Nhân một trường hợp phát hiện HIV trong giai đoạn cửa sổ bằng kỹ thuật Nucleic Acid Testing (NAT) tại Trung tâm Truyền máu Chợ Rẫy

Trong quá trình áp dụng kỹ thuật NAT, chúng tôi đã phát hiện một trường hợp nhiễm HIV trong giai đoạn cửa sổ ở người cho máu mà các phương pháp huyết thanh học như miễn dịch gắn men (ELISA) và điện hóa miễn dịch gắn men (CMIA) chưa phát hiện được.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số * 2015 Nghiên cứu Y học NHÂN MỘT TRƯỜNG HỢP PHÁT HIỆN HIV TRONG GIAI ĐOẠN CỬA SỔ BẰNG KỸ THUẬT NUCLEIC ACID TESTING (NAT) TẠI TRUNG TÂM TRUYỀN MÁU CHỢ RẪY Phạm Lê Nhật Minh*,**, Nguyễn Thúy Hương**, Trần Văn Bảo* Phan Thị Mỹ Kim*, Nguyễn Thị Kiều* TÓM TẮT Vào tháng 06/2015, Trung tâm truyền máu Chợ Rẫy tiến hành triển khai kỹ thuật Nucleic Acid Testing (NAT) xét nghiệm sàng lọc bệnh lây nhiễm qua đường truyền máu Kỹ thuật khắc phục hạn chế phương pháp huyết học áp dụng xét nghiệm sàng lọc máu chưa thể phát diện vi rút HBV, HCV đặc biệt HIV giai đoạn cửa sổ Trong trình áp dụng kỹ thuật NAT, chúng tơi phát trường hợp nhiễm HIV giai đoạn cửa sổ người cho máu mà phương pháp huyết học miễn dịch gắn men (ELISA) điện hóa miễn dịch gắn men (CMIA) chưa phát Việc mang ý nghĩa to lớn việc đảm bảo an toàn truyền máu cho bệnh nhân ngăn chặn kịp thời nguy lây truyền HIV lần khẳng định tính cần thiết việc áp dụng kỹ thuật NAT xét nghiệm sàng lọc máu Từ khóa: Miễn dịch gắn men (ELISA); Miễn dịch điện hóa phát quang (CMIA); Nucleic acid testing (NAT) SUMMARY ONE CASE REPORT: DETECTION HIV IN WINDOW PERIOD BY NUCLEIC ACID TESTING (NAT) AT CHO RAY BLOOD TRANSFUSION CENTER Pham Le Nhat Minh, Nguyen Thuy Huong, Tran Van Bao, Phan Thi My Kim, Nguyen Thi Kieu * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 19 - No - 2015: 105 - 109 Cho Ray Blood Transfusion Center has applied Nucleic Acid Testing (NAT) to screening donated blood for Transfusion Transmissible Infections (TTIs) from June, 2015 This techinique has the advantage of detecting virus in window period which serology methods such as Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) and Chemiluminescent Immuno Assay (CMIA) could not detected In this study, we would like to report a special case that NAT detected HIV in window period It is necessary to apply NAT to screening donated blood to ensure safety on blood transfusion Key words: Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA), Chemiluminescent Immuno Assay (CMIA); Nucleic acid testing (NAT) pháp áp dụng xét nghiệm sàng lọc ĐẶT VẤN ĐỀ máu, nhiên phương pháp Máu dược phẩm tự nhiên quý chưa thể phát diện vi công tác điều trị bệnh An toàn truyền rút giai đoạn cửa sổ Việc áp dụng kỹ thuật máu nội dung nhiều người quan Nucleic Acid Testing (NAT) giúp sớm phát tâm, có việc đảm bảo đơn vị máu chất liệu di truyền vi rút không bị nhiễm bệnh lây qua đường đơn vị máu hiến giai đoạn cửa sổ để từ truyền máu HBV, HCV đặc biệt góp phần đảm bảo An tồn truyền máu HIV Từ trước đến nay, có nhiều phương * Trung tâm truyền máu BV Chợ Rẫy ** Đại học Bách khoa TP.HCM Tác giả liên lạc: KS Phạm Lê Nhật Minh, ĐT: 0919223989 Email: stevenminh79@yahoo.com 105 Nghiên cứu Y học TRƯỜNG HỢP BỆNH Thông tin chung người cho máu Người cho máu tên Nguyễn Văn A, sinh năm 1967, giới tính Nam, cân nặng 64kg Hiến máu vào quý 3/2015 tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu Nghề nghiệp: cơng nhân viên Tình trạng nhân: Đang sống độc thân Theo bảng câu hỏi tự sàng lọc người cho máu tự trả lời trước hiến máu nhận thấy khơng có hành vi nguy Kết khám tuyển trước hiến máu đạt yêu cầu đủ điều kiện cho máu Kết xét nghiệm sàng lọc Vật liệu, thuốc thử trang thiết bị ml máu đông 4ml máu chống đông EDTA người hiến máu Sinh phẩm xét nghiệm HIV kỹ thuật miễn dịch gắn men (ELISA) hệ thống xét nghiệm miễn dịch tự động ETIMAX: Murex HIV Ag/Ab combi Sinh phẩm xét nghiệm HIV kỹ thuật miễn dịch điện hóa phát quang (CMIA) hệ thống xét nghiệm tự động Architect I2000SR Abbott: Architect HIV Ag/Ab Combo Bộ sinh phẩm phát nucleic acid vi rút có khả phát đồng thời DNA HBV, RNA HCV HIV-1, HIV-2 hệ Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số * 2015 thống phân tích tự động cobas® TaqScreen MPX, phiên 2.0 Roche Phương thức xét nghiệm sàng lọc máu Thực xét nghiệm sàng lọc kháng nguyên-kháng thể HIV phương pháp huyết học cho mẫu máu hiến Mẫu thử có kết âm tính với phương pháp huyết học xét nghiệm kỹ thuật NAT gộp chung mẫu (minipool 6) phát đồng thời DNA HBV, RNA HCV HIV-1, HIV-2 Nếu kết gộp mẫu cho kết dương tính làm riêng mẫu (individual) để xác nhận mẫu dương tính Kết xét nghiệm Kết xét nghiệm lần đầu Bảng 1: Kết xét nghiệm HIV kỹ thuật ELISA, CMIA NAT (mẫu gộp 6) Kỹ thuật ELISA (Murex CMIA NAT (DNA-HBV; xét HIV Ag/Ab (Architect HIV RNA-HCV; RNAnghiệm combi) Ag/Ab HIV1/HIV2) Combo) (Mẫu gộp 6) Kết Âm tính Âm tính Dương tính HIV (OD/COV: (S/CO: 0,15) (Phát chu 0,12) kỳ 36,8) Nhận xét: Kết xét nghiệm HIV kỹ thuật ELISA CMIA cho kết âm tính Riêng kỹ thuật NAT (mẫu gộp 6) cho kết Dương tính với HIV chu kỳ 36,8 HIV Đối chứng nội Cường độ huỳnh quang Chu kỳ Biểu đồ Kết đo kỹ thuật NAT (mẫu gộp 6) Qua biểu đồ thể kết đo kỹ thuật NAT (mẫu gộp 6) lần lấy mẫu đầu nhận 106 thấy HIV phát chu kỳ 36,8 so với đối chứng nội phát chu kỳ 35,1 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số * 2015 Bảng Kết xét nghiệm HIV kỹ thuật NAT (riêng rẽ) Kỹ thuật xét nghiệm Kết NAT (RNA-HIV1/HIV2) (Riêng rẽ mẫu) Dương tính HIV (Phát chu kỳ 34,1) Nghiên cứu Y học Nhận xét: Kết xét nghiệm HIV kỹ thuật NAT thực riêng rẽ cho kết Dương tính với HIV chu kỳ 34,1 Đối chứng nội HIV Cường độ huỳnh quang Chu kỳ Biểu đồ Kết đo kỹ thuật NAT (riêng rẽ) lần đầu Qua biểu đồ thể kết đo kỹ thuật NAT (riêng rẽ) lần lấy mẫu đầu nhận thấy HIV phát chu kỳ 34,1 so với đối chứng nội phát chu kỳ 34,6 Kết xét nghiệm mẫu lấy lại lần 2(cách lần đầu 09 ngày) Bảng Kết xét nghiệm HIV kỹ thuật ELISA, CMIA NAT (làm riêng rẽ) combi) Kết Dương tính (OD/COV: 2,87) Ag/Ab HIV1/HIV2) Combo) (Riêng rẽ mẫu) Dương tính Dương tính HIV (S/CO: 16,67) (Phát chu kỳ 19,2) Nhận xét: Kết xét nghiệm HIV kỹ thuật ELISA, CMIA NAT (riêng rẽ) lần lấy mẫu thứ hai cách lần lấy mẫu đầu ngày cho kết Dương tính với HIV Kỹ thuật ELISA (Murex CMIA NAT (DNA-HBV; xét nghiệm HIV Ag/Ab (Architect HIV RNA-HCV; RNA Đối chứng nội HIV Cường độ huỳnh quang Chu kỳ Biểu đồ 3: Kết đo kỹ thuật NAT (riêng rẽ) 107 Nghiên cứu Y học Qua biểu đồ thể kết đo kỹ thuật NAT (riêng rẽ) lần lấy mẫu thứ hai cách lần lấy mẫu đầu ngày, nhận thấy HIV phát chu kỳ 19,2 so với đối chứng nội phát chu kỳ 35,3 BÀN LUẬN Ở mẫu thử lần đầu, kỹ thuật ELISA CMIA không phát diện HIV Tuy nhiên, kỹ thuật NAT lại phát HIV chu kỳ 36,8 mẫu gộp Tiếp tục kiểm tra lại mẫu riêng rẽ phát HIV chu kỳ 34,1 Như vậy, người cho máu nhiễm HIV giai đoạn cửa sổ Giai đoạn cửa sổ thời gian từ vi rút xâm nhập vào thể vật chủ, dấu ấn có tác dụng điểm cho việc chẩn đoán chưa xuất xuất tỷ lệ thấp mà kỹ thuật xét nghiệm phương pháp huyết học không phát diện HIV Trong giai đoạn này, lấy máu người hiến máu truyền cho bệnh nhân bệnh nhân có khả bị lây nhiễm HIV kết xét nghiệm sàng lọc âm tính(2) Vào ngày sau, mẫu thử lấy lại kiểm tra đồng thời kỹ thuật ELISA, CMIA NAT Nhận thấy ba kỹ thuật cho kết dương tính với HIV, đặc biệt kỹ thuật NAT sớm phát diện HIV chu kỳ 19,2 Kết lần khẳng định kỹ thuật NAT giúp phát người cho máu nhiễm HIV giai đoạn cửa sổ Việc phát sớm diện HIV giai đoạn cửa sổ kỹ thuật NAT góp phần mang lại ý nghĩa to lớn cho cơng tác An tồn truyền máu để từ chọn cho bệnh nhân đơn vị máu an toàn điều trị bệnh Bên cạnh đó, độ nhạy kỹ thuật NAT thực hệ thống phân tích tự động cobas® TaqScreen MPX, phiên 2.0 Roche cao, phát diện vi rút HIV1 nhóm M nồng độ 50,3UI/mL (theo chuẩn WHO), HIV1 nhóm O nồng độ 18,3 copies/mL HIV2 nồng độ 57,4 copies/mL (theo chuẩn Roche)(1) 108 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số * 2015 Đây trường hợp phát nhiễm HIV giai đoạn cửa sổ khoảng 24000 mẫu thử xét nghiệm kỹ thuật NAT Trung tâm truyền máu Chợ Rẫy Với phương cách xét nghiệm dùng phương pháp huyết học để sàng lọc trước, sau mẫu thử có kết âm tính kiểm tra lại kỹ thuật NAT tỷ lệ phát HIV 1:24000 cao so với nghiên cứu tác giả khác Tại Nhật, nghiên cứu tác giả H Ohnuma cộng thực hội Chữ thập đỏ dịch vụ truyền máu Nhật Bản từ tháng 02/2001 với triệu đơn vị máu có kết âm tính với phương pháp huyết học, kiểm tra Kỹ thuật NAT có mẫu cho kết dương tính với HIV(3) Theo nghiên cứu khác Ngân hàng máu Thái Lan thực năm 2007 với 242363 mẫu thử có kết âm tính với xét nghiệm huyết học, xét nghiệm kỹ thuật NAT có mẫu dương tính với HIV(4) Như việc áp dụng kỹ thuật NAT xét nghiệm sàng lọc máu lựa chọn đắn việc đảm bảo An toàn truyền máu cho bệnh nhân KẾT LUẬN Kỹ thuật NAT giúp phát sớm diện HIV giai đoạn cửa sổ phương pháp huyết học ELISA CMIA không phát Việc áp dụng kỹ thuật NAT sàng lọc máu mang lại ý nghĩa to lớn việc đảm bảo chất lượng đơn vị máu lần khẳng định tính giá trị xét nghiệm việc góp phần đảm bảo An tồn truyền máu TÀI LIỆU THAM KHẢO Cobas® TaqScreen MPX Test (2014), Version 2.0 for use on the cobas s 201 system Package insert Đỗ Trung Phấn (2012) Sàng lọc bệnh nhiễm trùng người cho máu Truyền máu đại: Cập nhật ứng dụng điều trị bệnh Nhà xuất giáo dục Trang 405-420 Ohnuma H, Yoshikawa TA et al (2001) The first large-scale nucleic acid amplification testing (NAT) of donated blood using multiplex reagent for simultaneous detection of HBV, HCV, and HIV-1 and significance of NAT for HBV Microbiol Immunol 45:667-672 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số * 2015 Soisaang P, Sineenart O, Thaweesak T, Tasanee S, Wilai C, Suda L, Srivilai T, Viroje C, Pimpun K, Praphan P, Chantapong W, Chaivej N, and the Working Group for NAT Study in Thai Blood Donations (2009) One-year experience of nucleic acid technology testing for human immunodeficiency virus Type 1, hepatitis C virus, and hepatitis B virus in Thai blood donations Transfusion Vol49: 1126-1135 Nghiên cứu Y học Ngày nhận báo: 07/10/2015 Ngày phản biện nhận xét báo: 10/10/2015 Ngày báo đăng: 05/11/2015 109 ... máu nhiễm HIV giai đoạn cửa sổ Việc phát sớm diện HIV giai đoạn cửa sổ kỹ thuật NAT góp phần mang lại ý nghĩa to lớn cho cơng tác An tồn truyền máu để từ chọn cho bệnh nhân đơn vị máu an toàn điều... TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số * 2015 Đây trường hợp phát nhiễm HIV giai đoạn cửa sổ khoảng 24000 mẫu thử xét nghiệm kỹ thuật NAT Trung tâm truyền máu Chợ Rẫy Với phương cách xét nghiệm dùng phương... thời kỹ thuật ELISA, CMIA NAT Nhận thấy ba kỹ thuật cho kết dương tính với HIV, đặc biệt kỹ thuật NAT sớm phát diện HIV chu kỳ 19,2 Kết lần khẳng định kỹ thuật NAT giúp phát người cho máu nhiễm HIV