Đề tài đã xây dựng công thức sản phẩm và bào chế sản phẩm dạng viên nang cứng và dạng kem bôi ngoài da, sau đó đánh giá tác dụng làm trắng da và tính kích ứng da của sản phẩm. Kết quả cho thấy 2 sản phẩm có độ an toàn cao, không gây kích ứng và có tác dụng làm trắng da tốt. Với kết quả này đề tài đã phối hợp với các công ty để đăng ký sản phẩm thực phẩm chức năng viên nang trắng da Morus và mỹ phẩm dạng kem MELAGENN.
Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 34, Số (2018) 31-42 Phát triển sản phẩm trắng da chống nám từ nguồn nguyên liệu thiên nhiên Việt Nam Vũ Đức Lợi*, Lê Thị Thu Hường, Bùi Thanh Tùng, Bùi Thị Xuân Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, 144 Xuân Thủy, Cầu Giấy, Hà Nội, Việt Nam Nhận ngày 07 tháng năm 2018 Chỉnh sửa ngày 01 tháng 11 năm 2018; Chấp nhận đăng ngày 25 tháng 12 năm 2018 Tóm tắt: Qua tổng hợp liệu sàng lọc insilico đề tài xác định 21 hợp chất tiềm ức chế enzym tyrosinase Đề tài xác định dược liệu có chứa nhóm chất có tiềm ức chế enzym tyrosinase dùng làm trắng da Đó dâu tằm Từ dâu tằm, đề tài chiết xuất, phân lập phân đoạn dịch chiết 11 hợp chất nhóm flavonoid, terpenoid là: Acid 3,4dihydroxybenzoic, Acid ellagic, Acid gallic, Kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosid, Quercetin 3-Oα-L-rhamnopyranosid, isofraxidin-7-O- β -D-glucopyranosid, (±)-3,5,6,7,8,4’-hexahydroxyflavan, Kaempferol-3,7-di-O-α-L-rhamnopyranosid, 7,4’-dihydroxy-5,3’-dimethoxyflavon, (S)-5,5’,7trihydroxy-2’,4’-dimethoxy-6-methylflavanon Đề tài đánh giá độc tính cấp, tác dụng làm trắng da invitro invivo với phân đoạn dịch chiết hợp chất phân lập Kết cho thấy phân đoạn dịch chiết có độ an toàn cao, phân đoạn dịch chiết hợp chất phân lập có tác dụng làm trắng da tốt Đề tài xây dựng công thức sản phẩm bào chế sản phẩm dạng viên nang cứng dạng kem bơi ngồi da, sau đánh giá tác dụng làm trắng da tính kích ứng da sản phẩm Kết cho thấy sản phẩm có độ an tồn cao, khơng gây kích ứng có tác dụng làm trắng da tốt Với kết đề tài phối hợp với công ty để đăng ký sản phẩm thực phẩm chức viên nang trắng da Morus mỹ phẩm dạng kem MELAGENN Từ khóa: Morus, flavonoid, terpenoid, tyrosinase, dâu tằm Đặt vấn đề học cổ truyền Quá trình nghiên cứu tác dụng sinh học cịn ít, với sản phẩm mỹ phẩm Mặt khác, Việt nam có tiềm lớn sản phẩm từ tự nhiên Cây dâu tằm (Morus alba L.) sách cổ Trung Quốc coi lồi q, có nhiều cơng dụng người, vừa làm thuốc trị bệnh, vừa làm thực phẩm bồi bổ thể Trong đó, dâu tằm khơng dùng để chữa bệnh tiểu đường, huyết áp cao, rối loạn lipid máu, viêm đường hô hấp, nhức đầu, mờ mắt… mà Các sản phẩm làm trắng da, chống nám lưu hành có nhiều vấn đề liên quan đến độ an toàn hiệu Vì trình tìm kiếm thuốc cần thiết Ở Việt Nam nay, việc nghiên cứu phát triển sản phẩm hầu hết dựa vào kinh nghiệm y _ Tác giả liên hệ ĐT: 84-0917879959 Email: ducloi82@gmail.com https://doi.org/10.25073/2588-1132/vnumps.4103 31 32 V.Đ Lợi nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 34, Số (2018) 31-42 dùng với công dụng làm đẹp da, trắng da [1-3] Ngày nay, với phát triển xã hội, nhu cầu làm đẹp người tăng lên, đồng thời người ngày có xu hướng quay với tự nhiên để tìm kiếm giải pháp làm đẹp an toàn, hiệu Lá dâu coi nguồn nguyên liệu tự nhiên quý việc làm đẹp da, loại bỏ vết thâm nám, tàn nhang da Trên giới nghiên cứu dâucho thấy có nhóm chất flavonoid, terpenoid, acid béo có tác dụng chống oxy hóa, chống viêm, trắng da ức chế enzym tyrosinase [4-6] Cho đến nay, cơng trình nghiên cứu cơng bố thành phần hóa học tác dụng sinh học dâu Việt Nam cịn Để góp phần cung cấp sở tiền đề cho việc ứng dụng nguyên liệu dâu chăm sóc sức khỏe nói chung, xây dựng sở khoa học để bào chế số sản phẩm từ cao chiết dâu tằm, nghiên cứu dâu tằm thực Phương pháp nghiên cứu 2.1 Xây dựng sở liệu sàng lọc hợp chất ức chế enzym tyrosinase mạnh có nguồn gốc tự nhiên Việt nam [7] Xây dựng sở liệu cấu trúc hợp chất có nguồn gốc tự nhiên Việt Nam: Các hợp chất tập hợp từ báo đăng tạp chí quốc gia (Dược liệu, Dược học, Hóa học Khoa học cơng nghệ ) quốc tế Xác định hợp chất có tác dụng ức chế mạnh enzyme tyrosinase phương pháp sàng lọc ảo: Hệ thống sàng lọc ảo xây dựng nghiên cứu sử dụng để phát hợp chất có khả ức chế mạnh tyrosinase từ thông tin cấu trúc phân tử hợp chất thu thập 2.2 Chiết xuất phân đoạn dịch chiết phân lập hợp chất dự đốn có tác dụng ức chế tyrosinase [8, 9] + Chiết xuất phân đoạn dịch chiết chứa chất dự đốn có tác dụng ức chế tyrosinase: - Xác định nguồn dược liệu Việt nam chứa hàm lượng lớn hợp chất phát từ nghiên cứu sàng lọc ảo: Nguồn dược liệu xác định theo tài liệu tham khảo dựa số liệu vê hợp chất, nhóm hợp chất sàng lọc - Chọn mẫu dược liệu tương ứng có nhóm chất dự kiến cần phân lập - Chiết lấy cao toàn phần phương pháp chiết xuất phân lập thường quy - Chiết tách phân đoạn đánh giá tác dụng ức chế tyrosinase invitro để chọn phân đoạn có tác dụng ức chế tyrosinase mạnh để phân tích thành phần hóa học + Phân lập hợp chất có tiềm ức chế tyrosinase từ phân đoạn dịch chiết chứng minh tác dụng ức chế tyrosinase - Từ phân đoạn ức chế tyrosinase chọn trên, sử dụng phương pháp sắc ký (sắc ký cột, sắc ký điều chế, sắc ký mỏng, sắc ký lỏng hiệu cao ) để tách phân đoạn dịch chiết chứa nhóm chất dự đốn có khả ức chế tyrosinase + Đánh giá độc tính phân đoạn dịch chiết, chất tinh khiết phân lập phương pháp Litchfield – Wilcoxon, cách tiến hành sau: + Trước tiến hành thí nghiệm, để chuột nhịn ăn qua đêm + Chuột chia thành lô khác (mỗi lô 10 chuột) Cho chuột uốngmẫu nghiên cứu với liều tăng dần thể tích để xác định liều thấp gây chết 100 % chuột liều cao không gây chết chuột (gây chết 0% chuột) + Theo dõi tình trạng chung chuột, q trình diễn biến bắt đầu có dấu hiệu nhiễm độc (như nơn, co giật, kích động…) số lượng chuột chết vòng 72 sau uống thuốc Tất chuột chết mổ để đánh giá tổn thương đại thể Từ xây dựng đồ thị tuyến tính để xác định LD50 thuốc thử Sau tiếp tục theo dõi tình trạng chuột đến hết ngày thứ sau uống thuốc V.Đ Lợi nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 34, Số (2018) 31-42 2.3 Đánh giá tác dụng làm trắng da + Đánh giá tác dụng ức chế enzym tyrosinase phân đoạn dịch chiết chứa hợp chất dự đoán khả ức chế tyrosinase mơ hình in vitro [10-12] - Các phân đoạn dịch chiết thử tác dụng ức chế tyrosinase in vitro Nghiên cứu sử dụng tyrosinase nấm mỡ (Agaricus bisporus) phân lập Đây thí nghiệm tương đối đơn giản, cho phép xác định nhanh tác dụng ức chế, khả ức chế động học trình ức chế Đồng thời, nhiều nghiên cứu tương đồng cấu trúc tyrosinase Agaricus bisporus người - Phân đoạn có tác dụng mạnh tiến hành phân lập xác định số hợp chất chính, sau đánh giá tác dụng ức chế tyrosinase invitro hợp chất + Thử tác dụng ức chế enzym tyrosinase mơ hình in vivo số hợp chất ức chế in vitro mạnh hình thành melanin [13, 14] 2.4 Xây dựng cơng thức bào chế sản phẩm thực phẩm chức năng, mỹ phẩm có tác dụng làm trắng da Bào chế sản phẩm thực phẩm chức mỹ phẩm: Xây dựng công thức, tiến hành khảo sát bào chế sản phẩm Xây dựng tiêu chuẩn sản phẩm [15] 2.5 Đánh giá tác dụng làm trắng da tính kích ứng sản phẩm vừa bào chế + Đánh giá tác dụng làm trắng sản phẩm vừa bào chế: Sử dụng phương pháp kỹ thuật phân đoạn dịch chiết để đánh giá tác dụng sản phẩm vừa bào chế mô hình invivo + Đánh giá tính kích ứng da sản phẩm vừa bào chế được: thông qua đánh giá độ nhạy cảm với da độc tính với da [15] 2.6 Xử lý số liệu thống kê Tất liệu thu nghiên cứu giá trị trung bình thí nghiệm 33 thực ba lần thể SD ±E phân tích thống kê thực cách kiểm tra Student’st test Giá trị p