Nuôi cấy và định danh vi khuẩn Porphyromonas gingivalis từ mảng bám dưới nướu của bệnh nhân viêm nha chu

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang	7
Dung lượng	381,88 KB

Nội dung

Nuôi cấy và định danh vi khuẩn Porphyromonas gingivalis từ mảng bám dưới nướu của bệnh nhân viêm nha chu. Porphyromonas gingivalis có vai trò quan trọng trong sinh bệnh học của viêm nha chu. Nuôi cấy thành công Porphyromonas gingivalis tạo nguồn vi khuẩn có độc lực phục vụ cho các thử nghiệm với vi khuẩn nha chu.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học NUÔI CẤY VÀ ĐỊNH DANH VI KHUẨN PORPHYROMONAS GINGIVALIS TỪ MẢNG BÁM DƯỚI NƯỚU CỦA BỆNH NHÂN VIÊM NHA CHU Trần Thị Phương Thảo*, Lương Thị Mỹ Ngân**, Phạm Anh Vũ Thụy*** TĨM TẮT Mục tiêu: Ni cấy định danh vi khuẩn Porphyromonas gingivalis từ mảng bám nướu bệnh nhân viêm nha chu Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu: Vi khuẩn nghiên cứu phân lập từ mảng bám nướu bệnh nhân viêm nha chu mạn mức độ trung bình đến nặng Mơi trường nuôi cấy sử dụng thạch máu cừu ủ 37ºC điều kiện kỵ khí 10 ngày Sau xác định gram (-), hình dáng tròn màu sắc đen đặc trưng, mẫu khuẩn lạc gửi định danh phương pháp Maldi-Tof khẳng định kết phương pháp PCR Kết quả: Khuẩn lạc Porphyromonas gingivalis nuôi cấy thành công từ mẫu mảng bám duớ̛ i nướu bẹn ̂ h nhân thứ 21 có chẩn đốn viêm nha chu mạn tính thể nạn ̆ g Khuẩn lạc hình tròn, dạng lồi, tiêu huyết β, mạt̆ láng, kích thuớ̛ c - 2mm có màu đen đạc̆ trun ̛ g Sau định danh thành công Maldi-Tof, mẫu đuợ̛ c gửi thực hiẹn ̂ PCR với primer đạc̆ hiẹu ̂ , kết giải trình tự khẳng định chủng Porphyromonas gingivalis cần tìm Kết luận: Porphyromonas gingivalis có vai trò quan trọng sinh bệnh học viêm nha chu Nuôi cấy thành cơng Porphyromonas gingivalis tạo nguồn vi khuẩn có độc lực phục vụ cho thử nghiệm với vi khuẩn nha chu Từ khố: Viêm nha chu, Porphyromonas gingivalis, ni cấy, định danh, Maldi-Tof ABSTRACT ISOLATION AND IDENTIFICATION OF PORPHYROMONAS GINGIVALIS FROM SUB-GINGIVAL PLAQUE SAMPLES OF PATIENTS WITH PERIODONTITIS Tran Thi Phuong Thao, Luong Thi My Ngan, Pham Anh Vu Thuy * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 178 – 183 Objective: To isolate and identify Porphyromonas gingivalis from subgingival plaques samples of patients with periodontitis Methods: Subgingival plaque samples were collected from patients with moderate to severe chronic periodontitis, and anaerobic culture was performed Porphyromonas gingivalis were identified by using Maldi-Tof and confirmed by PCR Results: Porphyromonas gingivalis was successfully isolated from sub-gingival plaque of 21th patient It grew anaerobically on media containing lyses blood with dark pigmentation These - 2mm colonies were rounded, smooth and convex After identifying by Maldi-Tof, quantitative PCR was performed using speciesspecific primers Sequencing result confirmed the positive culture result Conclusion: Porphyromonas gingivalis is one of the dominant pathogenic bacteria in periodontal pockets of * Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Bộ mơn Cơng nghệ sinh học thực vật Chuyển hoá sinh học, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh *** Bộ môn Nha chu, Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh ** Tác giả liên lạc: PGS TS Phạm Anh Vũ Thụy 178 ĐT: 0916 810 874 Email: pavthuy@ump.edu.vn Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học patients with chronic periodontitis Successful isolation of this organism provides virulent strain for periodontal research Key words: Porphyromonas gingivalis, isolation, identify, Maldi-Tof đến Việt Nam, đó, mục tiêu ĐẶT VẤN ĐỀ nghiên cứu phân lập vi khuẩn Porphyromonas gingivalis một Porphyromonas gingivalis từ mảng bám dưới nướu yếu tố nguyên nhân sinh bệnh học bệnh nhân viêm nha chu mạn mức độ từ tiến triển tình trạng viêm bệnh nha chu trung bình tới nặng, sử dụng phương pháp Đây vi khuẩn gram âm, không di động, không Maldi-Tof để định danh, từ xác định quy phân giải đường (asaccharolytic) Vi khuẩn kỵ trình lưu trữ mẫu vi khuẩn cho nghiên khí tạo một quần thể màu đen đĩa cứu liên quan tương lai thạch máu đòi hỏi bắt buộc phải có sắt để PHƯƠNGPHÁP-VẬTLIỆUNGHIÊNCỨU phát triển Porphyromonas gingivalis được cho sản xuất yếu tố độc lực xuyên qua Đối tượng nghiên cứu nướu gây phá huỷ mô trực tiếp hay gián tiếp, Bệnh nhân viêm nha chu mạn mức độ từ thơng qua q trình viêm Các yếu tố độc lực trung bình tới nặng theo tiêu chuẩn phân loại Porphyromonas gingivalis bao gồm nhung mao, Hiệp hội nha chu Hoa Kỳ năm 2015(2) đến hemagglutinin, vỏ nang, lipopolysaccharide, khám điều trị Khoa Răng Hàm Mặt, Đại túi màng ngoài, hoạt động enzyme hố(1) học Y Dược TP Hồ Chí Minh Các đối tượng Nếu việc phát hiện định lượng vi khuẩn không sử dụng thuốc kháng sinh, kháng viêm, Porphyromonas gingivalis dần được thay thuốc tránh thai trước tham gia nghiên cứu phương pháp hiện đại như PCR tháng khơng có thói quen hút thuốc Thu khơng đòi hỏi tế bào sống nhưng có khả năng thập mẫu mảng bám nuôi cấy xuất nhận biết nhiều loại vi khuẩn bệnh nguyên khác hiện khuẩn lạc Porphyromonas gingivalis nhau, ni cấy vi khuẩn giữ vai trò thiết Quy trình thực hiện yếu việc cung cấp nguồn vi khuẩn để thực Chuẩn bị môi trường vận chuyển nuôi hiện nghiên cứu so sánh tỉ lệ vi khuẩn mẫu cấy: 2ml Wilkins Chalgren Anaerobic broth base bệnh nhân viêm nha chu so với bệnh nhân khoẻ (Hime – dia - M863) vào ống ly tâm eppendorf mạnh(13), thử nghiệm đặc điểm miễn dịch Bổ sung 5% thạch máu cừu đổ 15ml môi tính chất enzyme(5), phương pháp ni trường vào đĩa petri cấy(6) hay hoạt chất điều trị(14) Các nghiên cứu Lấy mẫu đòi hỏi vi khuẩn sống trao đổi chất, từ thể hiện đặc tính sinh học tương ứng với mục Quy trình lấy mẫu được thực hiện theo đích thử nghiệm, đó, việc giữ vi khuẩn sinh phương pháp Doan Nguyen cs(6): giấy vơ trưởng phát triển mơi trường thích hợp trùng đưa vào túi nha chu từ 5mm trở lên, cần thiết giữ 30s, chuyển vào ống eppendorf chứa môi trường vận chuyển, đưa vào túi chứa Porphyromonas gingivalis có vai trò quan gói hút oxy chuyển nhanh tới phòng thí trọng sinh bệnh học viêm nha chu nghiệm cấy mẫu vi khuẩn nuôi cấy trực tiếp từ bệnh nhân viêm nha chu được cho có độc lực mạnh hơn có giá trị thử nghiệm in vitro so với chủng vi khuẩn sẵn có từ phòng thí nghiệm(15) Trong việc phân lập định danh vi khuẩn chưa thực thành công từ trước Nuôi cấy Vortex mẫu 45s, phần huyền phù vi khuẩn được pha loãng bậc 10 dung dịch vận chuyển, sử dụng que trải cấy dung dịch mẫu vào đĩa thạch Sau ủ 37oC từ - 10 ngày, 179 Nghiên cứu Y học khuẩn lạc có kiểu hình màu sắc đặc trưng được cấy chuyền, làm thuần, định danh phương pháp Maldi-Tof Sau xác định chủng Porphyromonas gingivalis, mẫu khuẩn lạc được giữ dung dịch TE (Tris-EDTA) gửi giải Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 trình tự với đoạn mồi đặc hiệu kỹ thuật PCR để khẳng định kết Cuối cùng, chủng vi khuẩn được lưu trữ môi trường chứa glycerol điều kiện âm sâu Hình Quy trình nuôi cấy vi khuẩn Porphyromonas gingivalis 180 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 KẾT QUẢ Mẫu mảng bám sau ủ xuất hiện khuẩn lạc có nghi ngờ hiện diện vi khuẩn Porphyromonas gingivalis bệnh nhân thứ 21 Khuẩn lạc có hình tròn, màu đen bóng, dạng lồi, tiêu huyết β, kích thước khoảng - 2mm, kết nhuộm gram màu đỏ Sau làm thuần, mẫu Hình Hệ vi khuẩn nuôi cấy từ mẫu mảng bám sau 10 ngày Nghiên cứu Y học khuẩn lạc được gửi định danh phương pháp Maldi-Tof Kết hiển thị vi khuẩn Porphyromonas gingivalis cần tìm Mẫu sau được gửi giải trình tự với PCR với đoạn mồi đặc hiệu So sánh kết với ngân hàng gen khẳng định chủng Porphyromonas gingivalis Hình Khuẩn lạc màu đen, tròn láng, thể lồi đĩa thạch máu sau làm AAAAGTACTCTTCGGCTCTATGTAGGTGCTGCATGG TTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTCGGCTTAAG TGCCATAACGAGCGCAACCCACATCGGTAGTTGCTA ACAGTTTTCGCTGAGGACTCTACCGAGACTGCCGTC GTAAGGCGTGAGGAAGGTGGGGATGACGTACCC (177) Hình Kết định danh vi khuẩn Porphyromonas gingivalis phương pháp Maldi-Tof Hình Kết giải trình tự phương pháp PCR 181 Nghiên cứu Y học BÀN LUẬN Viêm nha chu bệnh lý viêm mạn tính, đa yếu tố dẫn tới phá huỷ mô nâng đỡ răng nguyên nhân hiện tượng răng Các tổn thương viêm nha chu được chứng minh liên quan tới hệ vi khuẩn dưới nướu, chứa chủ yếu lồi vi khuẩn gram âm, vi khuẩn màu đen Porphyromonas gingivalis được cho bệnh nguyên chính(8) Để phân tích vi khuẩn túi nha chu đặc hiệu, mảng bám dưới nướu hoặc mẫu dịch nướu phù hợp nhất(16) Một cách thu thập mảng bám dưới nướu dung một côn giấy vô khuẩn đưa vào túi nha chu Nhiều nghiên cứu sử dụng dung dịch vận chuyển nuôi cấy mẫu khác Do tính chất cần sắt để phát triển, mơi trường ni cấy cần có hemin menadione để hỗ trợ việc phân lập Porphyromonas gingivalis Nuôi cấy không chọn lọc được cho phương pháp hiệu để bộc lộ tất thành phần bệnh nguyên hệ vi khuẩn nha chu, nhằm nhận biết hiện diện bệnh nguyên nha chu gặp, xác định độ nhạy kháng khuẩn bệnh nguyên Do Porphyromonas gingivalis một vi khuẩn kỵ khí bắt buộc, nên q trình ni cấy phân lập loại vi khuẩn đòi hỏi tiêu chuẩn khắt khe việc trì mơi trường khơng có oxy Hệ thống bình chứa túi tạo mơi trường kỵ khí phương pháp ni cấy kỵ khí phổ biến phòng thí nghiệm lâm sàng(6) So với vi khuẩn hiếu khí, vi khuẩn kỵ khí bắt buộc như Porphyromonas gingivalis đòi hỏi thời gian nuôi cấy dài, môi trường nuôi cấy oxy nhiệt độ tối ưu (35 - 37oC) Các chủng vi khuẩn có sẵn từ phòng thí nghiệm rút ngắn thời gian nuôi cấy, thay đổi từ - ngày, nhưng mẫu mảng bám/dịch nướu, thời gian để nuôi cấy vi khuẩn Porphyromonas gingivalis thay đổi từ - ngày(6), 14 ngày(3) tuần(13) Nghiên cứu cần thời gian từ 10 ngày để quan sát xuất hiện 182 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Porphyromonas gingivalis môi trường thạch máu Khả năng xâm chiếm tăng sinh bệnh nguyên một môi trường vật chủ đặc biệt điều kiện tiên cho trình nhiễm khuẩn Sự phát triển phụ thuộc vào việc lấy được dưỡng chất thiết yếu, mà đó, sắt đóng vai trò quan trọng cho hình thành tiến triển nhiễm khuẩn Ở vật chủ người, phần lớn sắt có tế bào, dưới dạng hemoglobin, protein hemin hay ferritin Một lượng nhỏ sắt ngoại bào thường kết hợp với protein vận chuyển như transferrin huyết lactoferrin bề mặt niêm mạc Do phong phú chất cơ thể vật chủ, hoạt chất chứa heme một nguồn sắt quan trọng cho trình xâm nhiễm vi sinh vật Các bệnh nguyên sống nội bào sử dụng heme trực tiếp Tuy nhiên, vi khuẩn bệnh nguyên ngoại bào, heme phải được giải phóng khỏi tế bào, điều gây dạng tổn thương mơ điển hình có hoạt động giải phóng vật liệu nội bào xảy Heme hemoglonin bị ràng buộc protein huyết tương, haptoglobin hemopexin Các vi sinh vật phải thực hiện cơ chế để loại bỏ phần tử heme hoặc sắt vô cơ protein gắn sắt vật chủ Khả năng sử dụng hemin hợp chất chứa hemin để tạo dưỡng chất sắt được ghi nhận nhiều vi khuẩn gây bệnh, bao gồm Porphyromonas gingivalis(10).Theo Gibbons cs(7), phát triển vi khuẩn tỉ lệ với nồng độ hemin từ 0,05 tới 1,0 ug/ml môi trường, đồng thời họ khẳng định vai trò vitamin K hay menadion việc hỗ trợ sinh trưởng chủng vi khuẩn kị khí Đó lý hemin menadion có mặt hầu hết loại môi trường nuôi cấy Porphyromonas gingivalis Trong nghiên cứu này, sử dụng mơi trường Wilkins Chalgren Anaerobic Broth Base, ngồi việc môi trường giàu dinh dưỡng với thành phần như cao nấm men, peptone, L-arginine, casein muối, hemin menadione được bổ sung với nồng độ Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 lần lượt 0,005 0,0005g/l Do thiếu superoxide dismutase catalase, Porphyromonas gingivalis bắt buộc mặt oxy để phát triển, đó, sử dụng hệ thống kỵ khí, như GasPak đề xuất nhằm hỗ trợ việc sinh trưởng vi khuẩn này(6) Trong nghiên cứu này, chúng tơi sử dụng bình GasPak (Merk) túi tạo mơi trường kỵ khí AnaeroPack (Mitsubishi Gas Chemical Co-Japan) ủ nhiệt độ 37oC Tuy nhiên, đến mẫu bệnh nhân thứ 21, khuẩn lạc Porphyromonas gingivalis xuất hiện Điều liên quan tới tỉ lệ Porphyromonas gingivalis có mẫu mảng bám dưới nướu khả năng sinh trưởng môi trường nuôi cấy(9) Để xác định vi khuẩn Porphyromonas gingivalis, bên cạnh việc dựa hình dáng màu sắc đặc trưng quần thể, người ta tiến hành nhuộm gram, phân tích sinh hố, sử dụng phương pháp hiện đại hơn như PCR, Maldi-Tof Phương pháp sinh hố đòi hỏi thử nghiệm môi trường nuôi cấy lỏng, một số vi khuẩn có khả năng sinh trưởng thấp như Porphyromonas gingivalis cho kết khơng xác Bên cạnh đó, thời gian ủ kéo dài để đọc được kết một bất lợi phương pháp này(12) Maldi (Matrixassisted laser desorption ionization) phương pháp ion hóa mẫu hấp thụ dựa hỗ trợ chất năng lượng laser Nguồn Maldi sử dụng chất hỗ trợ để ion hóa mẫu dưới tác dụng năng lượng laser lớn Mẫu xét nghiệm được tinh nhiều phương pháp, sau trộn với chất chứa phân tử hữu cơ nhỏ có khả năng hấp thụ năng lượng ánh sáng bước sóng định, axit yếu như sinapinic Chuyển hỗn hợp lên khay làm bay hơi, tạo hạt tinh thể bám với peptid Nhờ nguồn laser năng lượng cực lớn chiếu vào, chất hấp thu năng lượng bật ion Các ion tích điện dương hay âm tuỳ vào chất Các protein peptid tích điện dương oligonucleotid saccaride tích điện âm Thời gian bay ion (Time of flight) được đo Nghiên cứu Y học chuyển đổi thông tin dưới dạng phổ Công nghệ khối phổ giúp định danh vi khuẩn xác thời gian đưa kết nhanh, bảo quản kết chia sẻ thông tin kỹ thuật số dễ dàng hơn Đối với Porphyromonas gingivalis, theo tác giả Rams cs(11), việc định danh nhanh chóng kiểu hình vi khuẩn mẫu mảng bám dưới nướu xác 100% với kỹ thuật Maldi-Tof Sở dĩ lựa chọn Maldi-Tof phương pháp định danh vi khuẩn ni cấy phương pháp dựa proteomic nhanh, tin cậy có giá thành hợp lý Trong tổng quan tác giả Clark cs(4), phương pháp Maldi-Tof có tầm quan trọng đặc biệt việc xác định thông thường mầm bệnh cần thời gian ủ lâu dài để phân lập khơng hoạt hóa sinh học như vi khuẩn kỵ khí khẳng định rằng, thông qua việc sử dụng Maldi-Tof MS, chủng Porphyromonas được phân biệt Khơng thế, bên cạnh độ xác lên tới 97% cho 227 chủng lồi Bacteroides, 84 dòng vi khuẩn kỵ khí khoang miệng được phân tích một nghiên cứu được thiết kế để tinh giản việc xác định vi khuẩn từ bệnh nhân mắc bệnh lý nha chu Cơng nghệ phân biệt hai lồi Prevotella Prevotella intermedia Prevotella nigrescens, một công việc tốn tốn thời gian phân tích gen16S rRNA Tuy nhiên, qua kết thu được, tác giả kết luận việc mở rộng tối ưu hoá cơ sở liệu cần thiết Trong nghiên cứu này, gửi mẫu vi khuẩn phân tích với hệ thống Bruker BioTyper nhận giá trị log 1,954; 2,139; 2,17 2,154 Theo hướng dẫn hệ thống, giá trị log (điểm) ≥ 2,00 được coi một xác suất tốt để nhận dạng vi khuẩn thử nghiệm cấp độ lồi KẾT LUẬN Porphyromonas gingivalis vi khuẩn có vai trò quan trọng sinh bệnh học bệnh lý nha chu tồn nhiều bệnh lý toàn thân khác Nuôi cấy thành công vi khuẩn Porphyromonas gingivalis từ mảng bám dưới 183 Nghiên cứu Y học nướu bệnh nhân viêm nha chu nghiên cứu phương pháp không xâm lấn, kết hợp với hỗ trợ định danh Maldi-Tof tạo nguồn vi khuẩn có độc lực phục vụ cho thí nghiệm nghiên cứu khác tương lai Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Africa C (2012), “The Microbial Aetiology of Periodontal Diseases” in Periodontal Diseases — A Clinician’s Guide, J Manakil, Ed., chapter 1, InTech American Academy of Periodontology (2015), “American Academy of Periodontology Task Force Report on the Update to the 1999 Classification of Periodontal Diseases and Conditions” Journal of Periodontology; 86(7): 835-838 Boutaga K, van Winkelhoff AJ, Vandenbroucke-Grauls CMJE, Savelkoul PHM (2003), “Comparison of Real- Time PCR and Culture for Detection of Porphyromonas gingivalis in Subgingival Plaque Samples” Journal of Clinical Microbiology; 41(11): 4950– 4954 Clark AE, Kaleta EJ, Arora A, Wolk DM (2013), “MatrixAssisted Laser Desorption Ionization–Time of Flight Mass Spectrometry: a Fundamental Shift in the Routine Practice of Clinical Microbiology” Clinical Microbiology Reviews; 26(3): 547– 603 Darveau RP, Belton CM, Reife RA, Lamont RJ (1998), “Local Chemokine Paralysis, a Novel Pathogenic Mecha- nism for Porphyromonas gingivalis" Infection and Immunity; 66(4): 1660– 1665 Doan N, Contreras A, Flynn J, Morrison J, Slots J (1999), “Proficiencies of three anaerobic culture systems for recovering periodontal pathogenic bacteria” Journal of Clinical Microbiology; 37: 171-174 Gibbons RJ, Macdonald JB (1960), “Hemin and vitamin K compounds as required factors for the cultivation of certain strains of Bacteroides melaninogenicus” Journal of Bacteriology; 80(2):164–170 184 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 10 11 12 13 14 15 16 Hajishengallis G, Darveau RP, Curtis MA (2012), “The keystonepathogen hypothesis” Nature Reviews Microbi- ology; 10: 717– 725 Hajishengallis G, Liang S, Payne MA, Hashim A, Jotwani R, Eskan MA et al (2011), “Low-abundance biofilm species orchestrates inflammatory periodontal disease through the commensal microbiota and complement” Cell Host Microbe; 10: 497– 506 Otto BR, Verweij-van Vught AMJJ, MacLaren DM (1992), “Transferrins and heme-compounds as iron sources for pathogenic bacteria” Boca Raton (FL): CRC Press; 217- 233 Rams TE, Sautter JD, Getreu A, van Winkelhoff AJ (2016), “Phenotypic identification of Porphyromonas gingivalis validated with matrix-assisted laser desorption/ionization timeof-flight mass spectrometry” Microbial Pathogenesis; 94: 112-116 Slots, J, and HS Reynolds (1982), “Long-wave UV light fluorescence for identification of black-pigmented Bac- teroides spp” Journal of Clinical Microbiology; 16: 1148-1151 Van Winkelhoff AJ, Loos BG, Van der Reijden WA, Van der Velden U (2002), “Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus and other putative periodontal pathogens in subjects with and without periodontal destruction” Journal of Clinical Periodontology; 29: 1023–1028 Wright TL, Ellen RP, Lacroix JM et al (1997) Effects of metronidazole on Porphyromonas gingivalis biofilms Journal of Periodontal Research; 32: 473–477 Yang LC, Hu SW, Yan M, Yang JJ, Tsou SH, Lin YY (2015), “Antimicrobial activity of platelet-rich plasma and other plasma preparations against periodontal pathogens” Journal of Periodontology; 86: 310–318 Yoshida A, Ansai T (2012), “Microbiological diagnosis for periodontal disease” in Periodontal Diseases—A Clinician’s Guide, J Manakil, Ed., chapter 2, InTech Ngày nhận báo: 10/06/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/06/2018 Ngày báo đăng: 20/09/2018 ... bệnh học vi m nha chu nghiệm cấy mẫu vi khuẩn nuôi cấy trực tiếp từ bệnh nhân vi m nha chu được cho có độc lực mạnh hơn có giá trị thử nghiệm in vitro so với chủng vi khuẩn sẵn có từ phòng... Porphyromonas gingivalis một Porphyromonas gingivalis từ mảng bám dưới nướu yếu tố nguyên nhân sinh bệnh học bệnh nhân vi m nha chu mạn mức độ từ tiến triển tình trạng vi m bệnh nha chu trung... nguồn vi khuẩn để thực Chu n bị môi trường vận chuyển nuôi hiện nghiên cứu so sánh tỉ lệ vi khuẩn mẫu cấy: 2ml Wilkins Chalgren Anaerobic broth base bệnh nhân vi m nha chu so với bệnh nhân

Ngày đăng: 15/01/2020, 13:39