Bài viết trình bày khảo sát tác động của dịch chiết từ hoa dừa cạn (Catharanthus roseus) lên sự biểu hiện protein trong tế bào phân lập từ khối u UNBTK.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học ĐIỆN DI PROTEIN HAI CHIỀU TRONG NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC THUỐC TRÍCH TỪ CÂY DỪA CẠN LÊN TẾ BÀO U NGUYÊN BÀO THẦN KINH Võ Văn Thành Niệm*, Trịnh Thị Thu Thảo**, Trương Đình Khải***, Trịnh Thị Diệu Thường****, Hoe Li Nah*****, Bùi Chí Bảo* TĨM TẮT Giới thiệu: U nguyên bào thần kinh (UNBTK) dạng khối u đặc phát triển từ tế bào mào thần kinh hệ thần kinh giao cảm ngoại biên, thường hình thành trình thai nhi năm đầu sau sinh Gần phương pháp điện di protein hai chiều áp dung cho sàng lọc thuốc cho thấy hệ protein quan trọng đường tín hiệu ung thư nói chung UNBTK nói riêng Những thơng tin biến đổi hệ thống biểu protein tế bào UNBTK trước sau tác động thuốc góp phần phục vụ cho chế điều trị ung thư Mục tiêu: Khảo sát tác động dịch chiết từ hoa dừa cạn (Catharanthus roseus) lên biểu protein tế bào phân lập từ khối u UNBTK Phương pháp: Phân lập nuôi cấy tế bào từ khối u UNBTK sinh thiết từ bệnh nhân, sau tiến hành xử lý với thuốc trích từ dừa cạn, ly trích protein từ tế bào xử lý thuốc Hệ thống điện di protein chiều lần đầu thiết lập phòng thí nghiệm thần kinh, Trung tâm y sinh học phân tử Protein tổng số chạy với hệ thống điện di hai chiều để kiểm tra so sánh hai hệ protein có khơng tác động thuốc Kết quả: Ni cấy thành cơng dòng tế bào UNBTK, đồng từ passage (P1) đến P3 Thành công thiết lập hệ thống điện di protein chiều với protein tổng số 80 g/ml, chạy dãy pH từ 3-10 Phân tích hình ảnh kết pH 3-10 cho thấy hai nhóm đối chứng nhóm xử lý dịch chiết Catharanthus roseus có khác biệt Mẫu NB 25 mẫu NB 49 có 50% số protein tăng biểu hiện, 50% protein giảm biểu hiện, xuất 57 26 điểm protein mới, 26 điểm protein so với mẫu đối chứng Kết luận: Nghiên cứu ni cấy, tăng sinh thành cơng dòng tế UNBTK sinh thiết từ khối u Bên cạnh đó, thấy tác động thay đổi biểu hệ thống protein tế bào thuốc trích từ dừa cạn phương pháp điện di hai chiều Kết giúp hỗ trợ nhiều nghiên cứu chế đường tín hiệu protein để làm rõ đường đáp ứng thuốc ung thư UNBTK Từ khóa: U nguyên bào thần kinh, điện di hai chiều, dừa cạn ABSTRACT 2-DIMENSIONAL (2-D) ELECTROPHORESIS ASSAY IN INVESTIGATING THE EFFECT OF DRUG EXTRACTED FROM CATHARANTHUS ROSEUS ON NEUROBLASTOMA Vo Van Thanh Niem, Trinh Thi Thu Thao, Truong Đinh Khai, Trinh Thi Dieu Thuong, Hoe Li Nah, Bui Chi Bao * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 20 - No - 2016: 129 - 135 Background: Neuroblastoma (NB), often formed during fetal and early postnatal, are tumors developed from neural crest of the peripheral sympathetic nervous system, 90% of cases are detected in their early years Recently, Trung tâm Y sinh học phân tử, Đại học Y Dược Tp HCM Bộ môn Ngoại Nhi Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Khoa Y học cổ truyền Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Đại học Khoa học tự nhiên Tp HCM Tác giả liên lạc: TS Bùi Chí Bảo Thần kinh ĐT: 0909708225 United Scientific Co., Ltd Malaysia Email: bcbao@ump.edu.vn 129 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 two-dimensional protein electrophoresis approach showed us important proteins in signaling pathways for cancer screening, particularly in NB The information about the alternations in protein expression system in NB cells before and after effects of the drug will provide knowledge for the new cancer treatment Objectives: Investigate the effects of drug extracted from Catharanthus roseus on protein expression in NB cell line Methods: Isolation and cell cultures from NB patients’s biopsies These samples then treated with drugs from Catharanthus roseus Extracted proteins were used for 2D electrophoresis system which was first set up in neuroscience lab, Center for molecular biomedicine The result was used to comparing two systems with and without the impact of drugs Results: NB cell lines are successfully cultured, consistent from passage (P1) to P3 2D systems were established with total protein 80 g/ml, pH range 3-10 Scan images were analysed by ImageMaster 2D Platinum 7.0 DIGE software (GE HealthCare), at pH 3-10 showed difference between the control group and treated group with Catharanthus roseus extract NB 25 and NB 49 samples have more than 50% protein increased expression and 50% protein reducted expression, 57 and 26 new spots appeared, 26 and spots disappeared in comparing with control, respectively Conclusion: The study was successfully culturing NB cell lines from tumor biopsies Two-dimensional electrophoresis method can detect protein expression changes under drug effect These results help to clarify the signaling pathway of drug response in NB Key word: neuroblastoma, 2-D proteomic, vinblastine ĐẶT VẤN ĐỀ U nguyên bào thần kinh (UNBTK) dạng khối u đặc phát triển từ tế bào mào thần kinh hệ thần kinh giao cảm ngoại biên Tỷ lệ mắc UNBTK 10,7 1.000.000 trẻ độ tuổi 0-14 tuổi(2) Mỗi năm có thêm khoảng 700 bệnh nhân phát có hình thành UNBTK, chiếm 8% chuẩn đốn u ác tính trẻ 15 tuổi Tỷ lệ tử vong khoảng 15%, nửa trường hợp mắc bệnh đánh giá mức rủi ro cao, tỷ lệ sống sót bệnh nhân vào khoảng 40%(13) Ở Việt Nam theo thống kê Tại Bệnh viên Nhi Trung Ương, hàng năm có vào khoảng 30 – 40 trường hợp UNBTK chẩn đoán điều trị Tỷ lệ tử vong chung trường hợp UNBTK điều trị thống kê từ năm 2002-2006 60%(11) 30% UNBTK phát sinh tuyến thượng thận, 60% hình thành ổ bụng, phần lại hình thành hạch giao cảm ngực, đầu, nách xương chậu(13) UNBTK bắt nguồn từ bất thường NST: đoạn cánh ngắn nhiễm sắc thể số 1, khuếch đại MYCN, tăng đoạn cánh dài nhiễm sắc thể số 17(5,7,9) Một số nhân tố ảnh 130 hưởng quan trọng khác ALK, PHOX2B, nhân tố di truyền , RNAs khơng mã hóa UNBTK mối đe dọa lớn đến sống sót bệnh nhi Gần đây, Vinblastine có chứa thành phần Vinca alkaloid chiết xuất từ dừa cạn Catharanthuhs roseus sử dụng loại thuốc kháng ung thư góp phần vào thành cơng liệu pháp hóa trị(8) Vinblastine có tác dụng chống ung thư thơng qua chế ức chế hình thành thoi vơ sắc pha prometaphase trình nguyên phân dẫn đến ngừng phân chia tế bào(6) Hệ “proteomics” Marc Wilkin đề cập đầu năm 1990(10), trở thành công cụ khơng thể thiếu q trình nghiên cứu sàng lọc hệ protein nhằm hỗ trợ điều trị bệnh di truyền, ung thư Điện di hai chiều protein công cụ proteomic quan trọng nghiên cứu thay đổi biểu hệ thống protein tế bào tác động thuốc Phương pháp điện di protein hai chiều thiết lập dựa nguyên tắc phân tách protein theo hai thông số điểm đẳng điện Chuyên Đề Nội Khoa II Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 khối lượng phân tử protein Ưu điểm bật phương pháp điện di protein hai chiều khả phát biến đổi khơng dự đốn trước hệ thống protein biểu thay đổi điều kiện khác nhau(4) Protein phân tách theo chiều thứ dựa điểm đẳng điện gel polyacrylamide có thay đổi theo gradient pH Chiều thứ hai kĩ thuật sử dụng phương pháp SDS-PAGE để phân tách theo khối lượng protein phân ly gel theo điểm đẳng điện tương ứng chúng Đây phương pháp nhạy, phát lúc hàng nghìn protein đo đạc độ đậm nhạt điểm protein máy đọc Việc thu nhận protein từ gel dễ dàng thực cho thí nghiệm phân tích xa hơn, đặc biệt kết hợp với kĩ thuật phân tích khối phổ (MS) để định lượng xác định xác protein quan tâm Trong nghiên cứu bước đầu ứng dụng điện di chiều khảo sát hệ proteomics dòng tế bào UNBTK tác động thuốc chiết xuất từ dừa cạn ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu Khối mô UNBTK (được đồng thuận gia đình bệnh nhân) thu từ bệnh viện Nhi Đồng TP.HCM thu nhận từ tháng 9-2013 đến tháng 10-2015 Phân loại nguy UNBTK dựa vào tiêu chí hệ thống phân loại trẻ em: Children Oncology Group 2010(2), giai đoạn xếp loại theo hệ thống phân chia giai đoạn quốc tế (International Neuroblastoma Staging System INSS) gồm giai đoạn 1, 2, 4S(1); mô học, tuổi (lớn nhỏ 18 tháng) khuếch đại MYCN nghiên cứu trước mẫu UNBTK người Việt Nam(6) Chỉ chọn nhóm bệnh chẩn đốn lần đầu, khơng chọn nhóm bệnh UNBTK tái phát Phương pháp Phân lập nuôi cấy tế bào Trong nghiên cứu tế bào UNBTK sinh Thần kinh Nghiên cứu Y học thiết từ khối mô nuôi môi trường DMEM bổ sung 10% huyết thai bò (FBS), 1% penicillin streptomycin, 370C, 5% CO2 Mẫu khối u nghiền biện pháp học (khoang điện 300mc/V) hóa học (dung dịch Trypsin/EDTA 0,5%) giúp tách thành tế bào đơn Xử lý thuốc Tế bào nuôi cấy đĩa giếng tới đạt 60% bề mặt ni cấy, sau xử với dịch chiết từ dừa cạn 24 DMSO 0,1% sử dụng làm mẫu chứng(3) Phân tách protein chạy điện di hai chiều Chuẩn hoá quy trình điện di protein chiều mẫu protein E.coli thương mại với nồng độ 1,35 mg/ml, sử dụng hố chất ReadyPrepTM 2D Starter Kit (Bio-Rad) Sau protein mẫu tế bào NB 25 NB 49 tách chiết dung dịch ly giải: 7M urea, 2M thiourea, 4% (w/v) CHAPS, 2% (w/v) IPG buffer pH 3–10, 2% (w/v) dithiothreitol tiến hành chạy điện di chiều hệ thống Ettan IPGphor Isoelectric Focusing System hệ thống điện di protein SDS-PAGE Bio-Rad, sau gel nhuộm với Comassive blue (Sigma, Cat B6529), rửa gel với dung dịch methanol acid acetic tỷ lệ 3:1 máy lắc ngang nhiệt phòng Sau gel với điểm chun biệt cho protein phân tích kết phần mềm ImageMaster 2D Platinum 7.0 DIGE (GE HealthCare) Các thông số thống kê phương pháp thống kê SPSS 16, với thể tích điểm protein tính theo cơng thức: %V= đ ể n/ Σ cá đ ể KẾT QUẢ Phân lập nuôi cấy sơ cấp Khoảng 1,2x107 tế bào thu nhận ngày Ở ngày thứ ba, quan sát thấy có tế bào bám nhiên chưa nhiều mơi trường chứa nhiều mảnh vụn sót lại sau q trình sử dụng học để tách tế bào đơn Ngày thứ sáu sau nhiều lần thay môi trường mảnh vỡ mô, tế bào loại bỏ dần, tế bào bám 131 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 hơn, bắt đầu tăng sinh Ngày thứ chín số tế bào thể trạng thái biệt hóa, tiếp tục tăng sinh Khối u chứa nhiều loại tế bào khác nhau, q trình ni cấy hình thái tế bào khơng dạng đồng nhất, cố số cụm tế bào biệt hóa số cụm tế bào dạng chưa biệt hóa Sự tăng sinh tế bào ghi nhận 12 ngày, với số lượng tế bào ổn định 2x105 (Hình 1) Hình 5: Kết ni cấy sơ cấp tế bào đơn thu nhận từ mẫu khối u NB49 (x20) Tế bào quan sát sau ngày, ngày, ngày, 12 ngày Nuôi cấy thứ cấp Hình 2: Kết ni cấy thứ cấp tế bào đơn thu nhận từ mẫu khối u NB49(X20) Tế bào đươc quan sát sau ngày, ngày, ngày, ngày protein tổng số E.Coli kèm Tế bào quan sát ngày sau cấy ReadyPrepTM 2-D Starter Kit (Cat.163-2105, Biotruyền, tế bào NB49 mọc ổn định, đến Rad), để chắn quy trình có khả ngày thứ 8, bề mặt dĩa tế bào bao tạo cho kết điểm protein tốt phủ phục vụ cho nghiên cứu Qua q trình ni cấy thứ cấp (P2), tế bào thu nhận phát triển bền vững hơn, tăng sinh nhanh so với q trình ni cấy sơ cấp ban đầu (Hình 2) Các tế bào xử lý với thuốc dịch trích Vinblastine từ dừa cạn nồng độ 200ng/ml 24 Kết chuẩn hóa quy trình điện di protein hai chiều mẫu protein E.Coli Để chạy điện di 2D, quy trình điện di hệ thống Ettan IPGphor Isoelectric Forcusing System (GE) tối ưu hóa Quy trình điện di protein hai chiều thử nghiệm mẫu 132 Hình 6: Kết chuẩn quy trình điện di hai chiều mẫu protein tổng số từ E.Coli (Bio-Rad) Chuyên Đề Nội Khoa II Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Q trình chuẩn hóa quy trình mẫu protein E.Coli cho kết đồng với hệ thống quy chiếu GE (Hình 3) Các điểm protein phân tách rõ ràng gel Từ kết trên, chúng tơi định áp dụng quy trình điện di protein hai chiều mẫu NB25 NB49 Nghiên cứu Y học Kết chạy điện di protein hai chiều mẫu NB25 NB 49 Khi so sánh mẫu đối chứng mẫu qua xử lý, có thay đổi biểu protein mẫu Hình cho thầy điểm màu xanh điểm protein tương đồng hai mẫu phần mềm nhận diện Các điểm màu đỏ điểm protein khơng tương đồng Hình 4: Kết điện di hai chiều mẫu NB25, NB 49 A: mẫu đối chứng, B: mẫu xử lý thuốc với nồng độ 200ng/ml Bảng 2: Số điểm tương đồng không tương đồng hai mẫu NB25 NB49 Số điểm tương đồng Số điểm không tương đống Mẫu NB25 đối chứng 42 26 Mẫu NB25 xử lý Mẫu NB49 đối chứng Mẫu NB49 xử lý 71 57 26 Trong thí nghiệm chúng tơi tìm thấy mẫu NB 25 xử lý thuốc có 42 điểm protein tương đồng, 57 điểm protein xuất 26 điểm protein so với mẫu đối chứng, mẫu NB 49 số 71, 26 Nhưng chí điểm protein biểu tương đồng hai mẫu có khác phần trăm thể tích điểm protein so với tổng thể tích điểm protein Những thay đổi tỷ lệ thể tích điểm protein so với tổng thể tích mẫu đối chứng xử lý trình bày Bảng Bảng Bảng 3: Tỷ lệ thể tích điểm protein tương đồng so sánh hai mẫu đối chứng xử lý mẫu NB 25 Stt %V mẫu đối chứng 23,43 0,99 3,03 0,46 1,10 2,21 1,06 Thần kinh %V mẫu xử lý 5,62 0,22 0,22 0,84 1,12 3,63 0,95 Stt 15 16 17 18 19 20 21 %V mẫu đối chứng 0,82 0,58 0,67 0,26 6,65 0,58 0,35 %V mẫu xử lý 0,52 0,21 0,26 0,79 1,03 0,22 1,12 Stt 29 30 31 32 33 34 35 %V mẫu đối chứng 0,56 0,97 0,61 0,63 0,65 0,62 0,76 %V mẫu xử lý 0,17 0,12 0,49 0,70 1,24 2,09 2,54 133 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học Stt 10 11 12 13 14 %V mẫu đối chứng 0,62 1,05 0,87 1,01 0,54 0,45 0,58 %V mẫu xử lý 0,59 0,31 0,16 0,21 0,09 0,07 0,10 Stt 22 23 24 25 26 27 28 %V mẫu đối chứng 2,91 1,79 1,50 0,83 1,10 0,33 0,44 %V mẫu xử lý 5,73 3,64 0,83 1,55 0,59 0,09 0,13 %V mẫu đối chứng 0,97 4,88 3,64 2,75 1,29 0,72 1,14 Stt 36 37 38 39 40 41 42 %V mẫu xử lý 1,92 7,14 4,88 3,94 2,37 0,10 0,20 Bảng 4: Tỷ lệ thể tích điểm protein tương đồng so sánh hai mẫu đối chứng xử lý mẫu NB 49 Stt 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 %V mẫu đối chứng 1,72 0,23 0,34 0,52 1,02 0,45 0,35 0,74 0,33 0,30 0,86 6,77 0,50 0,75 0,90 0,44 0,37 0,40 1,06 0,51 0,91 0,32 0,67 0,90 %V mẫu xử lý 1,25 0,65 1,04 0,57 0,86 0,60 0,58 0,74 0,90 0,72 0,74 8,72 1,54 0,18 1,17 1,22 0,73 0,28 1,35 1,17 2,51 0,36 0,71 0,78 Stt 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 %V mẫu đối chứng 0,98 1,18 4,60 0,47 0,50 1,00 2,23 2,48 3,33 3,09 4,12 2,22 0,69 0,56 0,31 2,91 1,14 0,63 1,55 1,12 0,81 3,40 1,68 1,25 %V mẫu xử lý 0,82 0,79 2,72 0,67 0,82 0,90 1,61 2,59 2,76 2,50 2,54 1,57 0,64 0,37 0,45 1,75 1,30 0,25 1,54 1,36 0,72 3,84 1,78 1,14 Stt 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 %V mẫu đối chứng 1,20 8,32 5,19 0,61 0,93 0,39 0,90 0,41 0,47 0,45 0,48 0,63 0,21 0,15 0,47 0,59 1,03 0,26 0,82 0,52 0,37 0,33 0,57 %V mẫu xử lý 1,25 8,94 5,85 0,75 1,17 0,62 1,59 1,01 0,36 0,59 0,48 0,65 0,39 0,38 0,57 0,60 0,93 0,34 1,12 0,61 0,64 0,60 0,81 Hình 7: So sánh thay đổi phần trăm thể tích điểm protein tương đồng hai mẫu đối chứng xử lý Thông tin Bảng 2, Bảng chuyển đổi sang dạng thơng tin hình ảnh qua Hình 134 Chúng ghi nhận mẫu NB 25, tổng số điểm tương đồng có 50% protein giảm biểu sau xử lý với thuốc, Chuyên Đề Nội Khoa II Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 mẫu NB 49 lại có 50% điểm protein tăng biểu so với mẫu đối chứng Những thay đổi kết trình đáp ứng thuốc tế bào UNBTK TÀI LIỆU THAM KHẢO BÀN LUẬN Trong nghiên cứu này, tiến hành sàng lọc thay đổi biểu hệ thống protein tế bào UNBTK trước sau trải qua tác động thuốc Vinblastine trích từ dừa cạn Catharanthuhs roseus Có khác biệt lớn thay đổi biểu protein hai mẫu NB25 NB49 sau xử lý với thuốc Hai mẫu NB25 NB49 thuộc giai đoạn 4, có mức độ khuếch đại MYCN khác nhau: NB 25 (670 copy), NB 49 (135 copy)(2), mẫu NB 25 có số copy MYCN gấp lần mẫu NB 49 nguyên nhân cho khác biệt Nhưng giới hạn đề tài chưa thể chạy khối phổ để xác định rõ protein tăng giảm biểu hiện, ngồi ra, chúng tơi tiến hành thí nghiệm mẫu NB 25 NB 49 Do cần tiến hành nhiều mẫu để xác định xác mối liên hệ số copy MYCN biểu protein đáp ứng thuốc KẾT LUẬN Kết nghiên cứu làm tảng cho nghiên cứu chuyên sâu sử dụng hệ thống giải trình tự peptide qua LC/Ms để tìm nhóm protein đặc trưng trình đáp ứng thuốc tế bào UNBTK Điều góp phần quan trọng chuẩn đoán điều trị ung thư UNBTK Nghiên cứu tài trợ Sở Khoa học Công nghệ tỉnh Sóc Trăng Thần kinh Nghiên cứu Y học 10 11 12 13 Bùi Chí Bảo (2014) Khảo sát tác động gen HBx Virus viêm gan B hình thành đa bội Y học TP Hồ Chí Minh, 18: 291-295 Bùi Chí Bảo (2015) Xây đựng quy trình phân loại nhóm nguy cao U nguyên bào thần kinh khuếch đại MYCN Y học TP Hồ Chí Minh, 19: 1-7 Castel V, Grau E, Noguera R, and Martinez F (2007) Molecular biology of neuroblastoma Clinical and Translational Oncology, 9: 478-483 Cellulaire B (2002) Two-dimensional gel electrophoresis in proteomics: old, old fashioned, but it still climbs up the mountains Proteomics, 2: 3-10 Fujita T, et al (2008) CHD5, a tumor suppressor gene deleted from 1p36.31 in neuroblastomas Journal of the National Cancer Institute, 100: 940-949 Gigant B, et al (2005) Structural basis for the regulation of tubulin by vinblastine Nature, 435: 519-522 Huang M and Weiss WA (2013) Neuroblastoma and MYCN Cold Spring Harbor perspectives in medicine, 3: a014415 Jordan MA and Wilson L (2004) Microtubules as a target for anticancer drugs Nature Reviews Cancer, 4: 253-265 Louis CU, and Shohet JM (2015) Neuroblastoma: Molecular Pathogenesis and Therapy Annual Review of Medicine, 66: 49–63 Nguyễn Thị Lang (2014) Proteomic sinh học đại In: Ngô Trần Ái Proteomics chức Proteomincs, 1: 5-12 Phùng Tuyết Lan (2007) Nghiên cứu phân loại nhận xét kết điều trị UNBTK trẻ em bệnh viện Nhi trung ương (2002 - 2006) Tạp chí Nhi Khoa, 6(1): 68-73 Theissen J, et al (2014) Chromosome 17/17q gain and unaltered profiles in high resolution array-CGH are prognostically informative in neuroblastoma Genes, Chromosomes and Cancer, 53: 639-649 United States Cancer Statistics Working Group (2014) United States Cancer Statistics: 1999–2011 incidence and mortality web-based report Atlanta (GA): Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, and National Cancer Institute Ngày nhận báo: 24/11/2015 Ngày phản biện nhận xét báo: 30/11/2015 Ngày báo đăng: 15/02/2016 135 ... ứng thuốc tế bào UNBTK TÀI LI U THAM KHẢO BÀN LUẬN Trong nghiên c u này, tiến hành sàng lọc thay đổi bi u hệ thống protein tế bào UNBTK trước sau trải qua tác động thuốc Vinblastine trích từ dừa. .. quy trình điện di protein hai chi u m u protein E.Coli Để chạy điện di 2D, quy trình điện di hệ thống Ettan IPGphor Isoelectric Forcusing System (GE) tối u hóa Quy trình điện di protein hai chi u. .. di hai chi u protein công cụ proteomic quan trọng nghiên c u thay đổi bi u hệ thống protein tế bào tác động thuốc Phương pháp điện di protein hai chi u thiết lập dựa nguyên tắc phân tách protein