Phát hiện mất đoạn 9 BP trong hệ gen ty thể ở một số bệnh nhân nghi hội chứng cơ não

Trong nghiên cứu này, 72 bệnh nhân tuổi dưới 20 nghi mắc hội chứng bệnh cơ não đã được kiểm tra sự có mặt của đột biến A8344G của hội chứng MERRF, đột biến A3243G của hội chứng MELAS và sự mất đoạn 9 bp giữa gen COII và gen mã hóa cho tRNALys bằng kỹ thuật PCR-RFLP và xác định trình tự nucleotide. DNA của máu ngoại vị được sử dụng làm khuôn cho phản ứng PCR nhân đoạn gen 212 bp từ vị trí 8155 đến vị trí 8366 trong hệ gen ty thể. Bằng ñiện di gel polyacrylamide, 23 mẫu được phát hiện là có băng DNA nhân bản chạy nhanh hơn các mẫu còn lại.

TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(2): 246-252 PHÁT HIỆN MẤT ĐOẠN BP TRONG HỆ GEN TY THỂ Ở MỘT SỐ BỆNH NHÂN NGHI HỘI CHỨNG CƠ NÃO Trương Thị Huệ1, Phạm Minh Huệ1, Lê Ngọc Yến1, Phạm Thị Vân Anh2, Ngơ Diễm Ngọc2, Phan Tuấn Nghĩa1* (1) Trường đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG Hà Nội, (*)phantn@fpt.vn (2) Bệnh viện Nhi Trung ương TĨM TẮT: Các đột biến hệ gen ty thể nguyên nhân nhiều bệnh khác nhau, ñặc biệt bệnh não người Mặc dù vậy, việc chẩn đốn bệnh thường khó xác thơng qua xét nghiệm lâm sàng Phân tích DNA phương pháp xác để phát đột biến hệ gen ty thể Trong nghiên cứu này, 72 bệnh nhân tuổi 20 nghi mắc hội chứng bệnh não kiểm tra có mặt đột biến A8344G hội chứng MERRF, ñột biến A3243G hội chứng MELAS ñoạn bp gen COII gen mã hóa cho tRNALys kỹ thuật PCR-RFLP xác định trình tự nucleotide DNA máu ngoại vị sử dụng làm khn cho phản ứng PCR nhân đoạn gen 212 bp từ vị trí 8155 đến vị trí 8366 hệ gen ty thể Bằng ñiện di gel polyacrylamide, 23 mẫu ñược phát có băng DNA nhân chạy nhanh mẫu lại Các sản phẩm PCR cắt enzyme BanII khẳng ñịnh sai khác mẫu Sản phẩm PCR 23 mẫu bệnh nhân nghi ngờ chứa ñột biến với bố mẹ bệnh nhân nhân dòng vào vector pGEM, plasmid tái tổ hợp tách xác định trình tự Kết giải trình tự cho thấy, 23 mẫu bệnh nhân nghi ngờ có chứa đột biến đoạn bp CCCCCTCTA so với trình tự chuẩn cơng bố (J01415.2), ñột biến ñoạn ñược di truyền từ mẹ cho tất ñều dạng ñồng Kết nghiên cứu rằng, bệnh nhân số 72 bệnh nhân mang ñột biến A8344G hội chứng MERRF, có bệnh nhân nam vừa mang ñột biến A3243G hội chứng MELAS vừa mang ñột biến ñoạn bp, chứng tỏ khơng có tương quan tin cậy tượng ñoạn bp CCCCCTCTA ñột biến A8344G hội chứng MERRF hay ñột biến A3243G hội chứng MELAS Từ khoá: DNA ty thể, ñoạn bp, bệnh não ty thể MỞ ĐẦU Ty thể quan tử có mặt tất tế bào có nhân với chức sản xuất lượng dạng ATP cho tế bào Hệ gen ty thể DNA dạng vòng, có kích thước 16.569 bp, gồm 37 gen mã hóa cho 13 chuỗi polypeptide, 22 tRNA rRNA khác liên quan ñến hoạt ñộng chức ty thể [1] So với DNA nhân tế bào DNA ty thể dễ bị tổn thương môi trường giàu chất oxy phản ứng ty thể thiếu chế sửa chữa hiệu Hơn 300 ñột biến khác hệ gen ty thể ñã ñược xác ñịnh kể từ ñột biến ñầu tiên ñược phát vào năm 1988 [8] Nghiên cứu ñột biến hệ gen ty thể cho phép phát nguyên nhân nhiều bệnh khác Hiện tượng ñoạn bp (CCCCCTCTA) vùng gen cytochrome oxidase II tRNALys hệ gen ty thể ñược xem dạng ñột biến hệ gen ty thể có tỷ lệ cao quần thể người Đơng Nam Á [7] Mất đoạn 246 bp hệ gen ty thể di truyền theo dòng mẹ, cơng cụ hữu ích để kiểm tra mối quan hệ di truyền cá thể [5, 6] Tuy nhiên, nay, chưa có thơng tin liên quan ñoạn bp với tình trạng bệnh lý đặc trưng Ivanova et al (1999) [2] bước ñầu ñã nghiên cứu DNA ty thể người Việt Nam phát số trường hợp ñoạn bp nêu trên, vậy, tác giả chưa có nhận xét tượng ñoạn với triệu chứng bệnh ty thể Trong nghiên cứu này, kết hợp việc sàng lọc ñột biến A3243G thuộc hội chứng MELAS ñột biến A8344G thuộc hội chứng MERRF bệnh nhân nghi bị bệnh não với tượng ñoạn bp với hy vọng tìm liên quan loại đột biến hội chứng bệnh ty thể PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu hóa chất thiết bị Truong Thi Hue et al Mẫu máu ngoại vi 72 bệnh nhân, tuổi 20 chẩn đốn lâm sàng bị bệnh não phổ biến ñược Bệnh viện Nhi Trung ương cung cấp Bộ kit tách chiết DNA ñược mua từ hãng Qiagen, cặp mồi ñặc hiệu ñược ñặt mua từ hãng Integrated DNA Technologies (IDT) Enzyme giới hạn ñược mua từ New England Biolabs Fermentas Hóa chất cho giải trình tự gen hãng Beckman Coulter Các hóa chất lại đạt độ tinh khiết dùng cho nghiên cứu sinh học phân tử Phương pháp DNA tổng số ñược tách theo kit Qiagen Để phát ñột biến A8344G thuộc hội chứng MERRF ñột biến ñoạn bp (CCCCCTCTA) vùng gen cytochrome oxidase II tRNALys hệ gen ty thể, đoạn DNA ty thể (chứa trình tự CCCCCTCTA vùng gen cytochrome oxidase II tRNALys) dài 212 bp từ vị trí 8155-8366, nhân phản ứng chuỗi polymerase (PCR) với cặp mồi DELFw-5’GGT ATA CTA CGG TCA ATG CTC 3’ (8155-8175) DELRv5’ TTT CAC TGT AAA GAG GTGTGG G 3’ (8366-8345) theo trình tự Anderson et al (1981) [1], nucleotide không ghép cặp gạch chân Mồi ngược chứa nucleotide khơng bắt cặp (T thay G) vị trí 8347, tạo ñiểm cắt cho enzyme BanII tRNALys bị ñột biến ñể bộc lộ sai khác có khơng có đột biến A8344G Các thành phần PCR (25 µl) gồm 30 ng DNA khn, 50 ng mồi xuôi 50 ng mồi ngược, ñơn vị Taq DNA polymerase dNTP nồng ñộ cuối 0,2 mM PCR ñược thực với chế ñộ nhiệt: 94oC, phút, tiếp nối 35 chu kỳ với 94oC, 10 giây để biến tính, 58oC, phút ñể gắn mồi 72oC, phút ñể kéo dài chuỗi Sản phẩm PCR ñược phân cắt enzyme BanII, DNA khơng đột biến chứa vị trí nhận biết BanII, ñược cắt thành 99 bp, 41 bp 72 bp Nếu DNA đột biến băng 72 bp cắt thành băng có kích thước 52 bp 20 bp Sản phẩm cắt ñược ñiện di gel polyacrylamide 10% ñệm Tris- Boric- EDTA, pH 8,0 Đột biến MELAS A3243G ñược phát PCR-RFLP mơ tả nghiên cứu trước ñây [4] Sản phẩm PCR nghi chứa ñột biến ñoạn ñược nhân dòng vào vector pGEM biến nạp vào tế bào E coli khả biến DH5α Plasmid tái tổ hợp ñược tách, cắt kiểm tra enzyme giới hạn xác định trình tự hệ thống máy tự ñộng CEQ 8000 (Beckman Coulter) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Phát ñột biến ñoạn phương pháp PCR-RFLP Đầu tiên, chúng tơi tiến hành điều tra có mặt đột biến A8344G 72 bệnh nhân nghi bị hội chứng não (bảng 1) Chúng tơi sử dụng kỹ thuật PCR với cặp mồi ñược thiết kế ñể nhân ñoạn gen từ 8155-8366 (212 bp) từ hệ gen ty thể bệnh nhân 212 bp Hình Kết điện di sản phẩm PCR nhân ñoạn gen chứa ñột biến Giếng 1: Thang chuẩn DNA; Giếng 2: Đối chứng âm; Giếng 3-9: Sản phẩm PCR từ mẫu DNA bệnh nhân Hình kết ñiện di sản phẩm PCR số bệnh nhân nghiên cứu, cụ thể, chúng tơi ñã nhân thành công ñoạn DNA ñặc hiệu với kích thước 212 bp tính tốn lý 247 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(2): 246-252 thuyết (các mẫu giếng 5), đồng thời chúng tơi phát thấy 23 trường hợp (gồm 15 nam nữ) có băng nhân chạy nhanh (ñược minh họa mẫu giếng 3, 6-9, hình 1), chứng tỏ có kích thước ngắn gợi ý khả ñoạn bp mẫu phát ñược sai khác tổng số 72 mẫu nghiên cứu, ñiều chứng tỏ đối tượng khơng mang đột biến A8344G Tuy vậy, kết ñiện di sản phẩm PCR cắt BanII (hình 2) cho thấy, mẫu có băng nhân chạy chậm thu hình (giếng 5) có băng 99 bp, 72 bp 41 bp theo tính tốn lý thuyết, mẫu cho băng nhân chạy nhanh (giếng 3, 6-9) có băng 99 bp, 72 bp băng ngắn băng 41 bp Kết lần gợi ý khả đoạn bp Ngồi ra, kết hình cho thấy, mẫu nghi ñoạn ñều khơng có băng 41 bp, chứng tỏ tính đồng loại cấu trúc tất copy DNA ty thể Để phát ñột biến A8344G, sản phẩm PCR ñược cắt trực tiếp enzyme BanII Theo cách thiết kế thí nghiệm, sản phẩm PCR người khơng mang đột biến A8344G có băng 99 bp, 72 bp 41 bp, có đột biến A8344G sản phẩm PCR có băng 99 bp, 52 bp, 20 bp 41 bp (băng 72 bp ñược cắt thành băng 52 bp 20 bp) Chúng tơi khơng bp 212 99 72 41 Hình Kết điện di sản phẩm PCR ñược cắt BanII số bệnh nhân Thang chuẩn DNA; Sản phẩm PCR không cắt BanII; 3-9 Sản phẩm PCR từ mẫu DNA bệnh nhân ñược cắt BanII A bp B bp 212 212 99 72 99 72 41 41 Hình Kết điện di sản phẩm PCR ñược cắt enzym BanII Thang chuẩn DNA; Sản phẩm PCR không cắt BanII, 3A-8A: Sản phẩm PCR ñược cắt BanII tương ứng bệnh nhân, mẹ bệnh nhân bố bệnh nhân gia đình I gia đình II, 3B-5B: Sản phẩm PCR ñược cắt BanII tương ứng bệnh nhân, mẹ bệnh nhân bố bệnh nhân gia đình III Để khẳng định tính chất di truyền theo dòng mẹ gen hệ gen ty thể Chúng tơi kiểm tra gia đình (ký hiệu I, II III) số 248 gia đình có bệnh nhân mang dấu hiệu ñoạn phát ñược qua PCR Kết điện di hình cho thấy, sản phẩm PCR với Truong Thi Hue et al mẫu DNA khuôn bố bệnh nhân gia đình sau cắt BanII có băng DNA 99 bp, 72 bp 41 bp giống mẫu bình thường (hình 3A, giếng giếng 8; hình 3B, giếng 5) Trong đó, sản phẩm PCR với DNA khuôn mẹ bệnh nhân gia đình cắt BanII cho phổ băng DNA có kích thước giống mẫu bệnh nhân chứa ñột biến ñoạn (hình 3A, giếng giếng 7; hình 3B, giếng 4) Kết chứng tỏ tương đồng kích thước đoạn gen nhân mẹ A [95.283%/212 bp] bệnh nhân Xác ñịnh trình tự nucleotide ñoạn gen nhân nghi ñoạn Để khẳng ñịnh chắn tồn đột biến đoạn kích thước đoạn mất, chúng tơi tiến hành giải trình tự đoạn DNA có kích thước 212 bp từ vector pGEM tái tổ hợp Kết giải trình tự so sánh với trình tự đoạn gen tương ứng cơng bố ngân hàng gen giới với mã số J01415.2 phần mềm Genetyx INT/OPT.Score : 1' GGTATA ****** 8101" AGATGCAATTCCCGGACGTCTAAACCAAACCACTTTCACCGCTACACGACCGGGGGTATA 7' CTACGGTCAATGCTCTGAAATCTGTGGAGCAAACCACAGTTTCATGCCCATCGTCCTAGA ************************************************************ 8161" CTACGGTCAATGCTCTGAAATCTGTGGAGCAAACCACAGTTTCATGCCCATCGTCCTAGA 67' ATTAATTCCCCTAAAAATCTTTGAAATAGGGCCCGTATTTACCCTATAGCA *************************************************** 8221" ATTAATTCCCCTAAAAATCTTTGAAATAGGGCCCGTATTTACCCTATAGCACCCCCTCTA 118' CCCCCTCTAGAGCCCACTGTAAAGCTAACTTAGCATTAACCTTTTAAGTTAAAGATTAAG ************************************************************ 8281" CCCCCTCTAGAGCCCACTGTAAAGCTAACTTAGCATTAACCTTTTAAGTTAAAGATTAAG 178' AGAACCCACACCTCTTTACAGTGAAA ****** ******************* 8341" AGAACCAACACCTCTTTACAGTGAAATGCCCCAACTAAATACTACCGTATGGCCCACCAT B [99.528%/212 bp] 1' 8101" 7' 8161" 67' 8221" 127' 8281" INT/OPT.Score : < 842/842 GGTATA ****** AGATGCAATTCCCGGACGTCTAAACCAAACCACTTTCACCGCTACACGACCGGGGGTATA CTACGGTCAATGCTCTGAAATCTGTGGAGCAAACCACAGTTTCATGCCCATCGTCCTAGA ************************************************************ CTACGGTCAATGCTCTGAAATCTGTGGAGCAAACCACAGTTTCATGCCCATCGTCCTAGA ATTAATTCCCCTAAAAATCTTTGAAATAGGGCCCGTATTTACCCTATAGCACCCCCTCTA ************************************************************ ATTAATTCCCCTAAAAATCTTTGAAATAGGGCCCGTATTTACCCTATAGCACCCCCTCTA CCCCCTCTAGAGCCCACTGTAAAGCTAACTTAGCATTAACCTTTTAAGTTAAAGATTAAG ************************************************************ CCCCCTCTAGAGCCCACTGTAAAGCTAACTTAGCATTAACCTTTTAAGTTAAAGATTAAG 187' AGAACCCACACCTCTTTACAGTGAAA ****** ******************* 8341" AGAACCAACACCTCTTTACAGTGAAATGCCCCAACTAAATACTACCGTATGGCCCACCAT Hình Kết so sánh trình tự nucleotide đoạn gen 8155-8366 ty thể bệnh nhân so với trình tự gen chuẩn cơng bố A Trình tự nucleotide trường hợp có băng PCR nhân chạy nhanh; B Trình tự nucleotide trường hợp có băng PCR nhân chạy chậm Kết so sánh ñoạn gen quan tâm (hình 4) cho thấy, đoạn gen nghiên cứu từ mẫu bệnh nhân có sai khác so với trình tự chuẩn cơng bố, vị trí 8347 chúng tơi chủ động thay 249 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(2): 246-252 nucleotide trình thiết kế mồi nên có sai khác so với trình tự gen chuẩn (C thành A), mẫu có băng DNA nhân chạy nhanh bị bp với trình tự CCCCCTCTA (8272-8280) so với mẫu chuẩn so với mẫu có băng DNA nhân chạy chậm phát hình Chúng tơi giải trình tự đoạn gen từ bố mẹ bệnh nhân, kết thu (khơng nêu đây) cho thấy, tượng đoạn có DNA ty thể mẹ khơng có bố bệnh nhân, phù hợp với kết PCR PCR-RFLP ban đầu Điều khẳng định tính chất di truyền theo dòng mẹ gen hệ gen ty thể Kết giải trình tự đoạn DNA (8155-8366) hệ gen ty thể ñã chứng tỏ việc phát bệnh nhân có đột biến ñoạn theo phương pháp PCR-RFLP tin cậy A B Hình Một phần trình tự nucleotide đoạn DNA ty thể (8155-8366) A Đoạn DNA ty thể chứa ñột biến ñoạn; B Đoạn DNA ty thể không chứa đột biến đoạn Bảng Thơng tin bệnh nhân kết xác ñịnh ñột biến gen ty thể Số lượng 72 Giới tính Nam Nữ 42 30 Kết xác ñịnh ñoạn bp 23 (31,9%) (15 nam nữ) Kết xác ñịnh ñột biến ñoạn bp 72 bệnh nhân ñược nghiên cứu (bảng 1) cho thấy rằng, số 72 bệnh nhân nghi bị bệnh não có tới 23 hay 31,9% bệnh nhân có tượng đoạn bp hệ gen ty thể Trong số có tới 15 bệnh nhân nam có bệnh nhân nữ Ngồi ra, điều tra có mặt ñột biến A3243G thuộc hội chứng MELAS, phát thấy bệnh nhân nam vừa mang đột biến A3243G vừa có tượng đoạn bp 250 Ghi nam có chứa ñoạn bp ñồng thời mang ñột biến MELAS A3243G Zhuo et al (2010) [8] xác ñịnh liên quan tượng ñoạn bp CCCCCTCTA bệnh nhân đa nang buồng trứng thấy tỷ lệ có đoạn 23,5%, so với người khỏe mạnh tỷ lệ có 7,1% tác giả nhận định có liên quan ñoạn bệnh ña nang buồng trứng Theo nghiên cứu trước ñây Ivanova et al (1999) [2] cho thấy, tỷ lệ ñoạn bp vùng gen COII tRNALys người Việt Nam khỏe mạnh 20%, nghiên cứu Liu et al (2005) [3] Truong Thi Hue et al bệnh nhân người Đài Loan thuộc hội chứng MELAS MERRF cho thấy tỷ lệ ñoạn bp 47%, đó, tỷ lệ người khỏe mạnh 21% Một số tác giả cho có bất ổn ñịnh vùng gen COII/tRNALys bệnh nhân bị bệnh ty thể điểm nóng cho đoạn [8] Trong nghiên cứu này, chúng tơi chưa phát thấy liên quan tin cậy tượng ñoạn bp với mức ñộ bị ñột biến A3243G hội chứng MELAS hay ñột biến A8344G thuộc hội chứng MERRF Hiện tượng ñoạn bp hệ gen ty thể có lẽ di truyền với số ñột biến DNA ty thể gây bệnh q trình di truyền tiến hóa lâu dài hệ gen ty thể Tuy nhiên, cần có nghiên cứu dịch tể học phân tử bệnh ty thể ñể khẳng ñịnh chắn mối liên quan ñoạn bp hệ gen ty thể xuất bệnh ty thể người Việt Nam KẾT LUẬN Hiện tượng ñoạn bp hệ gen ty thể phát nhanh xác phương pháp PCR-RFLP Sử dụng phương pháp thiết lập được, chúng tơi phát 23 trường hợp ñoạn bp (8272-8280) hệ gen ty thể tổng số 72 bệnh nhân nghi hội chứng não ty thể, chiếm 31,9% Các trường hợp ñoạn bp hệ gen ty thể phát ñược 23 bệnh nhân ñều thể tính chất di truyền theo dòng mẹ dạng ñồng (homoplasmy) Lời cảm ơn: Các tác giả chân thành cảm ơn Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) tài trợ kinh phí (Đề tài mã số 106.06.123.09) ñể thực nghiên cứu này, cám ơn Bệnh viện Nhi Trung ương ñã cung cấp mẫu bệnh phẩm and organization of the human mitochondrial genome Nature., 290: 457465 Ivanova R., Astrinidis A., Lepage V., Djoulah S., Wijnen E., Vu-Trieu A., Hors J., Charron D., 1999 Mitochondrial DNA polymorphism in the Vietnamese population Eur J Immunogenet., 26: 417-422 Liu C S., Cheng W L., Chen Y Y., Ma Y S., Pang C Y., Wei Y H., 2005 High prevalence of the COII/tRNALys intergenic 9-bp deletion in mitochondrial DNA of Taiwanese patients with MELAS or MERRF syndrome Ann N.Y Acad Sci., 1042: 82-87 Trịnh Lê Phương, Chu Văn Mẫn Phan Tuấn Nghĩa, 2009 Phân tích đột biến gen A3243G hội chứng MELAS phương pháp PCR-RFLP cải tiến Tạp chí Di truyền học Ứng dụng, 4: 6-9 Vassilina A S., Vadim B V., Thomas D., Catherine H., Dominique R., Catherine G., 2002 A Russian family of Slavic origin carrying mitochondrial DNA with a 9-bp deletion in region V and a long C-stretch in D-loop Mitochondrion, 1: 479-483 Watkins W S., Bamshad M., Dixon M E., Rao B B., Naidu J M., Reddy P G., Prasad B V R., Das P K., Reddy P C., Gai P B., Bhanu A., Kusuma Y S., Lum J K., Fischer P., Jorde L B., 1999 Multiple Origins of the mtDNA 9-bp Deletion in Populations of South India Am J Phys Anthropol., 109: 147-158 TÀI LIỆU THAM KHẢO Yao Y G., Watkins W S., Zhang Y P., 2000 Evolutionary history of the mtDNA 9bp deletion in Chinese populations and its relevance to the peopling of east and southeast Asia Hum Genet., 107: 504-512 Anderson S., Bankier A T., Barrell B G., deBruijin M H., Coulson A R., Drouin J., Eperon I C., Nierlich D P., Rose B A., Sanger F., Schreier P H., Smith A J H., Staden R and Young I G., 1981 Sequence Zhuo G., Feng G., Leng J., Yu L., Jiang Y., 2010 A 9-bp deletion homoplasmy in women with polycystic ovary syndrome revealed by mitochondrial genome-mutation screen Biochem Genet., 48: 157-163 251 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(2): 246-252 DETECTION OF 9-BP DELETION IN MITOCHONDRIAL GENOME IN VIETNAMESE PATIENTS WITH SUSPECTED MITOCHONDRIAL ENCEPHALOMYOPATHY Truong Thi Hue1, Pham Minh Hue1, Le Ngoc Yen1, Pham Thi Van Anh2, Ngo Diem Ngoc2, Phan Tuan Nghia1 (1) Hanoi University of Science, VNU (2) National Hospital of Pediatrics SUMMARY Mutations in the mitochondrial genome are the cause of many diffenrent diseases, especially encephalomyophathies in humans However, it is difficult to diagnose the diseases with clinal examinations DNA analysis is the most reliable method for detection of the mutations In this study, 72 patients under 20 years old with encephalomyopathies were checked for the presence of the A8344G mutation of MERRF syndrome, the A3243G mutation of MELAS syndrome and a 9-bp deletion between the COII and tRNALysgenes in their mitochondrial genome by using PCR-RFLP and DNA sequencing methods DNA from peripheral blood samples was used as templates for PCR amplification of mitochondrial DNA (212 bp) fragment starting from 8155 to 8366 position of the human mitochondrial genome By the polyacrylamide gel electrophoresis, 23 samples were shown to have a bit faster running amplified DNA band than the others The PCR products were then digested with BanII restriction enzyme, the BanII-digested PCR products again confirmed the difference between the samples The PCR products of the 23 suspected samples and those from their parents were cloned into pGEM vector, recombinant plasmids were isolated and used for nucleotide sequencing analysis The obtained nucleotides of the 23 suspected samples were shown to have a bp deletion (CCCCCTCTA) compared with the published reference sequence (J01415.2) and this deletion was inherited from the mother to her child(ren), and appeared in homoplasmy in all the cases It was also found from this study that none of the 72 subjects carried the A8344G mutation of MERRF syndrome, but only one male patient carried both the bp deletion and A3243G mutation of MELAS syndrome, indicating that there is no reliable relation between the bp (CCCCCTCTA) deletion and A8344G or A3243G mutations Keywords: Mitochondrial DNA, 9-bp deletion, mitochondrial encephalomyopathy Ngày nhận bài: 15-7-2011 252 ... phát 23 trường hợp ñoạn bp (8272-8280) hệ gen ty thể tổng số 72 bệnh nhân nghi hội chứng não ty thể, chiếm 31 ,9% Các trường hợp ñoạn bp hệ gen ty thể phát ñược 23 bệnh nhân thể tính chất di truyền... quan ñoạn bp hệ gen ty thể xuất bệnh ty thể người Việt Nam KẾT LUẬN Hiện tượng đoạn bp hệ gen ty thể phát nhanh xác phương pháp PCR-RFLP Sử dụng phương pháp thiết lập được, chúng tơi ñã phát 23... ñoạn bp 23 (31 ,9% ) (15 nam nữ) Kết xác ñịnh ñột biến ñoạn bp 72 bệnh nhân ñược nghi n cứu (bảng 1) cho thấy rằng, số 72 bệnh nhân nghi bị bệnh não có tới 23 hay 31 ,9% bệnh nhân có tượng ñoạn bp hệ