NGHIÊN cứu ĐỊNH LƯỢNG AMYLASE, PROTEASE, LIPASE TRONG máu và DỊCH tụy của BỆNH NHÂN VIÊM tụy mạn và bước đầu ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG TIẾT DỊCH của NGƯỜI BỆNH

Y H Ọ C TH Ự C HÀNH (90 3 ) - S Ố 1/2014 51 trực tràng là 2/46 (4,4%). Đột biến xảy tại exon 7 ở vị trí 249 với kiểu đột biến dị hợp tử. - Đột biến p53 xảy ra trên bệnh nhân đơn polyp chiếm 4,4%, polyp không cuống và nửa cuống cùng chiếm tỷ lệ 2,2%, không xảy ra đột biến ở bệnh nhân có kích thước < 10mm. - Đột biến p53 xuất hiện trên polyp u tuyến, gặp cả mức độ loạn sản vừa và nặng cùng chiếm 8,3% trên tổng số 12 polyp có loạn sản. SUMMARY The research discloses the Gen p53 for some concerned cancer types. It studied on great rectum polyp patient in Hai Phong Viet Tiep hospital. The result showed that the Gen p53 great rectum polyp is 2/46 (4.4%). The sudden change happened at exon 7 on the position 249 with odd zygote sudden change stype, while that did not happen to the patients with the size bellow 10mm. Keywords: Gen p53, great rectum polyp. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Trịnh Tuấn Dũng (2007), Nghiên cứu sự biểu hiện của các kháng nguyên p53, Ki67, Her -2/neu trong ung thư đại trực tràng bằng hóa mô miễn dịch. Tạp chí Y học TH. 2. Phạm Phan Địch, Trịnh Bình, Đỗ Kính (1998), Mô học, NXB Y học, Tr: 319- 319. 3. Chu Văn Đức (2009), Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, mô bệnh học và sự bộc lộ CK7, CK20, Ki67 và p53 của ung thư đại tràng. Luận văn thạc sĩ y học, Học viện Y Dược cổ truyền Việt Nam, 2009. 4. Cho Y, Gorina S, Jeffrey P.D, Pavletich N.P (1994), “Crystal structure of a p53 tumor suppressor- DNA complex: understanding tumorigenic mutations”, Science, 265, pp. 346–355. 5. Kikuchi-Yanoshita R, Konishi M, Ito S et al., (1992), “Genetic Changes of Both p53 Alleles Associated with the Conversion from Colorectal Adenoma to Early Carcinôm in Familial Adenomatous Polyposis and Non-Familial Adenomatous Polyposis Patients”, Cancer Res 52, pp.3965-3971. 6. Kirk GD, Lesi OA, Mendy M, Szymañska K, Whittle H, Goedert JJ, Hainaut P, Montesano R (2005). 249(ser) TP53 mutation in plasma DNA, hepatitis B viral infection, and risk of hepatocellular carcinoma. Oncogene; 24(38):5858-67. 7. López I, L P Oliveira, Tucci P, Alvarez-VALIN F, Một R Coudry, Marín M (2011) “Different mutation profiles associated to P53 accumulation in colorectal cancer” Epub, pp. 81 – 7. 8. Russo A, Bazan V, Iacopetta B et al(2005) “The TP53 Colorectal Cancer International Collaborative Study on the prognostic and predictive significance of p53 mutation: influence of tumor site, type of mutation, and adjuvant treatment.”, J Clin Oncol; 23: 7518–7528. 9. Shinozawa I (1996), "Evaluation ofpatients with colorectalpolyp in our department for the past five year", Asian pacific congress of gastroenterology, Yokchama, Japan, pp. 442. NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG AMYLASE, PROTEASE, LIPASE TRONG MÁU VÀ DỊCH TỤY CỦA BỆNH NHÂN VIÊM TỤY MẠN VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG TIẾT DỊCH CỦA NGƯỜI BỆNH NGUYỄN VĂN RƯ, NGUYỄN THỊ LOAN Trường đại học Dược Hà Nội TÓM TẮT Bước đầu đề tài đã lựa chọn được cách lấy, xử lí và bảo quản thích hợp các mẫu máu và dịch tụy của bệnh nhân viêm tụy mạn để định lượng các enzym: amylase, protease và lipase từ khoa Phẫu thuật tiêu hóa Bệnh viện Việt Đức. Đã sử dụng các phương pháp Anson cải tiến để định lượng protease, phương pháp Tiete, Borden để xác định hoạt độ amylase, phương pháp King để xác định hoạt độ lipase. Kết quả thu được về hoạt độ amylase trung bình là 275,3 ± 158,7 đvA/100ml máu và 615,6 ± 111,6 đvA/100ml dịch tụy bệnh nhân viêm tụy mạn, tăng so với người bình thường. Về hoạt độ lipase trung bình trong máu là 13,8±9,8 đvB/100ml máu và 51,5 ± 50,5 đvB/100ml dịch tụy của bệnh nhân viêm tụy mạn, giảm so với người bình thường. Hoạt độ protease trung bình 119,4±49,3 nK/100ml máu và 122,2±52,1 nK/100ml dịch tụy, chưa có số liệu so sánh. Các thông số về các enzyme thu được trong máu và dịch tụy từ các bệnh nhân viêm tụy mạn khác nhau, bước đầu có giá trị đánh giá được tình trạng chức năng tụy ngoại tiết. Từ khóa: Amylase, Protease, Lipase, viêm tụy mạn (VTM). SUMMARY In this study, we have: Options are taking, processing and proper storage of blood samples and pancreatic juice of chronic pancreatitis patients to quantify the enzymes: amylase, protease and lipase from target Surgery of Vietnam-Germany Hospital. Used methods to quantify improvements Anson protease, method Tiete, Borden to determine the activity of amylase, King method to determine the activity of Lipase. Results obtained on average amylase activity is 275.3 ± 158.7 and 615.6 ± 111.6 amylase unit/100ml blood and pancreatic juice of patients with chronic pancreatitis, compared with normal subjects. Regarding the activity of lipase in 13.8 ± 9.8 and 51.5 ± 50.5 Bondi (lipase) unit/100ml blood and pancreatic juice of chronic pancreatitis patients, lower than normal. The average protease activity of 119.4 ± Y H Ọ C TH Ự C HÀNH (903) - S Ố 1/2014 52 49.3 -122.2 ± 52.1 nK/100ml blood and pancreatic juice, no comparative data. The parameters of the enzyme obtained in blood and pancreatic juice from patients with different chronic pancreatitis, the initial value assessment of the condition exocrine pancreatic function. Keywords: amylase, protease, lipase, chronic pancreatic. ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm tụy mạn là bệnh viêm đặc trưng bởi sự phá hủy nhu mô tụy tiến triển, không hồi phục, dẫn tới xơ hóa nhu mô gây giảm chức năng tụy nội tiết và tụy ngoại tiết. Bên cạnh các nghiệm pháp thăm dò, chụp cắt lớp, chụp cộng hưởng từ để chuẩn đoán viêm tụy mạn…người ta còn đánh giá chức năng tụy ngoại tiết dựa vào việc định lượng các enzym trong máu, phân và nước tiểu, dịch tụy [1, 2]. Ở Việt Nam, định lượng enzym tụy được các nhà khoa học cho rằng đây là tiêu chuẩn hóa sinh quan trọng để đánh giá chức năng tụy trước và sau phẫu thuật đối với bệnh nhân (BN) viêm tụy mạn (VTM). Xuất phát từ ý tưởng như vậy chúng tôi tiến hành đề tài với mục đích tiến hành định lượng 3 nhóm enzym trên mẫu máu và dịch tụy của bệnh nhân viêm tụy mạn và bước đầu tiến hành phân tích đánh giá khả năng tiết dịch của các bệnh nhân VTM trước và sau phẫu thuật so với tham chiếu hoặc trung bình cộng [1, 3]. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 1. Nguyên vật liệu - Mẫu dịch tụy và máu được lấy từ 30 BN VTM được điều trị phẫu thuật tại Bệnh viện Việt Đức từ tháng 9/2008 đến 3/2010. - Các thiết bị hiện đại của các labo hóa sinh như: Máy li tâm EBA 12 Hettich (Nhật Bản), Máy điều nhiệt (Đức), Máy đo quang U1800 (Hitachi). 2. Phương pháp nghiên cứu Xác định hoạt độ amylase: Phương pháp Tiete và Border đơn vị tính hoạt độ amylase (HđA) là đơn vị amylase viết tắt là đvA/100ml dịch [2], [4]. Định lượng protein và xác định hoạt độ protease (HđP): Phương pháp Bradford, Biuret, Lowry, Anson cải tiến, đơn vị tính HđP là nanokatal, (nK/100ml dịch) [2], [4]. Xác định hoạt độ lipase: Phương pháp King [2], đơn vị tính hoạt độ lipase (HđL) là đơn vị Bondy viết tắt là đvB/100ml dịch [4]. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 1. Hoạt độ amylase trong dịch tụy và máu của bệnh nhân VTM Kết quả hoạt độ amylase (HđA) trong máu, đơn vị amylase - đvA/100ml HđA trung bình trong máu của BN VTM là 275,3 ± 158,7 đvA/100ml tăng cao so với chỉ số HđA ở người bình thường là 16-31 đvA/100ml. Trong số này, có 2 BN là có HđA trong khoảng bình thuờng và có tới 19 BN có HđA trong máu cao hơn bình thường, chiếm 90,5% BN VTM. BN có HđA cao nhất là 839 đvA/100ml và tăng lên 44 lần so với BN có HđA thấp nhất (19 đvA/100ml). Hoạt độ Amylase (HđA) 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 0 5 10 15 20 25 30 35 Bệnh nhân (STT) HđA (Đơn vị/100ml) Hình 1. Các giá trị về hoạt độ Amylase máu của BN VTM Hoạt độ Amylase dịch tụy của BN VTM Ho ạ t độ Amylase (H đ A) 0 200 400 600 800 1000 0 10 20 30 40 Bệnh nhân (STT) HđA (Đơn vị/100ml) Hình 2. Các giá trị về hoạt độ Amylase trong dịch tụy của BN VTM HđA dịch tụy trung bình của BN VTM là 615,6 ± 111,6 đvA/ 100ml. BN có HđA trong dịch tụy cao nhất là 781 đv/100ml có biên độ tăng gấp 31 lần BN có HđA trong dịch tụy thấp nhất 25 đvA/100ml. 2. Hoạt độ Lipase trong máu và dịch tụy của BN VTM Hoạt độ Lipase (HđL) trong máu của BN VTM đơn vị đo đvB/100ml Hoạt độ Lipase (HđL) 0 20 40 60 80 0 10 20 30 40 Bệnh nhân (STT) HđL (Bondi) Series1 Hình 3. Các giá trị về hoạt độ hoạt độ Lipase trong máu Giá trị trung bình HđL trong máu của BN VTM là Xtb = 13,8 ± 9,8 đvB/ml. Có 11 BN có HđL nằm trong giá trị trung bình và trong đó có 4 BN có giá trị trên và 7 BN dưới khoảng giá trị trung bình. BN có HđL cao nhất 70 đvB/ml trong máu gấp 35 lần BN có HđL thấp nhất (2 đvB/ml). Y H Ọ C TH Ự C HÀNH (90 3 ) - S Ố 1/2014 53 Hoạt độ Lipase (HđL) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 5 10 15 20 25 30 35 Bệnh nhân (STT) HđL Hình 4. Biểu đồ thể hiện hoạt độ Lipase trong dịch tụy của BN VTM HđL trung bình trong dịch tụy của BN VTM là 34,5 ± 9,9 đvB/100ml, người bình thường là 35 – 55 đvB/100ml. Trong số này, có 52% BN VTM có HđL thấp hơn người bình thường, 36% BN VTM có HđL bình thường và 12% BN VTM có HđL cao hơn. BN có HđL cao nhất gấp 17,5 lần so với người bình thường. 3. Hoạt độ Protease trong máu và dịch tụy của BN VTM Kết quả hoạt độ Protease (HđP) trong máu của BN VTM (đơn vị: nK/ml) Hoạt độ Protease (HđP) 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 0 5 10 15 20 25 30 35 Bệnh nhân (STT) HđP Hình 5. Kết quả về hoạt độ Protease trong máu của BN VTM Hoạt độ Protease trung bình trong máu của BN VTM là 125,3 ± 46 nK/ml. Có 8 giá trị nằm ngoài khoảng biến thiên của giá trị trung bình này (5 giá trị dưới và 3 trên bình thường), 23 BN có HđP trong giá trị bình thường. Bệnh nhân có HđP cao nhất 404,02 nK/ml gấp 14 lần bệnh nhân thấp nhất 28,37 nK/ml. Hoạt độ Protease (HđP) 0 100 200 300 400 500 0 5 10 15 20 25 30 35 Bệnh nhân (STT) HđP Hình 6. Đồ thị thể hiện hoạt độ Protease trong dịch tụy của BN VTM Hoạt độ Protease trung bình trong dịch tụy của BN VTM là 101,2 ± 51,1 nK/ml. Có 9 BN có hoạt độ Protease nằm ngoài khoảng giá trị trung bình (trong đó có 3 giá trị nằm ở dưới và 6 giá trị nằm ở phía trên), 17 BN có giá trị nằm trong khoảng trung bình. BN có hoạt độ Protease cao nhất 426,46 nK/ml gấp 36 lần so với BN có hoạt độ Protease 11,79nK/ml. BÀN LUẬN Trước đây, các công trình nghiên cứu chủ yếu mới đề cập đến hoạt độ enzym của protease, amylase và lipase trong máu mà chưa có công trình đề cập đến định lượng các enzym này trong dịch tụy cho nên có nhiều khó khăn trong quá trình đánh giá so sánh kết quả nghiên cứu vì vậy đây mới là kết quả bước đầu nhưng đã có ý nghĩa đánh giá được tình trạng của bệnh VTM [2]. Định lượng enzyme chủ yếu dựa vào các phương pháp hóa sinh, có tinh chất kinh điển và đặc hiệu do vậy co tính chính xác và phù hợp trong điều kiện nghiên cứu ở nước ta. Nhưng kết quả xét nghiệm về enzyme trong máu và trong dịch tụy có thể là cơ sở quan trọng cho nghiên cứu tình trạng bệnh lý và phương hướng phương án trong phẫu thuật và điều trị VTM. Các kết quả định lượng đã cung cấp các dữ liệu toàn diện hơn về enzyme trong dịch tụy hơn, từ trước đây người ta mới chỉ đề cập đến protease mà không để ý tới amylase và lipase trong khi chức năng ngoại tiết của tụy là có cả 3 loại enzym này [4, 5]. Vì vậy, định lượng được các enzyme của dịch tụy và cả trong máu của bệnh nhân VTM có ý nghĩa quan trọng trong chẩn đoán và điều trị bệnh. KẾT LUẬN Đã xác định được kết quả về hoạt độ amylase trung bình là 275,3 ± 158,7 đvA/100ml máu và 615,6 ± 111,6 đvA/100ml dịch tụy bệnh nhân viêm tụy mạn, tăng so với người bình thường. Về hoạt độ lipase trung bình là 13,8 ± 9,8 đvB/100ml máu và 51,5 ± 50,5 đvB/100ml dịch tụy của bệnh nhân viêm tụy mạn, giảm so với người bình thường. Hoạt độ protease trung bình 119,4 ± 49,3 nK/100ml máu và 122,2 ± 52,1 nK/100ml dịch tụy, chưa có chỉ số tham chiếu. Bước đầu cung cấp các giá trị hoạt độ từng nhóm enzym dịch tụy của bệnh nhân viêm tụy mạn để tham khảo, hỗ trợ trong việc chẩn đoán, đánh giá được tình trạng chức năng tụy ngoại tiết. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Lương Tấn Thành, (1997), “Kiểm tra chất lượng xét nghiệm định lượng trong hóa sinh lâm sàng”, Nxb Y học, Tr. 15-25. 2. Đỗ Đình Hồ, (2007), “Sổ tay xét nghiệm hóa sinh lâm sàng”, Nxb Y học, chi nhánh TP. Hồ Chí Minh. 3. Tierneyme, (2006), “Chuẩn đoán và điều trị y học hiện đại”, Nxb Y học, Hà Nội. 4. Lankish P.G., (1982) “Exocrine pancreatic fuction tests”, Gut, 23, pp 777 – 798. 5. Keller J. Layer P., (2005), “Human pancreatic enxocrine respone to nutrients in health”, Gut, 54 (Suppl VI), pp.1-28. . Yokchama, Japan, pp. 442. NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG AMYLASE, PROTEASE, LIPASE TRONG MÁU VÀ DỊCH TỤY CỦA BỆNH NHÂN VIÊM TỤY MẠN VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG TIẾT DỊCH CỦA NGƯỜI BỆNH NGUYỄN VĂN RƯ,. được trong máu và dịch tụy từ các bệnh nhân viêm tụy mạn khác nhau, bước đầu có giá trị đánh giá được tình trạng chức năng tụy ngoại tiết. Từ khóa: Amylase, Protease, Lipase, viêm tụy mạn. lượng 3 nhóm enzym trên mẫu máu và dịch tụy của bệnh nhân viêm tụy mạn và bước đầu tiến hành phân tích đánh giá khả năng tiết dịch của các bệnh nhân VTM trước và sau phẫu thuật so với tham chiếu