Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm định loài sán lá gan nhỏ opisthorchis viverrini nhiễm trên người bằng kỹ thuật PCR trên hệ gen ty thể tại huyện Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 ĐỊNH LỒI SÁN LÁ GAN NHỎ OPISTHORCHIS VIVERRINI NHIỄM TRÊN NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR TRÊN HỆ GEN TY THỂ TẠI HUYỆN HƯỚNG HĨA, TỈNH QUẢNG TRỊ Nguyễn Văn Chương*, Bùi Văn Tuấn*, Huỳnh Hồng Quang* TĨM TẮT Đặt vấn đề: Sán lá gan nhỏ là vấn đề y tế cơng cộng quan trọng tại các vùng Đơng Á và Đơng Âu, bệnh gây ra bởi lồi Opisthorchis viverrini, Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis và lồi Opisthorchis lobatus mới. Hiện tại, có hơn 600 triệu người có nguy cơ nhiễm các sán lá này trên phạm vi tồn cầu. Hầu hết bệnh nhân nhiễm sán khơng có triệu chứng, chỉ có 5‐10% số ca nhiễm nặng biểu hiện các triệu chứng khơng đặc hiệu. Tuy nhiên, nhiễm nặng và kéo dài có thể dẫn đến một loạt bệnh gan mật (viêm đường mật, viêm túi mật, vàng da do tắc mật), đặc biệt trên cả mơ hình thực nghiệm và dịch tễ học cho bằng chứng nhiễm các sán này là một trong các ngun nhân dẫn đến ung thư biểu mơ đường mật. Phương pháp nghiên cứu: Với thiết kế cắt ngang mơ tả. Sử dụng kỹ thuật giám định lồi PCR trên gen ty thể xác định và phân biệt lồi Clonorchis sinensis và Opisthorchis viverrini. Kết quả: Kỹ thuật PCR đã xác định lồi sán nhiễm trên người là lồiOpisthorchis viverrini. Kết luận: Việc xác định đặc hiệu là rất cần thiết để hiểu biết về tính đa dạng lồi sán lá gan nhỏ tại Việt Nam cũng như xây dựng bản đồ phân bố trong khu vực Mê Kơng, đề ra các biện pháp phòng chống thích hợp. Từ khóa: Opisthorchis viverrini, Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis ABSTRACT IDENTIFICATION OF Opisthorchis viverrini BY A MITOCHONDRIAL‐BASED MULTIPLEX PCR IN HUONG HOA DISTRICT, QUANG TRI PROVINCE Nguyen Van Chuong, Bui Van Tuan, Huynh Hong Quang * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 6‐ 2014: 540 – 545 Backgrounds: Liver fluke infection caused by Opisthorchis viverrini, Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis, and new Opisthorchis lobatus is a major public health problem in East Asia and Eastern Europe. Currently, more than 600 million people are at risk of infection with these trematodes. Most people with opisthorchiasis or clonorchiasis have no symptoms, only 5‐10% of infected people with heavy load have non‐ specific symptoms. Nonetheless, heavy, long‐standing infection is associated with a number of hepatobiliary diseases (cholangitis, obstructive jaundice, cholecystitis), especially, both experimental and epidemiologic evidence strongly implicates these fluke infection in the aetiology of one of the liver cancer subtypes as cholangiocarcinoma. Methods: A cross sectional study was conducted. A mitochondrial‐based multiplex PCR was used to identify and discriminate of Clonorchis sinensis and Opisthorchis viverrini species. Result: Themultiplex PCR technique in identification of adults fluke from infected patients was Opisthorchis viverrini. Conclusion: Specific identification is necessary for understanding of the liver fluke diversity in Vietnam, mapping of its distribution in Mekong region, and propose proper control measures. Key words: Opisthorchis viverrini, Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis * Viện Sốt rét KST‐CT Quy Nhơn g Tác giả liên lạc: TS. Huỳnh Hồng Quang ĐT: 0905103496 540 Email: huynhquangimpe@yahoo.com Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Nghiên cứu Y học ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh sán lá gan nhỏ (SLGN) là một trong những bệnh ký sinh trùng lây truyền qua thức ăn quan trọng, với 3 loài chính Opisthorchis viverrini (O.viverrini), Clonorchis sinensis (C. sinensis) và Opisthorchis felineus (O. felineus), gây ảnh hưởng rất lớn đến sức khoẻ của con người, đặc biệt dẫn đến ung thư biểu mô đường mật. SLGN hiện là mối nguy cơ và đe dọa đến khoảng 600 triệu người trên phạm vi toàn cầu, đặc biệt tại khu vực Đơng Á và Đơng Âu(3). Lồi O. viverrinilưu hành chủ yếu ở các quốc gia Đông Nam Á, gồm Thái Lan, Lào, Việt Nam và Campuchia; C. sinensis thường gặp ở vùng nông thôn tại Hàn Quốc và Trung Quốc(6). Tại Việt Nam, bệnh SLGL nhỏ lưu hành ít nhất 25 tỉnh, thành, trong đó 15 tỉnh phía bắc và 10 tỉnh miền Trung‐Tây Ngun(7,8) với tỷ lệ nhiễm từ 0,2 ‐ 37%. Hầu hết người bệnh SLGN khơng có triệu chứng, chỉ có 5‐10% số ca nhiễm nặng xuất hiện các triệu chứng khơng đặc hiệu như đau hạ sườn phải, khó tiêu và suy nhược. Tuy nhiên, nhiễm trùng nặng và kéo dài có liên quan đến một số loại bệnh gan mật, gồm có viêm đường mật, tắc mật vàng da, gan lớn, xơ gan viêm túi mật và sỏi túi mật, thậm chí gây ung thư biểu mơ đường mật hoặc ung thư đường mật(2,7). Người bị mắc bệnh SLGN là do ăn phải một số lồi cá nước ngọt có chứa ấu trùng sán chưa được nấu chín, hoặc ăn sống dạng gỏi cá. Vốn dĩ thói quen của một số vùng ven biển miền Trung, thích ăn các món cá nước ngọt dưới dạng “shasimi” (ăn với mù tạt hoặc dạng gỏi) hoặc xử lý chưa chín (tái) như một yếu tố nguy cơ cao nhiễm mầm bệnh SLGN. Huyện Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị với 6 xã vùng rìa giáp với biên giới Lào qua sơng Sepon với đa dạng nhiều lồi cá nước ngọt có thể là nguồn thực phẩm hàng ngày cho người dân hai bên sông, cùng với tập quán ăn gỏi cá nước ngọt nên khả năng có lưu hành bệnh SLGN là rất lớn(6). Với ý tưởng xác định lồi SLGN lưu hành cũng như đề xuất biện pháp phòng chống thích hợp, đề tài này tiến Chun Đề Y Tế Cơng Cộng hành nhằm mục tiêu xác định lồi SLGN ký sinh ở người và ở các vật chủ trung gian tại điểm nghiên cứu bằng ký thuật phân tử. ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Địa điểm và thời gian Xã Thanh và Xy, huyện Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị (xã giáp với biên giới Lào); Từ tháng 4/2013 đến tháng 6/2013. Đối tượng nghiên cứu Người dân trong 2 xã được chọn, chọn từ 5 tuổi trở lên; Mẫu SLGN thu thập được trên người và trên vật chủ trung gian cá. Phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu. Theo phương pháp nghiên cứu ngang mô tả. Cỡ mẫu nghiên cứu tỷ lệ nhiễm SLG nhỏ, theo công thức: p.(1 ‐ p) n = Z2(1‐ /2) d2 Trong đó: n : Cỡ mẫu tối thiểu cần đạt được; p: Tỷ lệ nhiễm SLGN từ một điều tra thăm dò trước (pilot survey) = 13,5% d: Sai số tuyệt đối, chọn 0,04. Z(1 ‐ /2): Hệ số tin cậy = 1,96 (với = 0,05, độ tin cậy CI = 95% ) Vậy cỡ mẫu sẽ là: n ≈ 280,3 cho mỗi điểm nghiên cứu. Cộng thêm những người mất mẫu + 10% số ca, vậy cỡ mẫu cuối cùng là 300 cho mỗi điểm. Tính trung bình mỗi hộ 4 người, chọn 75 hộ cho mỗi điểm. Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu tỷ lệ, cường độ nhiễm sán lá gan bằng kỹ thuật Kato‐katz; Thu thập sán trưởng thành trên người và định loại bằng hình thái học và giám định PCR; 541 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Kỹ thuật nghiên cứu Xét nghiệm phân Kato‐Katz: Các mẫu phân thu thập được; Kỹ thuật định loại SLGN bằng hình thái học (phân loại Nguyễn Thị Lê, 1995); Kỹ thuật giám định lồi SLGN bằng PCR: ADN tổng số của từng con sán riêng biệt được tách chiết bằng QIAamp DNA Extraction kit (QIAGEN Inc, USA). Mồi được sử dụng trong phản ứng này là các cặp mồi đặc hiệu được sử dụng để chẩn đoán phân biệt O. viverrini với C.sinensis (Le và cs, 2006), cho sản phẩm PCR xác định O.viverrini có độ dài là 1357 bp và C.sinensis là 612 bp; Phân tích và xử lý số liệu Nhập số liệu vào phần mềm Epidata và xử lý trên chương trình Stata. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thực trạng SLGN tại các điểm nghiên cứu Bảng 1. Tỷ lệ và cường độ nhiễm SLGN chung ở 2 xã qua xét nghiệm phân Địa điểm Thanh Xy Cộng Số XN Số ca phát Số trứng trứng sán gam phân 302 35 (11,59%) 33,38 304 34 (11,18%) 29,52 606 69 (11,39%) 31,4 Nhận xét: Tỷ lệ nhiễm sán tại 2 xã là 11,39%, trong đó tại xã Thanh là 11,59% và xã Xy là 11,18%. Cường độ nhiễm sán tại xã Thanh là 33,38 trứng/gam phân, tại xã Xy là 29,52 trứng/gam phân. Kết quả điều tra loài SLGN ở người và ở vật chủ trung gian Bảng 2. Kết quả XN đãi phân thu thập SLGN trưởng thành Địa điểm Số ca XN phân Số ca có sán Lượng sán thu (+) Xã Thanh 44 Xã Xy 19 Cộng 11 63 Nhận xét: Trong số 35 ca (xã Thanh) và 34 ca (xã Xy) nhiễm SLGN, chỉ chọn 5 ca (xã Thanh) và 6 ca (xã Xy) đưa đi đãi phân để xác định hình 542 thái học và phân học phân tử định lồi SLGN. Số ca được cho uống thuốc và đãi phân tìm sán trưởng thành là 11 ca, song chỉ có 3 ca thu thập được sán trưởng thành, tổng số sán lá gan nhỏ thu thập được là 63 con. Định lồi bằng hình thái học Hình 1. Hình thể SLGN trưởng thành Nhận xét: Xác định hình thái 6 mẫu sán cho thấy cơ thể sán mảnh, màu hồng nhạt khi nhuộm Carmine, giác miệng ở đầu nhỏ, giác bụng tròn nằm ở 1/3 phía dưới, tử cung gấp khúc nhiều lần, chứa đầy trứng, đặc biệt là tinh hồn phân nhánh hình thùy nằm ở phía cuối cơ thể. Dựa vào khóa phân loại, căn cứ hình thái và kích thước của sán, loài sán ở xã Thanh và Xy thuộc loài Opisthorchis viverrini (Cobbold, 1875), giống Opisthorchis (Looss, 1907), họ Opisthorchidae (Braun, 1901), bộ Opisthorchiida (La Rue, 1957). Giám định SLGN bằng kỹ thuật PCR 1 2 3 4 5 6 7 8 O. viverrini 1,5kb ~1357bp 1kb Hình 2. Kết quả điện di sản phẩm PCR của mẫu SLGN sử dụng cặp mồi OvF‐OvR Giếng 1: Chứng (‐) Giếng 2: Chứng (+) O. viverrini, 1357bp Giếng 3‐ 8: Mẫu SLGN thu nhận tại điểm. Giếng 9: Thang chuẩn DNA (1kb DNA ladder). Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Nghiên cứu Y học Phản ứng PCR thực hiện bằng mồi đặc hiệu C. sinensis (CsF‐CsR) với các mẫu sán, kết quả cho thấy khơng có sản phẩm PCR nào thu được từ các mẫu sán này, ngoại trừ một vạch DNA của C. sinensis đã được giám định bằng phân tử dùng làm chứng (+) (612 bp, giếng 3). Từ kết quả giám định này cho thấy mẫu sán thu nhận tại xã Thanh và xã Xy không phải là C. sinensis. BÀN LUẬN Bệnh SLGN gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe con người, song các hoạt động phòng chống hiệu quả vẫn chưa được triển khai bao phủ. Bệnh SLGN lưu hành ở những tỉnh/ thành có tập quán, thói quen ăn gỏi cá nước ngọt, điều kiện vệ sinh môi trường kém. Xã Thanh và xã Xy, là 2 xã thuộc huyện Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị giáp với Lào qua sơng Sepon, người dân ở đây chủ yếu là dân tộc Vân Kiều và một số ít người Kinh hoặc Paco vào đây bn bán hoặc là cán bộ tăng cường và bộ đội biên phòng. Việc quản lý phân nói riêng và vệ sinh mơi trường nói chung còn “khoảng trống” (tỷ lệ hộ có hố xí chỉ khoảng 50%, nhưng đa số là hố xí đào chưa hợp vệ sinh). Tập qn ăn gỏi cá ở đây đã có từ lâu và người dân xem món ăn gỏi cá là món “khối khẩu”. Tỷ lệ và cường độ nhiễm SLGN tại hai xã nghiên cứu Để xác định tỷ lệ nhiễm và cường độ nhiễm SLGN, xét nghiệm phân kỹ thuật Kato‐Katz cho 302 người tại xã Thanh và 304 đối tượng tại xã Xy. Số liệu về tỷ lệ nhiễm SLGN chung tại 2 xã là 11,39%, trong đó tại xã Thanh là 11,59% và xã Xy là 11,18%, khơng có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê. So với kết quả nghiên cứu của Nguyễn Văn Chương năm 1992 tại Phú n (36,97%) và năm 2002 tại Bình Định (20,17%) thì kết quả này thấp hơn, điều này tùy thuộc vào tỷ lệ ăn gỏi cá của người dân, hoặc điều kiện vệ sinh,… Nhưng so với nghiên cứu của Bùi Văn Tuấn và cộng sự năm 2007 tại xã Đăk Mơn, huyện Đăk Glei, tỉnh Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Kon Tum(4,1) với tỷ lệ nhiễm SLGN là 10,45% thì kết quả này có cao hơn. Theo kết quả của bảng 3.5, cường độ nhiễm SLGN tại xã Thanh là 33,38 trứng trên 1 gam phân, tại xã Xy là 29,52 trứng trên 1 gam phân. Cường độ nhiễm trung bình của 2 xã là 31,4 trứng/ gam phân. Khi so sánh với kết quả của Nguyễn Văn Chương và Đỗ Thái Hòa, cho thấy cường độ nhiễm trung bình trong nghiên cứu tại xã Thanh và xã Xy thấp hơn so với ở Mỹ Chánh, Bình Định (228 trứng/gam), An Mỹ (225 trứng/ gam) và Nga An (229,5 trứng/ gam). Điều này có lẽ do tần suất ăn gỏi cá các đối tượng trong nghiên cứu này thấp hơn tần suất tại các điểm nghiên cứu tác giả trên. Xác định loài SLGN tại xã Thanh và xã Xy Loài SLGN trên người Trong số 69 trường hợp nhiễm SLGN xác định qua chuẩn vàng soi trứng trong phân đều được điều trị thuốc đặc hiệu, song để phục vụ có định loại sán, số ca được cho uống thuốc và đãi phân tìm SLGN trưởng thành là 11 ca, tuy nhiên chỉ có 3/11 ca đó thu thập được sán trưởng thành, với tổng số sán thu được là 63 con. Thực hiện khâu định loại bằng hình thái học và phân tích sinh học phân tử, trong số 63 mẫu sán đại diện từ 3 cá thể, chọn ra 6 mẫu (mỗi cá thể 2 mẫu) dùng trong định loại hình thái và 6 mẫu (mỗi cá thể 2 mẫu) dùng trong định loại theo PCR. Kết quả xác định 6 mẫu sán tại điểm nghiên cứu sán có cơ thể sán mảnh, màu hồng nhạt khi nhuộm carmine, giác miệng ở đầu nhỏ, giác bụng tròn nằm ở phần ba phía dưới, tử cung gấp khúc nhiều lần, chứa đầy trứng, đặc biệt là tinh hồn hình thùy nằm ở phía cuối cơ thể. Đối chiếu với phân loại, căn cứ hình thái và kích thước cho biết SLGN ở xã Thanh và xã Xy thuộc lồi O. viverrini (Cobbold, 1875), giống Opisthorchis (Looss, 1907), họ Opisthorchidae (Braun, 1901), bộ Opisthorchiida (La Rue, 1957). Kết quả hình thái học, cho thấy lồi SLGN giống như lồi sán thu thập được ở xã Đăk Mơn, 543 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 huyện Đăk Glei, tỉnh Kon Tum mà nhóm nghiên cứu từng phát hiện(4,1). Để giám định về mặt phân tử loài sán O. viverrini tại điểm nghiên cứu đồng thời cũng khơng thể loại trừ khả năng lồi SLGN tại đây có thể là một chủng lai giữa Opisthorchis ‐ Clonorchis nên cần thiết tiến hành kỹ thuật PCR. Phản ứng PCR được thực hiện với mồi đặc hiệu cho O.viverrini (OvF‐OvR) với DNA tổng số được tách chiết từ các mẫu sán thu nhận tại xã Thanh và xã Xy, sản phẩm điện di cho thấy sản phẩm PCR thu được từ các mẫu SLGN có kích thước bằng với kích thước mẫu sán O.viverrini đã được giám định bằng phân tử dùng làm chứng dương (kích thước 1357 bp), sản phẩm PCR của các mẫu sán được giám định loài là đoạn DNA hiển thị rất rõ và đơn băng, chứng tỏ chất liệu DNA của SLGN ở xã Thanh và xã Xy rất đặc hiệu với cặp mồi dùng giám định O.viverrini (OvF‐OvR), từ kết quả giám định này cho thấy mẫu sán thu nhận tại xã Thanh và xã Xy là O. viverrini. Phản ứng PCR được thực hiện bằng cặp mồi đặc hiệu cho O.viverrini (OvF‐OvR) với DNA tổng số(7)được tách chiết từ các mẫu SLGN thu nhận tại xã Thanh và xã Xy, kết quả cho thấy sản phẩm PCR thu được từ các mẫu SLGN này có kích thước bằng với kích thước của mẫu sán O. viverrini đã được giám định bằng phân tử dùng làm chứng dương (kích thước khoảng 1357 bp, giếng 3), sản phẩm PCR của các mẫu sán được giám định loài là đoạn DNA hiển thị rất rõ và đơn băng, chứng tỏ khuôn DNA của SLG nhỏ ở xã Thanh và xã Xy là hết sức đặc hiệu với cặp mồi dùng giám định O.viverrini (OvF‐OvR). Từ kết quả giám định này cho thấy các mẫu sán thu nhận tại xã Thanh và xã Xy là O.viverrini. Kết quả giám định PCR cho thấy lồi sán O.viverrini ở đây cũng giống như ở xã Đăk Mơn, huyện Đăk Glei, tỉnh Kon Tum. Đồng thời phản ứng PCR được thực hiện bằng cặp mồi đặc hiệu cho C.sinensis (CsF‐CsR) với DNA tổng số được tách chiết từ các mẫu SLGN thu nhận tại xã Thanh và xã Xy, kết quả 544 cho thấy khơng có sản phẩm PCR nào thu được từ các mẫu SLGN này ngoại trừ một vạch DNA của C.sinensis đã được giám định bằng phân tử dùng làm chứng dương (kích thước khoảng 612 bp, giếng 3). Từ kết quả giám định này cho thấy các mẫu sán thu nhận tại xã Thanh và xã Xy không phải là C.sinensis. Từ kết quả giám định cho thấy các mẫu sán thu nhận tại xã Thanh và xã Xy là O.viverrini. KẾT LUẬN Tỷ lệ, cường độ nhiễm SLGN tại các điểm nghiên cứu Tại xã Thanh và xã Xy có bệnh SLGN lưu hành, tỷ lệ nhiễm chung 11,39%, trong đó tỷ lệ nhiễm tại xã Thanh là 11,59%, tại xã Xy là 11,18%. Cường độ nhiễm SLGN tại xã Thanh là 33,38 trứng/gam phân, tại xã Xy là 29,52 trứng/gam phân. Loài SLGN tại các điểm nghiên cứu Loài SLGN tại các điểm nghiên cứu thu thập trên người qua định loại bằng hình thái học và giám định sinh học phân tử là lồi O. viverrini. KIẾN NGHỊ Đẩy mạnh công tác tuyên truyền giáo dục nâng cao kiến thức phòng chống bệnh SLGN cộng đồng tại xã Thanh và Xy. Vận động người dân từ bỏ tập qn ăn gỏi cá, nâng cao tỷ lệ hộ có hố xí hợp vệ sinh; Nghiên cứu này chưa giải trình tự đề xác định sự tương đồng về lồi O. viverrini tại hai điểm này nên sẽ là một hạn chế trong phân tích sâu về mặt gen học, đồng thời điểm này sẽ là định hướng nghiên cứu tiếp theo để đánh giá cũng như so sánh tương đồng trong ngân hàng gen. TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Văn Tuấn, Nguyễn Văn Chương (2011). Thực trạng nhiễm sán lá gan nhỏ tại xã Đak Mơn. huyện Đak Glei. tỉnh Kon Tum. Tạp chí Y học thực hành. 796. 165‐168. Honjo S, Srivatanakul P, Sriplung H, et al, (2005). Genetic and environmental determinants of risk for cholangiocarcinoma via Opisthorchis viverrini in a densely infested area in Nakhon Phanom. northeast Thailand. Int J Cancer. 117: 854–860. Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Nghiên cứu Y học Keiser J, Utzinger J (2005). Emerging foodborne trematodiasis. Emerg Infect Dis. 11: 1507–1514. Nguyễn Văn Chương, Nguyễn Văn Khá và cộng sự (2003). Nghiên cứu thực trạng nhiễm sán lá gan nhỏ và đánh giá hiệu quả của mộtsố biện pháp can thiệp ở 3 xã của huyện Phù Mỹ. tỉnh Bình Định. Hội nghị khoa học ngành Y tế ‐ Bình Định. Tr.23 ‐ 28. Sriamporn S, Pisani P, Pipitgool V, Suwanrungruang K, Kamsa‐ ard S, et al, (2004). Prevalence of Opisthorchis viverriniinfection and incidence of cholangiocarcinoma in Khon Kaen. Northeast Thailand. Trop Med Int Health. 9: 588–594. Trung DD, Van DN, Waikagul J, Dalsgaard A, Chai JY, Sohn WM (2007). Fishborne zoonotic intestinal trematodes in Vietnam.Emerg Infect Dis.13:1828–33. Nguyễn Văn Đề, Lê Thanh Hoà và cộng sự (2007). Xác định thành phần lồi sán lá thường gặp ở Việt Nam bằng sinh học phân tử “. Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh. 11(2)80 ‐ 88. Sithithaworn P, Andrews RH, Nguyen VD, Wongsaroj T, Sinuon M, Odermatt P (2012). The current status of opisthorchiasis and clonorchiasis in the Mekong basin.Parasitol Int. 61:10–6. Ngày phản biện nhận xét bài báo: 23/6/2014 Ngày bài báo được đăng: 14/11/2014 Ngày nhận bài báo: 16/5/2014 Chuyên Đề Y Tế Công Cộng 545 ... Nghiên cứu tỷ lệ, cường độ nhiễm sán lá gan bằng kỹ thuật Kato‐katz; Thu thập sán trưởng thành trên người và định loại bằng hình thái học và giám định PCR; 541 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014... tổng số sán lá gan nhỏ thu thập được là 63 con. Định lồi bằng hình thái học Hình 1. Hình thể SLGN trưởng thành Nhận xét: Xác định hình thái 6 mẫu sán cho thấy cơ thể sán mảnh, ... cá thể 2 mẫu) dùng trong định loại hình thái và 6 mẫu (mỗi cá thể 2 mẫu) dùng trong định loại theo PCR. Kết quả xác định 6 mẫu sán tại điểm nghiên cứu sán có cơ thể sán mảnh, màu hồng nhạt khi