Ở Việt Nam, phương pháp phát sinh phôi soma đã được áp dụng thành công trên cây Cọc rào. Nghiên cứu này trình bày kết quả nghiên cứu về ảnh hưởng của một số acid amin và spermidin trong việc gia tăng tần suất phát sinh phôi từ mô sẹo của cây Cọc rào. Một số acid amin và spermidin ở các nồng độ khác nhau [prolin (0; 250; 500; 750; 1000 mg.l-1 ); glutamin (0; 50; 100; 150; 200 mg.l-1 ); adenin sulphate (0; 50; 100; 150; 200 mg.l-1 ); spermidin (0; 0,01; 0,03; 0,05; 0,08 mg.l-1 )] được bổ sung riêng rẽ vào môi trường nuôi cấy để khảo sát sự hình thành phôi soma. Kết quả cho thấy, các acid amin [prolin (750 mg.l-1 ); glutamin (150 mg.l-1 ); adenin sulphate (150 mg.l-1 )] và spermidin (0,03 mg.l-1 ) giúp gia tăng sự hình thành phôi soma từ mô sẹo của cây Cọc rào.
TẠP CHÍ SINH HỌC 2013, 35(3se): 136-144 ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ACID AMINE VÀ SPEMINDIN LÊN SỰ HÌNH THÀNH PHƠI VƠ TÍNH CÂY CỌC RÀO (JATROPHA CURCAS L.) Đỗ Đăng Giáp*1, Nguyễn Thị Kim Loan1, Trần Trọng Tuấn1, Lê Thanh Tuấn1, Huỳnh Lê Thiên Tứ1, Thái Xuân Du1, Nguyễn Đình Lâm2, Dương Tấn Nhựt3 Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Hàn Lâm KH & CN Việt Nam, *dodanggiap@gmail.com Viện Khoa học Kỹ thuật nông nghiệp miền Nam Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên, Viện Hàn Lâm KH & CN Việt Nam TÓM TẮT: Ở Việt Nam, phương pháp phát sinh phôi soma áp dụng thành công Cọc rào Nghiên cứu trình bày kết nghiên cứu ảnh hưởng số acid amin spermidin việc gia tăng tần suất phát sinh phôi từ mô sẹo Cọc rào Một số acid amin spermidin nồng độ khác [prolin (0; 250; 500; 750; 1000 mg.l-1); glutamin (0; 50; 100; 150; 200 mg.l-1); adenin sulphate (0; 50; 100; 150; 200 mg.l-1); spermidin (0; 0,01; 0,03; 0,05; 0,08 mg.l-1)] bổ sung riêng rẽ vào môi trường ni cấy để khảo sát hình thành phơi soma Kết cho thấy, acid amin [prolin (750 mg.l-1); glutamin (150 mg.l-1); adenin sulphate (150 mg.l-1)] spermidin (0,03 mg.l-1) giúp gia tăng hình thành phơi soma từ mơ sẹo Cọc rào Từ khóa: adenin sulphate, cọc rào, glutamin, prolin, spermidin, phát sinh phôi soma MỞ ĐẦU Cây cọc rào (Jatropha curcas L.) thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) hay gọi dầu mè, có nguồn gốc từ Mê-xi-cơ, Trung Mỹ, sau lan truyền sang châu Phi, châu Á Cây cọc rào có tên từ điển thuốc vị thuốc Việt Nam [7] Cây sinh trưởng vùng đất cát khô hạn Hạt cọc rào có hàm lượng dầu khoảng 30-40%, dầu thơ từ hạt chế biến thành dầu diesel sinh học (biodiesel) nhiều sản phẩm giá trị khác phân hữu cơ, thuốc trừ sâu sinh học, dược liệu Hiện nay, nhiều nước giới chạy đua phát triển này, nước Ấn Độ, Trung Quốc, Thái Lan, Malaixia, Inđơnêxia, Philíppin, Mianma nhiều nước châu Phi nhằm phục vụ nhu cầu lượng chỗ xuất Vi nhân giống cọc rào nghiên cứu nhiều giớí, tái sinh từ nuôi cấy phận khác như: chồi nách, chồi đỉnh, đốt thân, trụ mầm, cuống lá, [4, 15, 25, 31, 32, 33] Vi nhân giống thông qua đường nuôi cấy phôi vơ tính thực thành cơng cọc rào Jha et al (2007) [14] nuôi thành cơng mơ sẹo có khả phát sinh phơi thu nhận cách nuôi cấy mẫu Đỗ Đăng Giáp nnk 136 (2012) [6] nuôi cấy thành cơng phơi vơ tính cọc rào thơng qua mô sẹo Trong nuôi cấy mô tế bào thực vật, hình thành phơi vơ tính chịu ảnh hưỏng số yếu tố môi trường nuôi cấy chất điều hòa sinh trưởng thực vật; acid amin (prolin, serin, threonin); polyamin (spermidin, spermin), nguồn carbohydrate Acid amin nguồn nitơ hữu (dạng khử) chuyển hóa nhanh tế bào thực vật, kích thích tế bào sinh trưởng phát triển nhanh [12] Vì vậy, việc bổ sung acid amin vào mơi trường nuôi cấy cung cấp cho tế bào mô nguồn nitơ hữu phù hợp mức độ định Acid amin đóng vai trò quan trọng việc kích thích phát sinh phơi vơ tính số lồi thực vật [11] Polyamin mơi trường dinh dưỡng có hiệu kích thích hình thành phơi vơ tính Có số chứng cho thấy polyamin cần thiết cho phát triển phôi in vitro [19] Spermidin polyamin mang tính đặc hiệu dùng cho phát sinh phơi vơ tính từ mô tế bào cà rốt [10], Hevea [13], cỏ đinh lăng [3] Trong nghiên cứu này, muốn tăng cường khả sinh phơi vơ tính cải tiến khả phát triển phơi vơ tính từ mơ sẹo cọc rào ảnh hưởng số Do Dang Giap et al acid amin spemindin VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu Sử dụng mẫu Cọc rào trồng vườn ươm Viện Sinh học Nhiệt đới làm vật liệu nuôi cấy tạo phôi Các cặp thứ hai từ đỉnh sau thu nhận khử trùng sơ cách đặt vòi nước chảy (30 phút), dùng xà phòng lỗng rửa sơ bề mặt lá, sau ngâm cồn 70° (30 giây) rửa lại nước cất vô trùng (3-4 lần) Mẫu chuyển vào tủ cấy lắc khử trùng với dung dịch Javel có bổ sung 2-3 giọt Tween-20 (10 phút), sau rửa lại nước cất vơ trùng (4-5 lần) Các sau khử trùng cắt nhỏ theo kỹ thuật lớp mỏng tế bào (TCL) Mỗi mảnh nhỏ có kích thước 0,5 mm × 10 mm cấy vào môi trường MS [20] có bổ sung 1,0 mg.l-1 kinetin 1,5 mg.l-1 2,4-D Sau tuần nuôi cấy điều kiện tối sáng mơ sẹo có khả phát sinh phơi hình thành Phương pháp Khảo sát ảnh hưởng prolin lên hình thành phơi vơ tính Các mơ sẹo có khả sinh phơi cấy vào mơi trường MS có bổ sung 30 g.l-1 sucrose; g.l-1 agar; 1,0 mg.l-1 kinetin 0,05 mg.l-1 2,4-D [6] prolin nồng độ khác (250; 500; 750; 1000 mg.l-1) Khảo sát ảnh hưởng glutamin lên hình thành phơi vơ tính Các mơ sẹo có khả sinh phơi cấy vào mơi trường MS có bổ sung 30 g.l-1 sucrose; g.l-1 agar; 1,0 mg.l-1 kinetin 0,05 mg.l-1 2,4-D [6] glutamin nồng độ khác (50; 100; 150; 200 mg.l-1) Khảo sát ảnh hưởng adenin sulphate lên hình thành phơi vơ tính Các mơ sẹo có khả sinh phơi cấy vào mơi trường MS có bổ sung 30 g.l-1 sucrose; g.l-1 agar; 1,0 mg.l-1 kinetin 0,05 mg.l-1 2,4-D [6] adenin sulphate nồng độ khác (50; 100; 150; 200 mg.l-1) Khảo sát ảnh hưởng spermidin lên hình thành phơi vơ tính Các mơ sẹo có khả sinh phơi cấy vào mơi trường MS có bổ sung 30 g.l-1 sucrose; g.l-1 agar; 1,0 mg.l-1 kinetin 0,05 mg.l-1 2,4-D [6] spermidin nồng độ khác (0,01; 0,03; 0,05; 0,08 mg.l-1) Các thí nghiệm sau tuần nuôi cấy ghi nhận ba tiêu: tỷ lệ mẫu hình thành phơi, số lượng phơi hình thành mẫu trọng lượng tươi trung bình phơi Điều kiện thí nghiệm Thí nghiệm tiến hành phòng ni cấy có nhiệt độ trung bình 25°C 2, thời gian chiếu sáng 14 h/ngày, cường độ chiếu sáng tương đương 50,64 1,00 µmol.m-2s-1, độ ẩm trung bình 60% Xử lý thống kê số liệu Các thí nghiệm bố trí theo kiểu thí nghiệm hồn tồn ngẫu nhiên Số liệu ghi nhận xử lý phần mềm Statgraphics Centurion XV theo phương pháp DMRT [8] mức ý nghĩa 5% KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Ảnh hưởng prolin lên hình thành phơi vơ tính Prolin acid amin biết đến có ảnh hưởng đến kích thích phát sinh phơi [30] Trong thí nghiệm này, mơ sẹo có khả phát sinh phơi cấy chuyền vào mơi trường có bổ sung prolin nồng độ khác Sau tuần nuôi cấy, bề mặt mô sẹo xuất phơi vơ tính Khi tăng dần nồng độ prolin từ 250 lên 750 mg.l-1 tỷ lệ mẫu tạo phơi, số lượng phơi hình thành trọng lượng tươi phôi tăng dần Đạt cao công thức có bổ sung 750 mg.l-1 prolin, tỷ lệ mẫu tạo phôi cao đạt 86,66%; số lượng phôi 72,33; trọng lượng tươi phơi 0,0814 (bảng 1, hình 1c) Khi tăng nồng độ prolin lên 1000 mg.l-1 tiêu hình thành phơi giảm xuống rõ (bảng 1) 137 TẠP CHÍ SINH HỌC 2013, 35(3se): 136-144 Bảng Ảnh hưởng prolin lên hình thành phơi vơ tính cọc rào Prolin (mg.l-1) 250 500 750 1000 Tỷ lệ hình thành phơi (%) 23,33d 50,00c 60,00bc 86,66a 66,66b Số lượng phôi 11,66c 45,07b 47,87b 72,33a 50,70b Trọng lượng tươi phôi (g) 0,013c 0,050b 0,053b 0,081a 0,057b a, b, c… thể khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa P < 0,05 theo phương pháp Duncan’s test Prolin riêng lẻ hay kết hợp với acid amin khác có tác dụng kích thích phát sinh phơi loại thực vật khác trường hợp đậu xanh đậu nành, phơi vơ tính hình thành mơi trường có bổ sung prolin [29] Santos et al (1996) [27] phát việc bổ sung prolin mang lại hiệu rõ ràng tổng số lượng protein mô sẹo phát sinh phôi Họ nghĩ có mặt prolin mơi trường ni cấy dường đáp ứng điều kiện stress, giảm điện nước môi trường nuôi cấy tế bào thực vật, tăng tích tụ chất dinh dưỡng tế bào cuối tăng khả phát sinh phơi vơ tính Trong báo cáo trước đó, prolin phát đưa phản hồi tối ưu phát sinh phơi vơ tính sơ cấp thứ cấp hoa hồng [18] Một số báo cáo khác đề cập đến vai trò rõ ràng prolin lên phát sinh phôi ngô [34] kê [37] Khi nuôi cấy tạo phôi Sâm ngọc linh, Nhut et al (2012) [21] nhận thấy nồng độ prolin tối ưu 300 mg.l-1 Trong đối tượng Dâu tây nồng độ prolin 500 mg.l-1 cho hiệu tạo phôi tốt [2] Điều cho thấy, loại thực vật khác có tác dụng với nồng độ prolin khác Như vậy, mơi trường có bổ sung 750 mg.l-1 prolin nồng độ tối ưu ảnh hưởng đến khă cảm ứng phát sinh phơi vơ tính nâng cao tầng suất phát sinh phơi vơ tính cọc rào Ảnh hưởng glutamin lên hình thành phơi vơ tính Các mơ sẹo có khả phát sinh phơi cấy vào môi trường MS cảm ứng phát sinh phôi, có bổ sung glutamin nồng độ từ 50 đến 200 mg.l-1 Sau tuần nuôi cấy, quan sát thấy có xuất phơi vơ tính Cọc rào lấm dạng hình cầu Sau bắt đầu có xuất dạng phơi hình tim, hình thủy lơi hai mầm Ở cơng thức có bổ sung 150 mg.l-1 glutamin cho hiệu tạo phơi cao với tỷ lệ hình thành phơi 83,33%, số lượng phơi hình thành 67,6 trọng lượng tươi phôi 0,1043 g (bảng 2, hình 1d) Nhưng tiếp tục tăng nồng độ glutamin lên 200 mg.l-1 tiêu giảm xuống, lúc tăng nồng độ glutamin môi trường nuôi cấy làm ức chế phát sinh phôi vô tính Bảng Ảnh hưởng glutamin lên hình thành phơi vơ tính Glutamin Tỷ lệ hình thành phơi (%) Số lượng phôi (mg.l-1) 23,33d 11,66c 50 53,33c 33,13c 100 70,00b 46,40b 150 83,33a 67,60a 200 63,33bc 48,23b Trọng lượng tươi phôi (g) 0,013c 0,038b 0,053b 0,104a 0,054b a, b, c… thể khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa P < 0,05 theo phương pháp Duncan’s test 138 Do Dang Giap et al Việc bổ sung glutamin vào môi trường nuôi cấy cảm ứng sinh phôi nghiên cứu nhiều loại thưc vật [17] Glutamin hỗ trợ sinh trưởng tế báo có nhu cầu lượng cao cần tổng hợp lượng lớn protein acid nucleic Glutamin acid amin sẵn có để làm nguồn tạo lượng cho tế bào nguồn lượng cho nhiều loại tế bào phân chia với tốc độ cao nuôi cấy in vitro [28] Glutamin sử dụng nhiều đường sinh tổng hợp khác nhiều quan khác thực vật thời kỳ sinh trưởng khác Glutamin đóng vai trò quan trọng tăng nhanh phát triển mô sẹo phát sinh phôi đối tượng Cryptomeria japonica [22] El-Shiaty et al (2004) [9] báo cáo đối tượng cọ dầu nồng độ glutamin tối ưu cho phát sinh phơi vơ tính 100 mg.l-1 Theo nghiên cứu Varisai et al (2004) [36] đối tượng đậu thổ nhĩ kỳ nồng độ tối ưu glutamin bổ sung vào môi trường cảm ứng tạo phơi vơ tính 40 mg.l-1 Trong nghiên cứu chúng tơi sử dụng glutamin nồng độ 150 mg.l-1 thích hợp phát sinh phôi Cọc rào Ảnh hưởng adenin sulphate lên hình thành phơi vơ tính Adenin sulphate, adenosin adelynic acid chứng minh có tác dụng hoạt hóa cytokinin chúng thêm vào mơi trường nuôi cấy để gia tăng sinh trưởng gia tăng hoạt động cytokinin môi trường nuôi cấy Adenin kích thích phát sinh phơi soma phát sinh quan, gia tăng sinh trưởng đỉnh mô phân sinh biệt lập, bao gồm sư tăng nhanh chồi nách nuôi cấy chồi kích thích phát sinh chồi bất định gián tiếp từ mô sẹo hay trực tiếp từ mẫu cấy [35] Bảng Ảnh hưởng adenin sulphate lên hình thành phơi vơ tính Adenin sulphate (mg.l-1) 50 100 150 200 Tỷ lệ hình thành phơi (%) 23,33d 46,67c 63,33b 76,67a 53,33bc Số lượng phôi 11,66c 29,07c 41,40b 52,43a 39,27b Trọng lượng phơi trung bình (g) 0,013c 0,034c 0,047b 0,059a 0,044b a, b, c… thể khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa P < 0,05 theo phương pháp Duncan’s test Sau tuần nuôi cấy mô sẹo mơi trường có bổ sung adenin sulphate nồng độ từ 50200 mg.l-1 nhận thấy có xuất phơi vơ tính Khi tăng dần nồng độ adenin sulphate từ 50 lên 150 mg.l-1 tỷ lệ mẫu tạo phơi, số lượng phơi hình thành trọng lượng tươi phôi tăng dần, đạt cao nồng độ 150 mg.l-1 (bảng 3, hình 1e) Nồng độ adenin sulphate tăng lên 200 mg.l-1 tiêu giảm xuống, khơng hiệu hình thành phơi vơ tính từ mẫu mơ sẹo có khả phát sinh phơi Như vậy, mơi trường có bổ sung 150 mg.l-1 adenin sulphate thích hợp cho khă cảm ứng phát sinh phơi vơ tính nâng cao tầng suất phát sinh phơi vơ tính thơng qua nuôi cấy mô sẹo Cọc rào Adenin sulphate thường ý kết hợp với ammonium nitrate với cytokinin BAP kinetin [35] Một đặc tính hoạt động adenin sulphate chất hỗ trợ cytokinin kinetin zeatin [35] Adenin sulphate sử dụng nuôi cấy in vitro giúp tăng nhanh số lượng giống đối tượng đu đủ [26] Uraria picta [1] Trên đối tượng tiêu đen (Piper nigrum), Philip et al (2002) [23] adenin sulphate làm tăng số lượng chồi mẫu Delgado-Shanchez et al (2006) [5] báo cáo việc sử dụng adenin sulphate nồng độ khác tạo tăng nhanh ni cấy cụm chồi lồi đậu Trong thí nghiệm này, adenin sulphate thử 139 TẠP CHÍ SINH HỌC 2013, 35(3se): 136-144 nghiệm q trình kích thích tạo phơi vơ tính từ mơ sẹo đối tượng cọc rào, đạt hiệu cao nồng độ 150 mg.l-1 bổ sung vào môi trường nuôi cấy Ảnh hưởng spermidin lên hình thành phơi vơ tính Các mẫu mơ sẹo có khả sinh phôi từ Cọc rào nuôi cấy in vitro cấy vào mơi trường MS có bổ sung spermidin nồng độ khác Sau tuần ni cấy, tiêu tỷ lệ hình thành phơi, số lượng phơi hình thành trọng lượng tươi phơi trình bày bảng Khi ni cấy mơ sẹo có khả sinh phơi mơi trường có bổ sung spermidin nồng độ khác thấy rằng, sau tuần ni cấy mơ sẹo cảm ứng hình thành phơi nhanh, bề mặt mô sẹo xuất phôi hình cầu nhỏ số lượng phơi tăng dần lên Kết cho thấy, mơi trường có bổ sung spermidin có hình thành phơi cao hẳn so với môi trường không bổ sung spermidin, spermidin nồng độ 0,03 mg.l-1 cho hiệu cao với tỷ lệ phát sinh phơi đạt 100%, số lượng phơi hình thành 102 trọng lượng tươi trung bình 0,1139 g (bảng 4, hình 1f) Tiếp tục tăng nồng độ spermidin lên 0,05 mg.l-1 0,08 mg.l-1 tỷ lệ mẫu hình thành phơi, số lượng phơi trọng lượng tươi trung bình phơi giảm xuống Bảng Ảnh hưởng spermidin lên hình thành phơi vơ tính Spermidin (mg.l-1) Tỷ lệ hình thành phơi (%) 23,33e Số lượng phơi hình thành 11,67d Trọng lượng tươi phôi (g) 0,0134d 0,1 76,67c 63,37c 0,0717c 0,3 100,00a 102,70a 0,1139b 0,5 90,00b 81,27b 0,0912a 0,8 70,00d 61,13c 0,0674c a, b, c… thể khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa P < 0,05 theo phương pháp Duncan’s test Polyamin thực chất dạng acid amin xem chất quan trọng điêu hòa sinh trưởng thực vật Polyamin đóng vai trò quan trọng biệt hóa tế bào để hình thành phơi [24] Trong giai đoạn cảm ứng phôi, polyamin giúp cho tế bào vùng mơ phân sinh phân chia nhanh chóng giúp cho phơi hình thành Nồng độ polyamin giảm gia tăng tế bào mơ sẹo giảm hình thành phôi Như vậy, việc sử dụng polyamin môi trường ni cấy mang lại hiệu có ý nghĩa quan trọng giai đoạn phát sinh phôi thực vật [16] Những nghiên cứu tế bào cà rốt [10], Hevea [13], đinh lăng [3] spermidin polyamin mang tính đặc hiệu dùng cho phát sinh phơi vơ tính Trong nghiên cứu phát sinh phơi vơ tính Panax ginseng [16] khẳng định vài trò 140 spermidin Thảo luận Kết nghiên cứu cho thấy, acid amin sử dụng báo (prolin, glutamin, adenin sulphate) spemidin có cảm ứng mạnh tăng cường khả hình thành phơi vơ tính từ mơ sẹo có khả sinh phôi so với ghi nhận Đỗ Đăng Giáp nnk (2012) Khi so sánh kết khả cảm ứng hình thành phơi vơ tính từ mô sẹo tốt acid amin sử dụng (prolin, glutamin, adenin sulphate) spemindin, ghi nhận spemindin có tính đặc hiệu hiệu Tuy nhiên, spemindin hóa chất đắt tiền, vậy, tùy vào điều kiện nghiên cứu ứng dụng sử dụng acid amin thơng dụng (prolin, glutamin, adenin sulphate) cho phù hợp Do Dang Giap et al Hình Hình thái phơi vơ tính cọc rào a Mẫu mơ sẹo có khả sinh phôi; b Mẫu đối chứng; c Prolin (750 mg.l-1); d Adenin (150 g.l-1); e Glutamin (150 g.l-1); f Spermidin (0,03 mg.l-1) KẾT LUẬN Kết chứng minh rằng, hình thành phơi soma Cọc rào chịu ảnh hưởng acid amin spermidin Việc bổ sung thêm các acid amin: prolin, glutamin, adenin sulphate spermidin làm tăng hiệu tạo phôi cọc rào Lời cảm ơn: Nhóm tác giả xin chân thành cảm ơn Phòng Thí nghiệm trọng điểm Quốc gia Công nghệ tế bào thực vật (Viện Sinh học nhiệt đới) hỗ trợ kinh phí cho nghiên cứu 141 TẠP CHÍ SINH HỌC 2013, 35(3se): 136-144 TÀI LIỆU THAM KHẢO Anand A., Srinivasa Rao C., Latha R., Josekutty P C., Balakrishna P., 1998 Micropropagation of Uraria picta, a medicinal plant, through axillary bud culture and callus regeneration In Vitro Cell Dev Biol Plant, 34(2): 136-140 Biswas M K., Islam R., Hossain M., 2007 Somatic embryogenesis in strawberry (Fragaria sp.) through callus culture Plant Cell Tiss Org., 90: 49-54 Cvikrová M., Binarova P., Cenklova V., Eder J., Machackova I., 1999 Reinitiation of cell division and polyamine and aromatic monoamine levels in alfalfa explants during the induction of somatic embryogenesis Plant Physiol., 105: 330-337 Datta M M., Mukherjee P., Ghosh B., Jha T.B., 2007 In vitro clonal propagation of biodiesel plant Curr Sci., 93: 1438-1442 Delgado-Sanchez P., Saucedo-Ruiz M., Guzmán-Maldonado S H., Villordo-Pineda E., González-Chavira M., Fraire-Velázquez S., Acosta-Gallegos J A., Mora-Avilés A., 2006 An organogenic plant regeneration system for common bean (Phaseolus vulgaris L.) Plant Sci., 170(4): 822-827 Do Dang Giap, Bui Van The Vinh, Nguyen Thi Kim Loan, Thai Xuan Du, Chu Thi Bich Phuong, Hoang Xuan Chien, Nguyen Phuc Huy, Tran Trong Tuan, Nguyen Dinh Lam, Duong Tan Nhut, 2012 Organogenesis and somatic embryogenesis from leaf transverse thin cell layers of Jatropha curcas L J Biotechol., 10(2): 281-288 Đỗ Tất Lợi, 1997 Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Duncan D B., 1955 Multiple range and multiple F tests Biometrics, 11(1): 1-5 El-Shiaty O H., El-Sharabasy S F., Abd El-Kareim A H., 2004 Effect of some amino acids and biotin on callus and proliferation of date palm (Phoenix dactylifera L.) Sewy cultivar Arab J Biotech., 7: 265-272 142 10 Feirer R P., Wann S R., Einspahr D W., 1985 The effect of spermidine synthesis inhibitors on in vitro plant development Plant Growth Regul., 3: 319-327 11 George E F., 1993 Plant propagation by tissue culture - Part The technology, 2nd edn Exegetics, Eddington 12 Grimes H D., Hodges T K., 1990 The inorganic NO3: NH4 ratio influences plant regeneration and auxin sensitivity in primary callus derived from immature embryos of indica rice (Oryza sativa L.) J Plant Physiol., 136: 362-367 13 Hadrami I E., D’Auzac J., 1992 Effects of polyamine byosinthetic inhibitors on somatic embryogenesis and cellular polyamines in Hevea brasiliensis J Plant Physiol., 140: 33-36 14 Jha T B., Mukherjee P., Datta M M., 2007 Somatic embryogenesis in Jatropha curcas Linn., an important biofuel plant Plant Biotech Rep., 1: 135-140 15 Kalimuthu K., Paulsamy S., Senthilkumar R., Sathya M., 2007 In vitro propagation of the biodiesel plant Jatropha curcas L Plant Tiss Cult Biotech., 17(2): 137-147 16 Kevers C., Le Gal N., Monteiro M., Dommes J., Gaspar T H., 2000 Somatic embryogenesis of Panax ginseng in liquid cultures: a role for polyamines and their metabolic pathways Plant Growth Regul., 31: 209-214 17 Kopertekh L G., Stribnaya L A., 2003 Plant regeneration from wheat leaf explants Russian J Plant Physiol., 50: 365-368 18 Marchant R., Davey M R., Lucas J A., Power J B., 1996 Somatic embryogenesis and plant regeneration in floribunda rose (Rosa hybrida L cvs Trumpeter and Glad Tidings) Plant Sci., 120: 95-105 19 Mengoli M., Bagni N.,, 1992 Polyamines and somatic embryogenesis in higher plants IAPTC Newsletters 68: 1-8 20 Murashige T., Skoog F., 1962 A revised medium for a rapid growth and biossay with tobacco tissue culture Physiol Plant, 15: 473-497 Do Dang Giap et al 21 Nhut D T., Vinh B V T., Hien T T., Huy N P., Nam N B., Chien H X., 2012 Effect of spermidine, proline and carbohydrate sources on somatic embryogenesis from main root transverse thin cell layers of Vietnamese ginseng (Panax vietnamensis Ha et Grushv.), Afr J Biotechnol., 11(5): 1084-1091 22 Ogita S., Sasamoto H., Yeung E C., Thorpe T A., 2001 The effects of glutamine on the maintenance of embryogenic cultures of Cryptomeria japonica In Vitro Cell Dev Biol Plant, 37: 268-273 23 Philip V J., Joseph D., Triggs G S., Dickinson N M., 1992 Micropropagation of black pepper (Piper nigrum Linn.) through shoot tip cultures Plant Cell Rep., 12(1): 41-44 24 Rajam M V., 1997 Polyamines In: Prasad, MNV (ed) Plant Ecophysiology John Wiley and Sons, New York, 343-374 25 Rajore S., Batra A., 2005 Efficient plant regeneration via shoot tip explant in Jatropha curcas L J Plant Biochem Biotech., 14: 73-75 26 Saha M., Phatak A., Chandra N., 2004 In vitro culture studies in four dioecious varieties of Carica papaya L using axillary buds from field-grown plants J Tiss Res., 4(2): 211-214 27 Santos M A., Camara T., Rodriguez P., Claparols I., Torné J M., 1996 Influence of exogenous proline on embryogenic and organogenic maize callus subjected to salt stress Plant Cell Tiss Org., 47: 59-65 28 Sara A., Khaled E., 2011 Effects of Casein Hydrolysates and glutamine on callus and somatic embryogenesis of date palm (Phoenix dactylifera L.) New York Sci J., 4(7): 121-125 29 Shetty K., McKersie B D., 1993 Proline, thioproline and potassium mediated stimulation of somatic embryogenesis in alfalfa (Medicago sativa L.) Plant Sci., 88: 185-193 30 Shimizu K., Nagaike H., Yabuya T., Adachi T., 1997 Plant regeneration from suspension culture of Iris germanica Plant Cell Tiss Org., 50: 27-31 31 Singh A., Reddy M P., Chikara J., Singh S., 2010 A simple regeneration protocol from stem explants of Jatropha curcas Ind Crop Prod., 31: 209-213 32 Sujatha M., Mukta N., 1996 Morphogenesis and plant regeneration from tissue cultures of Jatropha curcas Plant Cell Tiss Org., 44: 135-141 33 Sujatha M., Makkar H P S., Becker K., 2005 Shoot bud proliferation from axillary nodes and leaf sections of non-toxic Jatropha curcas L Plant Growth Regul., 47: 83-90 34 Suprasanna P., Rao K V., Reddy G M., 1994 Embryogenic callus in maize: genotypic and amino acid effects Cereal Res Commun., 22: 79-82 35 Van Staden J., Zazimalova E., George E F., 2008 Plant growth regulators II: In: George EF, Hall M and De Kleck GJ (eds) Cytokinins, their analogues and antagonist Plant Propagation by Tissue Culture vol The Ackground Springer, The Netherlands, 205-226 36 Varisai M S., Wang C S., Thiruvengadam M and Jayabalan N., 2004 In vitro plant regeneration via somatic embryogenesis through cell suspension cultures of horsegram [Macrotyloma uniflorum (Lam.) Verdc.] In Vitro Cell Dev Biol Plant, 40: 284-289 37 Vikrant A., Rashid A., 2002 Somatic embryogenesis from immature and mature embryos of a minor millet Paspalum scrobiculatum L Plant Cell Tiss Org., 69: 71-77 143 TẠP CHÍ SINH HỌC 2013, 35(3se): 136-144 EFFECTS OF AMINO ACIDS AND SPERMIDINE ON SOMATIC EMBRYOGENESIS OF JATROPHA CURCAS L Do Dang Giap1, Nguyen Thi Kim Loan1, Tran Trong Tuan1, Le Thanh Tuan1, Huynh Le Thien Tu1, Thai Xuan Du1, Nguyen Dinh Lam2, Duong Tan Nhut3 Institute of Tropical Biology, VAST Insitute of Agricultural Science for Southern Vietnam Tay Nguyen Institute for Scientific Resreach, VAST SUMMARY In Vietnam, the somatic embryogenesis method was applied successfully on Jatropha curcas L., in this study, the effect of amino acids and spermidine on somatic embryogenesis of Jatropha curcas is reported Some of amino acids and spermidine with different concentrations [proline (0; 250; 500; 750; 1000 mg.l-1); glutamine (0; 50; 100; 150; 200 mg.l-1); adenine sulphate (0; 50; 100; 150; 200 mg.l-1; spermidine (0; 0.01; 0.03; 0.05; 0.08 mg.l-1)] were supplied individually on culture medium to examine somatic embryogenesis from callus The results from our study showed that amino acids [proline (750 mg.l-1); glutamine (150 mg.l-1); adenine sulphate (150 mg.l-1)] and spermidine (0.03 mg.l-1) increased somatic embryos formation of Jatropha curcas Keywords: Jatropha curcas, adenine sulphate, glutamine, proline, micropropagation, somatic embryogenesis Ngày nhận bài: 30-6-2013 144 ... tối ưu ảnh hưởng đến khă cảm ứng phát sinh phơi vơ tính nâng cao tầng suất phát sinh phơi vơ tính cọc rào Ảnh hưởng glutamin lên hình thành phơi vơ tính Các mơ sẹo có khả phát sinh phơi cấy vào... phơi vơ tính từ mơ sẹo đối tượng cọc rào, đạt hiệu cao nồng độ 150 mg.l-1 bổ sung vào môi trường ni cấy Ảnh hưởng spermidin lên hình thành phơi vơ tính Các mẫu mơ sẹo có khả sinh phôi từ Cọc rào. .. 35(3se): 136-144 Bảng Ảnh hưởng prolin lên hình thành phơi vơ tính cọc rào Prolin (mg.l-1) 250 500 750 1000 Tỷ lệ hình thành phơi (%) 23,33d 50,00c 60,00bc 86,66a 66,66b Số lượng phôi 11,66c 45,07b