Nghiên cứu cố định kháng thể hCG trên đế polystyrene sử dụng trong phân tích beta-hCG

Phân tích nồng độ beta-hCG có ý nghĩa quan trọng trong chẩn đoán và sàng lọc sơ sinh. Trong nghiên cứu này chúng tôi tối ưu hóa các điều kiện đính kháng thể hCG lên đế polystyrene (PS) bằng phương pháp hấp phụ để sử dụng phân tích beta-hCG bằng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang.

ISSN: 1859-2171 e-ISSN: 2615-9562 TNU Journal of Science and Technology 208(15): 117 - 123 NGHIÊN CỨU CỐ ĐỊNH KHÁNG THỂ HCG TRÊN ĐẾ POLYSTYRENE SỬ DỤNG TRONG PHÂN TÍCH BETA-HCG Tạ Văn Thạo1, Trần Hải Yến1,2, Nguyễn Thị Quỳnh3, Phạm Trường Long4, Nguyễn Trường Chung5, Mai Xuân Dũng6* Trường Đai học Sư phạm Hà Nội, 2Trường PTTH Ứng Hòa A, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - ĐHQG Hà Nội, 4Đại học Cần Thơ, Bệnh viện Đa khoa Xanh Pôn,6Trường Đại học Sư phạm Hà Nội TĨM TẮT Phân tích nồng độ beta-hCG có ý nghĩa quan trọng chẩn đoán sàng lọc sơ sinh Trong nghiên cứu chúng tơi tối ưu hóa điều kiện đính kháng thể hCG lên đế polystyrene (PS) phương pháp hấp phụ để sử dụng phân tích beta-hCG kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang Sử dụng kết hợp kháng thể hCG đánh dấu với Eu(III) dung dịch tăng cường tín hiệu huỳnh quang lựa chọn điều kiện hấp phụ tối ưu nồng độ dung dịch 2,5μg/L, thời gian hấp phụ 24 Hoạt tính kháng thể hCG cố định đế PS thay đổi không đáng kể lưu giữ 4oC tuần Quy trình phân tích sử dụng đế PS cố định hCG có độ chọn lọc đặc hiệu với beta-hCG, có độ lệch trung bình -2,1% so với Kit phân tích chuẩn, có giới hạn phát (LOD) giới hạn phân tích (LOQ) 11,9 17,9 ng/ml Kết cho phép sử dụng quy trình phân tích tự xây dựng dựa đế PS cố định hCG để phân tích beta-hCG với độ xác cao, chi phí thấp với cơng nghệ hồn tồn chủ động Từ khóa: Phân tích, beta-hCG, cố định kháng thể, miễn dịch huỳnh quang, hấp phụ Ngày nhận bài: 30/9/2019; Ngày hoàn thiện: 05/11/2019; Ngày đăng: 07/11/2019 A STUDY TO ANCHOR HCG ON POLYSTYRENE FOR IMMUNOANALYSIS OF BETA-HCG Van-Thao Ta1, Hai-Yen Tran1,2, Quynh Nguyễn Thi3, Truong Long Pham4, Truong Chung Nguyen5, Xuan-Dung Mai6* Hanoi University of Education, 2Ung Hoa A high school, VNU University of Science, 4College of Natural Science - Can Tho University, St Paul Hospital, 6Hanoi Pedagogical University ABSTRACT Measurements of beta form of human chorionic gonadotropin (hCG) provide important information in a variety of clinical situations and prenatal screening In this study, we optimized conditions to absorb hCG antibody onto polystyrene (PS) substrates for immunofluorescence analysis of hCG The conditions were monitored by evaluating the photoluminescent (PL) intensity obtained upon using Eu(III) labelled hCG antibody and PL enhancement solution The optimized concentration of hCG antibody in the absorbent solution was found to be 2.5μg/L and the absorption time was 24 hours The reactivity of the absorbed hCG antibody decreased negligibly after three weeks of storing at oC The immunofluorescence procedure based on the hCG/PS substrates was highly selective to beta-hCG, giving good analytical results when compared with standard Kit Lower limit of detection (LOD) and lower limit of quantification (LOQ) of the analytical procedure were estimated to be 11.9 and 17.9 ng/ml, respectively The results demonstrated in this paper provide a cost-effective and precise method for quantification of beta-hCG based on hCG antibody absorbed on PS substrates Keywords: Analytical method, beta-hCG, hCG antibody anchoring, immunofluorescence, absorption Received: 30/9/2019; Revised: 05/11/2019; Published: 07/11/2019 * Corresponding author Email: xdmai@hpu2.edu.vn http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 117 Tạ Văn Thạo Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN Giới thiệu hCG (human chorionic gonadotropin) sialoglycoprotein với trọng lượng phân tử khoảng 46.000 dalton, gồm hai tiểu đơn vị Alpha (α) Beta (β) α-hCG glycopeptide có 92 amino acid có trình tự trùng với kích thích tố tuyến yên glycoprotein, luteinizing, kích thích tố nang trứng kích thích tố hormone tuyến giáp [1] β-hCG có 145 amino acid có trình tự đặc trưng tìm thấy hCG [2] hCG sinh từ trophoblast, hormone mang thai quan trọng giúp q trình dung nạp thai nhi thành cơng cách tăng cường Tregs (T regulatory cell recruitment) đến bề mặt phân cách thai bà mẹ [3] Ngoài ra, hCG tác động đến nhiều loại tế bào liên quan đến trình mang thai như: giảm sinh sôi chức kháng nguyên tế bào tua (dendric cells), giảm hoạt tính tế bào NK gây độc máu ngoại vi, tăng cường sinh sôi tế bào NK sản xuất cytokine tử cung tế bào nội mạc [4] Việc phân tích nồng độ hCG huyết nước tiểu cung cấp thông tin quan trọng cho nhiều trường hợp chuẩn đoán sàng lọc theo dõi thai, rối loạn thai kỳ, sàng lọc trước sinh ung thư phụ khoa [5] Tuy nhiên, xuất phát từ chuyển hóa phức tạp, hCG tồn huyết nhiều dạng cấu trúc khác [6] làm cho việc phân tích nồng độ hCG với độ xác cao, khoảng nồng độ rộng, vấn đề quan tâm cải tiến [7,8] Phương pháp miễn dịch huỳnh quang sử dụng phổ biến để phân tích hCG có nhiều ưu điểm thời gian phân tích ngắn, khoảng phân tích rộng, cường độ tín hiệu lớn, tín hiệu bị nhiễu phát xạ [9] Trong phương pháp này, kháng thể hCG cố định bề mặt đế phần lại cặp kháng thể hCG đánh dấu với chất huỳnh quang Cố định kháng thể hCG lên bề mặt đế hấp phụ vật lý đảm bảo độ chọn lọc cao theo 118 208(15): 117 - 123 chế miễn dịch hoạt tính hCG trì trạng thái tự pha lỏng Tuy vậy, trình hấp phụ vật lý hCG hay protein nói chung bề mặt đế cứng polystyrene (PS) phụ thuộc vào nhiều yếu tố thực nghiệm độ phân cực điện tích bề mặt PS, hấp phụ cạnh tranh, nồng độ, nhiệt độ thời gian [10] Trong báo này, chúng tơi nghiên cứu tối ưu hóa phương pháp cố định kháng thể hCG đế polystyrene (PS) để phân tích hCG kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang Thực nghiệm 2.1 Nguyên vật liệu Đĩa 96 giếng polystyrene (PS) tiêu chuẩn, PBS (phosphate buffer saline), sodium azide (NaN3), BSA (Bovine Serum Albumin), kháng thể (antibody) kháng nguyên (antigen) hCG mua từ Thermofisher Dung dịch đánh dấu kháng thể hCG có chứa 300 nmol phức chất 1-(4isothiocyanatobenzyl) diethylenetriamineN,N,N′,N″,N″-pentaacetic acid (DTTA) Eu(III); DELFIA® Enhancement Solution có chứa phối tử 2-naphthoyltriluoroacetone (NTA), chất hỗ trợ phân lập triotylphosphine oxide (TOPO), chất hoạt động bề mặt Triton X-100 acetic acid để tạo môi trường acid (pH= 3,2) mua từ PerkinElmer 2.2 Cố định hCG lên bề mặt PS Pha loãng dung dịch hCG gốc, có nồng độ gốc 4750 µg/mL, hỗn hợp dung dịch gồm dung dịch đệm PBS nồng độ 0,01M NaN3 nồng độ 5% với tỷ lệ thể tích 90:1 để thu dung dịch hCG có nồng độ khác Lấy 0,2 ml dung dịch cho vào giếng PS ủ 20oC 20h trước rửa hai lần với dung dịch PBS 0.01M để loại bỏ hCG bám dính bề mặt Sau thêm 0.3 ml dung dịch BSA 1% pha đệm PBS 0,01M ủ tiếp 2h 4oC để ghim hCG bề mặt PS 2.3 Đánh dấu kháng thể hCG với Eu (III) Pha loãng dung dich kháng thể hCG gốc đệm carbonate (pH= 9,5) để thu dung http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Tạ Văn Thạo Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN dịch có nồng độ mg/ml Lấy 250 µL dung dịch hCG cho vào vial chứa dung dịch đánh dấu Eu-DTAA ủ 4oC qua đêm Làm hCG đánh dấu với Eu (ký hiệu hCG-DTAA-Eu) khỏi phức Eu-DTAA phương pháp lọc gel sử dụng cột Superdex 200 (Pharmacia) với pha động dung dịch đệm Tris-HCl (pH= 7,8) có chứa 0,9% NaCl 0,05% NaN3 Quá trình đánh dấu hCG biểu diễn sau: NH2 NCS COON + N N COO- Eu Eu COO- 2.4 Xây dựng đường chuẩn Pha dung dịch kháng nguyên hCG có nồng độ là: 10,6; 106; 1030; 5180 10100 ng/ml từ dung dịch gốc ban đầu đệm PBS 0,01M Thêm 25 µl dung dịch kháng nguyên hCG 0,2 ml đệm PBS 0,01 M vào giếng PS cố định kháng thể hCG tiến hành ủ 1h 25oC Rửa giếng với dung dịch PBS 0,01M để loại bỏ kháng nguyên hCG chưa phản ứng với kháng thể hCG cố định Thêm vào giếng 200 µl dung dịch hCG-DTTA-Eu nồng độ 0,4 µg/ml ủ mẫu 30 phút nhiệt độ phòng kết hợp với lắc nhẹ Rửa giếng với dung dịch PBS 0,01M để loại bỏ hCG-DTTA-Eu không phản ứng Sau đó, thêm 200 µl dung dịch tăng cường tín hiệu huỳnh quang (dung dịch chứa phối tử NTA, xem phần 2,1 trên) lắc nhẹ phút Quá trình tạo thành phức chất Eu với NTA TOPO sau: COON + N N phức (NTA)3-Eu-(TOPO)3 Đường chuẩn xây dựng dựa nồng độ chuẩn kháng nguyên hCG ban đầu cường độ huỳnh quang phức (NTA)3-Eu-(TOPO)3 thu bước sóng 615 nm, kích thích 340 nm 3.5 Phương pháp nghiên cứu Cường độ tín hiệu huỳnh quang đo máy huỳnh quang Victor2 Fluorometer (PerkinElmer) Phương trình đường chuẩn phụ thuộc cường độ huỳnh quang vào nồng độ kháng nguyên hCG xây dựng dựa data fitting phần mềm Origin Pro Kết thảo luận COO- NH2 NCS 208(15): 117 - 123 COO- Eu Eu COOCOO- Do cặp kháng thể hCG (một có định đế PS đánh dấu với Eu) liên kết kiểu “bánh kẹp” với kháng nguyên hCG nên nồng độ kháng nguyên hCG nồng độ http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Phân tích hCG kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang vắn tắt sơ đồ hình Ban đầu kháng thể hCG cố định bề mặt đế PS phương pháp hấp phụ vật lý Thời gian ủ nồng độ hCG ban đầu định đến chất lượng đơn lớp hCG bề mặt PS Khi cho mẫu kháng nguyên hCG cần phân tích hCG-DTTA-Eu vào giếng chứa kháng thể hCG có định bề mặt PS, trình bắt cặp theo chế “bánh kẹp” xảy đặc hiệu với kháng nguyên hCG [11] Do đó, nồng độ kháng ngun hCG cần phân tích tỷ lệ với mật độ Eu3+ có bề mặt Tuy nhiên, cường độ huỳnh quang phức chất Eu3+ DTTA thấp nên cần sử dụng dung dịch tăng cường độ huỳnh quang [12] Cơ chế hóa học q trình phản ứng trao đổi phối tử từ DTTA sang NTA pH acid (xem phản ứng phần 2.4) Ngoài ra, TOPO vừa phối tử tương hỗ vừa làm cho phức chất trở nên kị nước, ngăn cản ảnh hưởng dập tắt huỳnh quang phân tử nước với Eu3+ [13] Chất hoạt động bề mặt X100 giúp cho phức NTA-Eu-TOPO phân tán tốt nước Do phản ứng trao đổi phối tử xảy hoàn toàn, nên dựa vào cường độ huỳnh quang phức NTA-Eu-TOPO 615 nm, thu kích thích 340 nm, phân tích nồng độ kháng nguyên hCG ban đâu 119 Tạ Văn Thạo Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN Rửa 208(15): 117 - 123 hCG PS PS TOPO Eu Eu3+ Eu Eu NTA TOPO NTA PS hCG-DTTA-Eu PS PS : Kháng thể hCG PS: polylstyrene Eu : Kháng nguyên hCG : Kháng thể hCG đánh dấu với Eu3+ Hình Sơ đồ quy trình phân tích nồng độ kháng nguyên hCG phương pháp miễn dịch huỳnh quang a) b) 2500 1.25 2.50 5.00 10.0 PL Intensity (a.u) PL Intensity (a u) 2h 5h 10h 20h 24h 5000 7500 10000 hCG concentration (ng/ml) g/ml g/ml g/ml g/ml 2500 5000 7500 10000 hCG concentration (ng/ml) Hình Ảnh hưởng cường độ huỳnh quang theo nồng độ kháng nguyên hCG điều kiện cố định khảng thể hCG khác nhau: a) thời giản ủ mẫu b) nồng độ kháng thể hCG dung dịch hấp phụ Nồng độ kháng thể hCG a) 2,50 μg/ml; thời gian ủ mẫu b) 24h Để tìm điều kiện tối ưu cho trình cố định kháng thể hCG bề mặt giếng PS, thay đổi nồng độ hCG dung dịch hấp phụ ban đầu thay đổi thời gian lưu tiến hành đo huỳnh quang với nồng độ kháng nguyên hCG chuẩn Hình kết phụ thuộc cường độ huỳnh quang theo nồng độ kháng nguyên hCG điều kiện cố định kháng thể hCG khác Có thể thấy hình 2a, thời gian ủ ngắn, 2h, cường độ huỳnh quang khơng biến đổi tuyến tính theo nồng độ kháng nguyên hCG Điều mật độ kháng thể hCG cố định đế PS không ổn định từ mẫu sang mẫu khác thời gian ủ ngắn Khi tăng thời gian ủ mẫu, mật độ kháng thể hCG cố định bề mặt PS tăng dần, thể cường độ huỳnh quang tăng, đạt giá trị bão hòa sau thời gian 20h Do đó, chúng tơi lựa chọn thời gian ủ mẫu 24h cho tất thí nghiệm tiếp 120 theo Hình 2b thể phụ thuộc cường độ huỳnh quang theo nồng độ kháng nguyên hCG thay đổi nồng độ kháng thể hCG dung dịch hấp phụ giữ nguyên thời gian ủ mẫu 24h Có thể thấy rằng, tất nồng độ kháng thể hCG khảo sát, cường độ huỳnh quang tăng tuyến tính theo đồng độ kháng nguyên hCG Kết phù hợp với kết luận hấp phụ bão hòa kháng thể hCG bề mặt PS thời gian 24h hình 2a Cường độ huỳnh quang đạt cực đại khoảng nồng độ kháng nguyên hCG khảo sát nồng độ kháng thể dung dịch hấp phụ 2,50 μg/ml Có thể nồng độ hCG cao dẫn tới hấp phụ đa lớp xếp chồng lên làm giảm mật độ vị trí hoạt động, vị trí bắt cặp với kháng nguyên hCG, bề mặt Từ kết hình 2b, chúng tơi đến kết luận nộng độ hấp phụ tối ưu kháng thể hCG 2,50 μg/ml http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Tạ Văn Thạo Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN a) b) 2800 3200 PL Intensity (counts/sec) PL Intensity ( counts/sec) x 1000 208(15): 117 - 123 2600 2400 2200 2000 3000 2800 2600 2400 2200 blank PAPP-A AFP Free  -hCG Time (week) Hình a) Ảnh hưởng thời gian lưu đến cường độ huỳnh quang đo mẫu kháng nguyên hCG chuẩn b) Cường độ huỳnh quang thực quy trình phân tích mẫu trắng (blank) số loại protein khác PAPP-A, AFP, β-hCG tự Để đánh giá độ đặc hiệu phương pháp phân tích dựa vào đế PS gắn kháng thể hCG, tiến hành phép phân tích lập lại sử dụng số loại protein khác PAPP-A, AFP β-hCG tự để thay kháng nguyển hCG Cường độ huỳnh quang so sánh hình 3b so sánh với mẫu trắng (blank) Kết cho thấy, cường độ huỳnh quang thu phân tích mẫu protein tương đương với mẫu trắng, hay tương đương với 1% cường độ tín hiệu thu phân tích hCG (xem hình 3a) Điều chứng tỏ kháng thể hCG cố định đế PS bắt cặp đặc hiệu với kháng nguyên hCG http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 800 PL Intensity (counts/s) Để đánh giá độ bền lớp kháng thể hCG cố định bề mặt PS, lưu mẫu 4oC túi nilon kín Sau khoảng thời gian lưu khác nhau, đế PS có hCG cố định sử dụng để tiến hành đo cường độ huỳnh quang với mẫu kháng nguyên hCG chuẩn có nồng độ 1030 ng/ml Kết đo cường độ huỳnh quang 10 đế PS khác trình bày hình 3a Có thể thấy, cường độ huỳnh quang trung bình giảm dần, giảm khoảng 5% sau tuần lưu giữ Giá trị tương đương với độ lệch cường độ huỳnh quang thời gian lưu chứng tỏ hoạt tính kháng thể hCG trì tốt đế PS lưu giữ 4oC túi nilon kín 600 400 200 0 2000 4000 6000 8000 10000 hCG (ng/ml) Hình Đường chuẩn phụ thuộc cường độ huỳnh quang vào nồng độ hCG Hình trình bày cường độ huỳnh quang theo nồng độ hCG đường chuẩn Phương trình đường chuẩn xác định phương pháp tối ưu hóa cường độ tín hiệu huỳnh quang ( y ) theo nồng độ ( x ) theo phương trình: y  y0  Ae x t ; y cường độ huỳnh quang cực đại; t nồng độ phân rã A thừa số trước hàm mũ Các giá trị xác định data fitting có phần mềm OriginPro SR4 Để đánh giá độ tin cậy phương pháp, chúng tơi tiến hành phân tích ngẫu nhiên mẫu hCG so sánh đối chứng với kết phân tích theo quy trình chuẩn; kết tổng hợp bảng Có thể thấy kết phân tích kháng nguyên hCG phương pháp xây 121 Tạ Văn Thạo Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN 208(15): 117 - 123 dựng nghiên cứu có độ tin cậy tốt, với sai lệch trung bình so với phương pháp phân tích chuẩn khoảng -2,1% Sử dụng số liệu tín hiệu huỳnh quang xác định mẫu trắng (hình 4b) phương trình đường chuẩn (hình 5) giá trị giới hạn phát (LOD) giới hạn phân tích định lượng (LOQ) xác định theo tài liệu [14 ] tương ứng 11,9 ng/ml 17,9 ng/ml Kết tốt so với phương pháp phân tích miễn dịch huỳnh quang sử dụng hạt nano từ nghiên cứu [15] Bảng So sánh kết phân tích hCG mẫu thực Mẫu HN01250419 HN02250419 HN03250419 HD04250419 HN05250419 HN06250419 HY01260419 HN02260419 HN03260419 VP04260419 TN (ng/ml) 810 4460 1957 510 4697 1220 1767 1463 2380 1487 ĐC (ng/ml) 870 4473 2107 477 4400 1300 1907 1600 2443 1457 % sai khác -6,9 -0,3 -7,1 7,0 6,7 -6,2 -7,3 -8,5 -2,6 2,1 Mẫu ND01270419 HN02270419 HN01050519 HP02050519 HB03050519 HN01110519 HN02110519 HN02110519 HN03110519 HN04110519 TN (ng/ml) 2437 1787 2513 2847 1153 803 3207 3475 2850 1773 ĐC (ng/ml) 2660 1899 2613 2633 1192 790 3346 3450 2787 1847 % sai khác -8,4 -5,9 -3,8 8,1 -3,3 1,7 -4,2 0,7 2,3 -4,0 TN: Kết phân tích hCG theo quy trình thực nghiệm sử dụng đế PS cố định kháng thể hCG; ĐC: Kết phân tích hCG sử dụng KIT phân tích chuẩn Kết luận Trong báo này, nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện cố định kháng thể hCG lên bề mặt đế PS để sử dụng cho phân tích hCG theo chế miễn dịch huỳnh quang Điều kiện xác định nồng độ dung dịch hấp phụ 2,5μg/L, thời gian hấp phụ 24 hCG giữ hoạt tính đế PS khoảng thời gian từ đến tuần bọc kín lưu giữ 4oC Quy trình phân tích miễn dịch huỳnh quang sử dụng đế PS gắn kháng thể hCG có độ chọn lọc đặc hiệu với kháng nguyên hCG; có giới hạn phát giới hạn phân tích Kết phân tích hCG mẫu thực tế cho độ sai lệch trung bình -2,1% so với quy trình chuẩn Lời cám ơn Nghiên cứu tài trợ từ nguồn kinh phí đề tài cấp Bộ, kinh phí KHCN Trường ĐHSP Hà Nội cho đề tài mã số: B.2018-SP2-13 Cảm ơn công ty ChemedicVN tài trợ chi phí phân tích mẫu hCG đối sánh 122 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Glycoprotein hormones alpha chain precursor - Homo sapiens UniProt accession number P01215 UniProt Consortium [2] Choriogonadotropin subunit beta - Homo sapiens UniProt accession number P01233 UniProt Consortium [3] D Lachlan Hay, “Placental histology and the production of human choriogonadotrophin and its subunits in pregnancy”, British Journal of Obstetrics and Gynaecology, T.95, tr.1268-1275, 1988 [4] A Schumacher, K Heinze, J Witte, E Poloski, N Linzke, K Woidacki, A C Zenclusen, “Human chorionic Gonadotropin as a central regulator of pregnancy immnune tolerance”, The Journal of Immunology, T.190, pp 2650-2658, 2013 [5] A S Bansal, S A Bora, S Saso, J R Smith, M R Johnson, M-Y Thum, “Mechanism of human chorionic gonadotrophin-mediated iummunodulation in pregnancy”, Expert Review of Clinical Immunology, T.8, S.8, pp 747-753, 2012 [6] U-H Stenman, A Tiitinen, H Alfthan, L Valmu, “The classification, functions and clinical use of different isoforms of HCG”, Human reproduction update, T.12, pp.769-784, 2006 [7] Laurence A Cole, “Antibodies and hCG tests”, in Human Chorionic Gonadotropin (hCG), Elsevier, second edition, 2015, pp 313-320 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Tạ Văn Thạo Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN [8] Laurence A Cole, “Problems with today’s hCG pregnancy tests”, in Human Chorionic Gonadotropin (hCG), Elsevier, second edition, 2015, pp 323-334 [9] Luigi Cinquanta, Desré E Fontana, Nicola Bizzaro, “Chemiluminescent immunoassay technology: what does it change in autoantibody detection?”, Autoimmun Highlights, T.8, tr9, 2017 [10] Weiping Qian, Danfeng Yao, Fang Yu, Bin Xu, Rong Zhou, Xiang Bao, Zuhong Lu, “Immobilization of Antibodies on Ultraflat Polystyrene Surfaces”, Clinical Chemistry, T.46,S.9, pp.1456-1463, 2000 [11] K R Blomberg, V-M Mukkala, H H O Hakala, P H Makinen, M U Suonpaa, I A Hemmila, “A dissociative fluorescence enhancement technique for one-step time-resolved immunoassays”, Analytical and Bioanalytical Chemistry, T.399, pp 1677-1682, 2011 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 208(15): 117 - 123 [12] T K Christopoulos, E P Diamandis, “Fluorescence immunoassays”, in Immunoassay, Academic Press, pp 309-335, 1996 [13] M Hogmander, C J Paul, S C Elina, H V Eskonen, T Pahikkala, S Pihlasalo, “Luminometric label array for counting and differentiation of bacteria”, Analytical Chemistry, T.89, S.5, pp 3208-3216, 2017 [14] A Shrivastava, V B Gupta, “Methods fof the determination of limit of detection and limit of quantitation of the analytical methods”, Chronicles of Young Scientists, T.2, S.1, pp.21-25, 2011 [15] Ng T B Việt, T V Thạo, Ng B Ngân, Ng V Minh, “Nghiên cứu ứng dụng nano từ phân tích beta-hCG”, Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ, T.50, tr 96-99, 2019 123 ... Kết phân tích hCG theo quy trình thực nghiệm sử dụng đế PS cố định kháng thể hCG; ĐC: Kết phân tích hCG sử dụng KIT phân tích chuẩn Kết luận Trong báo này, nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện cố định. .. Ban đầu kháng thể hCG cố định bề mặt đế PS phương pháp hấp phụ vật lý Thời gian ủ nồng độ hCG ban đầu định đến chất lượng đơn lớp hCG bề mặt PS Khi cho mẫu kháng nguyên hCG cần phân tích hCG- DTTA-Eu... kiện cố định kháng thể hCG khác Có thể thấy hình 2a, thời gian ủ ngắn, 2h, cường độ huỳnh quang khơng biến đổi tuyến tính theo nồng độ kháng nguyên hCG Điều mật độ kháng thể hCG cố định đế PS