Định loài sán lá gan nhỏ opisthorchis viverrini nhiễm trên người bằng kỹ thuật PCR trên hệ gen ty thể tại huyện Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị

Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm định loài sán lá gan nhỏ opisthorchis viverrini nhiễm trên người bằng kỹ thuật PCR trên hệ gen ty thể tại huyện Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.

Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014   ĐỊNH LỒI SÁN LÁ GAN NHỎ OPISTHORCHIS VIVERRINI  NHIỄM TRÊN NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR TRÊN HỆ GEN TY THỂ   TẠI HUYỆN HƯỚNG HĨA, TỈNH QUẢNG TRỊ  Nguyễn Văn Chương*, Bùi Văn Tuấn*, Huỳnh Hồng Quang*  TĨM TẮT  Đặt vấn đề: Sán lá gan nhỏ là vấn đề y tế cơng cộng quan trọng tại các vùng Đơng Á và Đơng Âu, bệnh  gây ra bởi lồi Opisthorchis viverrini, Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis và lồi Opisthorchis lobatus mới.  Hiện tại, có hơn 600 triệu người có nguy cơ nhiễm các sán lá này trên phạm vi tồn cầu. Hầu hết bệnh nhân  nhiễm sán khơng có triệu chứng, chỉ có 5‐10% số ca nhiễm nặng biểu hiện các triệu chứng khơng đặc hiệu. Tuy  nhiên, nhiễm nặng và kéo dài có thể dẫn đến một loạt bệnh gan mật (viêm đường mật, viêm túi mật, vàng da do  tắc mật), đặc biệt trên cả mơ hình thực nghiệm và dịch tễ học cho bằng chứng nhiễm các sán này là một trong các  ngun nhân dẫn đến ung thư biểu mơ đường mật.   Phương pháp nghiên cứu: Với thiết kế cắt ngang mơ tả. Sử dụng kỹ thuật giám định lồi PCR trên gen ty  thể xác định và phân biệt lồi Clonorchis sinensis và Opisthorchis viverrini.   Kết quả: Kỹ thuật PCR đã xác định lồi sán nhiễm trên người là lồiOpisthorchis viverrini.  Kết  luận: Việc xác định đặc hiệu là rất cần thiết để hiểu biết về tính đa dạng lồi sán lá gan nhỏ tại Việt  Nam cũng như xây dựng bản đồ phân bố trong khu vực Mê Kơng, đề ra các biện pháp phòng chống thích hợp.  Từ khóa: Opisthorchis viverrini, Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis  ABSTRACT  IDENTIFICATION OF Opisthorchis viverrini BY A MITOCHONDRIAL‐BASED MULTIPLEX PCR   IN HUONG HOA DISTRICT, QUANG TRI PROVINCE  Nguyen Van Chuong, Bui Van Tuan, Huynh Hong Quang  * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 6‐ 2014: 540 – 545  Backgrounds:  Liver  fluke  infection  caused  by  Opisthorchis  viverrini,  Opisthorchis  felineus,  Clonorchis  sinensis,  and  new  Opisthorchis  lobatus  is  a  major  public  health  problem  in  East  Asia  and  Eastern  Europe.  Currently,  more  than  600  million  people  are  at  risk  of  infection  with  these  trematodes.  Most  people  with  opisthorchiasis  or  clonorchiasis  have  no  symptoms,  only  5‐10%  of  infected  people  with  heavy  load  have  non‐ specific  symptoms.  Nonetheless,  heavy,  long‐standing  infection  is  associated  with  a  number  of  hepatobiliary  diseases (cholangitis, obstructive jaundice, cholecystitis), especially, both experimental and epidemiologic evidence  strongly implicates these fluke infection in the aetiology of one of the liver cancer subtypes as cholangiocarcinoma.   Methods:  A  cross  sectional  study  was  conducted.  A  mitochondrial‐based  multiplex  PCR  was  used  to  identify and discriminate of Clonorchis sinensis and Opisthorchis viverrini species.   Result: Themultiplex PCR technique in identification of adults fluke from infected patients was Opisthorchis  viverrini.   Conclusion:  Specific  identification  is  necessary  for  understanding  of  the  liver  fluke  diversity  in  Vietnam,  mapping of its distribution in Mekong region, and propose proper control measures.  Key words: Opisthorchis viverrini, Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis  * Viện Sốt rét KST‐CT Quy Nhơn g  Tác giả liên lạc: TS. Huỳnh Hồng Quang     ĐT: 0905103496  540 Email: huynhquangimpe@yahoo.com  Chun Đề Y Tế Cơng Cộng  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014  Nghiên cứu Y học   ĐẶT VẤN ĐỀ  Bệnh  sán  lá  gan  nhỏ  (SLGN)  là  một  trong  những  bệnh  ký  sinh  trùng  lây  truyền  qua  thức  ăn  quan  trọng,  với  3  loài  chính  Opisthorchis  viverrini  (O.viverrini),  Clonorchis  sinensis  (C.  sinensis)  và Opisthorchis felineus (O. felineus),  gây  ảnh hưởng rất lớn đến sức khoẻ của con người,  đặc  biệt  dẫn  đến  ung  thư  biểu  mô  đường  mật.  SLGN  hiện  là  mối  nguy  cơ  và  đe  dọa  đến  khoảng  600  triệu  người  trên  phạm  vi  toàn  cầu,  đặc biệt tại khu vực Đơng Á và Đơng Âu(3). Lồi  O.  viverrinilưu  hành  chủ  yếu  ở  các  quốc  gia  Đông Nam Á, gồm Thái Lan, Lào, Việt Nam và  Campuchia; C. sinensis thường gặp ở vùng nông  thôn  tại  Hàn  Quốc  và  Trung  Quốc(6).  Tại  Việt  Nam,  bệnh  SLGL  nhỏ  lưu  hành  ít  nhất  25  tỉnh,  thành, trong đó 15 tỉnh phía bắc và 10 tỉnh miền  Trung‐Tây  Ngun(7,8)  với  tỷ  lệ  nhiễm  từ  0,2  ‐  37%. Hầu hết người bệnh SLGN khơng có triệu  chứng, chỉ có 5‐10% số ca nhiễm nặng xuất hiện  các triệu chứng khơng đặc hiệu như đau hạ sườn  phải,  khó  tiêu  và  suy  nhược.  Tuy  nhiên,  nhiễm  trùng nặng và kéo dài  có  liên  quan đến một số  loại bệnh gan mật, gồm có viêm đường mật, tắc  mật vàng da, gan lớn, xơ gan viêm túi mật và sỏi  túi  mật,  thậm  chí  gây  ung  thư  biểu  mơ  đường  mật hoặc ung thư đường mật(2,7).   Người bị mắc bệnh SLGN là do ăn phải một  số lồi cá nước ngọt có chứa ấu trùng sán chưa  được nấu chín, hoặc ăn sống dạng gỏi cá. Vốn dĩ  thói quen của một số vùng ven biển miền Trung,  thích  ăn  các  món  cá  nước  ngọt  dưới  dạng  “shasimi” (ăn với mù tạt hoặc dạng gỏi) hoặc xử  lý  chưa  chín  (tái)  như  một  yếu  tố  nguy  cơ  cao  nhiễm  mầm  bệnh  SLGN.  Huyện  Hướng  Hóa,  tỉnh  Quảng  Trị  với  6  xã  vùng  rìa  giáp  với  biên  giới Lào qua sơng Sepon với đa dạng nhiều lồi  cá  nước  ngọt  có  thể  là  nguồn  thực  phẩm  hàng  ngày cho người dân hai bên sông, cùng với tập  quán  ăn gỏi  cá  nước ngọt  nên  khả năng  có  lưu  hành  bệnh  SLGN  là  rất  lớn(6).  Với  ý  tưởng  xác  định lồi SLGN lưu hành cũng như đề xuất biện  pháp  phòng  chống  thích  hợp,  đề  tài  này  tiến  Chun Đề Y Tế Cơng Cộng  hành nhằm mục tiêu xác định lồi SLGN ký sinh  ở  người  và  ở  các  vật  chủ  trung  gian  tại  điểm  nghiên cứu bằng ký thuật phân tử.   ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Địa điểm và thời gian  Xã  Thanh  và  Xy,  huyện  Hướng  Hóa,  tỉnh  Quảng Trị (xã giáp với biên giới Lào);  Từ tháng 4/2013 đến tháng 6/2013.  Đối tượng nghiên cứu  Người dân trong 2 xã được chọn, chọn từ 5  tuổi trở lên;  Mẫu SLGN thu thập được trên người và trên  vật chủ trung gian cá.  Phương pháp nghiên cứu  Thiết kế nghiên cứu.  Theo phương pháp nghiên cứu ngang mô tả.  Cỡ  mẫu  nghiên  cứu  tỷ  lệ  nhiễm  SLG  nhỏ,  theo  công thức:        p.(1 ‐ p)  n = Z2(1‐ /2)             d2  Trong đó:  n : Cỡ mẫu tối thiểu cần đạt được;  p:  Tỷ  lệ  nhiễm  SLGN  từ  một  điều  tra  thăm  dò trước (pilot survey) = 13,5%     d: Sai số tuyệt đối, chọn 0,04.  Z(1 ‐ /2): Hệ số tin cậy = 1,96 (với  = 0,05, độ  tin cậy CI = 95% )  Vậy  cỡ  mẫu  sẽ  là:  n  ≈  280,3  cho  mỗi  điểm  nghiên cứu.  Cộng thêm những người mất mẫu + 10% số  ca,  vậy  cỡ  mẫu  cuối  cùng  là  300  cho  mỗi  điểm.  Tính trung bình mỗi hộ 4 người, chọn 75 hộ cho  mỗi điểm.  Nội dung nghiên cứu  Nghiên cứu tỷ lệ, cường độ nhiễm sán lá gan  bằng kỹ thuật Kato‐katz;  Thu  thập  sán  trưởng  thành  trên  người  và  định loại bằng hình thái học và giám định PCR;  541 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014   Kỹ thuật nghiên cứu  Xét nghiệm phân  Kato‐Katz:  Các mẫu  phân  thu thập được;  Kỹ thuật định loại SLGN bằng hình thái học  (phân loại Nguyễn Thị Lê, 1995);  Kỹ  thuật  giám  định  lồi  SLGN  bằng  PCR:  ADN  tổng số  của  từng  con sán  riêng  biệt  được  tách  chiết  bằng  QIAamp  DNA  Extraction  kit  (QIAGEN  Inc,  USA).  Mồi  được  sử  dụng  trong  phản  ứng này  là  các  cặp  mồi  đặc  hiệu  được sử  dụng  để  chẩn  đoán  phân  biệt  O.  viverrini  với  C.sinensis (Le và cs, 2006), cho sản phẩm PCR xác  định O.viverrini có độ dài là 1357 bp và C.sinensis  là 612 bp;  Phân tích và xử lý số liệu  Nhập  số  liệu  vào  phần  mềm  Epidata  và  xử  lý trên chương trình Stata.  KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU  Thực trạng SLGN tại các điểm nghiên cứu  Bảng 1. Tỷ lệ và cường độ nhiễm SLGN chung ở 2  xã qua xét nghiệm phân  Địa điểm Thanh Xy Cộng Số XN Số ca phát Số trứng trứng sán gam phân 302 35 (11,59%) 33,38 304 34 (11,18%) 29,52 606 69 (11,39%) 31,4 Nhận xét: Tỷ lệ nhiễm sán tại 2 xã là 11,39%,  trong  đó  tại  xã  Thanh  là  11,59%  và  xã  Xy  là  11,18%.  Cường  độ  nhiễm  sán  tại  xã  Thanh  là  33,38  trứng/gam  phân,  tại  xã  Xy  là  29,52  trứng/gam phân.  Kết  quả  điều  tra  loài  SLGN  ở  người  và  ở  vật chủ trung gian  Bảng 2. Kết quả XN đãi phân thu thập SLGN  trưởng thành  Địa điểm Số ca XN phân Số ca có sán Lượng sán thu (+) Xã Thanh 44 Xã Xy 19 Cộng 11 63 Nhận xét: Trong số 35 ca (xã Thanh) và 34 ca  (xã  Xy)  nhiễm  SLGN,  chỉ  chọn  5  ca  (xã  Thanh)  và 6 ca (xã Xy) đưa đi đãi phân để xác định hình  542 thái học và phân học phân tử định lồi SLGN. Số  ca  được  cho  uống  thuốc  và  đãi  phân  tìm  sán  trưởng thành là 11 ca, song chỉ có 3 ca thu thập  được  sán  trưởng  thành,  tổng  số  sán  lá  gan  nhỏ  thu thập được là 63 con.  Định lồi bằng hình thái học    Hình 1. Hình thể SLGN trưởng thành  Nhận xét: Xác  định  hình thái 6  mẫu sán  cho  thấy  cơ  thể  sán  mảnh,  màu  hồng  nhạt  khi  nhuộm  Carmine,  giác  miệng  ở  đầu  nhỏ,  giác  bụng  tròn  nằm  ở  1/3  phía  dưới,  tử  cung  gấp  khúc nhiều lần, chứa đầy trứng, đặc biệt là tinh  hồn phân nhánh hình thùy nằm ở phía cuối cơ  thể. Dựa vào khóa phân loại, căn cứ hình thái và  kích  thước  của  sán,  loài  sán  ở  xã  Thanh  và  Xy  thuộc  loài  Opisthorchis viverrini  (Cobbold,  1875),  giống  Opisthorchis  (Looss,  1907),  họ  Opisthorchidae  (Braun,  1901),  bộ  Opisthorchiida  (La Rue, 1957).  Giám định SLGN bằng kỹ thuật PCR   1  2  3  4  5  6  7   8   O.  viverrini  1,5kb ~1357bp  1kb    Hình  2.  Kết  quả  điện  di  sản  phẩm  PCR  của  mẫu  SLGN  sử dụng  cặp  mồi  OvF‐OvR  Giếng 1:  Chứng   (‐) Giếng 2: Chứng (+) O. viverrini, 1357bp Giếng 3‐ 8:  Mẫu  SLGN  thu  nhận  tại  điểm.  Giếng  9:  Thang  chuẩn DNA (1kb DNA ladder).  Chun Đề Y Tế Cơng Cộng  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014  Nghiên cứu Y học   Phản  ứng  PCR  thực  hiện  bằng  mồi  đặc  hiệu C. sinensis (CsF‐CsR) với các mẫu sán, kết  quả cho thấy khơng có sản phẩm PCR nào thu  được  từ  các  mẫu  sán  này,  ngoại  trừ  một  vạch  DNA  của  C. sinensis  đã  được  giám  định  bằng  phân tử dùng làm chứng (+) (612 bp, giếng 3).  Từ  kết  quả  giám  định  này  cho  thấy  mẫu  sán  thu nhận tại xã Thanh và xã Xy không phải là  C. sinensis.  BÀN LUẬN  Bệnh  SLGN  gây  ảnh  hưởng  nghiêm  trọng  đến  sức  khỏe  con  người,  song  các  hoạt  động  phòng chống hiệu quả vẫn chưa được triển khai  bao  phủ.  Bệnh  SLGN  lưu  hành  ở  những  tỉnh/  thành  có  tập  quán,  thói  quen  ăn  gỏi  cá  nước  ngọt,  điều  kiện  vệ  sinh  môi  trường  kém.  Xã  Thanh  và  xã  Xy,  là  2  xã  thuộc  huyện  Hướng  Hóa,  tỉnh  Quảng  Trị  giáp  với  Lào  qua  sơng  Sepon, người dân ở đây chủ yếu là dân tộc Vân  Kiều và một số ít người Kinh hoặc Paco vào đây  bn  bán  hoặc  là  cán  bộ  tăng  cường  và  bộ  đội  biên  phòng.  Việc  quản  lý  phân  nói  riêng  và  vệ  sinh mơi trường nói chung còn “khoảng trống”  (tỷ lệ hộ có hố xí chỉ khoảng 50%, nhưng đa số là  hố xí đào chưa hợp vệ sinh). Tập qn ăn gỏi cá  ở đây đã có từ lâu và người dân xem món ăn gỏi  cá là món “khối khẩu”.  Tỷ lệ và cường độ nhiễm SLGN tại hai xã  nghiên cứu  Để xác định tỷ lệ nhiễm và cường độ nhiễm  SLGN, xét nghiệm phân kỹ thuật Kato‐Katz cho  302  người  tại  xã  Thanh  và  304  đối  tượng  tại  xã  Xy. Số liệu về tỷ lệ nhiễm SLGN chung tại 2 xã là  11,39%, trong đó tại xã Thanh là 11,59% và xã Xy  là  11,18%,  khơng  có  sự  khác  biệt  có  ý  nghĩa  thống kê. So với kết quả nghiên cứu của Nguyễn  Văn Chương năm 1992 tại Phú n (36,97%) và  năm 2002 tại Bình Định (20,17%) thì kết quả này  thấp hơn, điều này tùy thuộc vào tỷ lệ ăn gỏi cá  của người dân, hoặc điều kiện vệ sinh,… Nhưng  so với nghiên cứu của Bùi Văn Tuấn và cộng sự  năm 2007 tại xã Đăk Mơn, huyện Đăk Glei, tỉnh  Chun Đề Y Tế Cơng Cộng  Kon Tum(4,1) với tỷ lệ nhiễm SLGN là 10,45% thì  kết quả này có cao hơn.   Theo kết quả của bảng 3.5, cường độ nhiễm  SLGN  tại  xã  Thanh  là  33,38  trứng  trên  1  gam  phân, tại xã Xy là 29,52 trứng trên 1 gam phân.  Cường  độ  nhiễm  trung  bình  của  2  xã  là  31,4  trứng/  gam  phân.  Khi  so  sánh  với  kết  quả  của  Nguyễn Văn Chương và Đỗ Thái Hòa, cho thấy  cường độ nhiễm trung bình trong nghiên cứu tại  xã Thanh và xã Xy thấp hơn so với ở Mỹ Chánh,  Bình  Định  (228  trứng/gam),  An  Mỹ  (225  trứng/  gam) và Nga An (229,5 trứng/ gam). Điều này có  lẽ  do  tần  suất  ăn  gỏi  cá  các  đối  tượng  trong  nghiên  cứu  này  thấp  hơn  tần  suất  tại  các  điểm  nghiên cứu tác giả trên.  Xác định loài SLGN tại xã Thanh và xã Xy  Loài SLGN trên người  Trong  số  69  trường  hợp  nhiễm  SLGN  xác  định qua chuẩn vàng soi trứng trong phân đều  được điều trị thuốc đặc hiệu, song để phục vụ  có định loại sán, số ca được cho uống thuốc và  đãi phân tìm SLGN trưởng thành là 11 ca, tuy  nhiên  chỉ  có  3/11  ca  đó  thu  thập  được  sán  trưởng  thành,  với  tổng  số  sán  thu  được  là  63  con.  Thực  hiện  khâu  định  loại  bằng  hình  thái  học và phân tích sinh học phân tử, trong số 63  mẫu  sán  đại  diện  từ  3  cá  thể,  chọn  ra  6  mẫu  (mỗi  cá  thể 2  mẫu)  dùng  trong  định  loại  hình  thái  và  6  mẫu  (mỗi  cá  thể  2  mẫu)  dùng  trong  định loại theo PCR.  Kết quả xác định 6 mẫu sán tại điểm nghiên  cứu sán có cơ thể sán mảnh, màu hồng nhạt khi  nhuộm  carmine,  giác  miệng  ở  đầu  nhỏ,  giác  bụng tròn nằm ở phần ba phía dưới, tử cung gấp  khúc nhiều lần, chứa đầy trứng, đặc biệt là tinh  hồn  hình  thùy  nằm  ở  phía  cuối  cơ  thể.  Đối  chiếu  với  phân  loại,  căn  cứ  hình  thái  và  kích  thước cho biết SLGN ở xã Thanh và xã Xy thuộc  lồi  O.  viverrini  (Cobbold,  1875),  giống  Opisthorchis  (Looss,  1907),  họ  Opisthorchidae  (Braun,  1901),  bộ  Opisthorchiida  (La  Rue,  1957).  Kết quả hình thái học, cho thấy lồi SLGN giống  như  lồi  sán  thu  thập  được  ở  xã  Đăk  Mơn,  543 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014   huyện Đăk Glei, tỉnh Kon Tum mà nhóm nghiên  cứu từng phát hiện(4,1).  Để  giám  định  về  mặt  phân  tử  loài  sán  O.  viverrini  tại  điểm  nghiên  cứu  đồng  thời  cũng  khơng thể loại trừ khả năng lồi SLGN tại đây có  thể là một chủng lai giữa Opisthorchis ‐ Clonorchis  nên cần thiết tiến hành kỹ thuật PCR. Phản ứng  PCR  được  thực  hiện  với  mồi  đặc  hiệu  cho  O.viverrini  (OvF‐OvR)  với  DNA  tổng  số  được  tách chiết từ các mẫu sán thu nhận tại xã Thanh  và xã Xy, sản phẩm điện di cho thấy sản phẩm  PCR  thu  được  từ  các  mẫu  SLGN  có  kích  thước  bằng với kích thước mẫu sán O.viverrini đã được  giám định bằng phân tử dùng làm chứng dương  (kích  thước  1357  bp),  sản  phẩm  PCR  của  các  mẫu sán được giám định loài là đoạn DNA hiển  thị rất rõ và đơn băng, chứng tỏ chất liệu DNA  của SLGN ở xã Thanh và xã Xy rất đặc hiệu với  cặp mồi dùng giám định O.viverrini (OvF‐OvR),  từ kết quả giám định này cho thấy mẫu sán thu  nhận tại xã Thanh và xã Xy là O. viverrini.  Phản ứng PCR được thực hiện bằng cặp mồi  đặc  hiệu  cho  O.viverrini  (OvF‐OvR)  với  DNA  tổng số(7)được  tách  chiết  từ  các mẫu  SLGN  thu  nhận tại xã Thanh và xã Xy, kết quả cho thấy sản  phẩm  PCR  thu  được  từ  các  mẫu  SLGN  này  có  kích thước bằng với kích thước của mẫu sán O.  viverrini đã được giám định bằng phân tử dùng  làm  chứng  dương  (kích  thước  khoảng  1357  bp,  giếng 3), sản  phẩm PCR của  các mẫu  sán  được  giám  định  loài  là  đoạn  DNA  hiển  thị  rất  rõ  và  đơn băng, chứng tỏ khuôn DNA của SLG nhỏ ở  xã  Thanh  và  xã  Xy  là  hết  sức  đặc  hiệu  với  cặp  mồi  dùng  giám  định  O.viverrini  (OvF‐OvR).  Từ  kết quả giám định này cho thấy các mẫu sán thu  nhận  tại  xã  Thanh  và  xã  Xy  là  O.viverrini.  Kết  quả giám định PCR cho thấy lồi sán O.viverrini  ở đây cũng giống như ở xã Đăk Mơn, huyện Đăk  Glei, tỉnh Kon Tum.  Đồng  thời  phản  ứng  PCR  được  thực  hiện  bằng  cặp  mồi  đặc  hiệu cho C.sinensis  (CsF‐CsR)  với  DNA  tổng  số  được  tách  chiết  từ  các  mẫu  SLGN thu nhận tại xã Thanh và xã Xy, kết quả  544 cho thấy khơng có sản phẩm PCR nào thu được  từ các mẫu SLGN này ngoại trừ một vạch DNA  của C.sinensis đã được giám định bằng phân tử  dùng làm chứng dương (kích thước khoảng 612  bp, giếng 3). Từ kết quả giám định này cho thấy  các  mẫu  sán  thu  nhận  tại  xã  Thanh  và  xã  Xy  không  phải  là  C.sinensis. Từ  kết  quả  giám  định  cho thấy các mẫu sán thu nhận tại xã Thanh và  xã Xy là O.viverrini.   KẾT LUẬN  Tỷ lệ, cường độ nhiễm SLGN tại các điểm  nghiên cứu  Tại  xã  Thanh  và  xã  Xy  có  bệnh  SLGN  lưu  hành,  tỷ  lệ  nhiễm  chung  11,39%,  trong  đó  tỷ  lệ  nhiễm  tại  xã  Thanh  là  11,59%,  tại  xã  Xy  là  11,18%. Cường độ nhiễm SLGN tại xã Thanh là  33,38  trứng/gam  phân,  tại  xã  Xy  là  29,52  trứng/gam phân.  Loài SLGN tại các điểm nghiên cứu  Loài SLGN tại các điểm nghiên cứu thu thập  trên  người  qua  định  loại  bằng  hình  thái  học  và  giám định sinh học phân tử là lồi O. viverrini.  KIẾN NGHỊ  Đẩy  mạnh  công  tác  tuyên  truyền  giáo  dục  nâng  cao  kiến  thức  phòng  chống  bệnh  SLGN  cộng đồng tại xã Thanh và Xy. Vận động người  dân từ bỏ tập qn ăn gỏi cá, nâng cao tỷ lệ hộ  có hố xí hợp vệ sinh;  Nghiên  cứu  này  chưa  giải  trình  tự  đề  xác  định sự tương đồng về lồi O. viverrini tại hai  điểm  này  nên  sẽ  là  một  hạn  chế  trong  phân  tích sâu về mặt gen học, đồng thời điểm này sẽ  là  định  hướng  nghiên  cứu  tiếp  theo  để  đánh  giá  cũng  như  so  sánh  tương  đồng  trong  ngân  hàng gen.   TÀI LIỆU THAM KHẢO  Bùi Văn Tuấn, Nguyễn Văn Chương (2011). Thực trạng nhiễm  sán lá gan nhỏ tại xã Đak Mơn. huyện Đak Glei. tỉnh Kon Tum.  Tạp chí Y học thực hành. 796. 165‐168.  Honjo  S,  Srivatanakul  P,  Sriplung  H,  et al, (2005).  Genetic  and  environmental determinants of risk for cholangiocarcinoma via  Opisthorchis  viverrini  in  a  densely  infested  area  in  Nakhon  Phanom. northeast Thailand. Int J Cancer. 117: 854–860.  Chun Đề Y Tế Cơng Cộng  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014  Nghiên cứu Y học   Keiser  J,  Utzinger  J  (2005).  Emerging  foodborne  trematodiasis.  Emerg Infect Dis. 11: 1507–1514.  Nguyễn  Văn  Chương,  Nguyễn  Văn  Khá  và  cộng  sự  (2003).  Nghiên cứu thực trạng nhiễm sán lá gan nhỏ và đánh giá hiệu  quả của mộtsố biện pháp can thiệp ở 3 xã của huyện Phù Mỹ.  tỉnh Bình Định. Hội nghị khoa học ngành Y tế ‐ Bình Định. Tr.23  ‐ 28.    Sriamporn S, Pisani P, Pipitgool V, Suwanrungruang K, Kamsa‐ ard S, et al, (2004). Prevalence of Opisthorchis viverriniinfection  and incidence of cholangiocarcinoma in Khon Kaen. Northeast  Thailand. Trop Med Int Health. 9: 588–594.  Trung  DD,  Van  DN,  Waikagul  J,  Dalsgaard  A,  Chai  JY,  Sohn  WM  (2007).  Fishborne  zoonotic  intestinal  trematodes  in  Vietnam.Emerg Infect Dis.13:1828–33.  Nguyễn  Văn  Đề,  Lê  Thanh  Hoà  và  cộng  sự  (2007).  Xác  định  thành phần lồi sán lá thường gặp ở Việt Nam bằng sinh học  phân tử “. Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh. 11(2)80 ‐ 88.    Sithithaworn  P,  Andrews  RH,  Nguyen  VD,  Wongsaroj  T,  Sinuon  M,  Odermatt  P  (2012).  The  current  status  of  opisthorchiasis and clonorchiasis in the Mekong basin.Parasitol  Int. 61:10–6.    Ngày phản biện nhận xét bài báo:   23/6/2014  Ngày bài báo được đăng:   14/11/2014  Ngày nhận bài báo:         16/5/2014      Chuyên Đề Y Tế Công Cộng  545 ... Nghiên cứu tỷ lệ, cường độ nhiễm sán lá gan bằng kỹ thuật Kato‐katz;  Thu  thập  sán trưởng  thành  trên người và  định loại bằng hình thái học và giám định PCR;   541 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014... tổng  số  sán lá gan nhỏ thu thập được là 63 con.  Định lồi bằng hình thái học    Hình 1. Hình thể SLGN trưởng thành  Nhận xét: Xác  định hình thái 6  mẫu sán cho  thấy  cơ  thể sán mảnh, ... cá  thể 2  mẫu)  dùng  trong  định loại  hình  thái  và  6  mẫu  (mỗi  cá  thể 2  mẫu)  dùng  trong  định loại theo PCR.   Kết quả xác định 6 mẫu sán tại điểm nghiên  cứu sán có cơ thể sán mảnh, màu hồng nhạt khi