Khảo sát tác động điều trị rối loạn lipid huyết cấp của cao nước từ bài thuốc phối hợp một số dược liệu của tỉnh An Giang

Đề tài khảo sát tác động điều trị rối loạn lipid huyết cấp của cao nước từ bài thuốc phối hợp một số dược liệu của tỉnh An Giang trên chuột nhắt.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID HUYẾT CẤP CỦA CAO NƯỚC TỪ BÀI THUỐC PHỐI HỢP MỘT SỐ DƯỢC LIỆU CỦA TỈNH AN GIANG Đỗ Thị Hồng Tươi*, Nguyễn Hoàng Anh*, Lê Thùy Dương*, Trần Quang Trung**, Nguyễn Ngọc Huỳnh Trân*** TÓMTẮT Mục tiêu: Đề tài khảo sát tác động điều trị rối loạn lipid huyết cấp cao nước từ thuốc phối hợp số dược liệu tỉnh An Giang chuột nhắt Phương pháp: Khảo sát tác động điều trị rối loạn lipid huyết cấp cao nước từ thuốc phối hợp số dược liệu tỉnh An Giang (cao AG) cho uống liều 220 440 mg/kg so với thuốc đối chứng fenofibrat 50 mg/kg mơ hình chuột nhắt Swiss albino đực tiêm tĩnh mạch tyloxapol liều 250 mg/kg Kết quả: Trên mơ hình gây rối loạn lipid huyết cấp, cao AG liều 440 mg/kg 220 mg/kg làm giảm 81,3% 83,6% triglycerid; giảm 47,2% 76,9% cholesterol toàn phần Tác động làm giảm nồng độ LDL-cholesterol so với lô chứng bệnh theo thứ tự tăng dần: fenofibrat 50 mg/kg < cao AG 440 mg/kg < cao AG 220 mg/kg So với thuốc đối chứng fenofibrat 50 mg/kg, cao AG liều 220 mg/kg thể tác động hạ LDL-cholesterol tốt liều 440 mg/kg có tác động tương tự Đối với HDL-cholesterol, lô cho chuột uống fenofibrat 50 mg/kg, cao AG liều 220 mg/kg 440 mg/kg không làm tăng thông số so với lô chứng bệnh Kết luận: Cao nước từ thuốc lưu truyền tỉnh An Giang thể tác động điều trị rối loạn hạ lipid huyết cấp liều 220 mg/kg tốt liều 440 mg/kg chuột nhắt trắng tiêm tyloxapol Kết đề tài sở cho việc nghiên cứu đại hóa thuốc thành dạng chế phẩm dễ sử dụng Từ khóa: thuốc tỉnh An Giang, rối loạn lipid huyết cấp, tyloxapol, điều trị rối loạn lipid ABSTRACT STUDY ON TREATMENT EFFECT IN ACUTE LIPID DISORDERS OF AQUEOUS EXTRACT FROM THE AN GIANG TRADITIONAL REMEDY CONTAINING SOME MEDICINAL PLANTS Do Thi Hong Tuoi, Nguyen Hoang An, Le Thuy Duong, Tran Quang Trung, Nguyen Ngoc Huynh Tram * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 680-684 Objectives: This study aim to evaluate treatment effect in acute lipid disorders of aqueous extract from the An Giang traditional remedy containing some medicinal plants Methods: Treatment effect in acute lipid disorders of aqueous extract from the An Giang traditional remedy containing some medicinal plants (AG extract) at the oral doses of 220 mg/kg and 440 mg/kg This effect was compared to that of 50 mg/kg fenofibrate positive control in the model of Swiss albino mice iv injected with 250 mg/kg tyloxapol * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Hội đơng y tỉnh An Giang *** Trung tâm Công nghệ sinh học tỉnh An Giang Tác giả liên lạc: PGS TS Đỗ Thị Hồng Tươi ĐT: 0908683080 ** 680 Email: hongtuoi@ump.edu.vn Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Results: In the model of acute lipidemia, AG extract at the doses of 440 mg/kg and 220 mg/kg decreased 81.3% and 83.6% of triglyceride levels; 47.2% and 76.9% of total cholesterol, respectively Compared to pathological control, hypoglycemic effects in LDL-cholesterol levels increased gradually in the order: 50 mg/kg fenofibrate < 440 mg/kg AG extract < 220 mg/kg AG extract Compared with 50 mg/kg fenofibrate control, AG extract at the dose of 220 mg/kg reduced LDL-cholesterol content in the better manner; while 440 mg/kg dose had a similar effect For HDL-cholesterol level, all three mice groups administrated with 50 mg/kg fenofibrate, 220 mg/kg or 440 mg/kg AG extract did not increase this parameter compared to the pathological control Conclusion: The aqueous extract from the An Giang traditional remedy exhibed a treatment effect in acute lipid disorders at the dose of 220 mg/kg in the better manner than that of 440 mg/kg in mice iv injected with tyloxapol Result of this study provided basis for modernization of this remedy into more usable formulations Key words: An Giang traditional remedy, dyslipidemia, tyloxapol, treatment for lipid disorders gồm có phần mặt đất Nhân trần ĐẶTVẤNĐỀ (Adenosma indianum (L.) Merr.) 80 g, Lức Theo Tổ chức Y tế giới (WHO), (Pluchea pteropoda Hemsley) 100 g, Trâm bầu nay, bệnh tim mạch xơ vữa động (Combretum quadrangulare Kurz) 100 g, vỏ quýt mạch nguyên nhân tử vong hàng đầu lứa xanh (Citrus reticulata Blanco) g tuổi trung niên người cao tuổi Hàng năm lương y sử dụng chữa bệnh cho 1600 giới có triệu người chết bệnh người từ 2001 đến 2016 Trong đó, Trâm bầu mạch vành (hơn 60% chết nước Lức vị thuốc (Quân); Nhân trần phát triển) Nhiều nghiên cứu chứng minh vị thuốc thứ yếu (Thần); vỏ quýt xanh trợ liên quan chặt chẽ rối loạn chuyển hoá dược (Tá - Sứ) lipid với tỷ lệ bệnh tim mạch, rối loạn chuyển Để có sở khoa học phát triển hố lipid nguy bệnh nhồi máu thuốc lương y Trần Quang Trung thành tim, tai biến mạch máu não, xơ vữa động dạng chế phẩm dễ sử dụng hơn, đề tài mạch… Ở Việt Nam, tỷ lệ người bị rối loạn khảo sát tác động điều trị rối loạn lipid lipid huyết có xu hướng gia tăng nhanh huyết cấp cao nước từ thuốc thời gian gần Năm 2011, theo Viện dinh chuột nhắt trắng dưỡng, bệnh rối loạn lipid huyết có tỷ lệ 26% VẬTLIỆU-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU nhóm tuổi từ 25 đến 74 Tại Hà Nội, TP Hồ Chí Minh, tỷ lệ bệnh lên đến 40% Mẫu thử Do vậy, việc nghiên cứu sản phẩm hỗ trợ Cao chiết nước từ thuốc lưu truyền điều trị rối loạn chuyển hóa lipid lương y Trần Quang Trung, tỉnh An Giang nhà khoa học quan tâm ThS Dương Mộng Ngọc, Trung tâm Sâm Ở Việt Nam, dựa vào kinh nghiệm quý báu lương y, nhiều thuốc điều trị bệnh tim mạch, gan, đái tháo đường đại hóa thành sản phẩm có hiệu lâm sàng(6) Tại tỉnh An Giang, thuốc lương y Trần Quang Trung để điều trị rối loạn lipid huyết dùng liên tục 100 ngày, liệu trình 30 ngày, nghỉ 3-5 ngày trước uống liệu trình Bài thuốc Chuyên Đề Dược Dược liệu Tp Hồ Chí Minh cung cấp Bài thuốc gồm: phần mặt đất Nhân trần 80 g, Lức 100 g, Trâm bầu 100 g, vỏ quýt xanh Hỗn hợp dược liệu thuốc chiết theo phương pháp sắc nước lần (tỷ lệ 1:10), gộp dịch lần chiết, cô cách thủy thu cao lỏng, hiệu suất 17,4%, độ ẩm 25,89% 681 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Động vật nghiên cứu Chuột nhắt trắng chủng Swiss albino, 6-7 tuần tuổi, trọng lượng trung bình khoảng 25 g Viện Vaccin sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp Chuột đực, khoẻ mạnh, ni ổn định mơi trường thí nghiệm ngày Chuột ni lồng kích thước 25 x 35 x 15 cm (6 chuột/lồng) cung cấp thức ăn, nước uống đầy đủ thời gian thử nghiệm Hóa chất, thuốc thử Fenofibrat (Lipantyl®, Fournier, Hoa Kỳ), kit định lượng cholesterol, triglycerid, HDLcholesterol, LDL-cholesterol (ELITech, Pháp), cồn 96% (Trung Quốc), NaCl 0,9% (OPV, Việt Nam) Phương pháp nghiên cứu Khảo sát tác động điều trị rối loạn lipid huyết cấp(1,5) Chuột cho nhịn đói 12 gây rối loạn lipid huyết cấp cách tiêm tĩnh mạch tyloxapol (pha NaCl 0,9%) liều 250 mg/kg Ngay sau đó, chuột cho uống fenofibrat liều 50 mg/kg cao AG liều 220 mg/kg 440 mg/kg (tương đương 2,5 5,0 g dược liệu khô/kg) Sau 24 tiêm tyloxapol, lấy máu tĩnh mạch chuột (nhịn đói 12 trước), định lượng cholesterol, triglycerid, HDL-cholesterol LDL-cholesterol huyết theo nguyên tắc enzym màu Bảng 1: Thành phần phản ứng đo TC huyết tương Thành phần Mẫu trắng Mẫu chuẩn Mẫu thử Thuốc thử (µL) 250 250 250 Nước cất (µL) 2,5 Chuẩn (µL) 2,5 Huyết (µL) 2,5 o Lắc đều, ủ phút 40 giây 37 C Đọc mật độ quang (OD) bước sóng 500 nm Bảng 2: Thành phần phản ứng định lượng triglycerid huyết tương Thành phần Mẫu trắng Mẫu chuẩn Mẫu thử Thuốc thử (µL) 250 250 250 Nước cất (µL) 2,5 Chuẩn (µL) 2,5 Huyết (µL) 2,5 o Lắc đều, ủ 11 phút 30 giây 37 C Đọc mật độ quang (OD) bước sóng 500 nm 682 Tính nồng độ cholesterol tồn phần, triglycerid theo cơng thức: Ct = x Cc (mg/dL) Trong đó: ODt, ODtr, ODc: OD mẫu thử, mẫu trắng mẫu chuẩn; Ct, Cc: nồng độ mẫu thử mẫu chuẩn Bảng 3: Thành phần phản ứng định lượng HDLCholesterol huyết tương Thành phần Mẫu trắng Mẫu chuẩn Mẫu thử Thuốc thử (µL) 240 240 240 Nước cất (µL) 2,4 Chuẩn (µL) 2,4 Huyết (µL) 2,4 o Lắc đều, ủ phút 40 giây 37 C Đọc mật độ quang (OD) bước sóng 578 nm Thuốc thử (µL) 80 80 80 o Lắc đều, ủ phút 37 C Đọc mật độ quang (OD) bước sóng 578 nm Bảng 4: Thành phần phản ứng định lượng LDLCholesterol huyết tương Thành phần Mẫu trắng Mẫu chuẩn Mẫu thử Thuốc thử (µL) 240 240 240 Nước cất (µL) 2,4 Chuẩn (µL) 2,4 Huyết (µL) 2,4 o Lắc đều, ủ phút 40 giây 37 C Đọc mật độ quang (OD1) bước sóng 578 nm Thuốc thử (µL) 80 80 80 o Lắc đều, ủ phút 37 C Đọc mật độ quang (OD2) bước sóng 578 nm Tính nồng độ HDL-C, LDL-C theo cơng thức: Ct = x Cc (mg/dL) Trong đó: ODt, ODc: OD mẫu thử mẫu chuẩn; Ct, Cc: nồng độ mẫu thử mẫu chuẩn Xử lý kết phân tích số liệu thống kê Kết trình bày dạng trung bình ± sai số chuẩn giá trị trung bình (Mean ± SEM) Số liệu phân tích thống kê sử dụng phép kiểm KruskalWallis Mann-Whitney với phần mềm SPSS 20 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giá trị p < 0,05 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 KẾTQUẢ Tác động hạ triglycerid huyết cholesterol toàn phần Kết nồng độ cholesterol toàn phần triglycerid huyết cuả chuột lô thử nghiệm 24 sau tiêm tyloxapol điều trị trình bày Bảng Bảng 5: Nồng độ cholesterol toàn phần triglycerid huyết tương lô thử nghiệm Lô thử nghiệm (n = 8) Triglycerid (mg/dL) Cholesterol toàn phần (mg/dL) Sinh lý 59,11  11,79 72,46  7,06 Chứng bệnh 801,24  87,27 ** 410,53  76,52 nghĩa thống kê (p > 0,05) So với lô fenofibrat 50 mg/kg, cao AG liều 220 mg/kg thể tác động hạ lipid huyết tương tự (p > 0,05) liều 440 mg/kg thể tác động hơn, nồng độ triglycerid cholesterol tồn phần lơ cao AG 440 mg/kg cao khoảng gấp lần so với lô fenofibrat 50 mg/kg (p < 0,01) Như vậy, cao AG uống với liều 220 mg/kg thể tác động hạ lipid huyết tương tự thuốc đối chiếu fenofibrat 50 mg/kg tốt liều 440 mg/kg mặc khác biệt ý nghĩa Tác động điều hòa rối loạn lipoprotein ** Fenofibrat 50 **## **## 75,41  17,46 106,68  11,27 mg/kg Cao An Giang 149,83  **#@@ 216,78  104,35 *##@@ 440 mg/kg 31,44 Cao An Giang 131,50  ## 94,69  14,88 **## 220 mg/kg 22,66 Kết khảo sát nồng độ HDL-cholesterol LDL-cholesterol huyết chuột thử nghiệm trình bày Bảng Bảng 6: Nồng độ HDL-cholesterol LDLcholesterol huyết tương lô thử nghiệm Lô thử nghiệm LDL-cholesterol (n = 8) (mg/dL) *: p < 0,05; **: p < 0,01: so với lô sinh lý # : p < 0,05; ## : p < 0,01 so với lô chứng bệnh @@ : p < 0,01 so với lô chứng dương Kết cho thấy 24 sau tiêm tĩnh mạch tyloxapol liều 250 mg/kg, nồng độ cholesterol triglycerid chuột lô chứng bệnh tăng đáng kể, tăng 5,7 lần 11,6 lần so với chuột lô sinh lý (p < 0,01) Ở lô fenofibrat 50 mg/kg, cholesterol toàn phần nồng độ triglycerid giảm đáng kể: cholesterol giảm 74,01% triglycerid giảm 90,59% so với lô chứng bệnh (p < 0,01) Như vậy, mơ hình gây tăng lipid huyết cấp cách tiêm tĩnh mạch đuôi chuột tyloxapol 250 mg/kg thể đáp ứng với thuốc fenofibrat Do đó, mơ hình sử dụng khảo sát tác động hạ lipid huyết cấp cao nước từ thuốc tỉnh An Giang Ở lô điều trị với cao AG, nồng độ triglycerid cholesterol toàn phần giảm có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng bệnh (p < 0,05) Liều 440 mg/kg làm giảm 81,3% triglycerid 47,2% cholesterol liều 220 mg/kg giảm 83,6% triglycerid 76,9% cholesterol Sự khác biệt nồng độ cholesterol, triglycerid lô cao AG với liều 440 220 mg/kg khơng có ý Chun Đề Dược Nghiên cứu Y học Sinh lý 54,15  2,39 Chứng bệnh 181,21  19,45 Fenofibrat 50 mg/kg Cao An Giang 440 mg/kg Cao An Giang 220 mg/kg 78,88  9,52 68,30  1,89 ** 39,85  1,96 **## 30,50  2,13 61,18  4,75 53,72  9,77 HDL-cholesterol (mg/dL) ## ##@ 42,99  2,38 ** **# **@@ 26,50  4,71 **# *: p < 0,05; **: p < 0,01: so với lô sinh lý # ## @ @@ : p < 0,05; : p < 0,05; : p < 0,01 so với lô chứng bệnh : p < 0,01 so với lô chứng dương Kết cho thấy lô chứng bệnh tăng LDLcholesterol 3,4 lần làm giảm HDL-cholesterol 1,7 lần so với lô sinh lý (p < 0,01) Khi cho chuột uống fenofibrat 50 mg/kg cao AG liều 440 220 mg/kg, nồng độ LDL-cholesterol giảm so với lô chứng bệnh (p < 0,01) theo thứ tự tăng dần: fenofibrat 50 mg/kg < cao AG 440 mg/kg < cao AG 220 mg/kg Chỉ số LDL-cholesterol lơ cao AG khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) khác không đáng kể lô sinh lý (p > 0,05) Cao AG liều 220 mg/kg thể tác động hạ LDL-cholesterol tốt thuốc đối chứng fenofibrat 50 mg/kg (p < 0,05) liều 440 mg/kg có tác động tương tự (p > 0,05) 683 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Đối với HDL-cholesterol, lô cho chuột uống fenofibrat 50 mg/kg, cao AG liều 220 mg/kg 440 mg/kg không làm tăng thông số so với lơ chứng bệnh, lơ fenofibrat AG liều 220 mg/kg có HDLcholesterol thấp lô chứng bệnh (p < 0,05) BÀNLUẬN Theo lương y Trần Quang Trung, tác dụng hạ lipid huyết, thuốc có tác dụng bảo vệ gan Điều phù hợp với kết nghiên cứu Phạm Thị Nguyệt Hằng cộng (2018), cao chiết nước thuốc tỉnh An Giang độc tính cấp đường uống chuột nhắt liều tối đa cho uống 197,7 g dược liệu/kg (gấp khoảng 80 lần 160 lần liều dùng đề tài) thể tác dụng bảo vệ gan, làm giảm hoạt tính enzym ALT, AST, hàm lượng MDA gan liều g dược liệu/kg(3) Dựa theo thử nghiệm sơ tác dụng hạ lipid chuột, đề tài khảo sát tác động điều trị rối loạn lipid huyết cấp cao chiết nước từ thuốc An Giang liều 220 mg cao/kg 440 mg cao/kg (tương đương 1,25 2,5 g dược liệu/kg) Trên mơ hình gây tăng lipid huyết cấp, cao AG liều 220 mg/kg thể tác động điều trị rối loạn lipid huyết tốt liều 440 mg/kg So với thuốc đối chứng fenofibrat liều 50 mg/kg, cao AG 220 mg/kg có tác động hạ triglycerid, cholesterol tương tự điều hòa rối loạn LDL, HDL tốt Tác động điều trị rối loạn lipid huyết cấp cao AG đề tài phù hợp với kết Kurowska cộng (2001) báo cáo polymethoxyflavon, đặc biệt tangeretin từ Cam quýt cho tác dụng hiệu việc giảm apo B tế bào HepG2, giảm LDL, từ làm giảm đáng kể tổng hợp cholesteryl este (-82%), cholesterol tự (-45%) triglycerid (-64%) Tangeretin làm giảm triglycerid (-33%), cholesterol huyết toàn phần (-17%) HDL-cholesterol (-10%)(2) Năm 684 2015, Samar Saadeldin chứng minh dịch chiết ethanol Trần bì có tác dụng hạ cholesterol chống oxy hóa(4) Ngồi ra, tác dụng điều hòa rối loạn lipid huyết cấp cao AG giải thích tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan dược liệu thành phần thuốc Các bệnh gan xơ gan, gan nhiễm mỡ, vàng da tắc mật làm giảm khả dụng chuyển hóa lipid thừa máu làm cho nồng độ lipid tăng cao Do đó, cao AG cải thiện chức gan giúp tăng khả dụng chuyển hóa lipid thừa máu, góp phần điều trị tình trạng rối loạn lipid huyết KẾTLUẬN Cao nước từ thuốc lưu truyền lương y Trần Quang Trung, tỉnh An Giang thể tác động điều trị rối loạn hạ lipid huyết cấp liều 220 mg/kg tốt liều 440 mg/kg chuột nhắt trắng tiêm tyloxapol Kết đề tài sở cho việc nghiên cứu đại hóa thuốc thành dạng chế phẩm dễ sử dụng TÀILIỆUTHAMKHẢO Huỳnh Ngọc Trinh, Nguyễn Bảo Yến cs (2014), "Tác dụng dược lý phân đoạn chiết từ thân đậu bắp Abelmoschus esculentus L - Malvaceae chuột nhắt", Chuyên đề Dược, Y học thành phố Hồ Chí Minh, phụ 18(2), tr.429-433 Kurowska EM (2001) Hypolipidemic activities of tangeretin, a flavonoid from tangerines in vitro and in vivo, FASEB 15, pp.A395 Phạm Thị Nguyệt Hằng, Dương Thị Mộng Ngọc cs (2018) Tác dụng bảo vệ gan chống oxy hóa thuốc tỉnh An Giang Dược liệu, 23, tr.121 - 128 Samar S, Abdelmotalab O, Ikram M, Eltayeb E, et al (2015) Phytochemical screening, antioxidant activity and lipid profile effects of Citrus reticulata fruit peel, Zingiber officinale rhizome and Sesamum indicum seed extracts, International Journal of Medical, Health, Biomedical, Bioengineering and Pharmaceutical Engineering, 9(12) Trương Thị Thu Trang, Nguyễn Thị Hạnh, Lê Phú Nguyên Thảo, Mai Phương Mai, Võ Phùng Nguyên (2014) Khảo sát tác động hạ lipid huyết đậu bắp Abelmoschus esculentus (L.) Malvaceae chuột thực nghiệm, Chuyên đề Dược, Y học Thành phố Hồ Chí Minh, phụ 18(2), tr.412-417 Viện Dược Liệu, 2004, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam I, II, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Ngày nhận báo: 18/10/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2018 Ngày báo đăng: 15/03/2019 Chuyên Đề Dược ... máu, góp phần điều trị tình trạng rối loạn lipid huyết KẾTLUẬN Cao nước từ thuốc lưu truyền lương y Trần Quang Trung, tỉnh An Giang thể tác động điều trị rối loạn hạ lipid huyết cấp liều 220 mg/kg... vữa động dạng chế phẩm dễ sử dụng hơn, đề tài mạch… Ở Việt Nam, tỷ lệ người bị rối loạn khảo sát tác động điều trị rối loạn lipid lipid huyết có xu hướng gia tăng nhanh huyết cấp cao nước từ thuốc. .. lipid huyết cấp cao chiết nước từ thuốc An Giang liều 220 mg cao/ kg 440 mg cao/ kg (tương đương 1,25 2,5 g dược liệu/ kg) Trên mơ hình gây tăng lipid huyết cấp, cao AG liều 220 mg/kg thể tác động điều