Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm chuẩn hóa kỹ thuật và xác định tính chính xác của xét nghiệm đột biến gen EGFR bằng kỹ thuật Strip Assay đang thực hiện tại Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ NGOẠI KIỂM ÉT NGHIỆM ĐỘT BIẾN GEN EGFR TRÊN BỆNH NHÂN UNG THƢ PHỔI KHÔNG TẾ BÀO NHỎ TẠI BỆNH VIỆN BẠCH MAI THEO TIÊU CHUẨN CHÂU ÂU Phạm Cẩm Phương*; Mai ọng Khoa* TÓM TẮT Mục tiêu: nhằm chuẩn hóa kỹ thuật xác định tính xác xét nghiệm đột biến gen EGFR kỹ thuật Strip Assay thực Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai Phương pháp: 10 mẫu bệnh phẩm Mạng lưới Kiểm soát Chất lượng Di truyền học Phân tử châu Âu (The European Molecular Genetics Quality Network - EMQN) cung cấp để xác định đột biến gen EGFR kít EGFR StripAssay® (ViennaLab) Các kết gửi trả trực tuyến EMQN đánh giá, công bố kết Kết quả: 10 mẫu kiểm chuẩn thực cho kết xác với cơng bố EMQN (100%) Kết luận: kỹ thuật xét nghiệm sử dụng kit EGFR StripAssay® thiết bị có Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai đảm bảo tiêu chuẩn phát đột biến gen EGFR Các xét nghiệm có độ xác cao, ổn định Từ đó, cung cấp thơng tin xác cho bác sỹ lâm sàng để chẩn đoán lập kế hoạch điều trị cho bệnh nhân (BN) ung thư phổi không tế bào nhỏ (UTPKTBN) * Từ khóa: Ung thư phổi khơng tế bào nhỏ; Đột biến gen EGFR; Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm Evaluate the Results of EGFR Mutation Testing in Non-Small Cell Lung Cancer by European Quality Assessment at Bachmai Hospital Summary Objectives: To standardize the technique and assess the realibility of EGFR mutations tests by Strip Assay technique at the Gene Therapy Unit, Bachmai Hospital Methods: Ten samples for external quality assessment which obtained from the European Molecular Genetics Quality Network (EMQN) were detected EGFR mutations by EGFR StripAssay® (ViennaLab), these results were submited online and compared with EMQN’s validated results Results: ll of ten samples had same results with publication of EMQN (100% efficiency) Conclusion: EGFR mutations tests with EGFR StripAssay® kit and equipment available at the Gene Therapy Unit, Bachmai Hospital ensure the quality to detect EGFR mutations These tests have high accuracy, providing more details for clinicians in non-small lung cancer management * Key words: Non-small cell lung cancer; EGFR mutation; External quality assessment * Bệnh viện Bạch Mai Người phản hồi (Corresponding): Phạm Cẩm Phương (camphuongmd@yahoo.com) Ngày nhận bài: 20/08/2015; Ngày phản biện đánh giá báo: 10/01/2016 Ngày báo đăng: 25/01/2016 44 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư phổi (UTP) bệnh ung thư phổ biến giới Việt Nam Hiện có nhiều tiến chẩn đốn (sinh học phân tử, tế bào…) điều trị bệnh UTP (phẫu thuật, xạ trị, hóa trị, điều trị đích…), nâng cao hiệu điều trị cải thiện chất lượng sống cho người bệnh Một tiến chẩn đoán xét nghiệm đột biến gen EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor: thụ thể yếu tố phát triển biểu mơ) Gen EGFR đóng vai trò quan trọng hoạt động chức phát triển biệt hóa tế bào Đột biến EGFR dẫn đến tăng biểu tăng cường hoạt động EGFR phát nhiều loại bệnh ung thư, có UTP Hiện nay, thuốc điều trị đích đời (kháng thể đơn dòng, thuốc phân tử nhỏ, ức chế vùng tyrosine kinase [tyrosine kinase inhibitor - TKI] thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô) sử dụng để điều trị cho BN UTPKTBN Các nghiên cứu giới Việt Nam cho thấy BN có đột biến EGFR có thời gian sống thêm không bệnh tiến triển (progressionfree survival - PFS) thời gian sống thêm toàn (overall survival - OS) cao BN khơng có đột biến EGFR điều trị TKI [1, 2] Vì vậy, xét nghiệm đột biến gen EGFR cho BN UTPKTBN thực cần thiết để bác sỹ lâm sàng lựa chọn phương án điều trị tối ưu cho người bệnh Hiện nay, có nhiều phương pháp khác để xét nghiệm đột biến gen EGFR giải trình tự gen (giải trình tự Sanger pyrosequencing), realtime-PCR (ví dụ kít therascreen - Qiagen), lai đầu dò (StripAssay - ViennaLab)… Mỗi phương pháp có ưu nhược điểm riêng: kít therascreen, StripAssay có độ nhạy cao, phát số lượng đột biến giới hạn theo thiết kế kít; phương pháp giải trình tự có khả phát đột biến mới, gặp, đòi hỏi số lượng tế bào mang đột biến mẫu phân tích lớn [3] Do vậy, phương pháp xét nghiệm cho kết khác mẫu phân tích Vì vậy, việc ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm (đặc biệt kiểm chuẩn quốc tế) có vai trò đặc biệt quan trọng việc đánh giá khả phát đột biến gen EGFR Đơn vị Trị liệu gen, Bệnh viện Bạch Mai thực thường quy xét nghiệm đột biến EGFR từ 2014 tham gia Mạng lưới Kiểm soát Chất lượng Di truyền học Phân tử châu Âu (có trụ sở thành phố Manchester, Anh) Chúng tiến hành đề tài nhằm: Chuẩn hóa kỹ thuật xác định tính xác xét nghiệm đột biến gen EGFR kỹ thuật Strip ssay thực Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai ĐỐI TƢỢNG, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên cứu 10 mẫu bệnh phẩm nhận từ EMQN, với mã tham chiếu 1.369 Các mẫu lấy trực tiếp từ khối u phổi (2 mẫu) từ tế bào nuôi cấy (8 mẫu) BN UTPKTBN Cố định mẫu 45 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 formalin đúc paraffin (formalin-fixed, paraffin-embedded - FFPE) để làm tiêu HE Trong tiêu HE, tỷ lệ tế bào ung thư phải đạt > 20% gia ngoại kiểm (bao gồm 277 phòng thí nghiệm 39 quốc gia), tình trạng đột biến gen EGFR xác định trước từ phòng thí nghiệm chuẩn Đây mẫu mù, gửi cho tất phòng thí nghiệm đăng ký tham Thông tin chi tiết mẫu ngoại kiểm trình bày bảng Bảng 1: Thơng tin mẫu kiểm chuẩn TT mẫu Mã bệnh phẩm Chẩn đốn Vị trí/phƣơng pháp lấy mẫu Tỷ lệ tế bào u 01 01.6127774 UTP (biểu mô tuyến) U thùy phổi phải (phẫu thuật) > 20% 02 02.6130768 UTP (biểu mô tuyến) U phổi (sinh thiết) > 30% 03 03.6153218 UTP (biểu mô tuyến) U thùy phổi phải (phẫu thuật) > 20% 04 04.6126965 EMQN không cung cấp EMQN không cung cấp > 20% 05 05.6127265 EMQN không cung cấp EMQN không cung cấp > 20% 06 06.6130038 EMQN không cung cấp EMQN không cung cấp > 20% 07 07.6130241 EMQN không cung cấp EMQN không cung cấp > 20% 08 08.6126384 EMQN không cung cấp EMQN không cung cấp > 20% 09 09.6161625 EMQN không cung cấp EMQN không cung cấp > 20% 10 10.6161844 EMQN không cung cấp EMQN không cung cấp > 20% Phƣơng pháp nghiên cứu * Địa điểm nghiên cứu: Đơn vị Gen trị liệu Trung tâm Y học Hạt nhân Ung bướu, Bệnh viện Bạch Mai * Thời gian nghiên cứu: tháng - 2014 * Phương pháp nghiên cứu: đối chiếu kết đột biến EGFR Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai với kết EMQN * Thiết bị, vật tư, hóa chất: - Thiết bị: thiết bị phòng thí nghiệm sinh học phân tử 46 pipet kèm giá đỡ (Eppendorf Research Plus), máy ly tâm lạnh (Eppendorf 5424R), máy ủ nhiệt kèm lắc rung (Eppendorf Thermomixer comfort), máy định lượng ADN theo nguyên tắc huỳnh quang (Qubit® 2.0 Fluorometer), máy PCR (Eppendorf Mastercycler pro S)… - Hóa chất: kít tách ADN từ mơ FFPE (QIAamp® DNA FFPE Tissue Kit, Qiagen), kít định lượng ADN theo nguyên tắc huỳnh quang (Qubit™ dsDNA HS, Molecular Probes), kít xác định đột biến gen EGFR (EGFR StripAssay®, ViennaLab)… TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 - Vật tư tiêu hao: vật tư cần thiết hãng uy tín cung cấp: ống PCR; ống ly tâm 1,7 ml; đầu tip 10, 20, 200, 1000 µl (Corning); ống Qubit assay (Invitrogen)… * Các bước tiến hành: 10 mẫu bệnh phẩm thực xét nghiệm đột biến EGFR theo quy trình sau: tách ADN từ mơ FFPE (sử dụng kít QIAamp® DNA FFPE Tissue Kít, Hãng Qiagen), định lượng ADN (Qubit™ dsDNA HS, Molecular Probes), khuếch đại đoạn gen quan tâm phản ứng PCR lai sản phẩm khuếch đại với đầu dò đặc hiệu (EGFR StripAssay®, ViennaLab), phân tích kết (sử dụng phần mềm StripAssay® Evaluator, ViennaLab) * Đối chiếu kết quả: kết chất lượng ADN sau tách đột biến gen EGFR gửi lại EMQN địa https://www.formdesk.com/EMQN/LUNG_ EQA_2014 Sau đó, so sánh kết EMQN 10 mẫu xét nghiệm đột biến EGFR Đơn vị Gen trị liệu với kết xét nghiệm biết trước EMQN gửi lại kết cho Đơn vị Gen trị liệu Ngồi ra, EMQN thơng báo với Đơn vị Gen trị liệu kết xét nghiệm labo khác giới tham gia chương trình KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Nồng độ ADN s u tách từ mẫu p r ffin block Bảng 2: Nồng độ ADN sau tách từ mẫu paraffin block mẫu kiểm chuẩn STT mẫu Mã bệnh phẩm Nồng độ ADN (ng/µl) STT Mã bệnh phẩm Nồng độ ADN (ng/µl) 01 01.6127774 6,54 06 06.6130038 6,49 02 02.6130768 12,50 07 07.6130241 6,67 03 03.6153218 6,01 08 08.6126384 8,85 04 04.6126965 7,79 09 09.6161625 43,00 05 05.6127265 7,23 10 10.6161844 8,03 Các mẫu thu nồng độ ADN đạt tiêu chuẩn kít xét nghiệm EGFR StripAssay® (hàm lượng ADN cho vào phản ứng PCR nằm khoảng - 10 ng/μl) Phát đột biến gen EGFR Kết số mẫu phân tích thể hình Mẫu 01.6127774 khơng phát đột biến exon 18 - 21 gen EGFR Mẫu 02.6130768 phát đột biến L858R exon 21, dạng phổ biến thứ hai với tần số xuất khoảng 41% tổng số đột biến Mẫu 03.6153218 phát đột biến G719S rõ ràng, đột biến tương đối gặp, nằm exon 18 gen EGFR 47 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 Hình 1: Phân tích kết teststrip Trên teststrip có sẵn vạch control cho phản ứng lai, PCR negative control cho exon (vạch 17 - 20) PCR positive control (vạch 21) làm đối chứng Các vạch - 16 tương ứng với 16 đột biến exon 18 - 21 Mẫu 01.6127774 (trái) không phát đột biến, mẫu 02.6130768 (giữa) phát đột biến L858R exon 21, mẫu 03.6153218 (phải) phát đột biến G719S exon 18 Bảng 3: So sánh kết phân tích đột biến gen EGFR mẫu kiểm chuẩn STT mẫu Mã bệnh phẩm Kết phân tích t i Đơn vị Gen trị liệu Kết củ EMQN 01 01.6127774 Không phát đột biến Không phát đột biến 02 02.6130768 Đột biến L858R (exon 21) Đột biến L858R (exon 21) 03 03.6153218 Đột biến G719S (exon 18) Đột biến G719S (exon 18) 04 04.6126965 Không phát đột biến Không phát đột biến 05 05.6127265 Không phát đột biến Không phát đột biến 06 06.6130038 Không phát đột biến Không phát đột biến 07 07.6130241 Đột biến đoạn E746-A750 (exon 19) Đột biến đoạn E746-A750 (exon 19) 08 08.6126384 Đột biến L861Q (exon 21) Đột biến L861Q (exon 21) 09 09.6161625 Đột biến L858R (exon 21) Đột biến L858R (exon 21) 10 10.6161844 Đột biến đoạn E746-A750 (exon 19) Đột biến đoạn E746-A750 (exon 19) Kết phân tích đột biến gen EGFR 10 mẫu kiểm chuẩn Đơn vị Gen trị liệu cho kết xác theo công bố EMQN, đạt tỷ lệ 100% 48 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 BÀN LUẬN tương đương Trong 10 mẫu ngoại kiểm, Q trình tách ADN chúng tơi thu nồng độ ADN Tại Đơn vị Gen trị liệu - Bệnh viện Bạch Mai, xét nghiệm đột biến EGFR theo quy trình sau: tách ADN từ mơ FFPE, định lượng ADN, khuếch đại đoạn gen quan tâm phản ứng PCR, lai sản phẩm khuếch đại với đầu dò đặc hiệu phân tích kết Chúng tơi sử dụng QIAamp® DNA FFPE Tissue Kit (Qiagen) để tách ADN từ mẫu kiểm chuẩn Nguyên tắc kít sau: lớp màng nằm cột QIAamp® có lực mạnh với ADN, cho phép lưu giữ ADN rửa trôi thành phần khác tế bào; bước thu ADN tinh sạch, đệm rửa giải có lực với ADN mạnh so với cột, sau rửa giải thu ADN cách ly tâm Sản phẩm ADN tách từ mô FFPE bị đứt gãy mạnh nên cần xác định xác nồng độ máy Qubit® 2.0 Fluorometer theo kít Qubit™ dsDNA HS (Molecular Probes) Đây thiết bị định lượng ADN theo nguyên tắc huỳnh quang: thuốc nhuộm phát tín hiệu huỳnh quang yếu, kết hợp đặc hiệu với ADN tín hiệu trở nên mạnh mẽ máy đo lại xác Nhờ đó, định lượng ADN theo nguyên tắc xác so với định lượng phương pháp hấp thụ UV, mà ADN đo không đặc hiệu, dễ lẫn ARN, protein số tạp chất khác có bước sóng hấp thụ giới hạn yêu cầu kít xét nghiệm EGFR StripAssay® (hàm lượng ADN cho vào phản ứng PCR nằm khoảng - 10 ng/μl), đảm bảo chất lượng để xác định đột biến gen Kết ét nghiệm EGFR Gen EGFR nằm nhiễm sắc thể 7p11.2, dài khoảng 200 kb, chứa 28 exon Các đột biến liên quan đến đáp ứng với TKI nằm exon từ 18 - 21, đột biến thay exon 18 21, đoạn exon 19 (chiếm tỷ lệ chủ yếu) làm tăng độ nhạy cảm với thuốc, đột biến thay T790M số đột biến thêm đoạn exon 20 (chiếm tỷ lệ nhỏ) liên quan đến kháng thuốc Tỷ lệ đột biến EGFR phụ thuộc vào chủng tộc, tình trạng hút thuốc lá, giới…, tỷ lệ đột biến EGFR chủng tộc châu Á cao chủng tộc châu Âu, châu Mỹ [2, 4] Chúng sử dụng kít EGFR StripAssay® (ViennaLab) để phân tích đột biến gen EGFR Đây kít thiết kế theo nguyên tắc PCR kết hợp lai đầu dò đặc hiệu: giai đoạn PCR sử dụng mồi (primer) đặc hiệu giúp khuếch đại xác với trình tự gen quan tâm Phân tử biotin gắn mồi, nhờ đưa vào sản phẩm khuếch đại Ở giai đoạn lai, đoạn ADN khuếch đại kết hợp xác với đầu dò (probe) tương ứng teststrip, phân tử biotin gắn đoạn hoạt hoá streptavidin thành dạng phát màu Do vậy, 49 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 dễ dàng phát kết cách so màu teststrip, đối chiếu với thang chuẩn mắt thường phần mềm StripAssay® Evaluator Bộ kít có khả phát 16 đột biến chiếm tỷ lệ cao có vai trò đáp ứng điều trị với TKI Kít có độ nhạy cao, có khả phát số lượng tế bào mang đột biến < 1%, đồng thời cấp chứng tiêu chuẩn xét nghiệm châu Âu áp dụng cho chẩn đoán bệnh (European Conformity - In Vitro Diagnostics,CE-IVD) mẫu phát đột biến gen EGFR Kết xét nghiệm Đơn vị Gen trị lệ so sánh với kết tổng hợp liệu cho thấy, 10 mẫu phân tích, EMQN, tỷ lệ xét nghiệm lỗi mẫu cho kết âm tính (các mẫu phòng thí nghiệm giới có 3,8% 04.6126965, 05.6127265, 06.6130038), (bảng 4) [5] bao gồm: mẫu đột biến thay G719S exon 18 (03.6153218), mẫu đột biến đoạn E746-A750 exon 19 (07.6130241 10.6161844), mẫu đột biến thay L861Q (08.6126384), mẫu đột biến thay L858R (02.6130768 09.6161625) exon 21 Cả 10 mẫu phân tích chúng tơi cho kết xác theo công bố EMQN (đạt tỷ lệ 100%) Đây kết đáng khích Bảng 4: Tổng hợp xét nghiệm lỗi 277 phòng thí nghiệm tham gia kiểm chuẩn năm 2014 STT mẫu Số báo cáo gửi EMQN* Số báo cáo s i kết Tỷ lệ s i kết (%) 254 1,1 254 4,3 256 11 5,4 252 3,2 253 2,4 256 3,5 249 2,3 256 22 8,5 249 10 4,0 10 256 3,5 Tổng số 2543 93 3,8 * Có 258 phòng thí nghiệm hồn thành phân tích gửi lại kết tổng số 277 phòng thí nghiệm đăng ký [5] 50 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 Chỉ có 3,8% sai sót tất labo, Đơn vị Gen trị liệu sai số 0% Hiện nay, có nhiều phương pháp khác để xét nghiệm đột biến gen EGFR giải trình tự gen (giải trình tự Sanger pyrosequencing), realtime-PCR (tiêu biểu kít therascreen - Qiagen), lai đầu dò (tiêu biểu kit StripAssay - ViennaLab)… Một số ưu, nhược điểm phương pháp mô tả bảng Dựa tiêu chí đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu chi phí cho xét nghiệm, phương pháp sử dụng kít StripAssay Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai có số ưu điểm phương pháp khác [3] Bảng 5: Ưu, nhược điểm số phương pháp phát đột biến gen EGFR [3] Giải trình tự Sanger Giải trình tự pyrosequencing Therascreen StripAssay Chứng CE-IVD Khơng Khơng Có Có Giới hạn phát 25 - 30% - 10% 1% < 1% Thời gian trả kết - 1/2 Thời gian thực giờ giờ phản ứng phản ứng phản ứng phản ứng Khả phát đột biến gặp Có Có Không Không Thiết bị chuyên dụng cần thiết Hệ thống giải trình tự Sanger Hệ thống pyrosequencing Hệ thống realtime-PCR Hệ thống PCR Phƣơng pháp Số xét nghiệm tối thiểu lần chạy Kít EGFR StripAssay® sử dụng Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai có độ đặc hiệu độ nhạy cao, thời gian thực xét nghiệm ngắn, khơng đòi hỏi thiết bị chuyên dụng hệ thống giải trình tự hay realtime-PCR, cấp chứng CE-IVD… KẾT LUẬN ngoại kiểm xét nghiệm EGFR thực Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai so với EMQN cho thấy: Mai đảm bảo tiêu chuẩn để phát đột biến gen EGFR - Cả 10 mẫu kiểm chuẩn quốc tế thực cho kết xác với công bố EMQN (đạt tỷ lệ 100%), sai số 0% - Kỹ thuật xét nghiệm sử dụng kít EGFR StripAssay® thiết bị có Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Như vậy, xét nghiệm đột biến gen EGFR thực Bệnh viện Bạch Mai có độ xác, ổn định Từ cung cấp Qua nghiên cứu 10 mẫu bệnh phẩm 51 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 thêm thông tin đáng tin cậy cho bác sỹ lâm sàng điều trị UTPKTBN Tháng 01 - 2015, chúng tơi thức nhận chứng ngoại kiểm EMQN Asian patients with advanced non-small-cell lung cancer of adenocarcinoma histology (PIONEER) J Thorac Oncol 2014, (2), pp.154-162 Lời cảm ơn: Nhóm nghiên cứu xin chân thành cảm ơn Công ty AstraZeneca hỗ trợ đăng ký tham gia EMQN để kiểm chuẩn xét nghiệm đột biến gen EGFR Jancik S, DrabekJ et al A comparison of direct sequencing, pyrosequencing, high resolution melting analysis, TheraScreen DxS, and the K-ras StripAssay for detecting KRAS mutations in non-small cell lung carcinomas Journal of Experimental & Clinical Cancer Research 2012, 31, pp.79-91 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tạ Thành Văn Nghiên cứu xác định đột biến gen định tính đáp ứng thuốc điều trị ung thư đại trực tràng UTP Đề tài Khoa học cấp Nhà nước KC.04.06/11-15 Bộ Khoa học Công nghệ 2014 Shi Y, Au JS, Thongprasert S, Srinivasan S, Tsai CM, Khoa MT et al A prospective, molecular epidemiology study of EGFR mutations in 52 Cheng L, Alexander RE et al Molecular pathology of lung cancer: key to personalized medicine Modern Pathology 2012, 25 (3), pp.347-369 The European Molecular Genetics Quality Network EMQN External Quality Assessment Scheme for Lung Cancer Lung Cancer scheme - final report 2014, EMQN, Manchester, UK 2014 ... CE-IVD… KẾT LUẬN ngoại kiểm xét nghiệm EGFR thực Đơn vị Gen trị liệu, Bệnh viện Bạch Mai so với EMQN cho thấy: Mai đảm bảo tiêu chuẩn để phát đột biến gen EGFR - Cả 10 mẫu kiểm chuẩn quốc tế thực... việc ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm (đặc biệt kiểm chuẩn quốc tế) có vai trò đặc biệt quan trọng việc đánh giá khả phát đột biến gen EGFR Đơn vị Trị liệu gen, Bệnh viện Bạch Mai thực thư ng... lượng tế bào mang đột biến < 1%, đồng thời cấp chứng tiêu chuẩn xét nghiệm châu Âu áp dụng cho chẩn đoán bệnh (European Conformity - In Vitro Diagnostics,CE-IVD) mẫu phát đột biến gen EGFR Kết xét