Nuôi cấy mô rong sụn (Kappaphycus alvarezii, Doty): Kết quả bước đầu về tạo mô sẹo trong phòng thí nghiệm

Mô sẹo (callus) là nguyên liệu quan trọng để nhân nhanh số lượng cây mầm trong công nghệ nuôi cấy mô rong biển. Bài viết này trình bày kết quả bước đầu về nghiên cứu tạo mô sẹo rong sụn trong phòng thí nghiệm sử dụng môi trường nuôi cấy PES ở độ mặn 28‰, khử trùng bằng hỗn hợp kháng sinh và cảm ứng tạo mô sẹo trong điều kiện nhiệt độ 250 C (±1°C), ánh sáng huỳnh quang 5 μmol photons m-2.s-1, chu kỳ chiếu sáng là 12: 12.

VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN NI CẤY MÔ RONG SỤN (Kappaphycus alvarezii, Doty): KẾT QUẢ BƯỚC ĐẦU VỀ TẠO MƠ SẸO TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM Đào Duy Thu1*, Phạm Thị Mát1, Vũ Thị Hoài1, Nguyễn Văn Nguyên1 TĨM TẮT Mơ sẹo (callus) ngun liệu quan trọng để nhân nhanh số lượng mầm công nghệ ni cấy mơ rong biển Bài viết trình bày kết bước đầu nghiên cứu tạo mô sẹo rong sụn phịng thí nghiệm sử dụng mơi trường nuôi cấy PES độ mặn 28‰, khử trùng hỗn hợp kháng sinh cảm ứng tạo mô sẹo điều kiện nhiệt độ 250C (±1°C), ánh sáng huỳnh quang μmol photons m-2.s-1, chu kỳ chiếu sáng 12: 12 Kết cho thấy với 100% mẫu cấy khơng bị nhiễm khuẩn nấm, tỷ lệ hình thành mơ sẹo đạt tới 45,16% mơ sẹo hình thành sớm quan sát sau ngày ni cấy Kết bước đầu xác định việc hình thành mô sẹo bị ảnh hưởng yếu tố kích thước mẫu cấy, nồng độ agar làm mơi trường không ảnh hưởng vào việc bổ sung chất điều tiết sinh trưởng Từ khóa: Rong sụn, Kappaphycus alvarezii, phát sinh mô sẹo, Việt Nam I MỞ ĐẦU Rong sụn loại rong biển kinh tế trồng nhiều nước châu Á Thái Bình Dương làm nguyên liệu sản xuất carrageenan Tương tự loài rong biển khác, từ trước tới nay, giống rong sụn chủ yếu sản xuất phương pháp sinh sản sinh dưỡng Theo phương pháp này, có nhánh rong có sức sinh trưởng tốt lựa chọn để nhân giống nguyên nhân dẫn đến suy giảm nguồn gen, sức sống kéo theo suy giảm suất rong thu hoạch (Dawes ctv., 1993) Nhiều nghiên cứu rằng, nhân giống rong sụn nuôi cấy mô phương pháp hiệu việc lưu giữ nguồn gene quý phục vụ cho việc sản xuất theo phương pháp sinh sản sinh dưỡng Quá trình phục hồi nhân nhanh thành non có tác dụng “trẻ hóa” nguồn giống, tăng cường khả chống chịu với môi trường (Reddy ctv., 2008; 2010; Baweja ctv., 2009) Bên cạnh đó, ni cấy mơ tạo số lượng lớn giống có đặc điểm tính trạng đảm bảo đủ nhu cầu giống cho việc trồng thương phẩm Thực tiễn, hai nghiên cứu Dawes ctv., (1991; 1993) thử nghiệm thành công sản xuất mô sẹo rong sụn từ mơ sẹo họ tiếp tục nuôi cấy thành rong giống đạt tỷ lệ 100% Rong giống sau đem trồng thử nghiệm cho tốc độ tăng trưởng hàng ngày tăng gấp 1,5-1,8 lần so với rong sinh sản sinh dưỡng thông thường (Reddy ctv., 2003) Tại Việt Nam, rong sụn loài rong kinh tế trồng nhiều vùng biển từ Phú Yên đến Bình Thuận Tuy nhiên, sản lượng chất lượng rong sụn Việt Nam bị suy giảm không đáp ứng nhu cầu chế biến rong sụn nội địa (Đào Duy Thu ctv., 2014) Đây vấn đề lớn cần phải có phương án giải triệt để Nhằm thử nghiệm phương pháp nhân giống rong sụn nuôi cấy mô cải thiện chất lượng rong sụn, nghiên cứu trình bày kết bước đầu thử nghiệm phương pháp tạo mơ sẹo phịng Viện Nghiên cứu Hải sản *Email: ddthu@rimf.org.vn 18 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN thí nghiệm làm ngun liệu tái sinh chồi tạo non sau II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Chuẩn bị nguyên liệu Rong sụn (Kappaphycus alvarezii) gốc lấy từ vùng trồng rong vịnh Cam Ranh, Khánh Hòa Tại điểm trồng rong, tản rong khỏe mạnh, bệnh lựa chọn, rửa xếp vào thùng xốp cách nhiệt phủ bề mặt khăn giữ ẩm Thùng rong vận chuyển đường hàng không Hà Nội vận chuyển tơ Viện Hải sản- Hải Phịng Tại Viện Nghiên cứu Hải sản, rong sụn lưu giữ theo mô tả Sulistiani ctv., (2012), cụ thể: Rong sau rửa ni lưu bể kính kích thước 50x70x80cm sử dụng môi trường f/2 với nước biển lọc qua lõi lọc µm, độ mặn 31‰ tương tự vùng trồng rong Chế độ sục khí 24/24 giờ, trì nhiệt độ 25-300C, chế độ chiếu sáng tự nhiên (L:D=12:12) Việc nuôi lưu rong sụn thực nhà kính Hàng tuần kiểm tra sinh trưởng rong thay môi trường Sau lưu giữ rong khoảng 4-5 tuần, rong sụn nuôi thích nghi với điều kiện phịng thí nghiệm Chọn tản rong khỏe mạnh cắt bớt gốc nuôi bình thủy tinh phịng thí nghiệm ni cấy mô Môi trường nuôi rong PES (Provasoli enriched seawater) pha hóa chất nguồn gốc Sigma- Trung Quốc, ngoại trừ Cyanocobalmin từ Việt Nam Các bình ni rong đặt ánh sáng huỳnh quang 2535 µmol photon m-2.s-1, chu kỳ sáng tối L:D= 12:12, nhiệt độ du trì 25±1oC máy điều hịa nhiệt độ, sục khí nhẹ 24/24 Rong sụn ni thích nghi khoảng tuần đến 10 ngày, định kỳ ngày thay tồn mơi trường ni Rong sau thích nghi với phịng thí nghiệm cắt thành đoạn – cm, cọ vật bám chổi lông nước biển pha 0,5% chất tẩy rửa tinh dầu lơ hội, Hàn Hình 1: Lưu giữ rong sụn phịng thí nghiệm TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 19 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Quốc 10 phút cho đoạn rong Từng đoạn rong sau rửa lại nước biển vô trùng lần ngâm dung dịch povidone iodine (hàm lượng iodine 0,5% w/v) nồng độ 2% phút Sau ngâm Povidone iodine, đoạn rong rửa lại nước biển vô trùng lần đem ủ 48 hỗn hợp nước biển vô trùng + 2% PES + 3% dung dịch kháng sinh (Penicillin G g, Streptomycin sulphate g, Kanamycin g, Nystatin 25 mg, Neomycin 200 mg pha 100 ml nước cất) Các hóa chất kháng sinh nguồn gốc hãng Sigma- Trung Quốc Điều kiện ủ kháng sinh là: nhiệt độ trì 25±1ºC, ánh sáng huỳnh quang 25-35 µmol photon m-2.s-1; chu kỳ sáng tối L:D= 12:12 (Reddy ctv., 2003) 2.2 Thử nghiệm cảm ứng tạo mô sẹo Quy trình cấy cảm ứng mơ sẹo tn theo mơ tả Reddy ctv., (2003), cụ thể: đoạn rong sau ủ kháng sinh rửa lại nước biển vô trùng 3-4 lần cắt thành đoạn dài mm làm mẫu cấy Các mẫu cấy lau dịch nhầy vết cắt cấy vào môi trường thạch đĩa petri với số lượng 9-10 mẫu cấy Các đĩa mẫu cấy để ngẫu nhiên khu vực phịng thí nghiệm kín, trì thơng khí điều hịa nhiệt độ với nhiệt độ phòng khoảng 25±1ºC, chiếu sáng đèn huỳnh quang với cường độ µmol photon m-2.s-1, chế độ chiếu sáng 12:12 - Ảnh hưởng kích cỡ mẫu cấy: Để đánh giá ảnh hưởng kích cỡ mẫu cấy đến việc hình thành mơ sẹo, tổng cộng 279 mẫu kích cỡ đường kính khác (từ 1,5-3,5 mm) cấy ngẫu nhiên vào đĩa petri khác với đĩa chứa 20 ml PES + 1,5% Bacto agar (Reddy ctv., 2003) Các mẫu cấy đánh số thứ tự theo dõi phát triển mơ sẹo hàng ngày kính giải phẫu với độ phóng đại tối đa 4,5 lần Các đĩa petri đựng mẫu cấy đặt ngẫu nhiên vị trí thí nghiệm để đảm bảo đồng 20 yếu tố ngoại cảnh - Ảnh hưởng nồng độ agar chất điều tiết sinh trưởng BA (6-benzyl aminopurine): Để đánh giá ảnh hưởng nồng độ agar đến hiệu hình thành mơ sẹo, ba loại nồng độ agar (Bacto agar, Sigma- Trung Quốc) 0,8%, 1,5% 2% thiết kế bổ sung vào môi trường PES Mỗi nồng độ thử nghiệm với 30 mẫu cấy có kích thước khác cấy ngẫu nhiên vào đĩa petri chứa 20 ml PES Các đĩa petri xếp ngẫu nhiên vị trí phịng ni cấy để đảm bảo đồng điều kiện ngoại cảnh Tương tự trên, thí nghiệm đánh giá hiệu việc bổ sung chất điều tiết sinh trưởng BA (6-benzyl aminopurine, SigmaTrung Quốc) tiến hành ba nồng độ mg/l (đối chứng); 0,5 mg/l mg/l môi trường PES Số lượng mẫu cấy thử nghiệm cho nồng độ n=30 Nồng độ agar sử dụng làm môi trường thí nghiệm 1,5% Các đĩa petri sau cấy mẫu xắp xếp ngẫu nhiên vị trí để đảm bảo đồng điều kiện ngoại cảnh Định kỳ kiểm tra hình thành mơ sẹo thống kê số mẫu hình thành mơ sẹo thí nghiệm Xử lý số liệu: Việc phân tích so sánh nghiệm thức thực phân tích χ (Chi-square) với α = 0,05 thống kê mô tả Tỷ lệ mẫu cảm ứng mô sẹo tính theo cơng thức: M= tổng số mẫu hình thành mô sẹo/tổng số mẫu cấy III KẾT QUẢ 3.1 Ảnh hưởng kích cỡ mẫu cấy Kết nghiên cứu cho thấy có khác biệt tỷ lệ phát sinh mơ sẹo hai loại mẫu có kích cỡ khác Thử nghiệm cảm ứng 279 mẫu cho thấy sau 14 ngày có 126 mẫu hình thành mơ sẹo chiếm 45,1% Đối với mẫu có đường kính >2 mm, tỷ lệ hình thành mơ sẹo 51,4% (75/146) Tỷ lệ mẫu có đường kính 3,841 (α=0,05, df=1) Việc phát sinh mô sẹo rong sụn xảy khác biệt có ý nghĩa thống kê tỷ lệ mô sẹo nhanh tăng dần theo thời gian Kết hình thành hai loại đường kính mẫu cấy quan sát cho thấy sau ngày cấy mẫu, tỷ lệ Thời gian cảm ứng mơ sẹo Hình 2: Tỷ lệ mơ sẹo hình thành sau thời gian cấy mẫu (n= 279) A B C D Hình 3: Hình chụp mẫu cấy có mơ sẹo dạng sợi (A), mô sẹo đặc (B), mẫu bị rỉ nước (C) mẫu bị hoại tử (D) TAÏP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 21 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN hình thành mơ sẹo dạng sợi đạt 14,17%, sau ngày tỷ lệ tăng lên 22,22%, sau 11 ngày đạt 24,73% sau 14 ngày 45,16% (Hình 2) Sau 14 ngày, khơng có mơ sẹo phát thêm Các mẫu cấy khơng hình thành mơ sẹo có tượng rỉ nước bề mặt vết cấy, màu tự nhiên hoại tử hoàn toàn sau 25-30 ngày (Hình 2) Quan sát trình hình thành mơ sẹo ghi nhận có hai dạng mơ sẹo xuất mô sẹo dạng sợi mô sẹo đặc (Hình 3) Tuy nhiên, tổng số 126 mẫu mơ sẹo có mẫu có dạng mơ sẹo đặc, cịn lại 125 mẫu mơ sẹo dạng sợi ( χ =122>>>3,841 (α=0,05, df=1)) 3.2 Ảnh hưởng nồng độ agar chất điều tiết sinh trưởng Kết nghiên cứu phản ánh khác biệt tỷ lệ mơ sẹo hình thành nồng độ agar thí nghiệm Nồng độ agar 1,5% cho tỷ lệ hình thành mơ sẹo đạt 60% cao ba nồng độ thử nghiệm Nồng độ agar 2% cho tỷ lệ hình thành mơ sẹo thấp (20%) (Hình 4B) Ở nồng độ agar 0,8% 1% cho tỷ lệ hình thành mơ sẹo tương đương (40%) Kết phân tích χ (α=0,05, df=1) sai khác có ý nghĩa thống kê tỷ lệ hình thành mô sẹo nồng độ agar 1,5% với nồng độ agar thử nghiệm (Bảng 1) Bảng 1: Kết phân tích giá trị χ đánh giá sai khác tỷ lệ mô sẹo nồng độ agar thí nghiệm Nồng độ agar 1,5% 1% 0,8% 2% 12,00* 2,94 4,00* 1,5% 1% 3,38 2,40 0,09 * Khác biệt có ý nghĩa thống kê 22 Việc bổ sung thêm chất điều tiết sinh trưởng BA khơng kích thích hình thành phát triển mơ sẹo Kết nghiên cứu cho thấy lô đối chứng (không bổ sung BA) cho tỷ lệ hình thành mơ sẹo đạt 55%, cao so với lô bổ sung 0,5 mg/l BA (đạt 45%) tương đương với lô bổ sung mg/l BA (đạt 57%) (Hình 4C) Kết phân tích χ (α=0,05, df=1) cho thấy giá trị χ dao động từ 0,05 đến 1,00 2 mm có n=146); nồng độ agar làm mơi trường (B) bổ sung chất điều tiết sinh trưởng (C) (n=30 nghiệm thức) tử Ngược lại, sử dụng hóa chất nồng độ thấp thời gian ngắn lại không hiệu với tỷ lệ nhiễm khuẩn cao Như vậy, tỷ lệ 100% mẫu không tạp nhiễm khuẩn, nấm phần phản ánh việc sử dụng liều kháng sinh nghiên cứu dẫn đến tỷ lệ mẫu hình thành mơ sẹo thấp Ngồi ra, nghiên cứu xác định mẫu cấy có đường kính lớn mm cho TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 23 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN tỷ lệ hình thành mơ sẹo cao so với mẫu có đường kính nhỏ Có thể mẫu có kích thước nhỏ thường nhánh sinh q trình thích nghi phịng thí nghiệm nên tế bào non, lớp vỏ mẫu cấy mỏng dẫn đến khả ngấm chất kháng sinh nhiều gây ức chế sinh trưởng Điều Reddy ctv., (2003) Sulistiani ctv., (2012) làm sáng tỏ nghiên cứu Như vậy, kích thước mẫu cấy mẫu cấy có ảnh hưởng đến tỷ lệ cảm ứng mô sẹo nuôi cấy mô Kết thử nghiệm agar 1,5% cho hiệu cảm ứng tạo mô sẹo cao với 59,26% số mẫu cấy hình thành mơ sẹo dạng sợi sau 14 ngày ni cấy Các nồng độ agar cịn lại cho tỷ lệ cảm ứng mô sẹo từ 22-40% Kết tương tự nghiên cứu Reddy ctv., (2003), với nồng độ agar 1,5% cho 82% mẫu cấy hình thành mơ sẹo sau tuần, nồng độ 0,8% tỷ lệ thấp nhiều (Reddy ctv., 2003) Ở nồng độ agar 2%, tỷ lệ hình thành mơ sẹo thấp hẳn mơi trường có độ cứng cao, giữ lại dinh dưỡng mẫu rong không đủ khả thẩm thấu dinh dưỡng từ thạch Điều chứng tỏ rằng, tính chất vật lý môi trường mà cụ thể độ cứng thạch có ảnh hưởng đến việc hình thành mơ sẹo Kết nghiên cứu ra, bổ sung chất điều tiết sinh trưởng BA (6 - benzyl aminopurine) khơng làm tăng tỷ lệ hình thành mơ sẹo rong sụn Điều tương tự nhận định Reddy ctv., (2003) trái với nhận định tác giả khác, việc bổ sung chất điều tiết sinh trưởng làm tăng tỷ lệ cảm ứng mô sẹo phát triển mô sẹo rong biển (Dawes Koch, 1991; Huang Fujita, 1997; Yokoya Handro, 2004; Yokoya ctv., 2004; Munoz ctv., 2006; Sulistiani ctv., 2012) Theo Reddy ctv., (2003), việc thích nghi rong sụn phịng 24 thí nghiệm quan trọng việc bổ sung chất kích thích sinh trưởng rong sụn thích nghi với mơi trường thí nghiệm tự tổng hợp đủ chất kích thích sinh trưởng cần thiết để phát sinh mơ sẹo cách tự nhiên Việc bổ sung thêm chất điều tiết sinh trưởng làm cân auxins cytokinins bị thừa, không cần thiết V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Việc nghiên cứu phát sinh mô sẹo rong sụn làm nguyên liệu tái sinh thành giống rong sụn bước đầu thử nghiệm thành công với tỷ lệ mô sẹo đạt lên tới 45,16% sau 14 ngày cảm ứng Việc hình thành mơ sẹo sau ngày cấy kéo dài khoảng 10 ngày Kết nghiên cứu q trình phát sinh mơ sẹo phụ thuộc vào nhiều yếu tố kích thước mẫu cấy, nồng độ agar sử dụng làm môi trường Bước đầu xác định việc hàm lượng agar làm mơ trường cấy mẫu thích hợp 1,5%; mẫu cấy có đường kính > mm cho hiệu phát sinh mơ sẹo cao Ngồi ra, ni thích nghi rong phịng thí nghiệm trước tạo mô sẹo điều kiện bắt buộc thực Đề xuất Mặc dù tạo mô sẹo phịng thí nghiệm, nhiên kết bước đầu Cần phải làm thêm nhiều lần thí nghiệm để khẳng định quy trình ổn định hiệu Ngồi ra, tốc độ phát triển mơ sẹo thấp tượng chết trắng xảy nhiều mẫu cấy Cần phải nghiên cứu xác định nguyên nhân phương án khắc phục Việc xử lý vô trùng mẫu cấy hỗn hợp kháng sinh bước đầu cho hiệu cao nhiều thời gian chi phí cao Cần nghiên cứu thử nghiệm số phương pháp TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN vơ trùng khác loại hóa chất khử trùng Polne-Fuller, M., Gibor, A., 1987 Calluses and callus-like growth in seaweeds: induction nhanh cồn, formol nồng độ thấp… and culture Hydrobiologia, 151/152:131– TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đào Duy Thu, Nguyễn Văn Nguyên Trần Mai Đức, 2014 Hiện trạng nghề trồng rong sụn (Kappaphycus alvarezii, Doty) Việt Nam Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn, tháng 9/2014:221-228 Tài liệu tiếng Anh Baweja, B., Sahoo, D., García-Jiménez, P., Robaina, R.R., 2009 Seaweed tissue culture as applied to biotechnology: Problems, achievements and prospects Phycological Research, 57: 45 - 58 Dawes, C.J., Koch, E.W., 1991 Branch, microprapagule and tissue culture of the red alga Eucheuma denticulatum and Kappaphycus alvarezii farmed in the Philippines Journal of Applied Phycology, 3: 247–257 Dawes, C.J., Trono, G.C., Lluisma, A.O., 1993 Clonal propagation of Eucheuma denticulatum and Kappaphycus alvarezii for Philippines seaweed farms Hydrobiologia, 260/261: 379–83 Huang, W., Fujita, Y., 1997 Callus induction and thallus regeneration in some species of red algae Phycological Research 45:105–11 Kumar, G.R., Reddy, C.R.K., Jha, B., 2007 Callus induction and thallus regeneration from callus of phycocolloid yielding seaweeds from the Indian coast Journal of Applied Phycology, 19:15–25 Moz, J., Cahue-López, A.C., Patiño, R., Robledo, D., 2006 Use of plant growth regulators in micropropagation of Kappaphycus alvarezii (Doty) in airlift bioreactors Journal of Applied Phycology, 18:209 – 218 138 Reddy, C.R.K., Kumar, G.R.K., Siddhanta, A.K., Tewari, A., Eswaran, K., 2003 In vitro somatic embryogensis and regeneration of somatic embryos from pigmented callues of Kappaphycus alvarezii (Doty) Doty (Rhodophyta, Gigartinales) Journal of Phycology, 39(3): 610-616 Reddy, C., Jha, B., Fujita, Y., Ohno, M., 2008 Seaweed micropropagation techniques and their potentials: an overview Journal of Applied Phycology, 20(5): 609-617 Reddy, C.R.K., Gupta, V., Jha, B., 2010 Developments in biotechnology of red algae In Red algae in the genomic age J Seckbach & D.J Chapman (Eds.), Springer Netherlands 13: 307-341 Sulistiani, E., Soelistyowati, D.T., Alimuddin & Yani, S.A., 2012 Callus induction and filaments regeneration from callus of cottonii seaweed (Doty) collected from Natuna Islands, Riau Islands Province Biotropia, 19 (2): 103 -114 Tatewaki, M., 1989 The simple method of seaweed axenic culture The Korean Journal of Phycology, 4(2): 183-189 Yeong, H.Y., Phang, S.M., Reddy, C.R.K., Khalid, N., 2014 Production of clonal planting materials from Gracilaria changii and Kappaphycus alvarezii through tissue culture and culture of G changii explants in airlift photobioreactor Journal of Applied Phycology, 26: 729-746 Yokoya, N.S., West, J.A., Luchi, A.E., 2004 Effect of plant growth regulator on callus formation, growth and regeneration in axenic tissue culture of Gracilaria tenuistipitata and Gracilaria perplexa (Gracilariales, Rhodophyta) Phycological Research, 52: 244-54 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 8/2015 25 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN TISSUE CULTURE OF COTTONI SEAWEED (Kappaphycus alvarezii, Doty): PRELIMINARY RESULTS OF IN VITRO CALLUS INDUCTION Dao Duy Thu1*, Pham Thi Mat1, Vu Thi Hoai1, Nguyen Van Nguyen1 ABSTRACT The callus is an essential material to produce propagules in seaweed tissue culture technology The study presents preliminary results of experimental callus induction in Kappaphycus alvarezii using culture medium PES at salinity of 28‰; aseptic culture condition with a mixture of antibiotics; and callus induction in temperature of 25°C (±1°C), cool white fluorescent irradiance of μmol photons m−2 s−1 and light regime with light:dark equals 12:12 The results showed that all experimental explants were not contaminated The primary result showed that callus induction rate was 45.16% and earliest callus could appear after day cultivation The callus induction depended strongly on size of explants, agar concentration in medium and not depend on the plant growth regulator addition Keywords: Cottoni seaweed, Kappaphycus alvarezii, callus induction, Vietnam Người phản biện: ThS Võ Minh Sơn Ngày nhận bài: 29/5/2015 Ngày thông qua phản biện: 03/8/2015 Ngày duyệt đăng: 07/8/2015 Research Institute for Marine Fisheries * Email: ddthu@rimf.org.vn 26 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THAÙNG 8/2015 ... mẫu cấy mẫu cấy có ảnh hưởng đến tỷ lệ cảm ứng mô sẹo nuôi cấy mô Kết thử nghiệm agar 1,5% cho hiệu cảm ứng tạo mô sẹo cao với 59,26% số mẫu cấy hình thành mơ sẹo dạng sợi sau 14 ngày nuôi cấy. .. mơ sẹo cao Ngồi ra, ni thích nghi rong phịng thí nghiệm trước tạo mơ sẹo điều kiện bắt buộc thực Đề xuất Mặc dù tạo mơ sẹo phịng thí nghiệm, nhiên kết bước đầu Cần phải làm thêm nhiều lần thí nghiệm. .. thời điểm phát sinh mô sẹo xuất sau ngày cấy mẫu tương đồng với kết nghiên cứu đối tượng rong sụn Tạo mẫu cấy vô trùng coi điều kiện quan trọng để phát sinh mô sẹo nuôi cấy mô rong biển (Polne-Fuller