Định loại và phân biệt hai dạng Metaceria của sán lá phổi thu từ cua suối Potamiscus Tannanti Rathbun, 1904 tại tỉnh Yên Bái

Định loại và phân biệt hai dạng Metaceria của sán lá phổi thu từ cua suối Potamiscus Tannanti Rathbun, 1904 tại tỉnh Yên Bái thông qua nghiên cứu tách riêng từng bộ phận của cua; xét nghiệm phân cua; phân loại sán lá phổi trưởng thành dựa trên đặc điểm hình thái.

29(1): 6-9 3-2007 Tạp chí Sinh học định loại phân biệt hai dạng metacercaria sán phổi thu từ cua suối Potamiscus tannanti rathbun, 1904 tỉnh Yên Bái Nguyễn Thị Lê, Phạm Ngọc Doanh Nguyễn Thị Minh, Nguyễn Văn Hà Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật Bệnh sán phổi Paragonimiasis bệnh lây truyền ngời động vật; bệnh lu hành nhiều nớc giới, đặc biệt nớc thuộc châu á, châu Phi [1, 6, 16] Việt Nam, bệnh sán phổi đợc quan tâm nghiên cứu khoảng 10 năm trở lại Các kết nghiên cứu cho thấy bệnh phân bố nhiều vùng thuộc tỉnh miền núi phía Bắc, nơi ngời dân có tập quán ăn cua sống hay nớng [3, 4, 5, 10, 15] Cho đến nay, có loài sán phổi đợc phát Việt Nam, Paragonimus westermani (Kerbert, 1878) [8]; P heterotremus Chen et Hsia, 1964 [7, 9] vµ P ohirai Miyazaki, 1939 [9] Tuy nhiên, nghiên cứu phát metacercaria loài P heterotremus, đồng thời khẳng định loài phổ biến Việt Nam tác nhân g©y bƯnh cho ng−êi [3, 5, 14] B»ng kü tht sinh học phân tử, kết nghiên cứu Lê Thanh Hòa cs (2006) khẳng định thu đợc loài P heterotremus [11] Với mục đích điều tra xác định tồn metacercaria loài sán phổi, thu thập xét nghiệm cua suối tỉnh Yên Bái Kết đ phát hai dạng metacercaria sán phổi loài cua suối Potamiscus tannanti Rathbun, 1904 khác hẳn cấu trúc kích thớc Hai dạng metacercaria đợc gây nhiễm riêng cho động vật thí nghiệm đ thu đợc sán trởng thành Dạng metacercaria nhỏ sán trởng thành phát triển từ chúng có đặc điểm đặc trng, dễ dàng định loại loài P heterotremus Trái lại, dạng metacercraria có kích thớc lớn đợc phát sán trởng thành phát triển từ chúng hoàn toàn khác hẳn với loài sán phổi đ đợc phát Việt Nam, nh loài khác giống Paragonimus; loài cho khoa học I Phơng pháp nghiên cứu - Cua suối P tannanti đợc thu thập huyện tỉnh Yên Bái đợc định loại theo Đặng Ngọc Thanh Hồ Thanh Hải (2006) [13] - Từng phận cua đợc tách riêng Ðp d−íi hai tÊm kÝnh, sau ®ã kiĨm tra d−íi kính lúp để thu metacercaria sán phổi - Dựa vào hình thái kích thớc, dạng metacercaria khác đợc tách riêng gây nhiễm cho động vật thí nghiệm (chó, mèo) - Định kỳ xét nghiệm phân động vật thí nghiệm để tìm trứng sán phổi Khi phát trứng sán mổ động vật thí nghiệm để thu sán trởng thành, bảo quản cồn 70o làm tiêu cố định cách nhuộm các-min - Phân loại sán phổi trởng thành dựa đặc điểm hình thái Các đặc điểm hình thái chủ yếu xếp gai cuticun bề mặt thể, kích thớc giác miệng giác bụng, nh quan sinh dục II Kết nghiên cứu Kết xét nghiệm cua suối P tannanti tỉnh Yên Bái đ thu đợc hai dạng metacercaria Công trình đợc hoàn thành với tài trợ Trung tâm hỗ trợ nghiên cứu châu sán phổi Hai dạng metacercaria khác hẳn cấu trúc kích thớc (hình 1) Dạng metacercaria thứ (M1) có kÝch th−íc nhá, 0,176-0,250 × 0,168-0,230 mm (trung b×nh 0,212 ± 0,018 × 0,187 ± 0,016), cã líp vá dày Dạng thứ hai (M2) có kích thớc lớn hơn, 0,738-0,943 × 0,648-0,931 mm (trung b×nh 0,811 ± 0,079 × 0,775 0,100), có lớp vỏ mỏng Đây dạng metacercaria sán phổi đợc phát Việt Nam Hình Hai dạng metacercaria sán phổi thu đợc từ cua suối P tannanti Rathbun, 1904 tỉnh Yên Bái a M1 metacercaria loài P heterotremus; b M2 metacercaria cđa Paragonimus sp D¹ng metacercaria M1 có kích nhỏ với đặc điểm đặc trng, dễ dàng định loại metacercaria loài P heterotremus Trái lại, dạng M2 có cấu trúc giống với metacercaria số loài sán phổi (P skrjabini), nhng hoàn toàn khác với tất loài sán phổi khác kích thớc, gồm loài đ đợc phát Việt Nam: P ohirai (0,4-0,5 mm), P westermani (0,3-0,4 mm), P skrjabini Chen, 1959 (0,42-0,55 mm), P harinasutai Miyazaki and Vajrasthira, 1967 (0,5-0,6 mm), dạng metacercaria thu đợc có kích thớc tới 0,811 ì 0,775 mm Hai dạng metacercaria đợc tách riêng gây nhiễm cho động vật thí nghiệm (chó, mèo); đ thu đợc sán trởng thành Từ dạng metacercaria nhỏ M1, sau 45-60 ngày gây nhiễm, đ phát trứng phân động vật thí nghiệm Sán trởng thành từ dạng metacercaria mang đặc điểm đặc trng loài P heterotremus [2]: gai cuticun bề mặt thể xếp đơn giác miệng (0,84 ì 0,98 mm) lớn gần gấp đôi giác bụng (đờng kính 0,48 mm) (hình 2) Từ dạng metacercaria (M2), đ thu đợc sán trởng thành Trứng sán đợc phát phân động vật thí nghiệm sau 90 ngày gây nhiễm Thời gian dài nhiều so với loài P heterotremus (45-60 ngày) Những cá thể sán thu đợc từ dạng metacercaria dễ dàng phân biƯt víi loµi P heterotremus ë tû lƯ kÝch th−íc giác bám Loài P heterotremus có giác miệng lớn gấp đôi giác bụng, mẫu vật có giác miệng nhỏ giác bụng, với đặc điểm mô tả nh sau (dựa cá thể): kích thớc thể 9,40-10,0 ì 5,12-5,84 mm; bề mặt phủ gai đơn; kích thớc giác miệng 0,754-0,760 ì 0,738-0,740 mm; giác bụng lớn giác miệng, có kích thớc 0,836-0,840 ì 0,902-0,908 mm tỷ lệ giác bụng/giác miệng 1,2; giác bụng nằm khoảng giữa, dịch nửa trớc thể, khoảng cách từ tâm giác bụng đến mút trớc thể 4,2mm, đến mút sau thể 5,2 mm ; buồng trứng phân thùy, kích thớc 0,820-0,840 ì 1,230-1,246 mm, tinh hoàn phân thuỳ, có kích thớc 0,984-0,890 ì 1,312-1,314 mm Trøng cã kÝch th−íc 0,0800,103 × 0,045-0,057 mm (trung b×nh 0,093 ± 0,005 × 0,054 ± 0,003) (h×nh 3) Với đặc điểm trên, thấy mẫu vật khác với loài P ohirai (có gai cuticun xếp thành nhóm) loài P westermani (giác miệng lớn giác bụng) So với loài khác giống Paragonimus, mẫu vật gần giống víi loµi P skrjabini vµ loµi P harinasutai ë hai đặc điểm bật gai cuticun xếp đơn giác bụng lớn giác miệng [12] Tuy nhiên, mẫu vật lại có đặc điểm khác so với hai loài giai đoạn metacercaria sán trởng thành Chúng gần giống với loài P harinasutai giai đoạn trởng thành, nhng lại khác biệt giai đoạn metacercaria: metacercaria loài P harinasutai có kích thớc nhỏ, có khoảng trống hạt globule màu hồng bên metacercria, metacercaria mẫu sán có kích thớc lớn hơn, khoảng trống hạt globule màu hồng Ngợc lại, mẫu vật có cấu trúc metacercaria gần giống với loài P skrjabini, nhng giai đoạn trởng thành có thể hình ovan tinh hoàn nhỏ hơn, loài P skrjabini có thể dài tinh hoàn lớn (bảng 1) Hình Paragonimus heterotremus Hình Paragonimus sp Bảng So sánh số đặc điểm loài Paragonimus sp với số loài sán phổi khác Đặc điểm Kích thớc meta (mm) Vỏ Khoảng trống Hạt globule Gai cuticun Giác miệng/ giác bụng Tinh hoµn P P heterotremus westermani P ohirai Paragonimus sp P skrjabini P harinasutai 0,21 × 0,18 0,3-0,4 0,4-0,5 0,81 × 0,77 0,42-0,55 0,5-0,6 dầy không không đơn giác miệng lớn gấp đôi giác bụng to dầy không không đơn giác miệng lớn giác bụng to dầy nhóm giác bụng > giác miệng to mỏng không không đơn dầy không không đơn giác bụng > giác miệng to mỏng có có đơn Những so sánh cho thấy dạng metacercaria thu đợc sán trởng thành phát triển từ chúng khác với loài giống Paragonimus đ đợc công bố; loài sán phổi cho khoa học Tuy nhiên, số lợng mẫu nghiên cứu ít, nên để khẳng định loài mới, cần phải nghiên cứu thêm hình thái phân tử với số lợng mẫu vật nhiều giai đoạn phát triĨn kh¸c III KÕt ln Ph¸t hiƯn hai dạng metacercaria sán phổi tồn loài cua suối P giác bụng > giác miệng nhỏ giác bụng > giác miệng nhỏ tannanti tỉnh Yên Bái Dạng thứ (M1) có kích thớc nhỏ với lớp vỏ dày Dạng thứ hai (M2) có kích thớc lớn có lớp vỏ mỏng Dạng metacercaria có kích thớc nhỏ sán trởng thành phát triển từ chúng dễ dàng định loại loài P heterotremus Dạng metacercaria lớn sán trởng thành chúng khắc hẳn với loài P heterotremus loài khác giống Paragonimus Những mẫu vật gần giống với hai loài P skrjabini P harinasutai xếp gai cuticun giác bụng lớn giác miệng; nhiên khác víi loµi P skrjabini vỊ kÝch th−íc cđa tinh hoµn, khác với loài P harinasutai cấu trúc kích thớc metacercaria Có thể loài cho khoa häc Landmann H., Ngu D V and Thai D D., 1961: Wochenschrift fur die Gesamte Medizin, 16: 1355-1364 Nguyễn Thị Lê, Lê Đăng Hà, Cao Văn Viên, 1997: Tạp chí Sinh học, 19(1): 5-7 Tài liệu tham khảo 10 Nguyễn Thị Lê, Đặng Tất Thế, Phạm Ngäc Doanh, 1997: Y häc ViÖt Nam, 2: 3540 11 Le T H et al., 2006: Acta Trop., 98: 25-33 Blair D., Xu Z B., Agatsuma T., 1999: Adv Parasitol, 42: 113-222 Chen H T and Hsia T K., 1964: Acta Zhongshan University, 2: 236-238 Ph¹m Ngäc Doanh, Đặng Tất Thế, Nguyễn Thị Lê, 2002: Tạp chí Sinh häc, 24(1): 14-22 Doanh P N., Le N T., The D T., 2005: Asian Parasitology, 1: 149-153 Nguyễn Văn Đề cs., 1998: Thông tin phòng chống sốt rét bệnh ký sinh trùng, 2: 35 Keiser J and Utginger J., 2005: Emerg Infect Dis, 10: 1507-1514 Kino H et al., 1995: Japan J Parasitol., 44: 470-472 12 Miyazaki I and Vajrasthira S., 1967: Ann Trop Med Parasitol., 62: 81-87 13 Đặng Ngọc Thanh, Hồ Thanh Hải, 2006: Động vật chí Việt Nam, tập Giáp xác nớc Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 14 Cao Văn Viên, 1997: Kỷ yếu Hội nghị khoa học - Công nghệ - Môi trờng lần thứ V tỉnh miền núi phía Bắc, 81-84 15 Cao Văn Viên cs., 1994: Tạp chí Y häc thùc hµnh, 2: 4-6 16 WHO/FAO, 2004: Report of World Health Organization, Regional office for the Western Pacific, Manila, Philippines identification and distinction of two Paragonimus metacercaria types found in the same crab species Potamiscus tannanti Rathbun, 1904 collected in yenbai province Nguyen Thi Le, Pham Ngoc Doanh Nguyen Thi Minh, Nguyen Van Ha Summary Although three species of the genus Paragonimus Braun, 1899, including P westermani (Kerbert, 1878), P heterotremus Chen et Hsia, 1964 and P ohirai Miyazaki, 1939, have been recorded in Vietnam, only the metacercaria of P heterotremus has been collected by previous authors During investigations in the Yenbai province, we have collected two types of Paragonimus metacercariae in the same freshwater crab, Potamiscus tannanti (Rathbun, 1904) They remarkably differed from each other in morphology and size The small metacercariae which were 0.212 ± 0.018 × 0.187 ± 0.016 mm in size, had thick inner cyst wall In contrast, the bigger metacercariae, which were found for the first time in Vietnam, were 0.811 ± 0.079 × 0.775 ± 0.100 mm in size and provided with thin inner cyst wall, occupying the entire space of the cyst The small metacercariae types and its adult worms were completely identical to P heterotremus In contrast, the big metacercaria types and its adult worms recovered from experimental dogs and cats differed from other known Paragonimus species Morphologically, they were somewhat similar to P skrjabini Chen, 1959 and P harinasutai Miyazaki and Vajrasthira, 1967, but different from them either in metacercaria stage or adult worm These Paragonimus sp samples collected from the Yenbai province of Vietnam, might be of a new species to science Ngµy nhËn bµi: 8-9-2006 ... metacercaria sán phổi đợc phát Việt Nam Hình Hai dạng metacercaria sán phổi thu đợc từ cua suối P tannanti Rathbun, 1904 tỉnh Yên Bái a M1 metacercaria cđa loµi P heterotremus; b M2 metacercaria... nhỏ tannanti tỉnh Yên Bái Dạng thứ (M1) cã kÝch th−íc nhá víi líp vá dµy Dạng thứ hai (M2) có kích thớc lớn chØ cã mét líp vá máng D¹ng metacercaria cã kích thớc nhỏ sán trởng thành phát triển từ. .. để khẳng định loài mới, cần phải nghiên cứu thêm hình thái phân tử với số lợng mẫu vật nhiều giai đoạn phát triển khác III Kết luận Phát hai dạng metacercaria sán phổi tồn loài cua suối P gi¸c