Đề tài có nội dung đề cập về ứng dụng các phương pháp hóa mô miễn dịch HMMD và lai tại chỗ gắn huỳnh quang (FISH) xác định tình trạng HER2 trong ung thư vú, và hóa mô miễn dịch đánh giá các dấu ấn ER, PR, HER2, Ki67 nhằm đưa ra phân loại phân tử trong ung thư vú, ứng dụng cho tiên lượng và điều trị.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 PHÂN LOẠI PHÂN TỬ UNG THƯ VÚ DỰA VÀO DẤU ẤN HĨA MƠ MIỄN DỊCH VÀ LAI TẠI CHỖ HUỲNH QUANG Đoàn Thị Phương Thảo*, Hứa Thị Ngọc Hà*, Phan Đặng Anh Thư, Nguyễn Thị Hồng Nguyệt*, Lý Thanh Thiện*, Đặng Hồng Minh*, Nguyễn Sào Trung* TĨM TẮT Giới thiệu: Ứng dụng phương pháp hóa mơ miễn dịch HMMD lai chỗ gắn huỳnh quang (FISH) xác định tình trạng HER2 ung thư vú, hóa mô miễn dịch đánh giá dấu ấn ER, PR, HER2, Ki67 nhằm đưa phân loại phân tử ung thư vú, ứng dụng cho tiên lượng điều trị Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả cắt ngang Phương pháp HMMD: thực máy tự động Ventana Phương pháp lai chỗ huỳnh quang (FISH): dùng kit Path Vysion, FDA chấp thuận ASCO and CAP khuyến cáo “tiêu chuẩnvàng” cho đánh giá khuếch đại gen HER2 Đánh giá ER, PR: tính theo thang điểm Allred: Đánh giá độ mô học theo Nottingham Ki67: tế bào u dương tính chia thành nhóm sau: 0-25%, 25 – 50%, 51-75% >75% Kết quả: Khảo sát 268 trường hợp thực đồng thời HMMD FISH kết sau: ER(-): 40,3%, ER(+): 60,4%, PR(-): 60,3%, PR(+): 39,6%, HER2(-)/HMMD: 60%, HER2(+)/HMMD: 40%, HER2(-)/FISH: 67,2% HER2(+)/FISH: 32,8% Phân nhóm phân tử: ER/PR(+)-Her2(+): 14,9%, ER/PR(+)-Her2(-): 44,8%, ER/PR(-)-Her2(+): 17,9%, ER/PR(-)-Her2(-): 22,3% Từ khóa: Hóa mơ miễn dịch, Lai chỗ huỳnh quang, HER2, phân loại phân tử ung thư vú ABSTRACT MOLECULAR CLASSIFICATION OF BREAST CANCER BASED ON IMMUNOHISTOCHEMISTRY AND FLUORESCENT IN SITU HYBRIDIZATION Doan Thi Phuong Thao, Hua Thi Ngoc Ha, Phan Dang Anh Thu, Nguyen Thi Hong Nguyet, Ly Thanh Thien, Dang Hoang Minh, Nguyen Sao Trung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 182 - 188 Introduction: Application of IHC and FISH methods to determine HER2 status and IHC to evaluate key markers such as ER, PR, HER2, Ki67 in breast cancer have used in this research to classify the molecular characteristics of breast cancer that could provide more accurate profile for both prognosis and specific treatment Methods: IHC: Immunohistochemical analysis was performed as specified by the autoimmunostainer using the Pathway kit The slides then were placed on an autoimmunostainer using the primary monoclonal antibody and polymer detection system supplied by Ventana FISH: FISH was performed as specified by the manufacturer, with a guideline to improve the accuracy of HER2 testing in invasive breast cancer of ASCO and CAP The PathVysion kit includes a Spectrum Orange-labeled DNA probe specific for the HER2 gene locus and a SpectrumGreen-labeled probe specific for the alpha satellite DNA sequence at the centromeric region of chromosome 17 (CEP17) Result: Of 268 invasive breast cancer cases performed simultaneously IHC and FISH ER(-): ∗ *Bộ Môn Giải Phẫu Bệnh – Đại Học Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: ThS Đoàn Thị Phương Thảo 182 ĐT: 0938008418 Email: thaodoanthiphuong@ymail.com Chuyên Đề Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Cấp Cứu Trưng Vương Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học 40,3%, ER(+): 60,4%, PR(-): 60,3%, PR(+): 39,6%, HER2(-)/IHC: 60%, HER2(+)/IHC: 40%, HER2(-)/FISH: 67,2% HER2(+)/FISH: 32,8% Subtype molecular classification: ER/PR(+)-Her2(+): 14,9%, ER/PR(+)- Her2(-): 44,8%, ER/PR(-)- Her2(+): 17,9%, ER/PR(-)- Her2(-): 22,3% Conclusions: Based on the results of fluorescence in situ hybridization to assess HER2 gene and results IHC ER, PR and Ki67, we have divided into four molecular subtypes These subtypes are characteristed by difference in morphology, grade, lymph node metastases and mitotic index Our research clearly shows the diversity of biology of breast cancer This results help to further support prognosis and treatment for individual patient in specifically and efficiently manner Key words: IHC, FISH, HER2, molecular classification of breast cancer ĐẶT VẤN ĐỀ Trong vài thập kỷ qua có tiến đáng kể quản lý bệnh ung thư vú, nhờ bệnh phát sớm, điều trị hiệu hơn, giảm tỉ lệ tử vong, cải thiện chất lượng sống cho người phụ nữ sống chung với bệnh ung thư vú(9,17) Ung thư vú bệnh đa dạng, phức tạp bao gồm phân nhóm sinh học khác có diễn tiến tự nhiên khác nhau, bệnh học lâm sàng đa dạng với đặc điểm bệnh học phân tử khác đáp ứng điều trị khác Những đồng thuận giá trị tiên đoán/ tiên lượng chưa đạt nghiên cứu đạt dược thành cơng việc tìm kiếm phương pháp phân loại chuyên biệt, chặt chẽ, có khả lập lại việc xác định dấu ấn sinh học tế bào u giúp cho thành công điều trị Các nghiên cứu gần tập trung ý vào phân loại phân tử ung thư vú(3,4,6,13,16,18,19,22,23) Các kết nghiên cứu giúp cho điều trị chuyên biệt hơn, nhắm trúng đính ER(+), PR(+) điều trị nội tiết HER2(+) điều trị kháng thể đơn dòng Dựa biểu ER, PR HER2 qua hóa mơ miễn dịch, lai chỗ huỳnh quang, nghiên cứu dựa vào dấu ấn sinh học chia carcinơm ống tuyến vú thành nhóm sau: - Nhóm 1: ER/PR dương (+), HER2 dương (+) gồm: (1A): ER+/PR+, HER2+; (1B): ER(-)/PR(+),HER2(+); (1C): ER(+)/PR(-), HER2(+) - Nhóm 2: ER/PR(+), HER2(-) gồm: (2A): ER(+)/PR(+), HER2(-); (2B): ER(-)/PR(+), HER2(-); (2C): ER(+)/PR(-), HER2(-) - Nhóm 3: ER/PR(-), HER2(+): - Nhóm 4: ER/PR(-), HER2(-) Việc phân loại phân tử dựa hóa mơ miễn dịch lai chỗ huỳnh quang tương quan với biểu gen microarray: ER/PR+, HER2+ gọi phân nhóm phân tử ống B (Luminal B); ER/PR+, HER2 (-) gọi phân nhóm phân tử ống A (Luminal A); ER/PR(-), HER2+ gọi phân nhóm phân tử HER2 ER/PR(-), HER2(-) gọi phân nhóm phân tử giống đáy hay ba âm tính, việc phân loại có ý nghĩa chẩn đốn, tiên lượng điều trị, tốn Mục tiêu nghiên cứu - Phân loại phân tử ung thư vú dựa vào đặc tính sinh học tế bào u HER2, ER, PR - Đánh giá mối tương quan phân loại phân tử đặc điểm mô bệnh học ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng Các bệnh nhân chẩn đốn ung thư vú mơn Giải Phẫu Bệnh Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh năm 2009-2011 Tiêu chuẩn chọn bệnh Các bệnh phẩm phẫu thuật đoạn nhũ, gửi nguyên khối môn Giải Phẫu Bệnh Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh Chuyên Đề Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV Cấp Cứu Trưng Vương 183 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Tiêu chuẩn Dương tính 3+ Cỡ mẫu n=α p (1-p) = 0: 0,2 (1-0,2) d2 0,052 1(+): màng tế bào u xâm lấn bắt màu rãi rác, nhạt = 246 bệnh nhân 2(+): màng tế bào u xâm lấn bắt màu hồn tồn, mỏng, nhạt ≥30% Trong đó: n = cỡ mẫu tính; α= 1,96; p = tỉ lệ HER2 (+) ung thư vú theo ASCO 2008 (18-20%); d = 0,05 Các liệu thu thập Tuổi, giới, đặc điểm giải phẫu bệnh (tuổi, kích thước u, loại mơ học, độ mô học, ER, PR, HER2, Ki67), giai đoạn bệnh, tình trạng hạch Đánh giá ER, PR: tính theo thang điểm Allred(10) Kháng thể kháng ER sử dụng 1D5, kháng PR PgR636 hệ thống phát polymer Sử dụng cho mẫu mô cố định formalin, vùi nến Tiêu chuẩn đánh giá hệ thống tính điểm dựa theo hệ thống tính điểm Allred Bảng Thang điểm Allred đánh giá tình trạng ER, PR % tế bào bắt màu Điểm % Điểm Trung bình cường độ âm Dương yếu Trung bình Mạnh 0 2/3 Điểm Allred = điểm %+ điểm cường độ Dương tính tổng điểm >2 Đánh giá biểu mức HER2 hóa mơ miễn dịch Kháng thể dùng để phát thụ thể HER2 loại kháng thể đa dòng sử dụng hệ thống nhuộm tự động Ventana hệ thống phát dùng polymer, Cục Quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa kỳ chấp thuận sử dụng hóa mơ miễn dịch Hệ thống tính điểm Âm tính: 1+ Âm tính + Dương tính trung bình 184 Màng tế bào u xâm lấn hồn tồn khơng bắt màu 3(+): màng tế bào u xâm lấn màu hoàn toàn, dày, đậm, ≥30% Đánh giá độ mô học theo Nottingham(7,5,12) Bảng Hệ thống phân độ mô học Nottingham Tạo ống >75% Số phân bào 0-9/10hpf Dị dạng Điểm Độ mô học nhân Nhẹ Biệt hóa rõ (độ 1) 10-75% 10-19/10hpf Trung bình Biệt hóa vừa (độ 2)