Cây cọc rào (Jatropha curcas L.) được xem là nguồn năng lượng sinh học tái sinh không cạnh tranh với các cây lương thực trên thế giới. Phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng sẽ có ích cho việc nhân giống đồng nhất và tạo cây sạch vi rút. Chồi cây cọc rào có chứa đỉnh sinh trưởng được chọn để khử trùng và đem nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung riêng rẽ các chất điều hòa sinh trưởng thực vật khác nhau sau: kinetin (N6 -furfuryladenin) (0; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg.l-1 ), BA (6-benzylaminopurine) (0; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg.l-1 ), TDZ (thidiazuron) (0; 0,01; 0,05; 0,10; 0,50; 1,0 mg.l-1 ). Sự cảm ứng chồi ban đầu được thúc đẩy hiệu quả nhất trong môi trường MS có bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ. Ở nồng độ này, hơn 95% đỉnh sinh trưởng phát triển hình thành chồi, ở các chồi được tái sinh không có sự hình thành mô sẹo. Việc sử dụng TDZ kết hợp với GA3 không có ảnh hưởng tốt lên sự hình thành chồi từ đỉnh sinh trưởng cây cọc rào mà chỉ có tác dụng kéo dài mẫu cấy. Trạng thái môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng lên sự phát triển của đỉnh sinh trưởng, môi trường MS bán rắn có bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ sẽ thích hợp cho sự hình thành chồi. Sự hình thành rễ ở những chồi bất định có kết quả tốt trên môi trường MS có bổ sung 1,0 mg.l-1 IBA và 3,0 mg.l-1 thiamin.
TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 188-195 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HỊA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT LÊN NI CẤY ĐỈNH SINH TRƯỞNG VÀ THIẾT LẬP CÂY HOÀN CHỈNH Ở CÂY CỌC RÀO (Jatropha curcas L.) Đỗ Đăng Giáp1*, Nguyễn Thị Kim Loan1, Trần Trọng Tuấn1, Trương Thị Trúc Hà1, Thái Xuân Du1, Bùi Văn Thế Vinh2, Nguyễn Đình Lâm3, Dương Tấn Nhựt4 (1) Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, (*)dodanggiap@gmail.com (2) Đại học Kỹ thuật cơng nghệ Hồ Chí Minh (3) Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp miền Nam (4) Viện Sinh học Tây Nguyên TÓM TẮT: Cây cọc rào (Jatropha curcas L.) xem nguồn lượng sinh học tái sinh không cạnh tranh với lương thực giới Phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng có ích cho việc nhân giống đồng tạo vi rút Chồi cọc rào có chứa đỉnh sinh trưởng chọn để khử trùng đem ni cấy mơi trường MS có bổ sung riêng rẽ chất điều hòa sinh trưởng thực vật khác sau: kinetin (N6-furfuryladenin) (0; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg.l-1), BA (6-benzylaminopurine) (0; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg.l-1), TDZ (thidiazuron) (0; 0,01; 0,05; 0,10; 0,50; 1,0 mg.l-1) Sự cảm ứng chồi ban đầu thúc đẩy hiệu mơi trường MS có bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ Ở nồng độ này, 95% đỉnh sinh trưởng phát triển hình thành chồi, chồi tái sinh khơng có hình thành mơ sẹo Việc sử dụng TDZ kết hợp với GA3 khơng có ảnh hưởng tốt lên hình thành chồi từ đỉnh sinh trưởng cọc rào mà có tác dụng kéo dài mẫu cấy Trạng thái môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng lên phát triển đỉnh sinh trưởng, mơi trường MS bán rắn có bổ sung 0,1 mg.l -1 TDZ thích hợp cho hình thành chồi Sự hình thành rễ chồi bất định có kết tốt mơi trường MS có bổ sung 1,0 mg.l-1 IBA 3,0 mg.l-1 thiamin Từ khóa: Jatropha curcas, cytokinin, đỉnh sinh trưởng, nhân giống, TDZ MỞ ĐẦU Cây cọc rào (Jatropha curcas L.) thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae), hay gọi dầu mè (tên tiếng Anh: Physic nut) Cây có nguồn gốc từ Mê-xi-cơ, Trung Mỹ, sau lan truyền sang châu Phi, châu Á Cây Cọc rào có tên từ điển thuốc vị thuốc Việt Nam [8] Cây sinh trưởng vùng đất cát khơ hạn Hạt cọc rào có hàm lượng dầu khoảng 30-40%, dầu thô từ hạt chế biến thành dầu diesel sinh học (biodiesel) nhiều sản phẩm giá trị khác phân hữu cơ, thuốc trừ sâu sinh học, dược liệu Hiện nay, nhiều nước giới chạy đua phát triển này, nước Ấn Độ, Trung Quốc, Thái Lan, Malaisia, Indonesia, Philippin, Mianma nhiều nước châu Phi nhằm phục vụ nhu cầu lượng chỗ xuất Trồng cọc rào chống sa mạc hóa, mang lại việc làm cho người nghèo, có ý nghĩa kinh tế-mơi trường-xã hội cao Trồng để khai thác dầu lâu năm phương pháp nhân giống hạt sử dụng 188 nhiều Những nghiên cứu rằng, tạo thành từ nhân giống giâm cành có đời sống ngắn hơn, khả chống hạn bệnh tật nhân giống hạt [11] Nhược điểm phương pháp nhân giống hạt chất lượng khơng đồng nhất, cọc rào thụ phấn chéo nên hạt có khác mặt di truyền, tạo gieo hạt có hàm lượng dầu hạt không ổn định, dao động từ đến 40% [13] Vì vậy, phương pháp nhân giống in vitro kỹ thuật hiệu để nhân nhanh đầu dòng Vi nhân giống J curcas nghiên cứu nhiều giớí, tái sinh từ nuôi cấy phận khác như: chồi nách, chồi đỉnh, đốt thân, trụ mầm, cuống lá, [31, 27, 32, 6, 14, 30] Để sản xuất hiệu biodiesel từ cọc rào, điều quan trọng cần có giống tốt nhân đầu dòng để phát triển vùng nguyên liệu [31, 27] Phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng sử dụng rộng rãi vi nhân giống thực vật bậc cao suốt ba thập kỷ qua Do Dang Giap et al Ứng dụng quan trọng nuôi cấy đỉnh sinh trưởng tạo bệnh, nhân nhanh bảo quản phôi mầm vi rút thời gian dài thông qua kỹ thuật bảo quản phôi đông lạnh [26] Kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng ghi nhận dòng hóa giống trồng từ ex vitro vào điều kiện in vitro có đặc điểm nhiều bệnh thực vật khác như: vi rút, vi khuẩn, nấm bệnh [16, 15, 23, 10, 3] Những hiệu kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng ứng dụng dòng hóa giống bệnh số loại trồng có giá trị như: khoai tây [4], tỏi [5], đậu lạc [21], củ cải đường [2] cà chua [1] Trong báo này, sử dụng phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Cọc rào để tạo nguồn giống cọc rào đầu dòng bệnh Kết nghiên cứu giúp ích nhiều thiết lập quy trình nhân giống, giúp sản xuất với số lượng lớn thời gian ngắn (gibberellic acid) lên phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào in vitro PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Các chồi hình thành từ đỉnh sinh trưởng ni cấy mơi trường MS có bổ sung mg.l-1 IBA [8] kết hợp với vitamin B1 – thiamin (0; 1,0; 3,0; 6,0; 9,0 mg.l-1) Sau tuần nuôi cấy ghi nhận tiêu: số lượng rễ chiều dài rễ Vật liệu Sử dụng chồi có chứa đỉnh sinh trưởng cọc rào đầu dòng trồng vườn ươm Viện Sinh học nhiệt đới làm vật liệu nuôi cấy Các chồi sau thu nhận khử trùng sơ cách đặt vòi nước chảy (30 phút), rửa qua xà phòng lỗng, sau ngâm cồn 70% (30 giây) Mẫu chuyển vào tủ cấy lắc khử trùng với dung dịch javel nồng độ 12,5% với thời gian phút, sau rửa lại nước cất vơ trùng (4-5 lần), dùng kính lúp tách lấy đỉnh sinh trưởng để sử dụng cho thí nghiệm Phương pháp Khảo sát ảnh hưởng cytokinin (BA, kinetin) TDZ lên phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào in vitro Các đỉnh sinh trưởng cấy vào môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) có bổ sung 30 g.l-1 sucrose; g.l-1 agar chất điều hòa sinh trưởng gồm kinetin (0; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg.l-1 ); BA 0; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg.l-1); TDZ (0; 0,01; 0,05; 0,10; 0,50; 1,0 mg.l-1) nồng độ riêng rẽ Khảo sát ảnh hưởng kết hợp TDZ GA3 Các đỉnh sinh trưởng cấy vào môi trường MS có bổ sung 30 g.l-1 sucrose; g.l-1 agar; 0,1 mg.l-1 TDZ kết hợp với GA3 nồng độ khác (0; 1,0; 3,0; 5,0; 7,0 mg.l-1) Khảo sát ảnh hưởng số trạng thái môi trường nuôi cấy lên phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào in vitro Các đỉnh sinh trưởng cấy vào mơi trường MS có bổ sung 30 g.l-1 sucrose; 0,1 mg.l-1 TDZ agar 0,0 g.l-1 (lỏng), 4,0 g.l-1 (bán rắn), 8,0 g.l-1 (rắn) Các thí nghiệm sau tuần ni cấy ghi nhận tiêu: tỷ lệ hình thành chồi, số chồi hình thành khối lượng tươi mẫu Khảo sát ảnh hưởng thiamin lên hình thành rễ chồi từ đỉnh sinh trưởng cọc rào in vitro Tất môi trường điều chỉnh pH 5,8-5,9, hấp khử trùng 121°C, atm 20 phút Điều kiện thí nghiệm Thí nghiệm tiến hành phòng ni cấy có nhiệt độ trung bình 25°C 2, thời gian chiếu sáng 14 h/ngày, cường độ chiếu sáng tương đương 50,64 1,00 µmol.m-2s-1, độ ẩm trung bình 60% Xử lý thống kê số liệu Các thí nghiệm bố trí theo kiểu thí nghiệm hoàn toàn ngẫu nhiên Số liệu ghi nhận xử lý phần mềm Statgraphics Centurion XV theo phương pháp DMRT [8] mức ý nghĩa 5% KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Ảnh hưởng cytokinin (BA, kinetin) TDZ lên phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào in vitro Sự phát triển đỉnh sinh trưởng mơi 189 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 188-195 trường có bổ sung BA, kinetin TDZ thể bảng Các chất điều hòa sinh trưởng nồng độ khác có ảnh hưởng khác đến hình thành chồi từ đỉnh sinh trưởng Cọc rào Sau tuần nuôi cấy mơi trường có bổ sung kinetin, BA, TDZ, đỉnh sinh trưởng có phát triển, chồi hình thành với tỷ lệ tái sinh chồi, số chồi hình thành khối lượng tươi chồi cao Trên mơi trường có bổ sung 1,0 mg.l-1 kinetin cho tỷ lệ mẫu hình thành chồi cao (86,67%) so với cơng thức lại, nhiên, số chồi hình thành (8,67) lại thấp so với mơi trường có bổ sung 0,5 mg.l-1 kinetin (9,67), khác biệt cơng thức khơng có ý nghĩa mặt thống kê Trên mơi trường MS có bổ sung BA, hình thành chồi thấp so với mơi trường có bổ sung kinetin TDZ Bảng Ảnh hưởng BA, kinetin TDZ lên phát triển đỉnh sinh trưởng Cọc rào Cơng thức thí nghiệm Kinetin BA TDZ Nồng độ CĐHSTTV (mg.l-1 ) 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0 0,01 0,05 0,1 0,5 1,0 Tỉ lệ mẫu hình thành chồi (%) Số chồi hình thành/mẫu (chồi) Khối lượng tươi (g) 66,67ef 80,00c 86,67bc 83,33bc 66,67ef 60,00f 83,33bc 70,00e 60,00f 30,00g 60,00f 93,33b 96,66a 76,67d 23,30g 9,00e 9,67d 8,67e 7,30f 7,00fg 7,00fg 8,67e 8,67e 10,67cd 5,00g 11,66cd 16,66b 17,66a 16,0b 13,66d 0,0224de 0,0331cd 0,0219de 0,0193ef 0,0148ef 0,0173ef 0,0208e 0,0136f 0,0090g 0,0095g 0,0319d 0,0541c 0,0944a 0,0714b 0,0464cd a, b, c thể khác biệt có ý nghĩa mức tin cậy P = 0,05 theo phương pháp Duncan Ảnh hưởng nồng độ TDZ đến phát sinh chồi rõ rệt, mơi trường có bổ sung TDZ nồng độ từ 0,01 - 0,10 mg.l-1 khả cảm ứng tạo chồi in vitro, nồng độ TDZ tăng dần số chồi khối lượng tươi chồi tăng Ở cơng thức có bổ sung 0,10 mg.l-1 TDZ, tỷ lệ hình thành chồi đạt gần tối đa (96,66%), số chồi khối lượng tươi trung bình cao (17,66 chồi/mẫu 0,0944 g/chồi) Tuy nhiên, tăng nồng độ từ 0,5 - 1,0 mg.l-1 TDZ khả tạo chồi khối lượng tươi giảm dần ức chế chất điều hòa sinh trưởng lên phát triển đỉnh sinh trưởng Do đó, thấy mơi trường ni cấy có bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ thích hợp cho phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào 190 TDZ sử dụng vi nhân giống thông qua đường phát sinh quan phát sinh phôi nhiều đối tượng thực vật khác [18] Trong báo cáo gần đây, TDZ phần thiếu nuôi cấy mô thân gỗ thân thảo [12] Ảnh hưởng kết hợp TDZ với GA3 lên phát triển đỉnh cọc rào in vitro TDZ kích thích cảm ứng nhân chồi sử dụng riêng rẽ kết hợp với chất điều hòa khác Trên cở sở đó, chúng tơi tiến hành thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng TDZ kết hợp với GA3 lên tăng trưởng đỉnh sinh trưởng Cọc rào Kết thu sau tuần trình bày bảng Do Dang Giap et al Bảng Ảnh hưởng TDZ GA3 lên phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào Công thức TDZ (mg.l1 ) GA3 (mg.l-1) ĐC G1 G2 G3 G4 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,0 1,0 3,0 5,0 7,0 Khi tiến hành cấy mẫu đỉnh sinh trưởng lên mơi trường có bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ với GA3 nồng độ khác nhau, nhận thấy, môi trường đối chứng 0,1 mg.l-1 TDZ khơng có bổ sung GA3 có tỷ lệ hình thành chồi, số lượng chồi hình thành khối lượng tươi trung bình chồi đạt cao Các cơng thức lại số mẫu cảm ứng để hình thành chồi tương đối thấp Trong ni cấy in vitro, GA3 có tác dụng kéo dài thân, kích thích chồi, mầm ngủ Gibberellin có tác động nhiều đỉnh sinh trưởng, thiếu gibberellin đỉnh sinh trưởng thể dạng hình cầu, tạo nên mắt GA3 xác định có hiệu Tỉ lệ mẫu hình thành chồi (%) 100,00a 83,00a 73,33ab 60,00c 56,67c Số chồi hình thành/mẫu (chồi) 15,67a 10,67b 7,67b 6,00ab 5,00c Khối lượng tươi (g) 0,0818a 0,0284ab 0,0242ab 0,0242ab 0,0178b việc ngăn chặn phân chia vơ tổ chức dẫn tới hình thành mơ sẹo, đồng thời kích thích đẩy mạnh biệt hóa đỉnh sinh trưởng [23] Theo kết nhận được, thấy rằng, GA3 kết hợp với TDZ khơng có ảnh hưởng tốt lên hình thành chồi từ đỉnh sinh trưởng cọc rào mà có tác dụng kéo dài mẫu cấy Ảnh hưởng số trạng thái môi trường nuôi cấy đến phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào in vitro Sự phát triển đỉnh sinh trưởng môi trường rắn, bán rắn lỏng thể bảng Bảng Ảnh hưởng số trạng thái môi trường nuôi cấy lên phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào Trạng thái môi trường Rắn Bán rắn Lỏng Tỉ lệ mẫu hình thành chồi (%) 92,3b 100a 51,6c Trong nuôi cấy mô tế bào thực vật, thay đổi trạng thái vật lý môi trường nuôi cấy có tác động lên thay đổi mẫu cấy Kết bảng cho thấy, ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy (môi trường lỏng, bán rắn, rắn) rõ nét lên tăng trưởng đỉnh sinh trưởng Trên môi trường MS điều kiện bán rắn, đỉnh sinh trưởng phát triển hoàn chỉnh nhất, tỷ lệ hình thành chồi, số chồi hình thành khối lượng tươi cao sau tuần nuôi cấy Trên môi trường lỏng, đỉnh sinh trưởng bị chết chồi hình thành yếu ớt, thân bị mọng nước Các chồi hình thành mơi Số chồi hình thành/mẫu (chồi) 7,00b 8,67a 5,33c Khối lượng tươi (g) 0,0939 b 0,1729 a 0,0315 c trường rắn có tỷ lệ hình thành chồi, số lượng chồi khối lượng tươi tương đối cao, khó áp dụng việc nhân giống môi trường rắn vào nhân giống thương mại, tốn nhiều chi phí mua agar làm tăng giá thành giống Hiện nay, hầu hết loài thực vật nhân giống thương mại môi trường bán rắn thông qua đường phát sinh quan Khi nuôi cấy mô tế bào thực vật môi trường lỏng trạng thái tĩnh khơng thống khí, mẫu khơng sinh trưởng, phát triển có tượng thủy tinh thể chồi lá, 191 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 188-195 dễ bị chết đưa ngồi vườn ươm [24] Như vậy, mơi trường MS bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ điều kiện bán rắn thích hợp cho ni cấy đỉnh sinh trưởng cọc rào (hình 1a, 1b, 1c, 1d) Ảnh hưởng thiamin lên hình thành rễ chồi từ đỉnh sinh trưởng cọc rào Tất tế bào ni cấy có khả tổng hợp tất loại vitamin thường với số lượng mức u cầu Để mơ có sức sinh trưởng tốt phải bổ sung thêm vào môi trường hay nhiều loại vitamin Các vitamin cần thiết cho phản ứng sinh hoá Thực vật cần vitamin để xúc tác trình biến dưỡng khác Thiamin vitamin cần thiết cho tăng trưởng tất tế bào Các chồi non ni cấy mơi trường có bổ sung IBA kết hợp với thiamin bắt đầu cảm ứng hình thành rễ bất định sau tuần nuôi cấy Kết nghiên cứu ghi nhận bảng Bảng Ảnh hưởng kết hợp 1,0 mg.l-1 IBA thiamin lên hình thành rễ chồi tái sinh sau tuần nuôi cấy Công thức IT0 IT1 IT2 IT3 IT4 Nồng độ thiamin (mg.l-1) 0,0 1,0 3,0 6,0 9,0 Việc bổ sung thiamin vào môi trường ni cấy có ảnh hưởng rõ rệt lên hình thành phát triển rễ chồi Cọc rào in vitro Khi tăng nồng độ thiamin số lượng rễ chiều dài rễ trung bình tăng lên Theo nghiên cứu Thái Xuân Du nnk (2010) [8] ghi nhận môi trường MS kết hợp với 1,0 mg.l-1 IBA thích hợp cho hình thành rễ từ chồi tái sinh thông qua nuôi cấy lớp mỏng tế bào cấy cọc rào Kết thí nghiệm chúng tơi cho thấy, mơi trường có bổ sung 1,0 mg.l-1 IBA Số rễ 0,758c 1,342a 1,517a 1,568a 1,034b Chiều dài rễ (cm) 2,351c 3,528b 3,987a 3,859ab 3,196b kết hợp với 3,0 mg.l-1 6,0 mg.l-1 thiamin, số lượng rễ chiều dài rễ trung bình đạt cao so với cơng thức đối chứng khơng có bổ sung thiamin (hình 1e) Dhillon et al (2009) [7] cơng bố ảnh hưởng tích cực thiamin lên hình thành rễ từ cành giâm Cọc rào Linsmaier & Skoog (1965) [17] khẳng định thiamin cần thiết cho cho sinh trưởng sau nghiên cứu kỹ lưỡng có mặt mơi trường MS Hình Hình thái nuôi cấy đỉnh sinh trưởng theo thời gian mơi trường bán lỏng có bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ a ngày tuổi; b ngày tuổi; c 14 ngày tuổi; d 21 ngày tuổi; e Cây hoàn chỉnh sau 60 ngày 192 Do Dang Giap et al KẾT LUẬN Các đỉnh sinh trưởng cọc rào ni cấy mơi trường MS có bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ điều kiện bán rắn, có tăng trưởng tốt sau tuần nuôi cấy Sử dụng mơi trường MS có bổ sung 0,1 mg.l-1 TDZ kết hợp với GA3, không cho kết tốt cho tăng trưởng đỉnh sinh trưởng Sự hình thành rễ chồi bất định có kết tốt mơi trường MS có bổ sung 1,0 mg.l-1 IBA kết hợp với 3,0 mg.l-1 thiamin Lời cảm ơn: Nhóm tác giả xin chân thành cảm ơn Phòng thí nghiệm trọng điểm Quốc gia Công nghệ tế bào thực vật (Viện Sinh học nhiệt đới) hỗ trợ kinh phí cho nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Alam M F., Banu M L A., Swaraz A M., Parvez S., Hossain M., Khalekuzzaman M and Ahsan N., 2004 Production of virus free seeds using meristem culture in tomato plant under tropical conditions J Plant Biotechnol., 6: 221-227 Balamuralikrishnan M., Doraisamy S., Ganapathy T and Viswanathan R., 2002 Combined effect of chemotherapy and meristem culture on sugarcane mosaic virus elimination in sugarcane Sugar Tech., 4: 19-25 Bhojwani S S and Razdan M K., 1996 Plant Tissue Culture: Theory and Practice A Revised Edition, Elsevier Press, New York, 510 Bittner H., Schenk G., Schuster G and Kluge S., 1989 Elimination by chemotherapy of potato virus S from potato plants grown in vitro Potato Res., 32: 175-179 Conci V C and Nome S F., 1991 Virus free garlic (Allium sativum L.) plants obtained by thermotherapy and meristem tip culture J Phytopathol., 132: 186-192 Datta M M., Mukherjee P., Ghosh B and Jha T B., 2007 In vitro clonal propagation of biodiesel plant Curr Sci., 93: 14381442 Dhillon R S., Hooda M S., Pundeer J S., Ahlawat K S and Kumari S., 2009 Development of efficient techniques for clonal multiplication of Jatropha curcas L., a potential biodiesel plant Curr Sci., 96(6): 823-826 Thái Xuân Du, Đỗ Đăng Giáp, Nguyễn Thị Ngọc Hân, Bùi Văn Thế Vinh, Nguyễn Du Sanh, Dương Tấn Nhựt, 2010 Vi nhân giống cọc rào (Jatropha curcas L.) kỹ thuật ni cấy lớp mỏng tế bào Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 8(3B): 1287- 1291 Duncan D B., 1955 Multiple range and multiple F tests Biometrics, 11(1): 1-5 10 Grout B W., 1999 Meristem tip culture for propagation and virus elimination Methods in Molecular Biology, 111: 115125 11 Heller J 1996 Physic nut, Jatropha curcas L International Plant Genetic Resource Institute: 1-66 12 Huetteman C A and Preece J E., 1993 Thidiazuron: a potent cytokinin for woody plant tissue culture Plant Cell Tiss Org., 33: 105-119 13 Jha T B., Mukherjee P and Datta M M., 2007 Somatic embryogenesis in Jatropha curcas L., an important biofuel plant Plant Biotech Rep., 1: 135-140 14 Kalimuthu K., Paulsamy S., Senthilkumar R and Sathya M., 2007 In vitro propagation of the biodiesel plant Jatropha curcas L Plant Tis Cult Biotech., 17(2): 137-147 15 Kartha K K., 1984 Elimination of viruses In: Vasil, IK (eds.) Cell culture and somatic cell genetics of plants V-I, Laboratory procedure and their applications, Academic Press Inc, Orlando, 577-585 16 La Motte C E and Lersten N R., 1972 Attempts to obtain bacteria-free plants of Psychotria punctata (Rubiaceae): growth and root formation in callus cultures Am J Bot., 59: 89-96 193 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 188-195 17 Linsmaier F M and Skoog F., 1965 Organic growth factor requirements of tobacco tissue culture Physiol Plant, l8: 100-127 18 Đỗ Tất Lợi, 1997 Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 19 Malik K A and Saxena P K., 1992 Regeneration in Phaseolus vulgaris L.: High frequency induction of direct shoot formation in intact seedlings by N6 benzylaminopurine and thidiazuron Planta, 186: 384-389 20 Morel G., 1964 A new means of clonal propagation of orchids Am Orchid Soc Bull., 33: 473-478 21 Morris J B., Dunn S., Pinnow D L., Hopkins M S and Pittman R N., 1997 Meristem culture for virus elimination and peanut interspecific hybrid preservation Crop Sci., 37: 591-594 22 Murashige T and Skoog F., 1962 A revised medium for a rapid growth and biossay with tobacco tissue culture Physiol Plant, 15: 473-497 23 Dương Tấn Nhựt, 2007 Công nghệ sinh học thực vật, Tập Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội 24 Dương Tấn Nhựt, 2010 Một số phương pháp, hệ thống nghiên cứu công nghệ sinh học thực vật Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội 194 25 Pierik R L M., 1989 In vitro culture of higher plants Dordrecht, The Netherlands: Martinus Nijhoff Publishers: 1-344 26 Quak F., 1977 Meristem culture and virusfree plants In: J Reinert and Y.P.S Bajaj (eds.) Applied and fundamental aspects of plant cells, tissue, and organ culture Springer, Berlin, 598-615 27 Rajore S and Batra A., 2005 Efficient plant regeneration via shoot tip explant in Jatropha curcas L J Plant Biochem Biotech., 14: 73-75 28 Sardana J., Batra A and Ali D J., 1998 In vitro plantlet formation and micropropagation of Jatropha curcas L Adv Plant Sci., 11(2): 167-169 29 Sarika S and Meenakshi B., 2008 In vitro clonal propagation of physic nut (Jatropha curcas L.): Influence of additives Int J Integr Biol., 3(1): 73-75 30 Singh A., Reddy M P., Chikara J and Singh S., 2010 A simple regeneration protocol from stem explants of Jatropha curcas Ind Crop Prod., 31: 209-213 31 Sujatha M and Mukta N., 1996 Morphogenesis and plant regeneration from tissue cultures of Jatropha curcas Plant Cell Tiss Org., 44: 135-141 32 Sujatha M., Makkar H P S and Becker K., 2005 Shoot bud proliferation from axillary nodes and leaf sections of nontoxic Jatropha curcas L Plant Growth Regul., 47: 83-90 Do Dang Giap et al EFFECTS OF GROWTH REGULATORS ON PLANT TO MERISTEM CULTURE AND SET UP TO COMPLETE PLANT IN PHYSIC NUT PLANT (Jatropha curcas L.) Do Dang Giap1*, Nguyen Thi Kim Loan1, Tran Trong Tuan1, Truong Thi Truc Ha1, Thai Xuan Du1, Bui Van The Vinh2, Nguyen Đinh Lam3, Duong Tan Nhut4 Institute of Tropical Biology, VAST HCMC University of Technology Insitute of Agricultural Science for Southern VietNam, VAST Tay Nguyen Institute of Biology, VAST SUMMARY Physic nut plant (Jatropha curcas L.) is considered as a potential source for a non-edible biofuelproducing energy crop throughout the world This optimized meristem culture technique would be useful for developing uniform and virus-free clones of physic nut plant Physic nut plant shoot apical meristems with leaf primordia were aseptically isolated to sterilize and culture on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with kinetin (0; 0.1; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0 mg.l-1), BA (0; 0.1; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0 mg.l -1), TDZ (0; 0.01; 0.05; 0.10; 0.50; 1.0 mg.l -1) individually Primary shoot induction was most effectively promoted by MS medium supplemented with 0.1 mg.l-1 TDZ In this concentration, more than 95% of the shoots were regenerated without intervening any callus formation The use of TDZ in combination with GA3 did not have good effects on the formation of shoots from meristem, in that only long meristems resulted Also, when surveying the state of culture medium, that semi-liquid MS medium supplemented with 0.1 mg.l-1 TDZ will be suitable for the development of meristems Rooting of adventitious shoots was achieved on MS medium supplemented with 1.0 mg.l-1 IBA and 3.0 mg.l-1 thiamin Keywords: Jatropha curcas, cytokinin, micropropagation, meristem, TDZ Ngày nhận bài: 21-6-2012 195 ... động lên thay đổi mẫu cấy Kết bảng cho thấy, ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy (môi trường lỏng, bán rắn, rắn) rõ nét lên tăng trưởng đỉnh sinh trưởng Trên môi trường MS điều kiện bán rắn, đỉnh sinh trưởng. .. mg.l-1 TDZ điều kiện bán rắn thích hợp cho ni cấy đỉnh sinh trưởng cọc rào (hình 1a, 1b, 1c, 1d) Ảnh hưởng thiamin lên hình thành rễ chồi từ đỉnh sinh trưởng cọc rào Tất tế bào ni cấy có khả... trường nuôi cấy đến phát triển đỉnh sinh trưởng cọc rào in vitro Sự phát triển đỉnh sinh trưởng môi trường rắn, bán rắn lỏng thể bảng Bảng Ảnh hưởng số trạng thái môi trường nuôi cấy lên phát