Để góp phần tìm hiểu tình hình nhiễm khuẩn do K. pneumoniae và gen độc lực của loài VK này, chúng tôi nghiên cứu các chủng K. pneumoniae phân lập được ở BN vào điều trị tại Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương nhằm: Tìm hiểu sự phân bố các chủng K. pneumoniae ở một số bệnh, tìm hiểu gen độc lực của chủng K. pneumoniae phân lập được.
TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 TÌNH HÌNH NHIỄM KHUẨN KLEBSIELLA PNEUMONIAE MANG GEN ĐỘC LỰC Ở BỆNH NHÂN VÀO ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN BỆNH NHIỆT ĐỚI TRUNG ƢƠNG (1 - 2007 ĐẾN 12 - 2011) Đào Tuyết Trinh*; Phạm Văn Ca*; Nguyễn Văn Kính* Vũ Thị Ngọc Bích**; Heiman F L Wertheim**; Lê Thu Hồng*** TÓM TẮT Trong số 537 chủng K pneumoniae phân lập từ bệnh phẩm bệnh nhân (BN) điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương từ - 2007 đến 12 - 2011, 204 chủng (38%) phân lập BN viêm phổi, 92 chủng (17,1%) phân lập BN nghiện rượu có viêm phổi sốc nhiễm khuẩn, 71 chủng (13,2%) phân lập BN viêm gan mạn xơ gan 164 chủng K pneumoniae xác định gen độc lực phương pháp PCR (36 chủng K pneumoniae từ nhiễm khuẩn bệnh viện 116 chủng K pneumoniae từ nhiễm khuẩn cộng đồng) Kết cho thấy: gen rmpA phổ biến nhiễm khuẩn cộng đồng (69,0%), đó, chủ yếu nhiễm khuẩn gan mật (83,3%), viêm phổi mắc cộng đồng 69,2% Gen AllS chiếm tỷ lệ thấp so với rmpA nhiễm khuẩn gan mật, nhiễm khuẩn cộng đồng (38,9% 27,6%) * Từ khóa: Klebsiella pneumoniae; PCR; Nhiễm khuẩn SITUATION OF Klebsiella pneumoniae INFECTION VIRULENCE GENe IN PATIENTS TREATED at NATIONAL HOSPITAL of TROPICAL DISEASES (from - 2007 to 12 - 2011) SUMMARY Among 537 pathogenic strains of K pneumoniae isolated from specimens of patients treated at National Hospital of Tropical Diseases from - 2007 to 12 - 2011, 204 (38%) isolated strains in the patients with pneumonia, 92 (17.1%) isolated strains in the alcoholic patients with pneumonia and septic shock, 71 (13.2%) isolated strains in the patients with hepatitis chronic and cirrhosis 164 strains of K pneumoniae virulence gene identified by the PCR method (36 strains of K pneumoniae from the hospital infection and 116 strains of K pneumoniae from the community infection) To detect virulant gene, indicating that gene rmpA is common in the community infection accounted for 69.0%, the hepatic or biliary infections accounted for 83.3%, including liver abscess, communityacquired pneumonia accounted for 69.2% AllS gene had the lower proportion than rmpA gene in the hepatic infection (38.9% and 27.6%) * Key words: Klebsiella pneumoniae; PCR; Infection * Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương ** Đại học Oxford *** Bệnh viện 103 Chịu trách nhiệm nội dung khoa học: PGS TS Nguyễn Thái Sơn PGS TS Trịnh Thị Xuân Hòa TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 ĐẶT VẤN ĐỀ Klebsiella pneumoniae trực khuẩn Gram âm thuộc họ vi khuẩn (VK) đường ruột phân bố khắp nơi giới K pneumoniae nguyên quan trọng gây bệnh cho người, dẫn tới tử vong Ở nước phát triển, K pneumoniae nguyên nhân phổ biến gây nhiễm khuẩn cộng đồng viêm phổi, áp xe gan nhiễm khuẩn huyết… Ở nước phát triển, K pneumoniae tác nhân gây nhiễm khuẩn bệnh viện nhiễm khuẩn huyết, nhiễm khuẩn đường tiết niệu viêm phổi Tuy nhiên, hiểu biết độc lực K pneumoniae giới Việt Nam Để góp phần tìm hiểu tình hình nhiễm khuẩn K pneumoniae gen độc lực lồi VK này, chúng tơi nghiên cứu chủng K pneumoniae phân lập BN vào điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương nhằm: - Tìm hiểu phân bố chủng K pneumoniae số bệnh - Thanh định danh API 20E card định danh (Bio Merieux, Pháp) - Hóa chất chạy PCR: dNTP Roche; thạch agarose, ethidium bromide mồi 16S, AllS, wcaG, Mrk, rmpA, Wab, Fim, Kfu, Uge, ureA Sigma [1, 2] Phƣơng pháp nghiên cứu - Định danh VK theo thường quy kỹ thuật vi sinh vật [3] - Phát gen độc lực K pneumoniae phương pháp PCR - Đánh giá BN bị nhiễm khuẩn cộng đồng hay nhiễm khuẩn bệnh viện dựa theo tiêu chí Trung tâm Kiểm soát Dịch bệnh Hoa Kỳ [4]: + Nhiễm khuẩn cộng đồng: nhiễm khuẩn mắc phải 48 kể từ nằm viện + Nhiễm khuẩn bệnh viện: nhiễm khuẩn mắc phải thời gian nằm viện với triệu chứng khởi phát sau nhập viện 48 giờ, BN có tiền sử nằm viện tuần trước đó, BN chuyển đến từ bệnh viện khác VK phân lập phù hợp với tác nhân từ bệnh viện - Tìm hiểu gen độc lực chủng K pneumoniae phân lập KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phân bố chủng K pneumoniae số bệnh Đối tƣợng nghiên cứu Bệnh phẩm dương tính với K pneumoniae BN nằm điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương từ - 2007 đến 12 - 2011 Vật liệu nghiên cứu - Môi trường phân lập VK: thạch máu, mac conkey (Bio Merieux, Pháp) * Tỷ lệ nhiễm K pneumoniae bệnh khác nhau: Viêm phổi: 204 (38,0%); viêm phổi, sốc nhiễm khuẩn BN nghiện rượu: 92 (17,1%); bệnh gan: 71 (13,2%); đái đường: 50 (9,3%); áp xe gan: 32 (6,0%); nhiễm khuẩn tiết niệu: 21 (3,9%); nhiễm khuẩn không rõ đường vào: 21 (3,9%); viêm màng não: 13 (2,4%); viêm gan: 12 (2,2%); nhiễm khuẩn mật: 10 (1,9%); viêm da: (1,3%); viêm phúc mạc: TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 (0,7%) Theo Obiamiwe Umeh CS: tỷ lệ viêm phổi người già K pneumoniae Malaysia Nhật Bản dao động 15 - 40%, với người nghiện rượu Mỹ, số lên tới 66%, tỷ lệ tử vong nhóm nghiện rượu cao (50 - 100%) [5] Ở Đài Loan, Wang JH CS tổng kết 182 trường hợp áp xe gan từ năm 1990 đến 1996 với 160 trường hợp (89%) nhiễm khuẩn K pneumoniae, đó, chủ yếu chủng phân lập BN bị tiểu đường, tỷ lệ tử vong nhóm lên tới 41% [6] Đặc điểm gen độc lực chủng K pneumonia Bảng 1: Tần suất gen độc lực chủng K pneumoniae gây bệnh Nhiễm khuẩn gan mật 14 12 33 30 36 34 15 35 35 (38,9%) (33,3%) (91,7%) (83,3%) (100%) (94,4%) (41,7%) (97,2%) (97,2%) Viêm phổi cộng đồng 11 11 47 36 52 49 20 50 50 (21,2%) (21,2%) (90,4%) (69,2%) (100%) (94,2%) (38,5%) (96,2%) (96,2%) Viêm phổi bệnh viện 23 28 27 12 26 28 (22,2%) (18,5%) (85,2%) (25%) (100%) (96,4%) (42,9%) (92,9%) (100%) Viêm da (16,7%) Nhiễm khuẩn tiết niệu Viêm màng não 6 (66,7%) (33,3%) (83,3%) (100%) (16,7%) (66,7%) (100%) 10 12 12 11 12 (25%) (16,7%) (83,3%) (16,7%) (100%) (100%) (33,3%) (91,7%) (100%) 7 8 7 (50%) (62,5%) (87,5%) (87,5%) (100%) (100%) (62,5%) (87,5%) (87,5%) Viêm phúc mạc 0 Không rõ đường vào 3 (100%) (33,3%) (100%) (100%) (66,7%) (100%) 19 19 19 8 19 (26,3%) (20%) (100%) (47,4%) (100%) (100%) (42,1%) (80%) (100%) Phân loại AllS wcaG Mrk rmpA Wab Fim Kfu Uge ureA Nhiễm khuẩn 31 36 35 16 33 36 (22,2%) (19,4%) (86,1%) (24,3%) (97,3%) (94,6%) (43,2%) (80,2%) (97,3%) 32 (27,6%) 30 (25,9%) 103 (88,8%) 80 (69,0%) 116 (100%) 111 (95,7%) 44 (37,9%) 110 (94,8%) 112 (96,6%) 36 52 28 12 19 Tổng 36 bệnh viện Nhiễm khuẩn cộng đồng Trong số 164 chủng K pneumoniae xác định gen độc lực kỹ thuật 116 PCR (36 chủng phân lập từ bệnh phẩm BN nhiễm khuẩn bệnh viện 116 chủng TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 phân lập từ bệnh phẩm BN nhiễm khuẩn cộng đồng), kết cho thấy: gen rmpA phổ biến BN nhiễm khuẩn cộng đồng (69,0%), nhiễm khuẩn bệnh viện 24,3% (p < 0,001), kết phù hợp với nghiên cứu Sylvain Brisse châu Âu, Bắc Mỹ, châu Á châu Phi [1]; nhiễm khuẩn gan mật chiếm 83,3%; viêm phổi cộng đồng 69,2% Gen AllS chiếm tỷ lệ thấp so với gen rmpA nhiễm khuẩn gan mật (38,9%); nhiễm khuẩn cộng đồng 27,6% Tuy nhiên, theo Sylvain Brisse CS: người bình thường có mang gen độc lực này, yếu tố nguy cao gây nhiễm khuẩn [1] KẾT LUẬN Qua nghiên cứu 537 chủng K pneumoniae phân lập BN vào điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương từ - 2007 đến 12 - 2011, rút kết luận: - Trong số BN nhiễm khuẩn K pneumoniae, 38,0% BN bị viêm phổi; 17,1% viêm phổi sốc nhiễm khuẩn BN nghiện rượu; 13,2% BN bị bệnh gan mạn, xơ gan TÀI LIỆU THAM KHẢO Vi sinh vật Y học NXB Đại học Giáo dục Hà Nội 1992, tr.136-137 Brisse S, et al Virulent clones of Klebsiella pneumoniae: identification and evolutionary scenario based on genomic and phenotypic characterization PloS one 2009, (3): p e4982 Yeh K.M, et al Revisiting the importance of virulence determinant magA and its surrounding genes in Klebsiella pneumoniae causing pyogenic liver abscesses: exact role in serotype K1 capsule formation The Journal of Infectious Diseases 2010, 201 (8): pp.1259-1267 Horan T.C, M Andrus, and M.A Dudeck CDC/NHSN surveillance definition of health care-associated infection and criteria for specific types of infections in the acute care setting American Journal of Infection Control 2008, 36 (5), pp.309-332 Jang S, Wheeler L, Carey R, Jensen B, Crandall C, Schrader K, Jessup D, Colegrove K, and Gulland F Pleuritis and suppurative pneumonia associated with a hypermucoviscosity phenotype of "Klebsiella pneumoniae" in California sea lions ("Zalophus californianus") Veterinary Microbiology 2010, Vol 141, pp.174-177 Wang JH, Liu YC, Lee SS, Yen MY, Chen YS, Wann SR, Lin HH Primary liver abscess due to Klebsiella pneumoniae in Taiwan Clin Infect Dis 1998, 26 (6), pp.1434-1438 - Trong số 164 chủng K pneumoniae, 36 chủng K pneumoniae từ BN bị nhiễm khuẩn bệnh viện 116 chủng K pneumoniae từ BN bị nhiễm khuẩn cộng đồng xác định gen độc lực PCR, tiếp tục nghiên cứu để làm sáng tỏ thêm Ngµy nhận bài: 31/10/2012 Ngày giao phản biện: 30/11/2012 Ngày giao b¶n th¶o in: 28/12/2012 TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 ... độc lực K pneumoniae giới Việt Nam Để góp phần tìm hiểu tình hình nhiễm khuẩn K pneumoniae gen độc lực lồi VK này, chúng tơi nghiên cứu chủng K pneumoniae phân lập BN vào điều trị Bệnh viện Bệnh. .. thường có mang gen độc lực này, yếu tố nguy cao gây nhiễm khuẩn [1] KẾT LUẬN Qua nghiên cứu 537 chủng K pneumoniae phân lập BN vào điều trị Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương từ - 2007 đến 12 -... pneumoniae nguyên nhân phổ biến gây nhiễm khuẩn cộng đồng viêm phổi, áp xe gan nhiễm khuẩn huyết… Ở nước phát triển, K pneumoniae tác nhân gây nhiễm khuẩn bệnh viện nhiễm khuẩn huyết, nhiễm khuẩn đường