Nghiên cứu nhằm phân tích thành phần hóa học của thân và thân rễ trong Nữ lang Hardwicke, các chất phân lập được được dùng trong kiểm nghiệm dược liệu, dùng phương pháp: Chiết xuất bằng dung môi hữu cơ, sắc ký cột và phương pháp phổ học được dùng trong nghiên cứu này. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU VỀ CÂY NỮ LANG HARWICKE II PHÂN LẬP TRITERPENOID TỪ THÂN VÀ THÂN RỄ NỮ LANG HARDWICKE (VALERIANA HARDWICKII WALL VALERIANACEAE) Huỳnh Lời*, Bùi Ngọc Thảo Trang*, Trần Hùng* TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu nhằm phân tích thành phần hóa học thân thân rễ Nữ lang Hardwicke, chất phân lập được dùng kiểm nghiệm dược liệu Phương pháp: Chiết xuất dung môi hữu cơ, sắc ký cột phương pháp phổ học dùng nghiên cứu Kết quả: Nguyên liệu (1,8 kg) ngấm kiệt cloroform, dung môi bốc thu 45,7 g cao chiết Từ cao chiết cloroform, kỹ thuật sắc ký cột với hệ dung môi cloroform - etyl acetat, thu 16 phân đoạn (A-P) Từ phân đoạn I J, chất phân lập: (11 mg), (1,72 g) Bằng kỹ thuật khối phổ, cộng hưởng từ hạt nhân, so sánh với tài liệu, hai chất 1, xác định tương ứng acid oleanolic acid ursolic Kết luận: Acid ursolic acid oleanolic phân lập từ thân thân rễ Valeriana hardwickii Hai thành phần chiếm hàm lượng lớn phân lập cao cloroform thân thân rễ Từ khóa: Nữ lang hardwicke, Valeriana hardwickii, Valerianaceae, acid oleanolic, acid ursolic ABSTRACT STUDIES ON VALERIANA HARDWICKII II ISOLATION OF TERPENOID FROM STEMS AND ROOTS OF VALERIANA HARDWICKII WALL VALERIANACEAE Huynh Loi, Bui Ngoc Thao Trang, Tran Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 479 - 481 Objectives: The aim of this study was to isolate the components from stems and roots of V hardwickii The received compouds are used for qualitative and quantitative analyses of this herb Methods: The materials were percolated with chloroform The common methods such as silica gel column chromatography, thin layer chromatography, MS, NMR were used for isolation and elucidation of the components Results: Stems and rhizomes of Valeriana hardwickii (1.8 kg) were percolated with chloroform The solvent was removed under reduced pressure to obtain extract (45.7 g) This extract was chromatographed on silica gel with chloroform-ethyl acetate as mobile phase, 16 fractions were obtained From the fractions, namely I and J, by silica gel chromatography with hexane-ethyl acetate as mobile phase in gradient elution, two compounds, namely (11 mg) and (1.72 g), were obtained.Based on MS, NMR data, and previously reported literatures, structures of 1, were elucidated to be oleanolic acid and ursolic acid, respectively Conclusions: Ursolic acid and oleanolic acid as the dominant components from the chloroform extract of the Valeriana hardwickii stems and rhizomes were isolated Key word: Nữ lang hardwicke, Valeriana hardwickii, Valerianaceae, oleanolic acid, ursolic acid thần nhẹ, giảm căng thẳng thần kinh ĐẶT VẤN ĐỀ ngủ Ở Việt Nam loài Valeriana jatamansi Jone Một số lồi thuộc chi Valeriana (Sì to) Valeriana hardwickii Wall (Nữ lang dùng phổ biến giới thuốc an * Khoa Dược, ĐH Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: PGS TS Trần Hùng 478 ĐT: 0918057096 Email: tranhung@uphcm.edu.vn Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 harwicke) dùng làm thuốc an thần, giải lo âu, kinh giật, mệt mỏi, dùng số bệnh da (1,3,) Lồi V jatamansi Jones có nhiều tài liệu số nước cơng bố hóa học tác dụng Việt nam có vài nghiên cứu tác dụng dược lý (Đỗ Ngọc Thanh, 1989; Nguyễn Duy Thuần, 2008…) Riêng loài V hardwickii, nay, chưa có tài liệu nghiên cứu hóa học Việt nam Nghiên cứu làm góp sáng tỏ thành phần hóa học chất phân lập được dùng để kiểm định dược liệu NGUYÊNLIỆU - PHƯƠNGPHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Nguyên liệu thân thân rễ Nữ lang thu hái vào tháng năm 2010 tháng năm 2010 mọc hoang Cổng Trời (vùng Bidoup núi Bà), thành phố Đà Lạt, phần nguyên liệu lấy xã Trà Linh huyện Nam Trà My, Quảng Nam Nguyên liệu định danh cách so sánh mô tả hình thái thực vật với thơng tin tài liệu tham khảo thực vật học chuyên ngành (1,3) Mẫu lưu Bộ môn Dược liệu, Khoa dược, Đại học Y dược TpHCM Phương pháp nghiên cứu Chiết xuất Từ 1,8 kg bột dược liệu, chiết ngấm kiệt với khoảng 18 lít cloroform (dung mơi thu hồi để chiết nhiều lần), sau bốc dung môi áp suất giảm thu 45,72 g cao cloroform (cao C) Phân tích định tính sắc ký lớp mỏng Tiến hành định tính sắc ký lớp mỏng: hòa tan lượng nhỏ cao C cloroform dùng dịch để chấm sắc ký Triển khai sắc ký với hệ CHCl3−EtOAc−acid acetic (90:10:1), phát UV254 nm, UV365 nm, thuốc thử vanilin-sufuric (VS) (định tính terpenoid), acid hydrocloric−acid acetic băng (8:2) (định tính valepotriat) Chuyên Đề Dược Học Nghiên cứu Y học Phân lập Cột thuỷ tinh kích thước × 45 cm, khối lượng mẫu 45,72 g cao C, 500 g silica gel (Merck) (0,040–0,063 mm) Pha động ban đầu triển khai với cloroform, sau triển khai hệ dung mơi CHCl3–EtOAc với độ phân cực tăng dần (99:1, 95:5, 90:10, 80:20, 50:50), EtOAc 100%, cuối MeOH 100% Thể tích hứng 150 ml, để nhỏ giọt tự nhiên Các phân đoạn hứng kiểm tra sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi nêu phát UV365 UV254 nm, thuốc thử VS AH Kết thu 16 phân đoạn ký hiệu từ A-P, từ phân đoạn I tiếp tục sắc ký cột với điều kiện sau: cột thuỷ tinh kích thước 3×30 cm; khối lượng mẫu nạp 560 mg thuộc phân đoạn I; pha tĩnh 60 g silica gel (Merck) (0,015−0,040 mm); rửa giải hệ dung môi n-hexan–EtOAc với độ phân cực tăng dần (100:0, 85:15, 80:20, 70:30, 50:50), EtOAc 100 %; thể tích hứng 20 ml với tốc độ ml/phút, phát sắc ký lớp mỏng với hệ dung mơi thăm dò trên, soi UV 365 UV 254 nm nhúng thuốc thử VS kết thu 11 mg chất Từ phân đoạn J thu 1,7 g chất kỹ thuật tinh chế kết tinh lại dung môi khác KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Chất Chất màu trắng, không mùi, dễ tan cloroform, tan EtOAc methanol, không tan hexan Khối phổ ESI cho đỉnh m/z = (M+Na)+ = 479 m/z = (M-H)- = 455, tương ứng với phân tử khối 456 có công thức nguyên C30H48O3 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz, ppm): δH 5,27 (1H, br s, H-12), 3,22 (1H, m, H-3), 2,28 (2H, d, H-2), bảy nhóm methyl có độ dịch chuyển 1,27 (3H, s), 1,15 (3H, s), 1,10 (3H, s), 1,00 (3H, s), 0,94 (3H, s), 0,80 (3H, s), 0,79 (3H, s) 13C-NMR (CDCl3, 125MHz, ppm): δC 183,3 (C28), 143,6 (C-13), 122,7 (C-12), 79,1 (C-3), 55,3 (C5), 47,7 (C-9), 46,6 (C-17), 45,9 (C-19), 41,6 (C-14), 41,0 (C-18), 39,3 (C-8), 38,8 (C-4), 38,4 (C-1), 37,1 (C-10), 33,8 (C-21), 33,1 (C-29), 32,6 (C-7), 32,5 (C22), 30,7 (C-20), 28,1 (C-23), 27,7 (C-15), 27,2 (C- 479 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học 2), 25,9 (C-27), 23,6 (C-30), 22,9 (C-16), 23,4 (C11), 18,3 (C-6), 17,2 (C-26), 15,6 (C-24), 15,3 (C25) Chất (1) xác định acid oleanolic liệu phổ nêu phù hợp với tài liệu công bố acid oleanolic(1) 30 29 21 20 19 12 18 13 22 11 25 17 26 COOH 14 16 10 28 15 27 HO 23 24 Hình Cấu trúc cuả chất (1) KẾT LUẬN 30 29 20 21 19 12 17 26 COOH 14 16 10 28 27 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 23 Hình Cấu trúc cuả chất (2) Chất Chất bột màu trắng, không mùi, dễ tan cloroform, tan EtOAc methanol, không tan hexan Khối phổ ESI+ cho đỉnh m/z = (M+Na)+ = 479,32 tương ứng với phân tử khối M = 456,32 có cơng thức ngun C30H48O3 1H-NMR (CDCl3, 500MHz, ppm): δH 5,24 (1H, br, s, H-12), 3,38 480 Bằng kỹ thuật sắc ký, hợp chất thuộc nhóm terpenoid phân lập, cấu trúc xác định liệu phổ học acid oleanolic acid ursolic, hai chất có hàm lượng lớn HO 13 11 25 18 (1H, m, H-3), 2,20 (2H, d, H-2), bảy nhóm methyl có độ dịch chuyển 1,30 (3H, s), 1,15 (3H, s), 1,00 (3H, s), 0,95 (3H, d, 6,5), 0,86 (3H, s), 0,81 (3H, s), 0,78 (3H, d, 3,5) 13C-NMR (CDCl3, 125MHz, ppm): δC 180,4 (C-28), 138,1 (C-13), 125,4 (C-12), 78,8 (C-3), 55,2 (C-5), 52,8 (C-18), 47,7 (C-17), 47,5 (C-9), 42,0 (C-14), 39,4 (C-8), 39,0 (C-19), 38,8 (C20), 38,6 (C-4), 36,8 (C-10), 36,7 (C-22), 33,0 (C-1), 30,6 (C-7), 29,6 (C-21), 28,0 (C-23), 28,0 (C-15), 26,8 (C-2), 24,1 (C-16), 23,2 (C-11), 21,2 (C-30), 18,2 (C-6), 16,9 (C-29), 16,9 (C-27), 16,8 (C-26), 15,5 (C-25), 15,3 (C-24) Chất (2) xác định acid ursolic liệu phổ nêu phù hợp với tài liệu công bố acid ursolic(01) Mahato SB et al (1994), “13C-NMR spectra of pentacyclic triterpenoids- a compilation and some salient features”, Phytochemistry, 37(6), pp 1517-1575 Phạm Hoàng hộ (1999), Cây cỏ Việt nam, NXB Trẻ, trang 228 Viện dược liệu (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tập 2, tr 484-485 Võ Văn Chi (2007), Sách tra cứu tên cỏ Việt Nam, NXB Giáo dục, tr 31-40 Ngày nhận báo: Ngày phản biện nhận xét báo: 14.12.2012 26.12.2012 Ngày báo đăng: 10.03.2014 Chuyên Đề Dược Học ... sáng tỏ thành phần hóa học chất phân lập được dùng để kiểm định dược liệu NGUYÊNLIỆU - PHƯƠNGPHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Nguyên liệu thân thân rễ Nữ lang thu hái vào tháng năm 2010 tháng năm 2010... dụng Việt nam có vài nghiên cứu tác dụng dược lý (Đỗ Ngọc Thanh, 1989; Nguyễn Duy Thuần, 2008…) Riêng loài V hardwickii, nay, chưa có tài liệu nghiên cứu hóa học Việt nam Nghiên cứu làm góp sáng... thuốc thử VS AH Kết thu 16 phân đoạn ký hiệu từ A-P, từ phân đoạn I tiếp tục sắc ký cột với điều kiện sau: cột thuỷ tinh kích thước 3×30 cm; khối lượng mẫu nạp 560 mg thuộc phân đoạn I; pha tĩnh 60