Trong đề tài này với mục tiêu nhằm nghiên cứu thiết lập qui trình xác định lệch bội nhiễm sắc thể (NST) trên phôi người làm TTTON bằng kĩ thuật FISH trên 5 NST (13, 18, 21 và X, Y) trong PGD: Qui trình được xây dựng dựa trên các thử nghiệm trên 101 phôi có chất lượng xấu.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP QUI TRÌNH CHẨN ĐỐN DI TRUYỀN TIỀN LÀM TỔ TRÊN PHÔI NGƯỜI Trương Thị Thanh Bình*, Nguyễn Thị Thu Lan*, Bùi Võ Minh Hồng**, Đặng Quang Vinh***, Hồ Mạnh Tường***, Trương Đình Kiệt** TĨM TẮT Mục tiêu: Thiết lập qui trình xác định lệch bội nhiễm sắc thể (NST) phôi người làm TTTON kĩ thuật FISH NST (13, 18, 21 X, Y) PGD Phương pháp: Qui trình xây dựng dựa thử nghiệm 101 phơi có chất lượng xấu Việc sinh thiết phôi thực phôi ngày sau mở lỗ zona pellucida hệ thống laser Sau cố định phôi bào, trình lai thực với mẫu dò ADN phương pháp FISH Các tín hiệu từ kính hiển vi huỳnh quang nhiễm sắc thể khảo sát ghi nhận Hiệu qui trình đánh giá kết thực PGD 39 phơi có chất lượng tốt Kết quả: Tỷ lệ phơi ngun vẹn, tỷ lệ nhân tế bào sau cố định, tỷ lệ nhân tế bào có tín hiệu FISH 92,3%; 94,9% 92,3% Kết cho thấy 46,2% phơi có bất thường nhiễm sắc thể khảo sát Kết luận: Đây nghiên cứu Việt Nam thành công việc xây dựng qui trình sinh thiết phơi người giai đoạn ngày sau thụ tinh qui trình thực FISH đơn bào để chẩn đoán lệch bội NST Từ khóa: Thụ tinh ống nghiệm, chẩn đốn di truyền tiền làm tổ, FISH, lệch bội nhiễm sắc thể ABSTRACT ESTABLISHING THE PROTOCOL FOR PREIMPLANTATION GENETIC DIAGNOSIS IN HUMAN EMBRYOS Truong Thi Thanh Binh, Nguyen Thi Thu Lan, Bui Vo Minh Hoang, Dang Quang Vinh, Ho Manh Tuong, Truong Dinh Kiet * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No - 2012: 169 - 174 Objective: To establish the protocol for preimplantation genetic diagnosis in human embryos, using fluorescence in situ hybridization (FISH) in chromosomes (13, 18, 21 and X, Y) Methods: The protocol was established through trials on 101 embryos with poor quality Embryo biopsy was performed on day through an opening on zona pellucida by laser After fixing, hybridization was done with probes The signal of chromosomes was detected under fluorescence microscope The effectiveness of the established protocol was assessed based the application of PGD on 39 good quality embryos Results: The rate of fully intact embryos after biopsy, intact cell after fixation and cells with FISH signals were 92.3%; 94.9% and 92.3%, respectively There were 46.2% embryos with abnormal chromosomes Conclusion: The protocol for embryo biopsy and fluorescent in situ hybridization on day human embryos to diagnose aneuploidy was successfully established in Vietnam in this experimental study Key words: invitro fertilization (IVF), preimplantation diagnosis genetics (PGD), fluorescence in situ IVF Vạn Hạnh, **ĐH Y Dược TPHCM, *** Trung tâm nghiên cứu Di truyền Sức khỏe sinh sản, khoa Y-ĐHQG TpHCM Hội Nội tiết sinh sản Vô sinh TpHCM Tác giả liên lạc: ThS Trương Thị Thanh Bình ĐT: 0989.960903 Email: thanhbinhbct@yahoo.com * 170 Chuyên Đề Sức khỏe Sinh sản Bà Mẹ - Trẻ em Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học hybridization (FISH), aneuploidy ĐẶT VẤN ĐỀ Thuật ngữ “chẩn đoán di truyền tiền làm tổ” dịch từ tiếng Anh “Preimplantation Genetic Diagnosis”, viết tắt PGD Năm 1990, PGD thực với phôi từ thụ tinh ống nghiệm (TTTON) nhằm sàng lọc di truyền đối tượng phôi người Kĩ thuật PGD dựa việc phát bất thường di truyền phôi cấy trở lại vào buồng tử cung phơi khơng có bất thường di truyền chẩn đoán Kĩ thuật cho phép cặp vợ chồng có nguy truyền bệnh lý di truyền cho có hội sinh không mắc bệnh, mà bỏ thai phát bệnh lý thơng qua chẩn đốn tiền sản Hiện nay, nhiều trường hợp có định PGD để chẩn đoán bất thường số lượng cấu trúc NST, số bệnh lý đơn gen hay di truyền theo giới tính Việt Nam phải nước ngồi điều trị, với chi phí điều trị chẩn đốn cho trường hợp 20.000 - 30.000 la Mỹ Việc xây dựng qui trình PGD, tạo sở cho việc nghiên cứu triển khai áp dụng, đáp ứng nhu cầu nhân dân góp phần cung cấp dịch vụ y tế đại đến nhiều đối tượng bệnh nhân Việt Nam với chi phí thấp giảm tượng “chảy máu” ngoại tệ việc người dân phải nước ngồi để chẩn đốn điều trị Sự phát triển PGD gắn liền với kĩ thuật hỗ trợ sinh sản Hiện nay, ngành hỗ trợ sinh sản Việt Nam có bước tiến lớn theo kịp trình độ nước khu vực hầu hết kĩ thuật Tuy nhiên, nay, chưa có nghiên cứu xây dựng thành cơng qui trình PGD điều kiện Việt Nam Cùng với phát triển mạnh kĩ thuật hỗ trợ sinh sản Việt Nam, việc xây dựng qui trình kĩ thuật PGD Việt Nam mở nhiều ứng dụng chẩn đoán di truyền, nâng cao chất lượng dân số phát triển công nghệ y - sinh học liên quan, Sản Phụ Khoa góp phần đáp ứng nhu cầu xã hội phát triển lãnh vực liên quan Việt Nam Nghiên cứu thực nhằm thiết lập qui trình chẩn đốn di truyền phơi người giai đoạn tiền làm tổ Đây đề taì nghiên cứu cấp thành phố, Sở Khoa học Công nghệ TpHCM quản lý Đơn vị chủ trì thực Đại học Y Dược TPHCM Đơn vị phối hợp thực bao gồm Hội Nội tiết Sinh sản Vô sinh TPHCM Bệnh viện Vạn Hạnh PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành phôi thụ tinh ống nghiệm (IVF) không sử dụng cho mục đích điều trị, khoa Hiếm muộn, bệnh viện Vạn Hạnh (IVF Vạn Hạnh) bệnh nhân đồng ý cho phôi văn thời gian từ tháng 03/2009 đến tháng 08/2010 Cỡ mẫu Tỷ lệ bất thường NST phơi có chất lượng 80% Độ tin cậy 95% Độ xác tuyệt đối 10% Cỡ mẫu nghiên cứu 61 phôi Chọn mẫu theo phương pháp đủ mẫu Nguồn thu thập phơi có chất lượng hay ngưng phát triển Bệnh nhân sau tư vấn giải thích mục đích nghiên cứu, đồng ý cho phôi hướng dẫn ký giấy đồng ý cho phơi, sau đó, phơi đưa vào nghiên cứu Phôi đánh giá chất lượng vào ngày thứ ba sau thụ tinh kính hiển vi đảo ngược với độ phóng đại 300 lần Theo đó, phơi xem có chất lượng xấu có từ - tế bào tỉ lệ phân mảnh bào tương ≥ 15% thể tích phơi Các phơi có - tế bào vào thời điểm kiểm tra xem phôi ngưng phát triển 171 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Phương pháp tiến hành Thiết lập qui trình Qui trình sinh thiết phôi xây dựng IVF Vạn Hạnh Qui trình thực FISH đơn bào gồm cơng đoạn (1) cố định tế bào, (2) lai tế bào, (3) rửa sau lai (4) phân tích kết lai Trong đó, cơng đoạn cố định tế bào thực IVF Vạn Hạnh, công đoạn lại (từ số đến 4) xây dựng Phòng xét nghiệm di truyền, Đại học Y Dược TpHCM Sinh thiết phôi Chuyển phôi cần sinh thiết từ đĩa nuôi cấy vào giọt môi trường ISM1 Đặt đĩa sinh thiết lên bệ ấm kính Kích hoạt hệ thống tạo laser để tạo lỗ thủng có kích thước 30 - 40µm màng suốt phôi Đưa kim sinh thiết áp vào phần lỗ thủng hút từ từ phôi bào phơi bào hút hồn tồn khỏi phơi Nhả phôi bào vừa hút vào môi trường Rửa phôi sau sinh thiết vài lần môi trường ISM1, chuyển phôi vào môi trường cấy để tiếp tục theo dõi khả sống phát triển Thực FISH đơn bào Nhúng lam mẫu vào dung dịch ethanol 70%, 85% 100% lạnh (4oC) phút/dung dịch Để khơ hồn tồn khơng khí Quan sát vị trí nhân kính hiển vi có vật kính phản pha Lai tế bào Lấy mẫu dò ADN MultiVysion từ -20oC để nhiệt độ phòng 5-10 phút trước sử dụng Cho 1µl dung dịch mẫu dò lên vùng nhân tế bào lam kính Phủ miếng lam phủ 3x3mm2 miếng parafilm 5x5mm2 Đặt lam mẫu lam mẫu đối chứng vào máy lai khởi động chương trình lai Khi chương trình kết thúc, lấy lam mẫu khỏi máy Rửa sau lai Tháo bỏ parafilm lam phủ, nhúng lam mẫu vào lọ coplin chứa dung dịch rửa I (0,4xSSC /0,3% NP-40) 73oC phút Chuyển lam mẫu sang lọ coplin chứa dung dịch rửa II (2xSSC /0,1% NP-40) nhiệt độ phòng phút Lấy lam mẫu đặt lam dựng đứng vùng tối khơ hồn tồn Cố định phơi bào Dùng Pasteur pipette chuyển phôi bào vào giếng thứ hộp giếng chứa dung dịch nhược trương - 10 giây Chuyển phôi bào sang giếng thứ chứa dung dịch trải 30 giây Chuyển phôi bào lên vị trí đánh dấu lam kính, với 2-3µl dung dịch trải, để khơ tự nhiên Nhỏ giọt dung dịch cố định lên vùng có phôi bào Lặp lại vài lần đến phần bào tương tan hồn tồn, lại nhân tế bào Nhúng lam mẫu vào dung dịch 2xSSC phút Nhỏ 2µl Antifade II lên vùng có nhân tế bào, đặt miếng lam phủ 5x5mm2 lên Hàn mép lam phủ sơn móng tay khơng màu Phân tích kết Đặt lam mẫu lên kính tìm vị trí tế bào vật kính phản pha có độ phóng đại thấp Bật nguồn sáng huỳnh quang sử dụng lọc màu xanh lơ (Spectrum Aqua) Chuyển qua vật kính x100 điều chỉnh ốc vi cấp kính để tìm lại vị trí nhân tế bào Phân tích tín hiệu màu xanh lơ (NST 18) Đổi lọc màu để phân tích tín hiệu màu xanh dương (NST X), màu vàng (NST 172 Chuyên Đề Sức khỏe Sinh sản Bà Mẹ - Trẻ em Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học Y), màu xanh (NST 21) màu đỏ (NST 13) Bảng 2: Tỉ lệ bất thường NST nhóm phơi khác KẾT QUẢ Số lượng bất thường NST Phôi khá/tốt 15/36 Phôi chất lượng xấu 15/32 Phôi ngừng phát triển 7/12 Tổng cộng 37/80 Trong trình xây dựng qui trình kĩ thuật, chúng tơi nhận 101 phơi có chất lượng xấu ngưng phát triển Trong nghiên cứu, thực qui trình cố định tế bào theo phác đồ đại học Chiangmai, Thái Lan (phác đồ A), phác đồ trung tâm Shady Grove (phác đồ B) phác đồ cải tiến (phác đồ C) Kết cho thấy phác đồ C cho thấy tỷ lệ nhân tế bào có tín hiệu sau FISH cao (62,5% so với 47,5% 33,3%) Ngoài ra, nhiều qui trình chi tiết bước thực PGD hoàn thiện thực nghiệm Ngồi 101 phơi chất lượng xấu ngưng phát triển theo tiêu chuẩn nhận mẫu, thu thập 39 phơi có chất lượng tốt Đây phơi có chất lượng khá/tốt trữ lạnh bệnh nhân đồng ý cho nghiên Tỉ lệ 41,6 46,9 58,3 46,2 BÀN LUẬN PGD qui trình phức tạp, gồm nhiều cơng đoạn, kết hợp nhiều kĩ thuật, cơng nghệ cao đòi hỏi kiến thức kỹ thục chuyên gia thuộc lãnh vực hỗ trợ sinh sản chẩn đoán di truyền Đây đề tài thực nhằm thiết lập qui trình kĩ thuật chẩn đốn di truyền tiền làm tổ (PGD) phơi TTTON điều kiện thực tế Việt Nam Trong phần bàn luận này, vấn đề nguồn vật liệu sử dụng cho PGD, phương pháp sinh thiết phôi, phác đồ cố định tế bào, hiệu qui trình kĩ thuật xây dựng, ý nghĩa đề tài đề cập cứu khơng nhu cầu sử dụng Chúng tơi Nguồn vật liệu di truyền tiến hành sinh thiết tế bào thực qui trình Việc tiến hành chẩn đốn di truyền thực thơng qua sinh thiết (1) thể cực noãn, (2) tế bào từ phôi phân chia vào ngày hay (3) tế bào nuôi phôi nang vào ngày sau thụ tinh Số liệu báo cáo từ nghiên cứu lớn giới PGD cho thấy có 90% chu kỳ PGD thực thông qua việc sinh thiết phôi ngày sau thụ tinh(2,4,5,7) Trong nghiên cứu chúng tôi, thời điểm thuận lợi cho nghiên cứu việc lấy mẫu trung tâm TTTON Việt Nam chuyển phôi vào ngày 2/3 sau thụ tinh, đó, đưa vào áp dụng mang tính thực tế phù hợp với tình hình FISH đơn bào theo phác đồ chuẩn hóa trước nhằm đánh giá hiệu qui trình kĩ thuật xây dựng Các số kĩ thuật chun mơn trình bày bảng Bảng 1: Hiệu qui trình kĩ thuật Số phơi sinh thiết Số phơi có phơi bào ngun vẹn sau sinh thiết Số phôi tiếp tục phát triển sau sinh thiết Số phôi bào nguyên vẹn sau sinh thiết Số nhân tế bào sau cố định Số nhân tế bào có tín hiệu sau FISH Số lượng Tỉ lệ (%) 39 38 97,4 36 92,3 38 97,4 37 94,9 36 92,3 Tỉ lệ lệch bội NST tính tổng số 80 nhân tế bào có tín hiệu, với 46,2% phơi ghi nhận có số lượng NST bất thường (bảng 2) Sản Phụ Khoa Sinh thiết phôi Để lấy tế bào ngồi tiến hành chẩn đoán di truyền, lỗ thủng màng suốt (ZP) cần hình thành Có phương pháp tạo lỗ thủng ZP: (1) laser không tiếp xúc, (2) dung dịch Tyrode có tính acid (3) xé 173 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 màng kim vi thao tác Laser không tiếp xúc phương pháp khuyến khích tính đơn giản, xác an tồn kĩ thuật(4,5,7) Việc sử dụng tia laser gặp nhiều thuận lợi chúng tơi có nhiều kinh nghiệm việc áp dụng kĩ thuật hỗ trợ phơi màng hệ thống laser cho qui trình điều trị thường qui thụ tinh ống nghiệm Qui trình thực FISH đơn bào Qui trình thực FISH PGD bao gồm (1) cố định, (2) lai tế bào, (3) rửa sau lai (4) phân tích kết lai Mục tiêu cố định tế bào nhằm loại bỏ tế bào chất xung quanh, chuẩn bị cho nhân có điều kiện tốt để phản ứng lai xảy Khác với chẩn đoán tiền sản từ tế bào nước ối, PGD, có tế bào để tiến hành chẩn đoán di truyền, khơng để xử lý tế bào tốt điều cần thiết Trong giai đoạn đầu thực hiện, phôi bào sau sinh thiết cố định hoàn toàn theo phác đồ Đại học Chiangmai, Thái lan (phác đồ A) trung tâm Shady Grove, Mỹ (phác đồ B) Tuy nhiên, tỷ lệ nhân tế bào có tín hiệu sau FISH thu thấp (33,3% 47,5%) Do đó, chúng tơi điều chỉnh qui trình dựa hai phác đồ (phác đồ C) Với phác đồ C, có 62,5% phơi bào có tín hiệu sau FISH Sự khác biệt ba phác đồ chủ yếu nằm khâu khử nước Hiệu qui trình Cỡ mẫu tối thiểu tính 61 phôi chất lượng kém/ngưng phát triển, nhiên, sử dụng 101 phôi vào nghiên cứu nhằm xây dựng qui trình Việc đánh giá hiệu qui trình kĩ thuật chúng tơi thực 39 phơi có chất lượng khá/tốt sau trữ lạnh Chúng tơi chủ yếu đối chiếu thông số kĩ thuật nghiên cứu với báo cáo lần thứ X tình hình thực PGD tồn châu Âu, ESHRE(3) Đây xem số liệu PGD lớn giới Qui trình sinh thiết phơi 174 Hiệu qui trình đánh giá thơng qua (1) tỉ lệ phơi bào ngun sau sinh thiết, (2) tỉ lệ phơi sống sau sinh thiết (3) tỉ lệ phôi tiếp tục phát triển sau 24 tiếng Kết cho thấy tỉ lệ phôi tỉ lệ tế bào nguyên sau sinh thiết 97,4% 97,4% Theo báo cáo ESHRE, tỉ lệ tế bào nguyên sau sinh thiết 98,7%(3) Chúng tiếp tục nuôi cấy phôi 24 tiếng điều kiện 37oC, 6% CO2 nồng độ oxy sinh lý Có 36 phơi tiếp tục phát triển đến giai đoạn 10-12 tế bào hay bắt đầu có tượng nén (compacting), đạt tỉ lệ 92,3% Tỉ lệ tương đương với khả phôi phát triển in vitro khơng thực sinh thiết phơi trước Qui trình FISH đơn bào Để đánh giá hiệu qui trình kĩ thuật thực FISH đơn bào, dựa vào tỉ lệ tế bào sau cố định tỉ lệ nhân tế bào có tín hiệu sau FISH Nghiên cứu cho thấy tỉ lệ nhân tế bào sau cố định 94,9% Kết số báo cáo lớn cho thấy tỉ lệ dao động khoảng 93,9% - 99%(1,6,8) Kết nghiên cứu cho thấy 92,3% nhân tế bào có tín hiệu FISH Con số nghiên cứu 1,255 phôi Marquez cộng năm 2000 93% Theo báo cáo ESHRE tổng số 125,187 phôi sinh thiết, số 94,1%(3) Các số liệu cho thấy qui trình kĩ thuật thực FISH đơn bào đạt hiệu cao tương đương báo cáo lớn giới Ý nghĩa ứng dụng đề tài Đây đề tài nghiên cứu thực nhằm xây dựng qui trình kĩ thuật chẩn đốn di truyền tiền làm tổ phơi TTTON tình hình thực tế Việt Nam Sự thành cơng đề tài góp phần khẳng định khả đội ngũ nhà khoa học Việt Nam việc tiếp cận kĩ thuật điều trị tiên tiến đại giới Ngoài ra, việc liên kết, tập hợp chuyên viên, nhà khoa học đầu ngành Việt Nam lãnh vực liên quan, việc phối hợp sở, thiết Chuyên Đề Sức khỏe Sinh sản Bà Mẹ - Trẻ em Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 bị vật chất nhiều phòng thí nghiệm đơn vị khác (đại học Y Dược TpHCM, Hội Nội tiết Sinh sản Vô sinh TpHCM, IVF Vạn Hạnh) để thực đề tài thành công lớn nhóm thực đề tài Một phép ứng dụng vào cho điều trị, PGD giúp cho cặp vợ chồng có tiền sử sanh bất thường di truyền, tiền sảy thai liên tiếp hay phụ nữ có nguy cao… có bình thường Khi đó, gánh nặng chi phí điều trị cho bệnh nhân giảm đáng kể, hạn chế tình trạng chảy máu ngoại tệ bệnh nhân phải điều trị nước Đề tài hội đồng khoa học Sở Khoa học Công nghệ TpHCM nghiệm thu vào tháng 01/2011 Tuy nhiên, việc triển khai PGD thực tế lâm sàng cần phải đuợc lưu ý cân nhắc Để có nguồn vật liệu cho việc chẩn đoán di truyền, điều kiện tiên phải xây dựng qui trình TTTON ổn định hiệu cao Kỹ thao tác nhân viên hai qui trình sinh thiết phơi cố định tế bào đóng vai trò quan trọng Các phơi sau sinh thiết theo dõi tiếp chuyển vào buồng tử cung người phụ nữ, đó, trình sinh thiết phơi phải thực nghiêm ngặt để khơng ảnh hưởng đến tính tồn vẹn phơi bào lại Theo hướng dẫn hiệp hội PGD thuộc Hội Sinh sản người Phôi học châu Âu năm 2011, cần có điều kiện qui định cho nhân viên thực sinh thiết phôi FISH đơn bào(4,5) Ngồi ra, việc thực PGD gặp phải tỉ lệ sai số định Ngay trung tâm PGD hiệu có tỉ lệ sai số vào khoảng 10%(7) Điều dẫn đến tình trạng bỏ sót phơi hay chuyển lầm phơi cho bệnh nhân Do đó, việc giáo dục sức khỏe sộng đồng thông tin cho cán y tế phạm vi khả ứng dụng, hậu sai số xảy kĩ thuật… cần thiết Sản Phụ Khoa Nghiên cứu Y học trước áp dụng triển khai PGD Việt nam KẾT LUẬN Nghiên cứu thành công việc xây dựng qui trình sinh thiết phơi người giai đoạn phân chia qui trình thực kĩ thuật FISH đơn bào để chẩn đoán lệch bội nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X Y Các thông số kĩ thuật qui trình xây dựng tương đương phù hợp với số liệu báo cáo lớn PGD y văn giới Thành công đề tài mở hướng cho ngành y sinh học nước nhà việc mở rộng ứng dụng chẩn đoán di truyền đại vào chẩn đốn sớm trước phơi làm tổ Tuy nhiên, tình hình Việt nam, việc triển khai PGD vào lâm sàng cần phải cân nhắc lợi ích nguy có kỹ thuật Đồng thời trước áp dụng, cần có qui định kiểm sốt chặt chẽ qui trình kỹ thuật pháp lý TÀI LIỆU THAM KHẢO Findikli N, Kahraman S, Saglam Y et al (2006) Embryo aneuploidy screening for repeated implantation failure and unexplained recurrent miscarriage Reprod BioMed Online; 13:38 - 46 Handyside AH (2010) Preimplantation genetic diagnosis after 20 years Reprod Biomed Online; 21:280-282 Harper JC, Coonen E, De Rycke et al (2010) ESHRE PGD Consortium data collection IX: cycles from January to December 2007 with pregnancy follow-up to October 2008 Hum Reprod; 25:2685-2707 Harton GL, Harper JC, Coonen E, Pelihvan T, Vesela K and Wilton L (2011a) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Hum Reprod; 26:25-32 Harton GL, Magli MC, Lundin K, Montag M, Lemmen J and Harper JC (2011b) ESHRE PGD Consortium/Embryology Special Interest Group—best practice guidelines for polar body and embryo biopsy for preimplantation genetic diagnosis/screening (PGD/PGS) Hum Reprod; 26:41-46 Marquez C, Sandalinas M, Bahce M, Alikani M, Munne S (2000) Chromosome abnormalities in 1255 cleavage stage human embryos Reprod Biomed Online 1:17-27 Munne S, Wells D, Cohen J (2010) Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes Fertil Steril; 94: 408-430 Xu K, Huang T, Tiezheng L, Rosenwaks Z (1998) Improve the fixation method for preimplantation genetics diagnosis for fluorescent in-situ hybridization J Assist Reprod Genet 13:570-4 175 ... chuyên gia thuộc lãnh vực hỗ trợ sinh sản chẩn đoán di truyền Đây đề tài thực nhằm thiết lập qui trình kĩ thuật chẩn đốn di truyền tiền làm tổ (PGD) phôi TTTON điều kiện thực tế Việt Nam Trong... triển lãnh vực liên quan Việt Nam Nghiên cứu thực nhằm thiết lập qui trình chẩn đốn di truyền phôi người giai đoạn tiền làm tổ Đây đề taì nghiên cứu cấp thành phố, Sở Khoa học Cơng nghệ TpHCM quản... xem phôi ngưng phát triển 171 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Phương pháp tiến hành Thiết lập qui trình Qui trình sinh thiết phơi xây dựng IVF Vạn Hạnh Qui trình