Khảo sát biểu hiện p53 trên ung thư thanh quản và mối tương quan với lâm sàng và hình ảnh học

Nghiên cứu nhằm tìm hiểu sự biểu hiện của kháng nguyên p53 trong ung thư thanh quản và mối tương quan với lâm sàng và hình ảnh học, và được thực hiện trên 39 trường hợp ung thư thanh quản được phẫu thuật tại Bệnh viện Chợ Rẫy từ tháng 6/2010 đến tháng 4/2011. Sau đó được nghiên cứu hóa mô miễn dịch p53.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 KHẢO SÁT BIỂU HIỆN p53 TRÊN UNG THƯ THANH QUẢN VÀ MỐI TƯƠNG QUAN VỚI LÂM SÀNG VÀ HÌNH ẢNH HỌC Lê Nguyên Hòa*, Lâm Huyền Trân**, Hứa Thị Ngọc Hà*** TĨM TẮT Mục đích nghiên cứu: Nhằm tìm hiểu biểu kháng nguyên p53 ung thư quản mối tương quan với lâm sàng hình ảnh học Phương pháp nghiên cứu: 39 trường hợp ung thư quản phẫu thuật Bệnh viện Chợ Rẫy từ tháng 6/2010 đến tháng 4/2011 Sau nghiên cứu hóa mơ miễn dịch p53 Kết quả: Tỷ lệ dương tính kháng nguyên p53 ung thư quản 61,5%, p53 (1+) 12,8%, p53 (2+) 12,8%, p53 (3+) 35,9% Biểu p53 (+) xuất nhóm yếu tố nguy hút thuốc uống rượu nhiều chiếm tỷ lệ 58,6%, xuất vị trí hạ mơn nhiều 100%, loại mô học carcinoma tế bào gai biệt hóa chiếm tỷ lệ cao 100% Kết luận: Tỷ lệ dương tính p53 với yếu tố nguy cơ, với vị trí giải phẫu học khối u, với hạch di căn, với giai đoạn lâm sàng, với loại mơ học khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Nhưng mức độ dương tính p53 với loại mơ học khác biệt có ý nghĩa thống kê Từ khóa: Đột biến, ung thư quản ABSTRACT EXPRESSION OF p53 IN LARYNGEAL CARCINOMA AND CORRELATION WITH CLINICAL AND IMAGES Le Nguyen Hoa, Lam Huyen Tran, Hua Thi Ngoc Ha * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No - 2012: 136 - 140 Purpose: To determine the expression of p53 in laryngeal carcinoma and correlation with clinical and images Methods: 39 cases of laryngeal carcinoma were operated at the Cho Ray Hospital from June 2010 to April 2011 All specimens were studied in immunohistochemistry Results: The positive rates of p53 in laryngeal carcinoma were 61,5% in that p53 (1+): 12,8%; p53 (2+): 12.8%; p53 (3+): 35.9% Conclusions: The positive rates of p53 in laryngeal carcinoma with tobaco and alcohol use, primary site of tumors, nodal metastasis, histological grade, clinical staging were no statistically significant difference But intensity of expression p53 with histological grade were statistically significant difference Key word: Mutation, laryngeal cancer ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư quản loại bệnh lý ác tính hay gặp nước ta có xu hướng ngày gia tăng, chiếm tỷ lệ cao gần 25% ung thư vùng đầu cổ Ung thư quản dù có điều trị ảnh hưởng đến chất lượng * Bệnh viện Đa khoa Đồng Nai ** Bộ môn Tai Mũi Họng -Đại học Y Dược TP HCM *** Bộ môn Giải Phẫu Bệnh - Đại học Y Dược TP HCM Tác giả liên lạc: BSCKII Lê Nguyên Hòa, ĐT: 0908225146, Email:hoanguyenent@yahoo.com.vn 136 Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 sống Cho đến nay, có nhiều cơng trình nghiên cứu khía cạnh khác ung thư quản Tuy nhiên việc ứng dụng hóa mơ miễn dịch nghiên cứu ung thư quản chưa có nhiều Riêng Việt Nam nghiên cứu theo hướng bước đầu Vì vậy, nghiên cứu tiến hành nhằm tìm hiểu đặc điểm biểu p53 ung thư quản mối tương quan với lâm sàng hình ảnh học Nghiên cứu Y học Âm tính (-): ≤ 10% số tế bào bướu bắt màu Dương tính (1+): 11 – 30% số tế bào bướu bắt màu Dương tính (2+): 31 – 50% số tế bào bướu bắt màu Dương tính (3+): > 50% số tế bào bướu bắt màu KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỐI TƯỢNG- PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Qua nghiên cứu thu kết sau: Đối tượng nghiên cứu Biểu p53 ung thư quản Nghiên cứu thực 39 trường hợp phẫu thuật Bệnh viện Chợ Rẫy thời gian 6/2010 – 4/2011 Bệnh nhân có đầy đủ xét nghiệm tiền phẫu, nội soi quản, CT Scan, xét nghiệm hóa mơ miễn dịch p53 Tuổi bệnh nhân từ 41 – 79 (trung bình 61,2 ± 9,6), chủ yếu nam giới 89,7% Biểu đồ: Phân phối bệnh nhân theo biểu p53 Phương pháp nghiên cứu Bảng 1: Liên quan biểu p53 với tuổi Nghiên cứu tiến hành theo phương pháp mô tả cắt ngang Các bệnh phẩm sau phẫu thuật ung thư quản quan sát mơ tả vị trí, kích thước, sau phẫu tích lấy bệnh phẩm từ vùng tổn thương cố định dung dịch formol buffer 10% gửi cho Bộ mơn giải phẫu bệnh vòng 24 h Nhuộm hóa mơ miễn dịch p53 với kháng thể đơn dòng chuột (BP53 – 11) hãng Ventana cho mẫu mơ cố định formol đệm trung tính vùi paraffin Quy trình nhuộm hóa mơ miễn dịch p53 thực máy nhuộm tự động hãng Ventana (Mỹ) Đánh giá kết nhuộm hóa mơ miễn dịch p53 Được xác định dương tính nhân tế bào bắt màu nâu Mức độ dương tính đánh giá dựa tỉ lệ % số tế bào bướu nhuộm dương tính tổng số tế bào bướu Tỉ lệ tính cách đếm số tế bào bướu nhuộm dương tính tổng số tế bào bướu vi trường (x200) Thang điểm đánh giá biểu p53 chia sau: Tai Mũi Họng Protein p53 biểu 61,5% (24/39 trường hợp ) ung thư quản, 12,8% biểu (1+), 12,8% biểu (2+) 35,9% biểu (3+) Biểu P53 với tuổi Biểu p53 < 50 tuổi 50 tuổi 59 tuổi 60 tuổi 69 tuổi > 69 tuổi Tổng p53(+) (75%) (60%) (50%) (70%) 24 (61,5%) p53(-) (25%) (40%) (50%) (30%) 15 (38,5%) Tổng 15 10 10 39 Nhận xét: Tuổi có p53 dương tính nhiều < 50 > 69, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P = 0,756 > 0,05) Biểu P 53 với giới tính Bảng 2: Liên quan biểu p53 với giới tính Biểu p53 Nam Nữ Tổng p53(+) 20 (57,1%) (100%) 24 (61,5%) p53(-) 15 (42,9%) (0%) 15 (38,5%) Tổng 35 39 Nhận xét: Nữ có tỷ lệ p53 dương tính 100% qua phân tích thống kê cho thấy khác biệt khơng có ý nghĩa (P = 0,095 > 0,05) Biểu p 53 với thuốc Bảng 3: Liên quan biểu P53 với thuốc Biểu p53 Không hút thuốc Hút thuốc p53(+) (83,3%) 19 (57,6%) p53(-) (6,7%) 14 (42,4%) Tổng 33 137 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học Biểu p53 Tổng p53(+) 24 (61,5%) p53(-) 15 (38,5%) Tổng 39 Nhận xét: Người hút thuốc có tỷ lệ p53 dương tính nhiều âm tính, qua phân tích thống kê, khác biệt khơng có ý nghĩa (P = 0,233 > 0,05) Biểu P 53 với vị trí nguyên phát Bảng 4:Lliên quan biểu P53 với vị trí nguyên phát Biểu 53 Thượng môn Thanh môn Hạ môn Tổng p53(+) 9(69,2%) 14(56%) 1(100%) 24 p53(-) 4(30,8%) 11(44%) 0(0%) 15 Tổng 13 25 Nhận xét: Tỷ lệ p53 dương tính cao hạ mơn (100%), thượng môn (69,2%), môn 56%, khác biệt khơng có ý nghĩa (P = 0,53 > 0,05) Biểu P53 với vị trí mức độ xâm lấn khối u (T) Bảng 5: Liên quan biểu P53 với vị trí mức độ xâm lấn khối u (T) Tổng p53(+) p53(-) T1 2(66,7%) 1(33,3%) T2 6(50%) 6(50%) 12 T3 12(66,7%) 6(33,3%) 18 T4 Tổng 4(66,7%) 24 2(33,3%) 15 39 khác biệt khơng có ý nghĩa (P = 0,228 > 0,05) Bảng 7: Liên quan mức độ biểu P53 với di hạch lâm sàng N0 N1 N2 p53(-) 9(60%) 4(26,7%) 2(13,3%) p53(1+) 4(80%) 0(0%) 1(20%) p53(2+) 2(40%) 0(0%) 1(20%) p53(3+) 7(50%) 2(14,3%) 5(35,7%) Tổng 22 Tổng 15 5 14 39 N3 0(0%) 0(0%) 2(40%) 0(0%) Nhận xét: Tỷ lệ p53 (-) gặp ung thư quản khơng hạch có hạch N1, N2, khơng gặp hạch N3, mức độ dương tính p53 (3+) gặp nhiều ung thư có hạch N2, khơng có N3, qua phân tích thống kê có khác biệt có ý nghĩa thống kê mức độ biểu p53 với di hạch lâm sàng mối tương quan thuận (P = 0,026 < 0,05, R = 0,023) Biểu P53 với giai đoạn lâm sàng Bảng 8: Liên quan biểu P53 với giai đoạn lâm sàng Biểu p53 Giai đoạn I Giai đoạn II Giai đoạn III Giai đoạn IV Tổng p53(+) 2(66,7%) 4(80%) 17(60,7%) 1(33,3%) 24 p53(-) 1(33,3%) 1(20%) 11(39,3%) 2(66,7%) 15 Tổng 28 39 Nhận xét: Tỷ lệ p53 dương tính nhiều T1, T3, T4 chiếm tỷ lệ 66,7%, T2(50%) , khác biệt khơng có ý nghĩa (P = 0,807 > 0,05) Nhận xét: Ta thầy tỉ lệ dương tính p53 với giai đoạn lâm sàng không theo qui luật cả, giai đoạn IV, bệnh nặng tỷ lệ thấp (33,3%), khác biệt khơng có ý nghĩa (P = 0,622 > 0,05) Biểu P53 với di hạch lâm sàng Biểu P53 với loại mô bệnh học Bảng 6: Liên quan biểu P53 với di hạch lâm sàng N0 N1 N2 N3 Tổng p53(+) 13(59,1%) 2(33,3%) 7(77,8%) 2(100%) 24 p53(-) 9(40,9%) 4(66,7%) 2(22,2%) 0(0%) 15 Tổng 22 39 Nhận xét: Tỷ lệ p53 dương tính chiếm 100% N3, N2 77,8%, thấp N1 33,3%, 138 Bảng 9: Liên quan biểu P53 với loại mơ học Carcinome tế bào gai Biệt hóa cao Biệt hóa vừa Biệt hốc Tổng p53(+) p53(-) Tổng 7(70%) 15(55,6%) 2(100%) 24 3(30%) 12(44,4%) 0(0%) 15 10 27 39 Nhận xét: Tỷ lệ p53 dương tính cao carcinơm tế bào gai biệt hóa 100%, biệt hóa Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 vừa 55,6%, mà biệt hóa cao 70%, khác biệt khơng có ý nghĩa (P = 0,375 > 0,05) Bảng 10: Liên quan mức độ biểu P53 với mô học Carcinôm tế bào gai p53(-) p53(1+) p53(2+) p53(3+) Tổng Biệt hóa Biệt hóa Biệt hóa cao vừa 3(30%) 12(44,4%) 0(0%) 2(20%) 1(3,7%) 2(100%) 3(30%) 2(7,41%) 0(0%) 2(20%) 12(44,4%) 0(0%) 10 27 Tổng 15 5 14 39 Nhận xét: 100% ung thư quản loại carcinôm tế bào gai biệt hóa có mức độ biểu p53 (1+), mức độ biểu P53 (2+) p53 (3+) có ung thư quản loại carcinơm tế bào gai biệt hóa cao, vừa Qua phân tích, khác biệt có ý nghĩa thống kê (P = 0,002 < 0,05) tương quan nghịch (R = 0,012) BÀN LUẬN Qua nghiên cứu 39 trường hợp ung thư quản, tỷ lệ p53 dương tính chiếm tỷ lệ 61,5%, tỷ lệ biểu gen khác tùy tác giả phương pháp khảo sát, dao động từ 42,2% - 65,1% Ý nghĩa gen p53 ung thư quản nhiều bàn cãi kết nghiên cứu tác giả chưa hoàn toàn thống Tuy nhiên nghiên cứu chứng minh gen p53 – gen đè nén u, đảm nhận nhiều chức năng, đặc biệt chận tiến trình phân bào Đột biến gen P53 tạo phân tử protein khơng có chức năng, tích tụ nhân, p53 tích tụ nhiều tiên lượng xấu Trong tế bào bình thường, lượng protein p53 thấp tồn ngắn (6-20 phút), bị phân hủy nhanh sau tổng hợp, khơng thể phát nhuộm hóa mơ miễn dịch Đột biến sai nghĩa sản xuất protein p53 đột biến bền vững hơn, có thời gian bán hủy đến giờ, dẫn đến tích tụ nhiều nhân tế bào nên phát qua nhuộm hóa mơ miễn dịch Về mối liên quan p53 với loại mô học qua bảng cho thấy: carcinơm tế bào gai biệt hóa cao tỷ lệ p53 dương tính 70%, với Tai Mũi Họng Nghiên cứu Y học carcinơm tế bào gai biệt hóa vừa, tỷ lệ p53 dương tính 55,6%, với carcinơm tế bào gai biệt hóa kém, tỷ lệ p53 dương tính 100% Điều có nghĩa độ biệt hóa mơ u tỷ lệ p53 dương tính cao ngược lại, qua phân tích thống kê (P = 0,375 > 0,05) dẫn đến khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Kết tương tự nghiên cứu khác (7,9) Về mối liên quan mức độ dương tính p53 với loại mơ học qua bảng 10 cho thấy: carcinơm tế bào gai biệt hóa cao tỷ lệ p53 (1+), p53 (2+), p53 (3+) 20%, 30%, 20%, với carcinôm tế bào gai biệt hóa vừa tỷ lệ p53 (1+), p53 (2+), p53 (3+) 3,7%, 7,4%, 44,4%, với carcinôm tế bào gai biệt hóa tỷ lệ p53 (+) 100% Điều có nghĩa độ biệt hóa khối u mức độ dương tính p53 thấp ngược lại, qua phân tích thống kê cho ta thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê tương quan nghịch mức độ yếu (P = 0,002, R = -0,012) Về mối liên quan p53 với di hạch, qua bảng ta thấy: hạch N1 tỷ lệ p53 dương tính 33,3%, hạch N2 tỷ lệ p53 dương tính 77,8%, hạch N3 tỷ lệ p53 dương tính 100% Điều có nghĩa hạch có kích thước lớn tỷ lệ p53 dương tính cao, qua phân tích thống kê, khơng tìm thấy liên quan có ý nghĩa (P = 0,228 > 0,05) Kết tương tự nghiên cứu(1,9) Về mối liên quan mức độ dương tính p53 với di hạch, qua bảng ta thấy: p53 (1+) N0 80%, với N1 0%, với N2 20%, N3 0% p53 (2+) N0 40%, với N1 0%, với N2 20%, N3 40% P53 (3+) N0 50%, với N1 14,3%, với N2 53,7%, N3 0% Điều có nghĩa hạch lớn mức độ p53 dương tích cao ngược lai, qua phân tích thống kê khác biệt có ý nghĩa có mối tương quan tỷ lệ thuận (P = 0,026 < 0,05, R = 0,023) Tỷ lệ p53 dương tính bệnh nhân hút thuốc chiếm tỷ lệ 57,6% gợi chế gây ung thư 139 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 quản thuốc Tuy nhiên phân tích thống kê khơng tìm thấy liên quan có ý nghĩa Kết tương tự với nhiều nghiên cứu khác(9) Nghiên cứu có kết với nhiều nghiên cứu trước đây, cho thấy biểu p53 khơng liên quan đến, tuổi(3,7,9),giới tính(3,9), vị trí ung thư(3,7,9), giai đoạn lâm sàng(1,7) KẾT LUẬN Tỷ lệ p53 dương tính ung thư quản 61,5%, p53 (1+) 12,8%, p53 (2+) 12,8%, p53 (3+) 35,9% Biểu p53 ung thư quản không liên quan đến tuổi, giới tính, thói quen hút thuốc lá, vị trí ung thư, kích thước bướu, kích thước hạch, loại mơ học, giai đoạn lâm sàng Nhưng mức độ biểu p53 có liên quan đến loại mơ học kích thước hạch, khác biệt có ý nghĩa thống kê Nghiên cứu chưa đánh giá ý nghĩa dương tính p53, cần nghiên cứu thêm với cỡ mẫu lớn thời gian dài để xác định tỷ lệ tái phát, tỷ lệ sống bệnh nhân ung thư quản thời điểm năm, năm, 10 năm để biết p53 dương tính có thực yếu tố tiên lượng xấu hay không TÀI LIỆU THAM KHẢO 140 10 11 Fracchiolla N.S., Capaccio P., Carboni N., Pagliari A.V., Neri A., Ronchett D., Pruner G., Silvotti M.G., Pignataro L., Buffa R., Broich G (1999) “ Immunohistochemical and molecular analysis of Bax, BCL-2, and p53 genes in laryngeal squamous cell carcinomas “ Anticancer Research, 19, pp.1043-1052 Golusinski W., Olofsson J., Szmeja Z., Szyfter K., Szyfter W Biczysko W., Hemminki K (1997) “Alteration of p53 gen structure and function in laryngeal squamous cell cancer” Eur Arch Otorhinolaryngol, 254, pp 133-137 Hứa Thị Ngọc Hà, Huỳnh Ngọc Linh (2001) “Ứng dụng kỹ thuật hóa mơ miễn dịch chẩn đốn giải phẫu bệnh ” Y học TPHCM, số đặc biệt chuyên đề Giải Phẫu Bệnh, phụ tập 5(4),tr.1-8 Nguyễn Thế Dân, Hà Xuân Nguyên,(2007) “ Biểu thụ thể Estrogen, Progesteron, gen p53, Ki67, Her-2/Neu ung thư biểu mơ tuyến vú”, Y học thành phố Hồ Chí Minh, phụ tập 13, 11(3), tr.106-109 Nguyễn Thị Hồng (2006) Đột biến gen P53 biểu protein p53, MDM2, Ki67, MMP9, ung thư niêm mạc miệng người Việt Nam Luận án tiến sĩ Y học, Đại học Y Dược TPHCM Salam M, Rockett J and Morris A (1995) “The prevalence of different human papillomavirus types and p53 mutations in laryngeal carcinomas: is there a reciprocal relationship ?” European Journal of surgical oncology, 21, pp.290-296 Suzuki T, Shidara K, Hara F, Nakajima T (1994) “High frequency of p53 abnormality in laryngeal cancer of heavy smokers and its relation to human papillomavirus infection” Jpn J cancer Res, 85, pp.1087-1093 Tan L.K.S and Ogden G R (1997) “p53 over-expression in laryngeal carcinoma is not predictive of response to radiotherapy” Oral oncology, 33(3), pp.177-181 Tatemoto Y., Osaki T., Yoneda K., Yamamoto T., Ueta E., Kimura T (1998), “Expression of p53 and p21 proteins in oral squamous cell carcinoma: correlation with lymph node metastasis and response to chemoradiotherapy”, PatholRes Pract, 194, pp 821-830 Trịnh Tuấn Dũng, (2007) “Sự biểu kháng nguyên p53, Her-2/Neu ung thư đại trực tràng hóa mơ miễn dịch”, Y học TPHCM, chuyên đề Giải Phẫu Bệnh- Tế Bào Học, phụ tập 11 (3), tr 89-94 Anwar K, Nakakuki K, Imai H, Naiki H and Inuzuka M (1993) “Over- expression of p53 protein in human laryngeal carcinoma” Int J Cancer, 53, pp.952-956 Chuyên Đề Mắt – Tai Mũi Họng ... thống kê mức độ biểu p53 với di hạch lâm sàng mối tương quan thuận (P = 0,026 < 0,05, R = 0,023) Biểu P53 với giai đoạn lâm sàng Bảng 8: Liên quan biểu P53 với giai đoạn lâm sàng Biểu p53 Giai đoạn... Thang điểm đánh giá biểu p53 chia sau: Tai Mũi Họng Protein p53 biểu 61,5% (24/39 trường hợp ) ung thư quản, 12,8% biểu (1+), 12,8% biểu (2+) 35,9% biểu (3+) Biểu P53 với tuổi Biểu p53 < 50 tuổi 50... bước đầu Vì vậy, nghiên cứu tiến hành nhằm tìm hiểu đặc điểm biểu p53 ung thư quản mối tương quan với lâm sàng hình ảnh học Nghiên cứu Y học Âm tính (-): ≤ 10% số tế bào bướu bắt màu Dương tính (1+):