Đặc điểm mô bệnh học và phân loại ung thư biểu mô tuyến vú bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch và lai tại chỗ gắn huỳnh quang

Bài viết nghiên cứu đặc điểm mô bệnh học, giai đoạn TNM và chỉ số tiên lượng Nottingham của ung thư biểu mô tuyến vú (UTBMTV). Phân nhóm phân tử UTBMTV dựa trên kiểu hình hóa mô miễn dịch (HMMD) và biểu hiện gen HER2 bằng kỹ thuật lai tại chỗ gắn huỳnh quang.

Tạp chí y - dợc học quân số 6-2017 ĐẶC ĐIỂM MÔ BỆNH HỌC VÀ PHÂN LOẠI UNG THƯ BIỂU MƠ TUYẾN VÚ BẰNG KỸ THUẬT HĨA MƠ MIỄN DỊCH VÀ LAI TẠI CHỖ GẮN HUỲNH QUANG Nguyễn Thùy Linh*; Nguyễn Mạnh Hùng*; Trần Ngọc Dũng* Nguyễn Thành Chung*; Nguyễn Khánh Vân** TÓM TẮT Mục tiêu: nghiên cứu đặc điểm mô bệnh học, giai đoạn TNM số tiên lượng Nottingham ung thư biểu mô tuyến vú (UTBMTV) Phân nhóm phân tử UTBMTV dựa kiểu hình hóa mơ miễn dịch (HMMD) biểu gen HER2 kỹ thuật lai chỗ gắn huỳnh quang Đối tượng phương pháp: nghiên cứu mô tả tiến cứu 100 bệnh nhân (BN) phẫu thuật chẩn đoán UTBMTV Bệnh viện Quân y 103 từ - 2014 đến - 2015 Kết quả: týp mô bệnh học chủ yếu UTBMTV týp ung thư biểu mơ ống xâm nhập (78%) Khối u có độ mô học II chiếm 87%, gặp nhiều giai đoạn IIA (63%) Nhóm BN có tiên lượng trung bình tốt (NPI ≤ 5,4) chiếm tỷ lệ cao (97%) Tỷ lệ dương tính với ER, PR, CK5/6 tương ứng 51%; 41%; 14% Tỷ lệ đột biến gen HER2 18% Có phân nhóm phân tử UTBMTV phân nhóm lòng ống A; phân nhóm lòng ống A/HER2(+); phân nhóm lòng ống B; phân nhóm lòng ống B/HER2(+); HER2(+); phân nhóm giống đáy; phân nhóm năm âm tính với tỷ lệ tương ứng 5%; 3%; 42%; 6%; 9%; 14% Kết luận: nhờ biểu lộ dấu ấn miễn dịch đột biến gen HER2 mà chia phân nhóm phân tử UTBMTV, phân nhóm lòng ống B chiếm tỷ lệ cao (42%); phân nhóm lòng ống A/HER2(+) chiếm tỷ lệ thấp (3%) * Từ khố: Ung thư biểu mơ tuyến vú; Phân týp phân tử ung thư vú; Lai chỗ gắn huỳnh quang; Kỹ thuật hố mơ miễn dịch Characteristis of Histopathology and Molecular Subtypes of Breast Carcinomas by Immunohistochemistry and Fluorescence in Situ Hybridization Summary Objectives: To research characteristics of histopathology, TNM stage, Nottingham prognostic index in breast carcinomas; classification of molecular subtypes of breast cancer based on immunohistochemistry (IHC) marker expression and HER2 gene amplification by fluorescence in situ hybridization (FISH) technique Subjects and methods: A prospective description study on 100 operated patients who were diagnosed breast carcinoma at 103 Hospital from January 2014 to January 2015 Results: According to WHO classification of breast cancer in 2012, * Bệnh viện Quân y 103 Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Thùy Linh (bsnguyenthuylinhc6@gmail.com) Ngày nhận bài: 15/03/2017; Ngày phản biện đánh giá báo: 16/06/2017 Ngày báo ng: 18/07/2017 126 Tạp chí y - dợc học quân sù sè 6-2017 the most cases were invasive carcinoma of no special type (78%) A higher percentage of cases was tumor grade and as compared to grade and stage IIA accounted for 63% Patients in the good and moderate (NPI ≤ 5.4) accounted for high percentage (97%) Most breast carcinoma cases were hormone receptor positive (ER (+) 51%, PR(+) 41%) and CK5/6 negative (86%) HER2 gene amplification was presented in 18% of breast tumors Seven molecular sybtypes of breast cancer were luminal A, luminal A/HER2 hybrid, luminal B, luminal B/HER2 hybrid, HER2 over-expression, basal like and five negatives These subtypes accounted for 5%, 3%, 42%, 6%, 9%, and 14%, respectively Conclusion: Breast cancer was classified into seven molecular subtypes based on IHC parameter makers and HER2 gene amplification by FISH Luminal B subtype represented 42% of all patients, luminal A/HER2 (+) subtype accounted for the smallest percentage (3%) * Keywords: Breast carcinoma; Molecular subtypes of breast cancer; Fluorescence in situ hybridization; Immunohistochemitry ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư biểu mơ tuyến vú nhóm khối u khơng đồng mặt sinh học Trên lâm sàng BN ung thư vú có đặc điểm mơ bệnh học giai đoạn biểu lâm sàng, tiến triển đáp ứng với liệu pháp điều trị hoàn toàn khác nhau, UTBMTV gồm phân nhóm phân tử có kiểu hình gen khơng giống Bên cạnh đó, việc xác định biểu gen HER2 có ý nghĩa định việc điều trị phương pháp nhắm trúng đích HMMD lai chỗ gắn huỳnh quang (FISH) hai phương pháp sử dụng để phân nhóm phân tử định hướng điều trị đích [1, 4] Trên sở đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu nhằm mục tiêu: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu - 100 BN phẫu thuật chẩn đốn mơ bệnh học UTBMTV Bệnh viện Quân y 103 từ tháng 01 - 2014 đến 01 - 2015 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu mô tả tiến cứu * Một số tiêu nghiên cứu: - Nghiên cứu đặc điểm chung tuổi kích thước u - Xác định độ mô học ung thư vú dựa theo tiêu chuẩn Scaff - Bloom - Richardson Elston Ellis sửa đổi (1991) [5] - Đánh giá phân loại giai đoạn TNM (theo AJCC-2010) [2] - Xác định týp mô bệnh học ung thư vú theo tiêu chuẩn WHO (2012) [6] - Đánh giá đặc điểm mô bệnh học, giai đoạn TNM số tiên lượng Nottingham UTBMTV - Đánh giá số tiên lượng Nottingham (NPI): NPI = [0,2 x S] + N + G - Phân nhóm phân tử UTBMTV dựa kiểu hình HMMD khuếch đại gen HER2 kỹ thuật FISH Trong đó, S: kích thước khối u (cm); N: di hạch (N = không di hạch; N = di - hạch; N = di 127 Tạp chí y - dợc học quân số 6-2017 > hạch); G: độ mô học (G = độ mô học độ I; G = 2: độ mô học độ II, G = 3: độ mô học độ III ) [5] - Đánh giá bộc lộ dấu ấn miễn dịch: ER, PR, CK5/6, HER2 tỷ lệ khuếch đại gen HER2 kỹ thuật FISH Bảng 1: Phân nhóm phân tử theo Bahgava (2010) [3] Phân nhóm phân tử Tiêu chuẩn chẩn đốn Phân nhóm lòng ống A ER ≥ 200 điểm, HER2(-) + Cách tính điểm cho thụ thể nội tiết ER, PR theo phương pháp bán định lượng Wilbur (1992), gọi HSCORE (HS) [8] tính sau: Phân nhóm lòng ống A/HER2(+) ER ≥ 200 điểm, HER2(+) Phân nhóm lòng ống B ER 11 - 199 điểm PR > 10 điểm, HER2(-) HS = (cường độ bắt màu) x (tỷ lệ % tế bào u bắt màu) Trong đó: cường độ bắt màu mạnh = 3; cường độ bắt màu trung bình = 2; cường độ bắt màu yếu = 1; khơng bắt màu = Phân nhóm lòng ống B/HER2(+) ER 11 - 199 điểm PR > 10 điểm, HER2(+) Phân nhóm HER2 ER PR ≤ 10 điểm, HER2(+) Phân nhóm giống đáy ER PR ≤ 10 điểm, HER2(-), CK5/6(+) Phân nhóm năm âm tính ER PR ≤ 10 điểm, HER2(-), CK5/6(-) Căn vào điểm HS để xác định ER PR dương tính âm tính sau: ER PR (+) HS > 10 điểm ER PR (-) HS ≤ 10 điểm + Đánh giá biểu lộ dấu ấn CK5/6:CK5/6 (+) có 1% bào tương tế bào u bắt màu nâu CK5/6 (-) bào tương tế bào u không bắt màu thuốc nhuộm + Đánh giá biểu lộ HER2 theo tiêu chuẩn đánh giá ASCO/CAP [7] - IHC (âm tính): khơng có phản ứng - IHC 1+ (âm tính): nhuộm màng nhạt màu/một phần 10% tế bào u - IHC 3+ (dương tính): bắt màu đậm hoàn toàn màng tế bào > 30% tế bào u Nghiên cứu HER(2+) HMMD tiến hành làm xét nghiệm FISH để xác định có khuếch đại gen HER2 hay khơng - Phân nhóm phân tử UTBMTV dựa vào bộc lộ dấu ấn miễn dịch khuếch đại gen HER2 128 Trong HER2(-) HMMD HER2(-) HER2(1+) khơng có khuếch đại gen HER2 xét nghiệm FISH; HER2(+) có khuếch đại gen HER xét nghiệm FISH HER2(3+) HMMD KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Đặc điểm mô bệnh học, giai đoạn TNM đánh giá số tiên lượng Nottingham UTBMTV Bảng 2: Phân bố theo nhóm tuổi BN UTBMTV Độ tuổi n Tỷ lệ (%) 21 - 30 5 31 - 40 14 14 41 - 50 30 30 51 - 60 24 24 > 60 27 27 100 100 Tng Tạp chí y - dợc học quân số 6-2017 Tuổi thấp 28, cao 86, tuổi trung bình 52 ± 13 Gặp nhiều lứa tuổi 41 - 50 (30%) Nghiên cứu Đoàn T Phương Thảo (2012) có tuổi trung bình 50,87 ± 10,9 nhóm BN 41 - 50 tuổi có tỷ lệ cao (49,3%) Nghiên cứu Nishimura (2013): tuổi trung bình 52,5 tỷ lệ BN > 40 tuổi 58,1% * Týp mô bệnh học UTBMTV theo phân loại WHO (2012): Thể ống xâm nhập kinh điển: 78 BN (78%); thể thuỳ xâm nhập: 10 BN (10%); thể nội ống dạng trứng cá: BN (8%); thể tủy: BN (3%); thể vảy: BN (1%) Chúng gặp chủ yếu loại ung thư biểu mô ống xâm nhập (78%) Thể thùy xâm nhập nghiên cứu chiếm 10% Kết phù hợp so với nghiên cứu Lê Văn Xuân (1995) C Ảnh 1: Hình ảnh týp mô bệnh học UTBMTV (A: UTBMTV ống xâm nhập (H.E x 200); B: UTBMTV thùy xâm nhập (H.E x 200) C: UTBMTV thể nội ống trứng cá (H.E x 200) * Phân độ mô học UTBMTV: Độ I: 26 BN (26%); độ II: 68 BN (68%); độ III: BN (6%) A B UTBMTV có độ mơ học chủ yếu độ II (68%), phù hợp với kết nghiên cứu tác giả nước Nghiên cứu Tạ Văn Tờ (2004) 71,4%, Spitale (2009) 72,9% Độ mô học chứng minh có liên quan khơng tỷ lệ tái phát, tỷ lệ tử vong mà liên quan đến thời gian sống khơng bệnh thời gian sống toàn BN ung thư vú sau phẫu thuật BN ung thư vú có độ mơ học cao thường thất bại điều trị xảy sớm hơn, BN ung thư vú có độ mơ học thấp, thường tái phát muộn Độ mơ học cao liên quan đến tăng nguy tái phát điều tr bo tn 129 Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 6-2017 Từ 2,0 - 2,4: 23 BN (23%); 2,4 đến ≤ 3,4: 37 BN (37%); 3,4 đến ≤ 5,4: 37 BN (37%) Điểm NPI từ 2,4 đến ≤ 5,4 có tỷ lệ cao (74%), thấp điểm NPI > 5,4 Chỉ số tiên lượng Nottingham xác định từ ba yếu tố độ mô học, kích thước u tình trạng di hạch Chỉ số có giá trị tiên lượng ung thư vú NPI < 3,4 có tiên lượng tốt, từ 3,4 - 5,4 có tiên lượng trung bình, NPI > 5,4 có tiên lượng xấu Nghiên cứu Galea (1992) ghi nhận thời gian sống thêm 15 năm liên quan đến số NPI 80%, 42% 13% tương ứng với NPI tiên lượng tốt, trung bình xấu Nghiên cứu Bell (2010) cho kết nhóm có tiên lượng tốt chiếm 31,2%; nhóm tiên lượng trung bình 48,5%; nhóm tiên lượng xấu 20,3% * Giai đoạn TNM theo AJCC (2010): Giai đoạn IA: BN (4%); giai đoạn IIA: 63 BN (63%); giai đoạn IIB: 14 BN (14%); giai đoạn IIIA: BN (5%); giai đoạn IIIB: BN (2%); giai đoạn IIIC: BN (8%); giai đoạn IV: BN (4%) Giai đoạn IIA chiếm tỷ lệ cao (63) Giai đoạn TNM giá trị tiên lượng bệnh mà để bác sỹ lâm sàng định phương pháp điều trị cho BN Kumar (2004) nghiên cứu thời gian sống thêm toàn năm giai đoạn 0, I, II, III, IV tương ứng là: 92%; 87%; 75%; 46%; 13% Nghiên cứu Carey (2006) có 51% giai đoạn I; 39% giai đoạn II; 8% giai đoạn III 3% giai đoạn IV [4] * Chỉ số tiên lượng Nottingham (NPI): Kết phân nhóm phân tử ung thư vú theo Bahgava (2010) Bảng 3: Kết nhuộm HMMD với ER PR Dấu ấn Dương tính Âm tính ≥ 200 diểm ER 11 - 199 điểm ≤ 10 điểm n Tỷ lệ (%) n Tỷ lệ (%) n Tỷ lệ (%) 8 43 43 49 49 > 10 điểm PR ≤ 10 điểm n Tỷ lệ (%) n Tỷ lệ (%) 41 41 59 59 Tỷ lệ UTBMTV dương tính với ER 51%, 8% ER ≥ 200 điểm Tỷ lệ dương tính với PR 41% Kết thấp so với tác giả nước Theo nghiên cứu Tạ Văn Tờ (2004) có 59,1% ER(+), 51,4% PR(+), Falck (2013) với 73% ER(+) v 48% PR(+) 130 Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 6-2017 A B Ảnh 2: Nhuộm HMMD với ER PR (A: ER(+) 120 điểm, tế bào 57805 x 100; B: PR (+) > 10 điểm, tế bào 52999 x 200) * Kết nhuộm HMMD với CK5/6: 21 BN (21%); dương tính (3+): 12 BN (12%) Dương tính: 14 BN (14%); âm tính: 86 BN (86%) Tỷ lệ dương tính với HER2 chiếm 33% (HER2(2+) (3+)), phù hợp với kết Tạ Văn Tờ (2004): dương tính với HER2 35,1%; cao kết Carey (2006) với 22% HER2(+) [4], Nishimura (2013) HER2 (+) 23% Theo ASCO/CAP, lý quan trọng khác biệt tỷ lệ biểu thụ thể HER2 đặc tính sinh học cộng đồng BN ung thư vú khác [7] CK5/6 dấu ấn miễn dịch tế bào vảy Các nghiên cứu gần chứng minh nhuộm miễn dịch cho CK5/6 phân biệt tăng sản tuyến vú thông thường với UTBMTV chỗ * Kết nhuộm HMMD với HER2: Âm tính: 66 BN (66%); dương tính (1+): BN (1%%); dương tính (2+): A B C Ảnh 3: Nhuộm HMMD với HER2 (A: HER2 (1+), tế bào số 56753 x 200; B: HER2 (2+), tế bào số 56855 x 100; C: HER2 (3+), tế bào s 53683 x 200) 131 Tạp chí y - dợc häc qu©n sù sè 6-2017 Bảng 4: Kết khuếch đại HER2 FISH Có khuếch đại HER2 Khơng có khuếch đại HER2 Tổng (-) (1+) 67 67 (2+) 15 21 (3+) 12 12 18 82 100 HER2 Tổng Ảnh 4: Khuyếch đại gen HER2 FISH Chúng tiến hành kỹ thuật xét nghiệm FISH cho 21 trường hợp có HER2(2+) (nghi ngờ có đột biến gen HER2) Tổng hợp kết khuếch đại gen HER2 nghiên cứu 18/100 trường hợp (18%) Francis G.D (2009), Press M.F (2005) cho tỷ lệ khuếch đại gen HER2 khoảng 20 - 30% Kết giải thích dựa vào tiêu chí lựa chọn mẫu nghiên cứu Theo Carey CS, tỷ lệ phù hợp hóa mơ miễn dịch với FISH > 90% [4] Bảng 5: Kết phân nhóm phân tử (n = 100) Phân nhóm phân tử n Tỷ lệ (%) Phân nhóm lòng ống A 5 Phân nhóm lòng ống A/HER2(+) 3 Phân nhóm lòng ống B 42 42 Phân nhóm lòng ống B/HER2(+) 6 Phân nhóm HER2 9 Phân nhóm giống đáy 14 14 Phân nhóm năm âm tính 21 21 100 100 Tng 132 Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 6-2017 Tỷ lệ phân nhóm phân tử ung thư vú khác biệt nghiên cứu, cho thấy đa dạng đặc tính sinh học tế bào u, có khác phân nhóm sử dụng cách đánh giá khác dấu ấn miễn dịch ER, PR, HER2 dấu ấn tế bào đáy Nghiên cứu chúng tôi, phân nhóm lòng ống B có tỷ lệ cao (42%), phân nhóm năm âm tính nhóm giống đáy chiếm tỷ lệ cao (21% 14%), phân nhóm lòng ống B/HER2(+) 6%, phân nhóm HER2 9% Phân nhóm lòng ống A/HER2(+) có tỷ lệ thấp (3%) KẾT LUẬN * Đặc điểm mô bệnh học, giai đoạn TNM số tiên lượng Nottingham UTBMTV: - Týp mô bệnh học chủ yếu loại ung thư biểu mô ống xâm nhập (78%) - Độ mô học khối u chủ yếu độ II (87%) - Giai đoạn IIA theo AJCC-2010 chiếm tỷ lệ cao (63%) - Nhóm có tiên lượng trung bình tốt (NPI ≤ 5,4) chiếm tỷ lệ cao * Phân nhóm phân tử UTBMTV: - Tỷ lệ dương tính với ER 51%; tỷ lệ dương tính với PR 41%; tỷ lệ dương tính với CK5/6 5,7% Tỷ lệ đột biến gen HER2 chiếm 18% - Căn vào kiểu hình HMMD khuếch đại gen HER2 UTBMTV có phân nhóm phân tử, phân nhóm lòng ống B chiếm tỷ lệ cao (42%), phân nhóm lòng ống A/HER2(+) chiếm tỷ lệ thấp (3%) TÀI LIỆU THAM KHẢO Adedeyo A, Jessica M, Robert T et al Breast cancer subtypes based on ER/PR and HER2 expression: Comparison of clinicopathologic features and survival Clinical Medicine and Research 2009, Vol 7, No 1, 2, pp.4-13 Edge S.B, Byrd D.R, Compton C.C et al AJCC (American Joint Committee on Cancer) th Cancer Staging Manual, ed SpringerVerlag New York 2010 pp.347-377 Bhargava R et al Immunohistochemical surrogate markers of breast cancer molecular classes predicts response to neoadjuvant chemotherapy Cancer 2010, 116, pp.14311439 Carey L.A, Perou C.M, Livasy C.A et al Race, breast cancer subtypes, and survival in the Carolina breast cancer study JAMA 2006, 295 (21), pp.2492-502 Galea M.H, Blamey R.W, Elston C.E, Ellis I.O The Nottingham Prognostic Index in primary breast cancer Breast Cancer Res Treat 1992, 22 (3), pp.207-219 Lakhani S, Ellis I, Schnitt S et al WHO classification of tumours of the breast 2012, th Lyon: IARC Press Wolff A.C, Hammond M.E, Schwartz J.N et al American Society of Clinical Oncology/ College of American Pathologists guideline recommendations for human epidermal growth factor receptor testing in breast cancer J.Clin Oncol 2007, 25, pp.118-145 Wilbur D.C, Willis J, Mooney R.A, Fallon M.A Estrogen and progesterone receptor detection in archival formalin fixed, parafinembedded tissue from breast carcinoma A comparison of immunohistochemical with dextran coated charcoal assay Med Patho 1992, 5, pp.79-84 133 ... hybridization; Immunohistochemitry ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư biểu mô tuyến vú nhóm khối u khơng đồng mặt sinh học Trên lâm sàng BN ung thư vú có đặc điểm mơ bệnh học giai đoạn biểu lâm sàng, tiến triển đáp ứng... lệ thấp (3%) KẾT LUẬN * Đặc điểm mô bệnh học, giai đoạn TNM số tiên lượng Nottingham UTBMTV: - Týp mô bệnh học chủ yếu loại ung thư biểu mô ống xâm nhập (78%) - Độ mô học khối u chủ yếu độ II... lệ biểu thụ thể HER2 đặc tính sinh học cộng đồng BN ung thư vú khác [7] CK5/6 dấu ấn miễn dịch tế bào vảy Các nghiên cứu gần chứng minh nhuộm miễn dịch cho CK5/6 phân biệt tăng sản tuyến vú thơng