát lao kháng thuốc INH (97,1%), RIF... lệ tử vong việc giảm tỉ lệ truyền nhiễm vi khuẩn lao kháng thuốc Trong năm gần đây, số phương pháp sinh học phân tử phát triển ứng dụng rộng rãi việc phát vi khuẩn lao xác định kiểu gene kháng