Nghiên cứu sự phân hóa sinh địa học của nấm hương (Lentinula Edodes) và loài mới – bạch kim hương (Lentinula Platinedodes sp.nov) phát hiện ở Cát Tiên, nam Việt Nam.
33(3): 29-39 9-2011 Tạp chí Sinh học Nghiên cứu phân hóa sinh địa học nấm hơng (Lentinula edodes) loài - Bạch kim hơng (Lentinula platinedodes sp nov.) phát Cát Tiên, Nam Việt Nam Lê Xuân Thám, Nguyễn NhƯ CHƯƠNG Sở Khoa học Công nghệ Lâm Đồng Phạm Ngọc Dơng Vờn Quốc gia Cát Tiên Bùi Hoàng Thiêm Sở Khoa học Công nghệ Đồng Nai Trong đợt khảo sát đa dạng nấm hơng (Shiitake) thuộc chi Lentinula Earle, đ phát nhiều chủng địa lý phân hóa đặc sắc tõ vïng nói cao Sa Pa, Cao B»ng, B¾c ViƯt Nam, từ vùng núi cao Langbiang, Đà Lạt, Lâm Đồng đến vùng chuyển tiếp từ cao nguyên xuống đồng - Vờn quốc gia (VQG) Cát Tiên, Đồng Nai, Nam Việt Nam, đ phân tích so sánh với chủng Nhật Bản, Trung Quốc hình thái cấu trúc DNA [20] Trong giới thiệu sơ hình thái loài có tán nấm trởng thành màu bạch kim, dự kiến mới: Lentinula platinedodes, sp nov., gần với loài chuẩn Lentinula boryana - phân bố vùng Trung, Nam Mỹ Nghiên cứu cđa TrÞnh Tam KiƯt (1981) [8] cho thÊy chØ ghi nhËn mét loµi ë ViƯt Nam: Lentinula edodes (Berk.) Pegl với nấm hơng vùng núi cao Bắc Việt Nam giáp giới với Trung Quốc, vùng Cao Bằng, song đ số nét phân hóa đặc biệt: bao chung dạng bột dễ tan biến, hệ sợi không Sau này, nhấn mạnh thờm chủng Sa Pa có nhiều đặc điểm phân hóa gần với loài Lentinula lateritia L edodes đề nghị thứ địa lý [20] Trong công trình phân tích chủng nấm hơng Shiitake Bắc Nam Việt Nam sâu hình thái phân tử, so sánh với chủng loài phát Nam Cát Tiên, xác lập sở đầy đủ cho loài Lentinula platinedodes sp nov., tiÕn mét b−íc vỊ quan hƯ chủng loại phát sinh, phát sinh hình thái cá thể phân hóa sinh địa học Lentinula edodes khả nguồn gốc chi Lentinula i PHƯƠNG PHáP nghiên cứu Chủng nấm hơng Mời chủng nÊm h−¬ng thc chi Lentinula: (1) Chđng nÊm h−¬ng Sa Pa (SP) nguồn gốc hoang dại, đợc thu thập huyện Sa Pa, Lào Cai mọc rộ vào tháng mùa đông (3/2008, 2011) giá lạnh ( 7C), ngời dân địa thu hái rừng cung cấp; (2) Chủng nấm hơng Lentinula edodes nguồn gốc hoang dại ë Cao B»ng, tõ Së Khoa häc & C«ng nghƯ Cao Bằng; (3, 4) Chủng nấm hơng D2 L170 đợc nuôi trồng nhiều năm Đà Lạt, từ Viện Nấm Tottori, Nhật Bản; (5) Chủng nấm hơng Vân Nam, Trung Quốc (YuC) Lê Xuân Thám su tập; (6) Chủng nấm hơng thành phố Trờng Sa, Trung Quốc (ChsC); (7) Chủng nấm hơng nguyên gốc núi Langbiang, Đà Lạt thuộc Lentinula edodes Trơng Bình Nguyên su tập; (8, 9) Hai chđng thc loµi Lentinula lateritia (L.l, L.l’) hoang dại đợc thu thập vùng Bắc Cát Tiên (Cát Lộc, Bù Sa) núi Langbiang, Lâm Đồng độ cao gần 2000 m; (10) Trong đợt khảo sát mùa ma (510/2008) đầu năm (4/2009) tuyến Thác Trời, Nam Cát Tiên thu đợc mẫu loµi rÊt gièng víi loµi chn Lentinula boryana, cã thĨ Lentinula sp., bao gồm dạng Lentinula sp.2 Lentinula sp.3 Các chủng loài 29 đợc lu giữ Bảo tàng Nấm, VQG Cát Tiên Sở Khoa học Công nghệ, Lâm Đồng Toàn vật liệu giống nấm gốc đợc bảo tồn Bảo tàng giống chuẩn - VTCC thuộc Viện Vi sinh vật Công nghệ sinh học, Đại học quốc gia Hà Nội Phòng Công nghệ Vi sinh ứng dụng, Sở Khoa học Công nghệ Lâm Đồng Phân tích hình thái Các mẫu vật sau phân tích, chụp ảnh đợc định loại sở t liƯu cđa: Pegler (1975, 1983) [14, 15], Singer (1986) [19], Hibbett nnk (1998) [5], Hibbett (2001) [6], Trịnh Tam KiÖt (1981) [8], Mata & Petersen (2000, 2001) [9, 10], kết hợp tra cứu so sánh internet Phân lập giống nấm PGA (Potato Glucose Agar) cải tiến môi trờng tách giống khiết khảo sát hệ sợi môi trờng thạch có thành phần cho lít môi trờng: 200 g khoai tây, 100 g cà rốt, g peptone, 100 g giá đỗ, 0,5 g KH2PO4, 0,5g MgSO4, 15 g glucose, 15 g agar Khoai tây, cà rốt đợc gọt vỏ giá đỗ đợc rửa đun sôi khoảng 15-20 phút, lọc lấy nớc chiết, bỏ xác b Môi trờng PGA đợc hÊp khư trïng ë 121°C, atm 30 Môi trờng cấy chuyền giống cấp hai khảo sát hệ sợi môi trờng hạt: 1000 g gạo lức, 600-700 ml nớc, 0,5 g CaCO3 Gạo lức đợc nấu chÝn råi trén víi CaCO3 cho vµo èng nghiƯm vµ hÊp khư trïng ë 120°C, atm 60 Nuôi trồng thể Mùn ca nguyên liệu đợc bổ sung 10% cám gạo, 10% cám bắp, 5% bột bánh dầu 1% CaCO3 nớc, trộn để độ ẩm đạt 60-70% Sau kg chất đợc cho vào bịch hấp khử trïng 120 ë 121°C, atm vµ tiÕp tơc hấp khử trùng lần sau 24 h Giống đợc cấy từ môi trờng hạt sang môi trờng mùn ca phòng sạch, kín, dới lửa đèn cồn, ủ 18-25C, không cần ánh sáng Sau sợi nấm lan hết bịch mùn ca, bịch nylon đợc lột bỏ cho nhà trồng nấm nhiệt độ thích hợp 15-20C với độ ẩm không khí 80-90%, kín gió, bịch giống đợc đặt kệ theo chiều thẳng đứng Các chủng nấm hơng đợc nuôi trồng theo thứ tự: Thu hái nấm tự nhiên; 30 Phân lập giống khiết môi trờng PGA cải tiến; Khảo sát tốc độ lan tơ môi trờng hạt; Khảo sát tốc độ lan tơ môi trờng mùn ca; Khảo sát trình thể Qui trình phân tích rDNA Các bớc phân tích rDNA đợc tiến hành theo Lê Xuân Thám nnk (2010) [20] Các sản phẩm PCR tinh đợc khuếch đại với kít ABI PRISM Cycle sequencing đệm 5x sequence (Perkin-Elmer Applied Biosystem) với hỗn hợp phản ứng Trình tự ITS D1/D2 26S rDNA chủng nấm đợc đọc trực tiếp máy đọc trình tự tự động 3100 Avant Sau đó, kết trình tự đợc so sánh với trình tự loài đ đợc xác định GenBank Cây phát sinh chủng loại đợc xây dựng sử dụng phần mềm ClustalX 1.83 Kết hợp với phân loại truyền thống, mối quan hệ phát sinh tiến hóa taxon đợc thẩm định đánh giá ii KếT QUả Và THảO LUậN Phát nấm bạch kim hơng Lentinula platinedodes sp nov Cát Tiên Dự kiến loài ghi nhận cho khu hƯ Lentinula ë ViƯt Nam, ®−a tỉng sè hiƯn biết lên 2-3 loài Mẫu thu đợc Nam Cát Tiên bao gồm dạng hình đặc sắc Lần vùng Thác Trời nóng ẩm đầu mùa ma nhiệt đới (~30oC), nấm hơng mọc rộ, thể nét giống với L lateritia, song phù hợp với mô tả loài chuẩn L boryana Trung Mỹ Nhà nấm học Earle xác định loài chuẩn L cubensis, tìm thấy Cu Ba, Trung Mỹ, đó, loài cho chi Lentinula tách từ Lentinus Fr., vào năm 1909, dựa vào mẫu vật Berkeley Curtis xác lập: Lentinus cubensis Berk & Curt (1869) Thực ra, đồng vật tên loài trớc đó: Agaricus boryanus Berk & Mont (1849) - tức sớm 20 năm Hơn 100 năm sau, Singer R Trờng Đại học Tổng hợp Vienna, Austria khẳng định tính u tiên định ngữ loài boryanus chỉnh lí là: Lentinus boryanus (Berk & Mont.) Singer (1952, 1986) [18, 19] Còng kho¶ng 20 năm sau, Pegler (1975) [14] Vờn Thực vật Hoàng gia Kew, Anh, kết hợp tính đắn Earle (1909) Singer xác lập loài chuẩn: Lentinula boryana (Berk & Mont.) Pegler Chúng xin đề nghị tên tiếng Việt cho loài nấm Bạch kim hơng (vì màu bạch kim thể quả) a b Hình Dạng hình bạch kim nâu vẩy (giống với Lentinula edodes) loài Lentinula platinedodes a Mô tả Dạng hình bạch kim (Lentinula sp.2): Dạng boryana - Mũ nấm có đờng kính 3,5-5,5(-8) cm, chất thịt mềm, lồi đến phẳng, dẹt hay lõm, có lúc lõm sâu, trởng thành có màu vàng bạch kim đến trắng ngà, lợt màu tùy theo tuổi, có d i gân sọc hay có đốm màu nâu vàng, sáng, mờ, nhẵn lông hay có vảy nhỏ, đờng khía, mép uốn cong vào, già uốn cong lên, lợn sóng phân thùy, mặt có vẩy nhỏ trắng gần mép mũ nấm, thờng lợn sóng nhiều Phiến nấm phẳng lợn, cuối tách khỏi cuống, màu kem biến thành màu nâu bẩn, thâm lại ch¹m x−íc, hĐp, réng 2-3 mm, sÝt nhau, phiÕn dài ngắn khác nhau, mép phiến viền sắc Cuống di 2,5-6,5 cm ì 3,57,5 (15,5) mm, lúc đầu đính tâm sau lệch tâm, thờng cong, đặc Bề mặt trở nên màu trắng, dới có màu nâu gỉ sắt, với sợi lông vẩy nhỏ phủ rộng, lan tỏa khắp chiều dài có phần phía dới đế chân Bao nấm dạng vẩy, lông xơ mịn mọc dày, màu trắng, hay nhiều vòng vẩy bao chóng tàn cuống rơi tróc dần Lớp thịt nấm dày 2-5 mm trung tâm, trắng, 31 mọng nớc, có tạo thành keo gelatin chuyển khô, gồm hệ sợi nấm đan kết lại với nhau, có đờng kính 3-8 àm, phồng lên có đờng kính đến 16 àm, màng dày (0,5 àm), có khóa vách ngăn nhô lên rõ Bụi bào tử màu trắng, bào tử suốt, 5-6 ì 2-3 (5,7 0,3 × 2,7 ± 0,2) µm, Q = 2,2, h×nh elip thon, amylose, màng mỏng, nội chất đậm đặc Đảm bào 15-17 ì 3-4 àm, hẹp, hình chùy, mang cuống đính bào tử Phiến sắc cạnh, hữu thụ Lõi tầng sinh bào tử không đều, suốt, nhiều sợi nấm giống nhau, đồng nhất, có đờng kính 5-12 àm Hệ sợi lớp tầng sinh bào tử hòa lẫn với Sợi đồng (monomitic) có màng mỏng, đờng kính 4-5,7 àm Dạng hình nâu vẩy (Lentinula sp.3): Dạng hình edodes nh dòng Đông (Trung Quốc, Nhật Bản ), cuống tán thờng nhiều lông vẩy, dày mập nhiều Cấu tạo giải phẫu hệ sợi (monomitic) bào tử không khác biệt rõ rệt, phù hợp với phân tÝch cđa Guzman vµ nnk (1997) [2] vỊ kiĨu hƯ sợi loài Lentinula, Pleurotus số đại diện khác, so với L edodes loài có bào tử thuôn dài đôi chút Khi non phân biệt với L edodes, song nấm ngả già thờng vàng nâu nhẹ nâu nhợt, khác biệt rõ b a c Hình Hai dạng thể nhẵn (a) nhiều lông vẩy (b) bào tử đồng (c ) - chụp dới vật kính dầu (ì100) 32 Lu ý dạng gặp mọc gốc gỗ rộng phân bố phạm vị hẹp rừng Nam Cát Tiên b Nuôi trồng Trên chất mùn ca cao su, dạng bạch kim (Lentinula sp.2, hình 3a) lúc hình thành thể non giống với L edodes, nhiên, có lông vẩy thờng sớm rụng, tán xòe rộng hầu nh nhẵn già xòe uốn song mạnh, ngả nhợt màu nhanh Lúc dạng vàng nhợt (Lentinula sp.3, hình 3b) chuyển hóa hình thái tơng tự Khi non khó phân biệt với L edodes, nhng quan sát nấm lớn đến trởng thành lúc ngả già khó cho nấm hơng Shiitake Điều cho thấy giả thiết cho loài L platinedodes thực chất dạng phân hóa sinh địa học nhiệt đới cđa L edodes Còng t−¬ng tù nh− Pegler (1983) [15] nhận xét có lẽ L lateritia dạng nhiệt đới L edodes, nghĩa dạng nhợt màu, rụng lông vẩy sớm trở nên nhẵn phát sinh phân hóa thứ cấp, L edodes dạng nguyên sơ Các chủng khác đợc nuôi trồng đ công bố [20] a b Hình Thể nuôi trồng Đà Lạt Cát Tiên (từ 9/2010-6/2011) a non dạng hình L edodes trội; b lớn thể ngả bạch kim - L platinedodes 33 Nh− vËy, cã thĨ cho r»ng L edodes lµ loài trung tâm, gần với nhóm tổ tiên Lentinula, phát tán sang vùng nhiệt đới đ phân hóa mạnh, có lẽ nhánh phát tán sang châu Mỹ từ L edodes qua châu Âu qua eo biển Berrhing từ 34 triệu năm trớc [6] Sự phân hóa tiếp tục đ dẫn đến hình thành loài khác nh L aciculospora, L boryana L raphanica Điều thể rõ phân tích tiến hóa phân tử quan hệ chủng loại phát sinh c Phân tích giám định gene Kết giải trình tự rDNA cho thấy loài (dòng Lentinula sp.2 vµ Lentinula sp.3 thùc chÊt chØ lµ mét, dạng hình thái phân hóa) gần với taxon châu Mỹ 0,05 92 Lentinula novaezelandieae_U33074 80 Lentinula novaezelandieae_ U33079 Lentinula edodes_ AF031191 90 88 Sapa 97SP Lentinula lateritia_ U33070 51 56 _ Lentinula lateritia_ U33076 99 Lentinula lateritia_ U33072 Lentinula lateritia_ U33086 100 100 Lentinula lateritia_ U33085 Lentinula edodes_ U33091 100 D2Jp 77 YuC 79 ChsC 78 Ll' 100 Le_ ITS 73 CB 76 Ll 100 Lentinula sp.3 Lentinula sp.2 Lentinula boryana_ AY016440 100 Lentinula boryana_ U33077 55 Lentinula boryana_ AF031176 79 82 Lentinula boryana_ AF031175 53 Lentinula raphanica_ AY016442 58 100 Lentinula boryana_ AF079578 Lentinula raphanica_ AY016441 55 Lentinula boryana_ AF079579 90 100 Lentinula aciculospora_Costa_ AY016444 Lentinula aciculospora_ AY016443 Pleurotus ostreatus_EU420068 Hình Lentinula sp.2, Lentinula sp.3 taxon gần cận dựa rDNA ITS (5.8S) (trên dẫn liệu Mata & Petersen, 2001) Điều đáng ngạc nhiên loài lại gần với dòng Tây bán cầu Có lẽ tơng đồng với hình thành loµi míi ë ViƯt Nam (loµi L platinedodes) mµ quan hệ gần với dòng phân hóa châu Mỹ đợc phân tích trình tự rDNA - vùng ITS vùng D, kể so sánh quan hệ chủng 34 dẫn liệu cđa nhãm Mata & Petersen (2001) [9, 10] vµ nhãm Hibbett (1995, 1998) [4, 5] Râ rµng, loµi míi ë Việt Nam nh nhánh trung gian dòng (lineage) Đông bán cầu dòng Tây bán cầu (hình 4, 5) Đây minh chứng vế mối quan hƯ trùc tiÕp gi÷a chóng 62 53 78 D2Jp 60 U33089_Lentinula edodes 68 YuC 72 ChsC U33092_Lentinula edodes 54 U33091_Lentinula edodes edodes 62 U33093_Lentinula 100CB 75 Ll Le 73 Ll' 94 U33087_Lentinula edodes 60 AF031188_Lentinula edodes 55 AF031187_Lentinula edodes 90 AF031193_Lentinula edodes 83 AF031182_Lentinula edodes U33080_Lentinula edodes 50 AF031189_Lentinula edodes 74 U33088_Lentinula edodes 66 AF031186_Lentinula edodes U33090_Lentinula lateritia U33083_Lentinula lateritia 95 U33071_Lentinula lateritia 100 52 U33070_Lentinula lateritia U33072_Lentinula lateritia 51 AF031192_Lentinula lateritia 73 U33073_Lentinula lateritia 57 U33084_Lentinula lateritia 56 U33076_Lentinula lateritia lateritia 100 AF031180_Lentinula AF031179_Lentinula lateritia 64 100 U33075_Lentinula novaezeland 98 U33082_Lentinula novaezeland 50 U33079_Lentinula novaezeland novaezeland 67 U33081_Lentinula U33074_Lentinula novaezelandia 57 65AF031185_Lentinula edodes AF031191_Lentinula edodes 99 Sapa 64 SP 86 100 U33086_Lentinula lateritia U33085_Lentinula lateritia 100 Lentinula sp.3 Lentinula sp.2 U33078_ Lentinula boryana 100 U33077_ Lentinula boryana AF031175_ Lentinula boryana 88 AF031176_ Lentinula boryana 100 AF031177_ Lentinula boryana 77 AF031178_ Lentinula boryana Pleurotus ostreatus_EU420068 0,05 H×nh Quan hƯ chủng loại phát sinh loài Lentinula sp.2, Lentinula sp.3 taxon gần cận dựa rDNA ITS (5.8S) - dẫn liệu Hibbett, 1998 Các dòng D2 - Nhật Bản, YuC Vân Nam ChS Tràng Sa, Trung Quốc dòng Việt Nam: CB, L.e, L.l L.l quần tụ quanh L edodes nhận thấy Shiitake Sapa (SP) gần với nhánh (clades) L lateritia với L edodes CÊu tróc vïng D còng chØ c¸c mèi quan hệ (hình 6) 35 0,02 56 68 61 72 63 73 63 66 100 100 Lentinula edodes_ AF388060 Lentinula edodes_ AF042579 Lentinula lateritia_ AF356159 D2Jp YuC Ll' ChsC Lentinula edodes_ AF261557 Ll Le Lentinula novaezelandieae_ AF261561 83 Lentinula lateritia_ AF287872 72 Lentinula lateritia_AF261562 72 SaPa 71 Lentinula sp.2 57 Lentinula raphanica_AF356147 82 Lentinula boryana_ AF356152 84 100 Lentinula boryana_ AF261560 Gymnopus subpruinosus_AY639429 62 Rhodocollybia maculata_AF04259 Collybia dryophila_AF042595 Pleurotus ostreatus_DQ071722 Hình Quan hệ chủng loại phát sinh dựa vào trình tự rDNA 28S (vùng D1/D2) Nh mối quan hệ trực tiếp dòng Đông bán cầu Tây bán cầu đ có chứng với việc bổ sung loài L platinedodes trình phát sinh cá thể loài góp phần cho thấy có lẽ L edodes taxon trung tâm [16] dẫn đến phát tán phân hóa sinh địa học loài Shiitake Lentinula Phân hóa sinh địa học nấm hơng Lentinula Từ công trình cđa Hibbett vµ nnk (1995, 1998) [4, 5] vµ Hibbett (1992, 2001) [3, 6], Mata vµ nnk (2000, 2001) [9, 10] số tác giả khác nhận định nấm hơng có tổ tiên từ vùng Tây Nam Thái bình dơng - Đông 36 Nam á, đ phân ly thành nhóm lớn: Dòng Đông bán cầu (bao gồm loài) Dòng Tây bán cầu (3 loài) Đồng thời theo Hibbett vùng Tây Nam Thái bình dơng - Đông Nam trung tâm đa dạng sinh học di truyền Lentinula Nhánh lớn L edodes phát tán mạnh u vùng Đông thể tác động nhân tạo lịch sử chọn lọc, nuôi trồng lai tạo, trì tăng cờng (gây ra) tính tơng hợp đa dạng di truyền chủng khắp vùng châu - úc Shimomura nnk (1992, 2009) [16, 17], Mori vµ nnk (1974) [12], Chiu vµ nnk (1994) [1], FukumasaNakai vµ nnk (1994), cho r»ng vỊ thùc chÊt chúng loài tơng hợp cao (mating): L edodes phân ly cục số vùng địa lý Vấn đề cần đợc dẫn chứng cho thấy nhóm Tây bán cầu có quan hệ trực tiếp với nhóm Đông bán cầu, thực tế chúng bất tơng hợp [2, 9] Nhiều dẫn liệu thực nghiệm giải trình tự nhiỊu gene (kĨ c¶ gene tubulin, gene ty thĨ) còng đợc áp dụng chứng tỏ trình phân hóa mối quan hệ chặt chẽ [6, 10, 13, 22] Hiện giả thiết chúng có tổ tiên chung mà cha có dẫn liệu thuyết phục khả quan hệ trực tiếp Nhận định Pegler (1983) [15] cho rằng, dạng phân hóa sinh địa học vùng nhiệt đới đợc xác nhận phần phân tích rDNA gần đặc tính nguyên sơ gần L lateritia L boryana (song phân bố cách biệt nhau) ngụ ý chúng gần với nhóm tổ tiên Shiitake Vùng núi Bắc Việt Nam có số dòng phân hóa khác biệt với dòng Đông Dòng ë Cao B»ng (CB) víi bao chung d¹ng bét dƠ bong tróc thể trởng thành thờng nhẵn, nhợt màu, nhỏ thơm khô, dễ lai tạo với chủng L edodes nhập ngoại [7]; dòng Sapa (SP) thờng nâu đỏ lợt đến nâu đỏ sẫm, nhẵn, cuống thon, tơng tự nh L lateritia Vùng núi Langbiang, Nam Việt Nam (khá hẹp Lâm Đồng - Cát Tiên) có ý nghĩa quan trọng, cho thấy có dòng hình thái khác biệt Dòng ký hiệu L.e tơng đồng với dòng Đông á, nh Nhật Bản, Trung Quốc Trong đó, hai dòng L.l L.l lại thể phân hóa mạnh, tán nấm nhẵn thờng nâu đỏ đến nâu nhợt, mỏng, giống nh L lateritia [20] Nhận định Hibbett nnk (1998) [5], Hibbett (2001) [6] cho tổ tiên loài Lentinula vùng Tây Nam Thái bình dơng dựa ý kiến đại diện có tính nguyên sơ nh L lateritia L boryana Thực ra, Pegler (1983) [15] cho rằng, đại diện nguyên sơ L lateritia dạng phân hóa nhiệt đới L edodes, nghĩa chúng thứ sinh Phát cho phép mở rộng hợp lý Đông Nam - Tây Nam Thái bình dơng Đặc biệt, phân bố Nam - Nam Thái bình dơng L lateritia giao hòa hình thái phân tử với c¸c biÕn thĨ phong phó cđa L edodes chøng tá mối quan hệ gần gũi chúng Các chủng sinh địa học nấm hơng Lentinula edodes Việt Nam (bản địa) gần gũi với nhóm nguồn gốc Đông Nam giao hòa với dòng Đông Kết phân hóa sinh địa học Lentinula Việt Nam góp phần vào tiến trình nghiên cứu sâu Iii Kết luận Đ phân tích nét phân hóa sinh địa học 10 chủng nấm hơng (Shiitake) Lentinula edodes thu đợc vùng núi cao Bắc Nam Việt Nam, so sánh với chủng Trung Quốc Nhật Bản phát nấm bạch kim hơng (Lentinula platinedodes sp nov) Vờn quốc gia Cát Tiên nh dạng phân hãa tõ Lentinula edodes ë vïng sinh th¸i chun tiÕp cao nguyên - đồng nhiệt đới, với thể trởng thành ngả màu bạch kim, tơng đồng cao với loài chuẩn châu Mỹ: Lentinula boryana, hình thái phân tử, nh minh chứng cho quan hệ chủng loại phát sinh nhóm Shiitake Đông bán cầu Tây bán cầu Sự chuyển hóa hình thái loài thể rõ nuôi trồng thể Có thể giả thiết nhóm Shiitake Tây bán cầu kết trình phân hóa tơng tự phát tán Lentinula edodes Đông bán cầu Tài liệu tham kh¶o Chiu S W., Ma A M., Lin F C and Moore D., 1994: Genetic homogeneity of cultivated strains of Shiitake (Lentinula edodes) used in China as revealed by the polymerase chain reaction Mycol Res, 100: 1393-1399 Guzm¸n G., Salmones D., Tapia F., 1997: Lentinula boryana: morphological variation, taxonomic position, distribution and relationship with Lentinula edodes and related species Rept Tottori Mycol Inst, 35: 1-28 Hibbett D S., 1992: Towards a phylogenetic classification for Shiitake: taxonomic history and molecular perspectives Rept of the Tottori Mycol Inst, 30: 30-42 Hibbett D S., Fukumasa-Nakai Y., 37 Tsuneda A., Donoghue J M., 1995: Phylogenetic diversity in Shiitake inferred from nuclear ribosomal DNA sequence Mycologia, 87(5): 618-638 Hibbett D S., Hansen K., Donoghue J M., 1998: Phylogeny and biogeography of Lentinula inferred from an expanded rDNA dataset Mycol Res, 102(9): 1041-1049 Hibbett D S., 2001: Shiitake mushrooms and molecular clocks: Historical biogeography of Lentinula J Biogeogr, 28: 231-241 Võ Thị Phơng Khanh, Phạm Thành Hổ, 1999: Lai nÊm h−¬ng (Lentinula edodes) Cao B»ng víi chđng L170 nhËp nội Tạp chí Di truyền ứng dụng, 1: 15-19 TrÞnh Tam KiƯt, 1981: NÊm lín ë ViƯt Nam Nxb Khoa häc vµ Kü thuËt Hµ Néi Mata G., Guzm¸n G., 1989: HibridacÝon entre una cepa Mexicana de Lentinus boryanus y una Asi¸tica de Lentinus edodes (Hybridization between a Mexican strain of Lentinus boryanus and an Asiatic strain of Lentinus edodes) Rev Mex Micol., 5: 7780 10 Mata J L., Petersen R H., 2000: A new species of Lentinula (Agaricales) from Central America Mycoscience, 41: 351-355 11 Mata J L., Petersen R H., Hughes K W., 2001: The genus Lentinula in the Americas Mycologia, 93: 1102-1112 12 Mori K., Fukai S., Zennyozi A., 1974: Hybridization of shiitake (Lentinus edodes) between cultivated strains of Japan and wild strains grown in Taiwan and New Guinea Mush Sci., 9: 391-403 13 Nicholson M S., Bunyard B A., Royse D J., 1997: Phylogeny of the genus Lentinula 38 based on ribosomal DNA restriction fragment length polymorphisms analysis Mycologia, 89: 400-407 14 Pegler D N., 1975: The classification of the genus Lentinus Fr (Basidiomycota) Kawaka, 3: 11-20 15 Pegler D N., 1983: The genus Lentinula (Tricholomataceae tribe Collybieae) Sydowia, 36: 227-239 16 Shimomura N., Hasebe K., FukumasaNakai Y., Komatsu K., 1992: Intercompatibility between geographically distant strain of Shiitake Rept Tottori Mycol Inst., 30: 26-29 17 Shimomura N., Hasebe K., Terashima K., 2009: Intersterility between populations of Lentinula edodes from Papua New Guinea Mycoscience, 50: 240-243 18 Singer R., 1952: Type studies on agarics III Lilloa, 25: 26-29 19 Singer R., 1986: The Agaricales in modern taxonomy 4th ed Koeltz Scientific Books, Koenigstein, Germany: 981 pp 20 Lê Xuân Thám, Nguyễn Lê Quốc Hùng, Phạm Ngọc Dơng, Trơng Thị Hồng, Hoàng Thị Hoan, Trơng Bình Nguyên, Đào Thị Lơng, 2010: Nghiên cứu phát phân hóa nấm hơng Lentinula edodes Sapa, (Bắc Việt Nam), Lentinula cf lateritia Langbiang, Đà Lạt Lentinula sp tìm thấy Cát Tiên (Nam Việt Nam) Tạp chí Công nghệ sinh học, 8(1): 87-101 21 Thon M R and Royse D J., 1999: Evidence for two independent lineages of shiitake of the Americas (Lentinula boryana) based on rDNA and β-tubulin gene sequences Mol Phy Evol., 13: 520-524 The biogeographical speciations of Shiitake Lentinula edodes and a new species Lentinula platinedodes sp nov found in Cat tien, South Vietnam Le Xuan Tham, Nguyen Nhu chuong, Pham Ngoc Duong, Bui Hoang Thiem SUMMARY Lentinula edodes (Berk.) Pegler has been taxonomically studied for 130 years ago with collections of authentic specimens as type of Lentinus tonkinensis Pat (already treated as synonym), collected from Ba Vi mountainous region (near to Hanoi) by Balansa (1887-1888), deposited in Paris (Patouillard, 1928) and recently supplemented with some newly - collected strains, native to high mountainous regions, North Vietnam: Cao Bang and Sa Pa shiitake, near to South China Some Shiitake strains obtained from Japan, China as repesentatives of East Asian races of Lentinula edodes were analysed comparatively both morphological and molecular characteristics, showing that the Vietnam natively geographical races of Shiitake collected in Sa Pa mountains (1600-2800 m alt.), North Vietnam are so clearly segregated from strains imported from Changsha, Yunnan (China) and Tottori (Japan) that are East Asian races, typical temperate Shiitake Lentinula edodes (similar to Cao bang race), that markedly similar to Southeast Asian - tropical Shiitake forms, but close to the species Lentinula lateritia and L novaezelandieae, based on rDNA both D and ITS sequences In South Vietnam, Shiitake races of Lentinula edodes, L cf lateritia and L platinedodes sp.nov were newly found on Langbiang mountain (1500-2000 m alt.) in Da Lat city, highland of Lam Dong province and in Cat Tien national park (600-150 m alt.), lowerland of Dong Nai province, particularly among which the last one is showing high similarity in morphological characters with both Amarica’s Shiitake - type species, Lentinula boryana and L edodes, due to the forms at different stages of development of fruitbodies, collected in the wild This new species showed some phenotypte forms similar to each others in their early stages of morphological genesis of young fruitbodies in nature and in cultivations However, they are the same in rDNA sequences, particularly located in the clades of New World Shiitake lineage They share common secondary tropically features of speciations in the Lentinula, and their ontogenesis of fruitbodies shows the more primary fibrilose forms of Lentinula edodes differentiating to the secondary glabrous froms commonly found in species in South East Asia - Australian regions The occurrence of tropical Shiitake both L cf lateritia and L platinedodes in Vietnam would be a new evidence for direct relationships present between Old and New World Shiitake speciation lineages, that China - South East Asia regions would be an origin center of diversity of Lentinula, and the South East Asia Australian regions would be a focus of tropical and subtropical diversity of Shiitake speciations and harbor Lentinula morphological species with high similarity and compatibility, and the temperate Shiitake races from the pivotal species Lentinula edodes differenciate and disperse, so largely in Australasia, particularly under cultivation, selection and breeding Ngµy nhËn bµi: 12-7-2011 39 ... chủng sinh địa học nấm hơng Lentinula edodes Việt Nam (bản địa) gần gũi với nhóm nguồn gốc Đông Nam giao hòa với dòng Đông Kết phân hóa sinh địa học Lentinula Việt Nam góp phần vào tiến trình nghiên. .. phần cho thấy có lẽ L edodes taxon trung tâm [16] dẫn đến phát tán phân hóa sinh địa học loài Shiitake Lentinula Phân hóa sinh địa học nấm hơng Lentinula Từ công trình Hibbett nnk (1995, 1998)... nghiên cứu sâu Iii Kết luận Đ phân tích nét phân hóa sinh địa học 10 chủng nấm hơng (Shiitake) Lentinula edodes thu đợc vùng núi cao Bắc Nam Việt Nam, so sánh với chủng Trung Quốc Nhật Bản phát nấm