Phát hiện các dạng đột biến gen G6PD ở người Việt Nam bằng kỹ thuật sinh học phân tử

chính xác các tổn thương gen gây bệnh thiếu me G6PD, cũng như kiểm soátbệnh tốt hơn nhờ phát hiện người phụ nữ mang gen bệnh và tư vấn ditruyền cho gia đình, tăng hiệu quả trong việc phò

ĐẶT VẤN ĐỀ

Glucose - 6 - phosphat dehydrogenase (G6PD hay G6PDH) là mộtenzyme oxy hóa khử, đóng vai trò then chốt trong quá trình chuyển hóaglucose theo con đường hexose monophosphat trong hồng cầu nhằm tạo ramột chất khử vô cùng quan trọng là NADPH Enzym này có vai trò tham giavào quá trình chống lại các tác nhân oxy hóa, giúp bảo vệ màng hồng cầuđược bền vững, bảo vệ cấu trúc hemoglobin, cấu trúc các enzyme có tronghồng cầu để duy trì sự sống cho tế bào hồng cầu

Vì vậy, khi thiếu hụt enzyme này, gây nên bệnh thiếu máu tan máu Đây

là bệnh lý enzyme hồng cầu hay gặp nhất ở người Trên thế giới khoảng 5%người mắc bệnh này, gặp nhiều ở Địa Trung Hải, Châu Phi và Châu Á Tỉ lệthiếu hụt G6PD cũng như các dạng đột biến khác nhau giữa các vùng địa lý vàcác dân tộc Tại Việt Nam, bệnh tương đối phổ biến, tỷ lệ ở các dân tộc 0,5 -21% tại các dân tộc phía Bắc[2]: khoảng 26% ở người Mường ở Ba Vì [17];người Kinh ở Hà Nội là 1,75% [5] và khoảng 5,5% ở các tỉnh phía Nam [14]

Cơ sở di truyền học của bệnh là do đột biến xảy ra trên gen mã hóaG6PD Gen này nằm trên nhánh dài, vùng 2, băng 8 của nhiễm sắc thể giớitính X (Xq28) Không có alen tương ứng trên nhiễm sắc thể Y nên gặp nhiều

ở nam, nữ thường là người mang gen bệnh và di truyền cho con trai Ngàynay cïng víi sù ph¸t triÓn vît bËc cña c«ng nghÖ sinh häc ph©n tö trongnghiªn cøu Y häc, c¬ së gen häc cña bÖnh ngµy cµng s¸ng tá Trên thế giới cónhiều công trình nghiên cứu phân tích cơ sở di truyền học của bệnh thiếu hụtG6PD, đã có hơn 140 loại đột biến được công bố trên toàn thế giới với nhiềudạng biến thể khác nhau[14] Hầu hết các đột biến này đều là đột biến điểm

và đều dẫn đến sự thay đổi acid amin trong phân tử protein tạo enzymeG6PD Các nhà khoa học có thể phân tích DNA của người bệnh để xác định

chính xác các tổn thương gen gây bệnh thiếu me G6PD, cũng như kiểm soátbệnh tốt hơn nhờ phát hiện người phụ nữ mang gen bệnh và tư vấn ditruyền cho gia đình, tăng hiệu quả trong việc phòng ngừa bệnh tật đồngthời nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe trong cộng đồng.

Nằm trong khu vực có tỉ lệ mắc bệnh thiếu hụt G6PD cao, Việt Nam đã

có một số công trình nghiên cứu về đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng, đánhgiá tỷ lệ mắc bệnh, các dạng đột biến trên một số nhóm dân tộc, địa lý…Tuynhiên cho đến nay chưa có công trình nào nghiên cứu toàn diện về đột biến genG6PD ở người Việt Nam, tạo cơ sở dữ liệu để làm tiền đề cho việc xâydựng bản đồ gen ở bệnh nhân thiếu hụt men G6PD ở Việt Nam

Do vậy, đề tài này được thực hiện với hai mục tiêu:

1) Phát hiện các dạng đột biến gen G6PD ở người Việt Nam bằng kỹ thuật sinh học phân tử.

2) Bước đầu xây dựng bản đồ đột biến gen G6PD ở người Việt Nam.

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

Quá trình tách chiết enzym ra khỏi hồng cầu cũng ngày càng đạt được

độ tinh sạch cao hơn Cùng với sự phát triển của sinh học phân tử cácdạng đột biến của G6PD ngày càng được phát hiện nhiều Các phươngpháp phát hiện thiếu hụt từ định lượng, định tính, bán định lượng, testnhanh ngày càng phát hiện chính xác hơn và ngày càng được áp dụng rộngrãi trong cộng đồng

1.1.1 Cấu trúc và cơ chế hoạt động của G6PD

G6PD là một enzym rất đa dạng, có cấu trúc bậc 4 phức tạp , G6PD hồngcầu người có hai đặc tính cơ bản là tính không đồng nhất và tính chuyển dạngphân tử Cấu trúc dimer và tetramer hay dimer và monomer có thể chuyểndạng lẫn nhau trong in vitro, nhưng dường như dạng monomer không xuấthiện trong điều kiện sinh lý, chỉ có dimer và tetramer là hai dạng hoạt độngcủa enzyme, trong hồng cầu người dạng dimer chiếm ưu thế

Cấu trúc của enzyme bị ảnh hưởng bởi pH của môi trường: Ở môi trường

pH thấp, enzyme tồn tại chủ yếu dưới dạng tetramer; ở pH gần trung tính,

enzyme tồn tại dưới dạng dimer; ở môi trường pH trung tính thì dimer vàtetramer có tỷ lệ bằng nhau

Hình 1.1 Cấu trúc G6PD dạng monomer

Một monomer gồm 515 acid amin, có trọng lượng phân tử khoảng59.256 dalton [4], [5] Sự trùng hợp các monomer thành dimer và các dạngcao hơn (tetramer…) có hoạt tính xúc tác cần sự có mặt của NADP+ Như vậy,NADP+ được gắn với enzyme vừa như một phức hợp cấu trúc, vừa như một

cơ chất của phản ứng Mỗi dimer có hai vị trí gắn NADP+ : Tại vị trí gắnNADP+ xúc tác thì NADP+ gắn lỏng lẻo, dễ bị khử thành NADPH Tại vị trígắn NADP+ chức năng thì NADP+ gắn chặt chẽ hơn và cần thiết để duy trì cấutrúc oligo hoạt động của enzyme Có bốn acid amin liên quan đến vị trí gắnNADP+ cấu trúc là: Cys 385, Lys 386, Arg 387, Arg 393 Vị trí gắn NADP+xúc tác là Lys 47 Ngoài ra còn hai vị trí gắn NADP+ nữa là acid amin 242-248

và 38 - 44 NADP+ không chỉ là cơ chất cho enzyme mà còn ổn định G6PDbằng việc ngăn cản sự chuyển enzyme ở dạng dimer thành dạng monomerkhông hoạt động , ,

Km của G6PD với NADP+ rất thấp, khoảng 2-4 µmol/l và enzyme bị ứcchế cạnh tranh bởi NADPH Do đó, tỷ lệ NADPH/NADP+ trong hồng cầu tựđiều hoà tốc độ của phản ứng enzyme

1.1.2 Vai trò của G6PD trong chuyển hoá hồng cầu

G6PD thuộc loại enzyme oxy hóa khử, xúc tác cho phản ứng oxy hóaGlucose - 6 - Phosphat thành 6 - Phosphogluconolacton G6PD là enzymethen chốt mở đầu và điều khiển tốc độ con đường hexose monophosphat (haycon đuờng pentose phosphate) Hexose monophosphat là con đường oxy hoáglucose xảy ra ở các mô song song với con đường đường phân, song chiếm tỷ

lệ thấp hơn nhiều (7 - 10%) Con đường này tuy không cung cấp nhiều nănglượng nhưng cung cấp nhiều NADPH, đồng thời cung cấp Ribose - 5 -Phosphat sử dụng cho quá trình tổng hợp acid nucleic Ở hồng cầu người vàmột số mô khác, sự thoái hoá glucose theo con đường hexose monophosphatlại chiếm ưu thế Đặc biệt trước một tác nhân oxy hoá bất ngờ thì sự giáng hoáglucose theo con đường này lại tăng lên gấp hai mươi đến ba mươi lần, thậm chícao hơn nữa Trong con đường này, G6PD oxy hoá G - 6 - P thành 6 -Phosphogluconolacton, với Coenzyme là NADP+, chất nhận hydro và trở thànhNADPH

NADPH là một Coenzyme khử, cần cho phản ứng của nhiều con đườngsinh tổng hợp khác nhau và liên quan mật thiết với một chuỗi phản ứng tiếptheo để bảo vệ hồng cầu như: tái tạo glutathion dạng khử (GSH) từ glutathiondạng oxy hoá (GSSG), khử MetHb thành Hb

Hồng cầu có chức năng vận chuyển oxy Do đó, cấu trúc của hồng cầuthường xuyên có nguy cơ bị oxy hoá và rất dễ nhạy cảm với các quá trình oxyhoá nên dễ dàng bị phá huỷ Đặc biệt trong hồng cầu thiếu các con đường tổnghợp NADPH khác nên khả năng sống sót của hồng cầu truớc sự công kích củacác tác nhân oxy hoá từ môi trường phụ thuộc vào hiệu quả hoạt động của conđường Hexose monophosphat

Hình 1.2: Vai trò của G6PD trong hồng cầu

NADPH hoạt động thông qua phản ứng chuyển GSSG thành GSH với

sự tham gia của enzyme glutathion reductase GSH tạo thành sẽ ngăn cản quátrình peroxide các cấu tử của hồng cầu, trực tiếp bảo vệ hồng cầu trước sự tấncông của các tác nhân oxy hoá Ngoài ra, để bảo vệ hồng cầu còn có các cơchế khác: quá trình khử MetHb cùng đồng thời diễn ra nhờ hệ thống enzymemethemoglobin reductase (MetHbR) mà cần coenzyme là NADPH và NADH.Khi NADPH bị oxy hoá, GSSG bị khử thành GSH, NADPH chuyển thànhNADP+ và G6PD trở nên hoạt động, khử NADP+ thành NADPH Khi hồngcầu thiếu G6PD, con đường hexose monophosphat bị ngừng trệ NADPH sẽkhông được tạo thành, dẫn đến GSH không đủ Kết quả là việc bảo vệ hồngcầu không hiệu quả Đặc biệt, khi hồng cầu bị tấn công bởi các tác nhân oxyhoá, quá trình oxy hoá vốn xảy ra rất mạnh và có nguy cơ làm tăng quá trìnhperoxid hoá các cấu tử của nó GSH sẽ càng không đủ cho nhu cầu của quátrình chuyển hoá, làm thay đổi chức năng màng hồng cầu và hemoglobin bịbiến tính Hemoglobin bị oxy hoá thành một hợp chất không bền HbH2O2 vớihàm lượng khá cao và rất độc cho hồng cầu Kết quả cuối cùng là màng hồngcầu bị tổn thương và hồng cầu bị vỡ

Km của G6PD với NADP+ rất thấp, enzyme bị ức chế cạnh tranh bởiNADPH Vì vậy tỉ lệ NADPH/NADP+ trong hồng cầu tự điều hòa tốc độ củaphản ứng enzyme Trong thời kỳ trơ, tỉ lệ này rất cao và G6PD gần như bị ứcchế hoàn toàn.

về enzyme G6PD và các hình thái lâm sàng cũng như cơ sở sinh học phân tửliên quan đến thiếu hụt G6PD Mỗi biến thể dẫn đến mức độ thiếu hụt enzymekhác nhau và chúng liên quan đến mức độ nặng nhẹ của tan máu trên lâmsang: thiếu máu tan máu mạn tính, thiếu máu tan máu cấp tính thứ phát saudung thuốc, hoặc hoàn toàn không có triệu chứng

Năm 1996, trên tạp chí Blood, Ernest Beutler có viết: trên thế giới cókhoảng 400 triệu người thiếu hụt G6PD, bệnh gặp ở tất cả các dân tộc Tầnsuất thiếu hụt G6PD khác nhau rất nhiều theo từng vùng dân cư và vùng lãnhthổ, nhưng cao nhất ở vùng Địa Trung Hải, châu Phi và Nam Á - khu vực nằmtrong vùng dịch tễ sốt rét Tỉ lệ thiếu hụt G6PD ở châu Phi là 20%; ở châu

Mỹ: cao nhất là người da đen (17 - 27%) ; Venezuela 2 - 12%; người Do Thái

Nam theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Ngọc Phượng tỉ lệ thiếu hụt G6PD là5,5%

1.2.2 Biểu hiện lâm sàng

Khác với các nguyên nhân gây thiếu máu tan máu khác, những người bịthiếu hụt G6PD thường không biểu hiện triệu chứng lâm sàng Chỉ khi tiếpxúc với tác nhân oxy hoá, triệu chứng lâm sàng thường thể hiện chủ yếu là

những cơn tan máu Tuỳ thuộc vào loại đột biến mà hoạt độ G6PD của người

bệnh khác nhau, cùng với tính chất của từng tác nhân oxi hóa và các bệnh ditruyền đồng thời khác mà các triệu chứng lâm sàng khác nhau

Biểu hiện hay gặp nhất của thiếu hụt G6PD là thiếu máu tan máu mạntính Tuy nhiên, ở trẻ em thì biểu hiện phổ biến và rất quan trọng lại là vàng

da sơ sinh Thiếu máu tan máu mạn tính không có hồng cầu hình cầu là mộtbiểu hiện hiếm gặp của bệnh

1.2.2.1 Vàng da sơ sinh

Vàng da sơ sinh là một triệu chứng của nhiều nguyên nhân khác nhau, là

do trong máu có sự gia tăng chất bilirubin, một sản phẩm dị hoá củahemoglobin Mức độ vàng da phụ thuộc vào mức độ tan máu

Vàng da sơ sinh có hai loại là sinh lý và bệnh lý Vàng da sinh lý thườngdiễn ra trong ba ngày đầu và kết thúc tối đa là 10 ngày, mức độ vàng da nhẹ.Vàng da bệnh lý xuất hiện khi nồng độ bilirubin trong máu cao hơn 20mg/dl

Hậu quả nghiêm trọng của bệnh lý này là vàng nhân não , , Trẻ sơ sinh sẽ có

biểu hiện là những cơn tăng trương lực cơ, xoắn văn, mất các phản xạ sơ sinh,ngừng thở tím tái và rất dễ tử vong Nếu trẻ qua khỏi thì sẽ để lại những dichứng nặng nề như rối loạn ngoại tháp (múa vờn, múa giật, rối loạn ngônngữ…) hoặc bất thường thính lực, thị giác và thiểu sản phát triển răng Vàng

da nhân não ảnh hưởng đến khả năng phát triển tinh thần và vận động của trẻ Thiếu G6PD như một yếu tố nguy cơ dẫn đến vàng da bệnh lý Do đó

việc phát hiện thiếu hụt G6PD sẽ giúp cho quá trình phát hiện những triệuchứng nặng giúp cho quá trình theo dõi tốt hơn tránh bỏ sót đáng tiếc.

1.2.2.2 Thiếu máu tan máu cấp tính

Ernet Beutler phát hiện ra hiện tượng tan máu lần đầu tiên sau khi nghiêncứu một số bệnh nhân sử dụng thuốc chống sốt rét là Primaquin Sau đó quanghiên cứu người ta đã khám phá ra rằng không chỉ Pnimaquin mà sau sử dụngmột số thuốc khác cũng gây nên hiện tượng tan máu: Aspirin (thuốc giảm đau),Procainamide (thuốc điều trị bệnh tim mạch), DDS (thuốc diệt khuẩn) Triệuchứng tan máu dẫn đến vàng da thường xảy ra vào ngày thứ 2,3 sau khi dùngthuốc

Ngoài ra hiện tượng tan máu còn được biết đến sau khi bệnh nhân sửdụng một số loại thức ăn có tính oxi hóa cao như long não, rượu vang đỏ, cácsản phẩm từ đậu tương, đậu nành và đặc biệt là các loại đậu Fava dẫn đến hộichương Favism

Hội chứng Favism: là bệnh lý thiếu máu tan máu đã được biết đến từthời Pythagoras Người ta nhận thấy rằng sau khi ăn đậu Fava, thì một sốngười 24 giờ sau có thể xuất hiện hiện tượng tan máu có khi rất dữ dội Sau

đó nhiều nghiên cứu cho thấy rằng tình trạng này liên quan đến thiếu hụtG6PD Đa số các trường hợp xảy ra ở những cá thể thiếu G6PD nặng nhưngđôi khi cũng thấy ở người có thiếu hụt nhẹ Tuy nhiên cũng có trường hợpthiếu mà không có bệnh sinh lý sau khi ăn đậu Fava Trong đậu Fava thànhphần liên quan trực tiếp gây ra hiện tượng tan máu là glucosidevicine vàdividine Aglycone của chúng được thay thế bởi prymidine đến tổn thươngoxi hóa cho xu hướng oxi hóa tự phát ở những bệnh nhân này thường thấyHemoglobin niệu trong vài ngày Bệnh nhân có thiếu máu cấp: da xanh, niêmmạc nhợt, nhịp tim nhanh, gan, lách có thể to Trường hợp nặng có thể suytim, suy thận

1.2.2.3 Thiếu máu tan máu mạn tính hồng cầu không hình cầu

Những bệnh nhân này có thiếu máu nhẹ, ít khi có thiếu máu nặng Vàng

da, gan, lách to ,

1.2.3 Cận lâm sàng

- Hoạt độ enzyme G6PD giảm

- Bilirubin toàn phần, tự do tăng; Hb, hồng cầu giảm

- Hồng cầu lưới tăng

- Thiếu máu tan máu cấp: Hb niệu (+), thể Heinz (+)

- Thiếu máu tan máu mạn tính hồng cầu không hình cầu: MCV tăng,hồng cầu không hình cầu

1.2.4 Phân loại

Dựa vào hoạt độ của enzyme trong hồng cầu và những biểu hiện lâmsàng của chúng, WHO đã chia các biến thể của thiếu hụt G6PD thành 5 lớp.Cho đến nay các nghiên cứu của các tác giả trên thế giới cũng áp dụng cáchchia này ,

Bảng 1.1 Phân loại thiếu hụt G6PD

với bình thường (%)

I Nặng, thiếu máu tan máu hồng cầu không

II Nặng, thiếu máu tan máu cấp tính, từng đợt < 10%

III Nhẹ và trung bình, có cơn tan máu cấp khi

tiếp xúc với các yếu tố oxi hóa 10 - 60 %

IV Thiếu rất nhẹ hoặc không thiếu enzyme,

V Không có biểu hiện lâm sàng

hành; tiền sử vàng da, thiếu máu cấp hoặc mạn tính; các triệu chứng lâm sàngxuất hiện sau khi dùng các thuốc hoặc các thực phẩm có tính oxi hóa mạnh.

- Lâm sàng: Ít có giá trị

- Cận lâm sàng

Để phát hiện thiếu G6PD người ta thường đo hoạt độ G6PD dựa trêntốc độ tạo thành NADPH từ NADP+ khi có G6P làm cơ chất Người thiếu hụt

là người có hoạt độ enzyme này dưới 200 U/1012 hồng cầu

Có ý kiến cho rằng ngay khi tan máu, hồng cầu non và hồng cầu lướichiếm ưu thế Những tế bào này có hoạt độ enzyme cao hơn tế bào già Vì vậyxét nghiệm này phải được trì hoãn vài tuần sau đợt tan máu đến khi mứcenzyme thấp xuống lại lúc đó mới nên xét nghiệm để chẩn đoán Tuy nhiêncũng có nghiên cứu cho thấy rằng trong quá trình tan máu do dùngPrimaquine mức G6PD tăng nhẹ song song với sự xuất hiện của hồng cầu lướinhưng thường không bao giờ đạt được đến mức bình thường

Ngoài ra để đánh giá thiếu hụt G6PD còn có thể dùng các kỹ thuật định

tính và định lượng trong huyết thanh , ,

Hiện nay, nhiều nước trên thế giới đã dùng kỹ thuật phân tích gen đểphát hiện các đột biến gen thiếu hụt G6PD

1.2.6 Điều trị và phòng bệnh

Chủ yếu là phòng bệnh để không xảy ra các triệu chứng

Với những bệnh nhân đã biết trước là thiếu hụt G6PD thì trước khi raviện cần được tư vấn cho bệnh nhân và gia đình hiểu về bệnh thiếu hụt G6PD

và tính nguy hiểm của nó Ngoài ra cần tránh những thực phẩm và thuốc cótính oxy hóa

Cần tránh những tình trạng sau có thể ảnh hưởng xấu tới sức khỏe bệnhnhân bị thiếu hụt G6PD: mắc bệnh, kể cả những bệnh do nhiễm trùng hoặcnhiễm virút; uống một số loại thuốc giảm đau, hạ sốt có chứa Aspirin hoặcPhenacetin, các loại kháng sinh thuộc nhóm Sulfonamide và Sulfone, các

thuốc kháng sốt rét như Quinine, Chloroquine, Primaquine, các loại thuốckháng sốt rét khác mà trong tên gọi có chữ “quine”, một số loại thuốc sử dụngnhư vitamin K, xanh methylen dùng trong điều trị nhiễm trùng đường tiểu; ănmột số thức ăn làm từ đậu tằm.

Đối với trường hợp bị thiếu men G6PD cần phải có chế độ chăm sóc đặcbiệt đối với trẻ: Không sử dụng các loại dược phẩm, thức ăn hoặc những chất

có thể gây tan huyết; thông báo cho nhân viên y tế về tình trạng thiếu menG6PD của người bệnh; không sử dụng viên long não (băng phiến) để cho vào

tủ quần áo, chăn mềm, giường gối do có chứa naphthalen là một chất oxy hóa.Cần cảnh giác với một số loại thuốc nam, thuốc đông y và các loại đậu vì cóthể chứa chất oxy hóa Các bà mẹ cho con bú không được sử dụng những thức

ăn hoặc dược phẩm không được sử dụng ở người bị thiếu men G6PD vìnhững chất này có thể đi vào cơ thể trẻ qua sữa mẹ Các mẹ không nên tự ýmua thuốc cho trẻ mà phải hỏi ý kiến của bác sĩ

Với những bệnh nhân khi có chỉ định dùng những loại thuốc có tính oxyhóa (Primaquine, Aspirin ) cần làm xét nghiệm G6PD trước khi dùng, cầntheo dõi tình trạng tan máu, các triệu chứng như: nước tiểu sẫm màu, vàng

da, thiếu máu hoặc nên lựa chọn thuốc thay thế khác trong điều trị

Cần sàng lọc trẻ sơ sinh để chẩn đoán thiếu hụt G6PD ngay sau sinh Vìđây cũng là một trong những nguyên nhân phỏ biến gây vàng da, tan máu ởtrẻ sơ sinh Nếu không được phát hiện và điều trị kịp thời có thể gây nhữngbiến chứng thần kinh nặng nề, thậm chí tử vong

Ngoài ra cần thực hiện tư vấn di truyền: thông báo và giải thích với giađình bệnh nhân về sự di truyền của bệnh và khuyên phụ nữ mang gen bệnhkhông nên kết hôn với người nam bị bệnh

Khi tan máu xảy ra cần ngưng dùng thuốc Nếu tình trạng thiếu máu dotan máu nặng cần được truyền máu, lưu ý không dùng loại máu thiếu G6PD

Khi trẻ bị vàng da, tùy theo mức độ cần thiết phải chiếu đèn hoặc tiến hànhthay máu cho bệnh nhi sớm để phòng tình trạng vàng da nhân não.

1.2.7 Cơ sở di truyền học của bệnh thiếu hụt G6PD

1.2.7.1 Gen mã hóa cho G6PD

Gen mã hóa G6PD nằm trên nhánh dài, vùng 2, băng 8 của nhiễm sắc thểgiới tính X (Xq28) Vùng này gắn với rất nhiều gen khác như: hội chứngnhiễm sắc thể X gãy, hemophilia A, nhìn màu

Hình 1.4 Vị trí gen G6PD trên nhiễm sắc thể X

Gen G6PD dài khoảng 18 - 20 kb, gồm 13 exon và 12 intron gồm 25.861nucleotid , khung đọc mở (open reading frame) dài 1545 nucleotid Kíchthước của các exon mã hoá thay đổi rất nhiều, từ 38 - 236 bp Hầu hết cácintron đều ngắn hơn 1 kb, chỉ có intron 2 dài hơn bình thường (khoảng 12 kb).Exon 1 và đầu 5’ của exon 2 không mã hoá Bộ ba mã hoá đầu tiên nằm trênexon 2 Chức năng của từng exon có sự khác nhau Gen cấu trúc của G6PDgồm 20014 bp, trong đó 1548 bp được mã hoá mRNA của G6PD gồm 2269nucleotid, tương ứng với 2,4 kb mRNA của G6PD có một đầu 3’ không mã

hoá dài 655 bp và một đầu 5’ không mã hoá dài 696 bp.

Gen G6PD được coi là gen có sự điều hoà và kiểm soát (housekeeping)chặt chẽ Cùng một lúc G6PD được biểu lộ với mức độ rất khác nhau ở nhữngloại tế bào khác nhau Sự biểu lộ đó được điều hoà bởi nhiều yếu tố và được cho

là do sự bất hoạt của nhiễm sắc thể X

1.2.7.2 Cơ chế bệnh sinh

Thiếu hụt G6PD là bệnh di truyền gen lặn liên kết với giới tính, nằm trênnhiễm sắc thể X, không có alen tương ứng trên nhiễm sắc thể Y Vì vậy, nữ làngười mang gen bệnh và truyền cho con trai Người nữ đồng hợp tử gen độtbiến hiếm gặp Người nữ dị hợp tử mang gen đột biến sẽ có các kiểu hình bìnhthường hoặc thiếu hụt G6PD từ nhẹ đến trung bình, hiếm khi thiếu hụtenzyme nặng (trừ khi họ mang alen bị đột biến ở vùng có chức năng quantrọng) Nguyên nhân là do sự bất hoạt nhiễm sắc thể X trong tế bào nữ từ giaiđoạn sớm của quá trình phát triển của phôi Người nam chỉ cần mang một genđột biến là đã thể hiện sự thiếu hụt G6PD Do đó, tỉ lệ trẻ nam được phát hiệnbệnh cao hơn trẻ nữ

Hình 1.5 Sơ đồ di truyền bệnh thiếu hụt G6PD

Nếu đột biến xảy ra trên gen cấu trúc sẽ phá vỡ cấu trúc bình thuờng của

enzyme, gây thiếu G6PD về mặt chất lượng Nếu đột biến xảy ra trên gen điềuhoà hoặc gen khởi động sẽ làm giảm số lượng enzyme G6PD Sự thay đổi về

số lượng và chất lượng của G6PD đều dẫn đến sự thay đổi hoạt độ củaenzyme G6PD Tuy nhiên hầu hết các enzyme bị đột biến luôn luôn có thànhphần bất thường Điều này chứng tỏ những đột biến này xảy ra tại gen cấutrúc - vùng mã hoá (coding region) Đến nay với sự phát triển của sinh họcphân tử, cơ sở gen học của bệnh thiếu hụt G6PD ngày càng sáng tỏ Vào năm

1993 người ta đã tìm thấy 58 dạng đột biến, tương ứng với 97 biến thể Năm

2002, con số này lên đến 140 đột biến hay phức hợp đột biến gen, tương ứngvới 442 biến thể Điều này cho thấy rằng tốc độ phát triển những ứng dụngsinh học phân tử trong lĩnh vực y học hiện nay rất nhanh chóng Các dạng độtbiến khác nhau có thể gây nên các mức độ thiếu hụt G6PD khác nhau, từ đódẫn đến các hình thái lâm sàng khác nhau, tuỳ thuộc vào mức độ quan trọng

về chức năng của vùng đột biến

Có rất nhiều dạng đột biến gây nên thiếu hụt G6PD nhưng chủ yếu làđột biến điểm, tức là thay thế một nucleotid, dẫn đến thay thế acid amin nàybằng một acid amin kia và cuối cùng là thay đổi cấu trúc protein

Tuy nhiên một số đột biến khác nhau có thể tạo ra enzyme biến dị giốngnhau , ví dụ G6PD Aachen đột biến nucleotid C1089G và Loma LindaC1089A, hai đột biến này đều làm thay đổi acid amin 363 Asn → Lys

Cũng có khi có đột biến giống nhau nhưng lại tạo ra enzyme có nhữngđặc tính sinh hoá không hoàn toàn giống nhau Ví dụ như G6PD Morioka vàG6PD Santiago de Cuba có đột biến G1339A, dẫn đến thay 447 Gly → Arg,nhưng G6PD Morika thì có tốc độ điện di bình thường, trong khi G6PDSantiago de Cuba thì tốc độ điện di chậm lại [22]

Nếu những đột biến xảy ra ở những vùng không mã hoá (intron), hoặc

đột biến không làm thay đổi ý nghĩa của bộ ba thì sẽ không có biểu hiện bấtthuờng về enzyme , Ví dụ G6PD Silent đột biến xảy ra ở exon 11, nucleotid

1311 chuyển C → T, tạo thành bộ ba mã hoá TAT thay cho TAC, cùng mãhoá cho Tyr Trong khi đó G6PD Sunderland mất đoạn 3 bp, sự thay đổi cấutrúc gen này gây nên tính không ổn định của enzyme G6PD và dẫn đến tìnhtrạng lâm sàng với những đợt thiếu máu tan máu trường diễn xen với nhữngđợt tan máu cấp ,

Một số đột biến gen G6PD được tìm thấy tại Đông Nam Á

Bảng 1.2 Một số dạng đột biến G6PD gặp ở Đông Nam Á

STT Dạng đột biến Vị trí biến đổi Acid amin tương ứng

Exon Nucleocid

Cosenza 11-13 1367 G → C 459 Arg → Pro

Nghiên cứu về điện di và động học của enzyme ở những người thiếu hụtG6PD từ những dân cư khác nhau người ta thấy rằng thiếu hụt G6PD có sự khác

nhau giữa các khu vực trên thế giới Trong 140 dạng đột biến gây thiếu G6PDđại diện cho 442 biến thể khác nhau có tính chất đặc hiệu và có thể phân biệtđược với nhau bằng cách đo các chỉ số hoá sinh Năm 1967 một hiệp hội củaWHO đề nghị đưa một quy trình chuẩn để mô tả các đặc điểm các biến thể sửdụng các chỉ số như: hoạt độ enzyme, di chuyển điện di, hằng số Km cho G6PD

và NADP, sự sử dụng thay thế cơ chất, ổn định với nhiệt độ và pH tối ưu

Thiếu G6PD là nguyên nhân dẫn đến thiếu Glutathion dạng khử.Glutathion là chất chống oxi hoá có tác dụng bảo vệ màng hồng cầu chống lạicác tác nhân oxi hoá Khi lượng Glutathion giảm, các enzyme và protein (baogồm cả Hemoglobin) sẽ bị hư hại do bị oxi hoá., dẫn đến mất cân bằng phản ứngoxi hoá khử, xảy ra liên kết chéo, tích tụ protein trong màng tế bào hồng cầu, cuốicùng tế bào hồng cầu bị vỡ

1.3 Các phương pháp xác định đột biến gen G6PD

Hiện nay có rất nhiều phương pháp xác định đột biến gen G6PD Baogồm: phân tích đường cong nóng chảy HRM (High Resolution Melt),

Phương pháp MPTP (PCR using multiplex Tandem forward Primer), phân

tích cấu trúc đa hình chuỗi đơn SSCP (Single - strand comformationpolymorphism analysis), sử dụng enzyme cắt giới hạn, hệ thống khuếch đạicác đột biến bền với nhiệt ARMS (Amplification Refractory Mutationsystem), giải trình tự gen

1.3.1 Phương pháp phân tích đường cong nóng chảy (HRM)

Hiện nay trên thế giới đang ứng dụng rộng rãi phân tích đường congnóng chảy (melting curve) trong kỹ thuật realtime PCR giúp chẩn đoán cácđột biến điểm trên gen G6PD , Hệ thống realtime PCR cho phép theo dõi

sự hình thành sản phẩm PCR theo từng chu kỳ của phản ứng Đây là một kỹ

thuật “không đồng nhất” vì trong kỹ thuật này, một hỗn hợp sản phẩm PCRđược tạo ra chứ không phải từng thành phần sản phẩm PCR được phát hiệnnhư trong kỹ thuật điện di Quy trình phản ứng đơn giản nhất là bổ sungEthidium Bromid vào hỗn hợp phản ứng Khi Ethidium Bromid xen kẽ vàotrong cấu trúc chuỗi đôi của DNA, tín hiệu huỳnh quang sẽ được tạo ra,mức độ tín hiệu này phụ thuộc vào lượng DNA chuỗi đôi được tạo ra trongquá trình phản ứng Trong kỹ thuật realtime PCR, người ta ứng dụng việcphân tích đường cong nóng chảy Tm để xác định một vài loại đột biến gen.

Kỹ thuật này phát hiện đột biến dựa vào nhiệt độ nóng chảy Tm của sảnphẩm PCR chuỗi đôi Ưu điểm của kỹ thuật này là sự phát hiện diễn ratrong cùng một ống phản ứng khuyếch đại, sử dụng cùng một thiết bị Điềunày giúp loại bỏ được thao tác bằng tay sau PCR và giúp kỹ thuật trở nênnhanh hơn, rẻ tiền hơn các phương pháp sàng lọc khác

1.3.2 Phương pháp MPTP (PCR using multiplex Tandem forward Primer)

Năm 1977, một nhóm tác giả Nhật Bản và Singapore đã triển khaiphương pháp phát hiện những đột biến của gen G6PD là MPTP Nguyêntắc của phản ứng này dựa trên nguyên lý của PCR

Trước hết một vùng gen đích của G6PD được khuếch đại, sau đó sảnphẩm này được sử dụng làm khuôn mẫu để chạy MPTP MPTP dựa trên cơ

sở một primer rất ngắn có khả năng nhận ra một nucleotid khác biệt trongvùng trình tự đích, và như vậy việc lai sẽ không thực hiện được Phản ứngMPTP được tiến hành với nhiều primer xuôi chiều Những primer xuôichiều nối đuôi nhau phủ toàn bộ vùng gen đích và một primer ngược thôngthường làm khuếch đại từng đoạn “theo bậc thang“ Sự thay đổi nucleotidtrong vùng “rà soát“ của primer dẫn đến việc thiếu một hay hai sản phẩmkhuếch đại Lợi ích của kỹ thuật này là hầu hết trình tự đột biến trong vùngđích của gen trên nhiễm sắc thể có thể được khu trú lại một vùng nhỏ và

được phát hiện sau hai bước PCR.

1.3.3 Phương pháp phân tích cấu trúc đa hình thái chuỗi đơn SSCP (Single - strand comformation polymorphism analysis)

Năm 1985, Maniatis và cộng sự đã chứng minh rằng bằng cách sửdụng gel polyacrylamid ở trạng thái biến tính có thể phát hiện được sự thaythế một cặp base đơn độc trong bộ gen do sự khác nhau về khả năng dichuyển, hậu quả của sự thay đổi cấu trúc

Về nguyên tắc, phương pháp gồm hai bước: Bước 1: Khuếch đại đoạn DNA đích nhờ PCR, Bước 2: Sau đó sản phẩm được biến tính và phân đoạn

nhờ điện di trên gel polyacrylamid ở điều kiện không biến tính Sau khi bị biếntính bởi nhiệt độ, khả năng di chuyển của các phân đoạn DNA khi điện di trêngel polyacrylamid phụ thuộc vào kích thước và cấu trúc bậc 2 nội phân tử củachuỗi đơn Ưu điểm của phương pháp này là chỉ cần một lượng nhỏ DNAkhuôn

1.3.4 Phương pháp ARMS (Amplification Refractory Mutation System)

ARMS do Newton và cộng sự nghiên cứu năm 1989, sáu năm sau khiPCR được phát minh Ngày nay, phương pháp này đang được ứng dụngrộng rãi trong viêc xác định các đột biến điểm đã được biết trước đó

Nguyên tắc của ARMS dựa trên sự khác biệt về các nucleotid củaprimer ở đầu 3’ thiết kế cho các alen khác nhau Chính vì vậy ARMS còn

có một số tên gọi khác nữa căn cứ vào bản chất của kỹ thuật: PCR đặc hiệualen (allele specific PCR - ASP), khuếch đại PCR của các alen đặc hiệu(PCR amplification of specification of specific alleles - PASA) hay khuếchđại allele đặc hiệu (allele specific amplification - ASA)

Trong kỹ thuật ARMS, hai quy trình PCR được tiến hành với cùngmột khuôn DNA, một mồi giống nhau song khác nhau về mồi đặc hiệualen Như vậy, trong cùng một phản ứng, một mồi sẽ khuếch đại một alen

trong khi mồi kia sẽ khuếch đại alen khác Các mồi này chỉ đặc hiệu chomột alen chính bởi sự khác biệt trình tự nucleotid ở đầu 3’, tương ứng với

vị trí mà có sự khác biệt về trình tự nucleotid giữa các alen

Hình 1.6 Nguyên tắc phản ứng ARMS

Điều đặc biệt quan trọng ở đây là Taq hoặc các DNA polymerase trongphản ứng PCR này phải không có chức năng sửa chữa 3’ → 5’ Nếuenzyme này có hoạt tính sửa chữa thì nó sẽ tự sửa lại những cặp đôi nhầm ởđầu 3’ của mồi và sẽ làm thay đổi hoàn toàn sự khác biệt trong quá trìnhphân tích Thêm vào đó, enzyme này phải không có khả năng khởi đầu sựtổng hợp DNA tại vị trí cặp đôi nhầm để đảm bảo không có quá trìnhkhuếch đại và kết quả là không có sản phẩm Điều này hoàn toàn đối lậpvới trường hợp là khi các mồi liên kết bổ sung phù hợp 100% với alen thì

hiệu quả khuếch đại sẽ tương ứng là 100% Các sản phẩm tạo thành sẽ đượcphân tích bằng điện di trên gel agarose

Kỹ thuật ARMS được sử dụng trong trường hợp có nhiều cấu trúc đahình, dòng tế bào mầm, các đột biến ở tế bào soma, xác định tình trạngmang gen, chẩn đoán trước sinh các bệnh di truyền và phát hiện các biểuhiện bệnh trong quá trình điều trị ung thư

Ưu điểm của phương pháp ARMS là đơn giản, dễ áp dụng, rẻ tiền mà

vẫn đảm bảo độ chính xác cao

1.3.5 Giải trình tự gen

Giải trình tự gen là phát hiện được thứ tự sắp xếp của 4 loại nucleotidtrên phân tử DNA Thông tin di truyền của mọi cơ thể sinh vật được chứađựng trong phân tử có tên là ADN (acid deoxynucleic), đó là một chuỗi xoắnkép gồm hai mạch đơn được tạo thành từ bốn loại nucleotide gồm: A(adenine), C (cytosine), G (guanine) và T (thymine) Các nucleotide này sắpxếp nối tiếp nhau theo một trình tự xác định, và trình tự này không những đặctrưng ở từng loài mà còn khác nhau ở từng các thể trong cùng một loài Giảitrình tự ADN là kỹ thuật giúp xác định sự sắp xếp của bốn loại nucleotide A,

T, C, G trên phân tử ADN, nhờ đó nghiên cứu được đặc điểm di truyền ở mức

độ sinh học phân tử

Các phương pháp giải trình tự gen:

*) Phương pháp hóa học: Phương pháp hóa học của Maxam và Gilber

Vào năm 1977, hai nhà khoa học người Mỹ Allan Maxam và WalterGilbert đã phát minh ra một phương pháp hóa học có thể xác định được trình

tự các nucleotide trongchuỗi ADN Theo phương pháp này, trước hết phân tửADN được đánh dấu bằng đồng vị phóng xạ 32P ở đầu 5’, tạo ra những đoạn

có thể phát hiện bằng hình ảnh phóng xạ Sau đó các nucleotide trong phân tửADN được đánh dấu sẽ được xử lý hóa chất khác nhau làm biến đổi và cắt

phân tử ADN tại những vị trí nucleotide khác nhau Bốn nhóm bị tác độngbao gồm: G, A+G, T+C, và C Kết quả sẽ tạo thành những đoạnoligonucleotide có chiều dài khác nhau 1 base Các đoạn này được điện ditrên gel polyacrylamide và hiển thị bằng máy phóng xạ tự ghi Từ kết quảphóng xạ tự ghi của bốn nhóm trên có thể xác định được vị trí của bốn loạinucleotide trong chuỗi ADN Phương pháp hóa học xác định trình tự ADNcủa Maxam và Gilbert trên thực tế không phải dễ thực hiện vì cần phải xácđịnh khá nhiều thông số tối ưu cho thí nghiệm, trong đó khó nhất là phải xácđịnh được nồng độ giới hạn của các chất hóa học sao cho khi xử lý mẫu ADNthì trên mỗi đoạn ADN chỉ có một base bị biến đổi Chính vì sự phức tạp này,phương pháp Maxam-Gilber hiện nay gần như không còn sử dụng, mà thayvào đó các nhà khoa học dùng phương pháp enzyme với nhiều ưu điểm vượttrội hơn.

Hình 1.7 Hình ảnh gel Polyacrylamide sau khi đã điện di

*) Phương pháp enzyme:

Phương pháp này được Sanger và các cộng sự phát minh cũng vào năm 1977

Nguyên tắc của phương pháp này là dựa vào sự hoạt động của enzymeDNA-polymerase để tổng hợp mạch bổ sung của trình tự cần xác định Phảnứng có sự tham gia của các dideoxynucletide (ddNTP), ddNTP có cấu trúcgiống như dNTP nhưng bị mất nguyên tử oxy ở C3 khiến dNTP tiếp theokhông thể gắn vào làm quá trình tổng hợp bị dừng lại Để thực hiện phươngpháp này, trước hết, các đoạn ADN cần xác định trình tự phải được tạo dòngvào một vector để nhân thành nhiều bản sao trong tế bào được chuyển vào (vídụ: vi khuẩn) sau đó tách chiết và tinh khiết các vector từ vi khuẩn để thànhcác vector tự do Lượng ADN sau khi được tách chiết sẽ được phân vào bốnống nghiệm khác nhau để thực hiện phản ứng giải trình tự Mỗi phản ứng baogồm: vector có gắn chèn đoạn ADN cần xác định trình tự, đoạn mồi bổ sungđặc hiệu với trình tự của vector tại vị trí chèn đoạn ADN, enzyme ADNpolymerase, bốn loại dNTP và 1% mỗi loại ddNTP (được đánh dấu bằngđồng vị phóng xạ 32P hay 35S) Kết quả sẽ tạo những mạch ADN có chiềudài khác nhau 1 nucleotide tương ứng với trình tự nucleotide trên đoạn ADNgốc Sau khi điện di trên gel polyacrylamide giống như phương pháp Maxam-Gilbert, các vạch điện di này được hiển thị bằng kỹ thuật phóng xạ tự ghi Từcác vạch này có thể xác định được trình tự ADN.

Hình 1.8 Phương pháp enzyme sử dụng các dideoxynucleotide của Sanger

*) Giải trình tự bằng máy giải tự động:

Ngày nay, việc giải trình tự được thực hiện dễ dàng nhờ có sự hỗ trợ củamáy giải trình tự tự động Máy giải trình tự hoạt động dựa theo nguyên lý củaphương pháp Sanger có cải biến Các phòng thí nghiệm hiện nay đều dùngphản ứng giải trình tự bằng phương pháp enzym, nhưng khi làm giải trình

tự thì thường dùng các máy tự động chứ không dùng kỹ thuật xạ ký tự ghinhư trước Để thực hiện được giải trình tự bằng máy tự động thì các mạchDNA đơn sản sinh trong ống phản ứng giải trình tự phải được đánh dấuhuỳnh quang để các vạch điện di của các mạch đơn này phát sáng khi điqua một chùm tia sáng laser Cấu tạo của một máy giải trình tự tự độnggồm hai phần chính: phần điện di với gel polyacrylamid và phần phát hiệncác vạch điện di Phần điện di polyacrylamid có thể là một bản gel hay làmột ống mao quản chứa gel Phần phát hiện vạch điện di là những con mắtcảm quang và một chùm tia laser đi qua trước nó Nguyên tắc hoạt độngcủa máy là trong suốt quá trình điện di, mỗi khi có một vạch điện di đi quachùm tia laser thì vạch điện di sẽ phát sáng lên và sự phát sáng này sẽ đượccon mắt cảm quang ghi nhận và lưu lại thành một đỉnh cường độ sáng trongbiểu đồ Từ biểu đồ của các đỉnh cường độ sáng này, máy sẽ so dòng củacác đỉnh tương ứng với các màu, cuối cùng phân tích thành trình tự củađoạn DNA

Với các thế hệ máy mới sau này, người ta có thể dùng 4 màu huỳnhquang để đánh dấu 4 loại ddNTP, nhờ vậy phản ứng giải trình tự có thể thựchiện được chỉ trong một ống nghiệm và khi giải trình tự chỉ cần điện di trênmột hàng mà không phải trên 4 hàng khác nhau như trước Nếu dùng điện dimao quản thì tùy thuộc vào số mao quản có thể chạy một lần mà người làmthí nghiệm có thể có số mẫu cho mỗi lần chạy nhiều hay ít

Hình 1.9 Sơ đồ hệ thống máy giải trình tự tự động

Hình 1.10 Trình tự của gen sau khi điện di mao quản

1.4 Một số nghiên cứu liên quan

1.4.1 Trên thế giới:

Từ thời xa xưa người ta đã nhận thấy có một bệnh cảnh liên quan đếnthiếu hụt G6PD hồng cầu và đã có nhiều công trình nghiên cứu về vấn đề này.Đầu tiên từ những nhà triết học Hy Lạp, tiếp sau đó có một nhóm các nhà yhọc miền nam Italia và Sardinia đã phác hoạ hình ảnh lâm sàng của favism(tan máu xảy ra ở một số người sau khi ăn đậu fava) Vào khoảng những năm

1950, Ernest Beutler đã đưa ra nhận xét về sự tan máu xảy ra sau khi dùng

thuốc mà điển hình là primaquine, một thuốc chống sốt rét , Sau đó, 1956,Carson và cộng sự đã khám phá ra rằng những người nhạy cảm vớiprimaquine có hoạt độ của enzyme G6PD hồng cầu rất thấp Cho đến nay đã

có những hiểu biết đáng kể về enzyme G6PD và các hình thái lâm sàng cũngnhư cơ sở sinh học phân tử liên quan đến thiếu hụt G6PD

Năm 1996, trên tạp chí Blood, Ernest Beutler có viết: Trên thế giới cókhoảng 400 triệu người thiếu hụt G6PD, bệnh gặp ở tất cả các dân tộc Tầnsuất thiếu hụt G6PD khác nhau rất nhiều theo từng vùng dân cư và vùng lãnhthổ, nhưng cao nhất ở vùng Địa Trung Hải, châu Phi và Nam Á - khu vực nằmtrong vùng dịch tễ sốt rét Tỉ lệ thiếu hụt G6PD ở châu Phi là 20%; ở châuMỹ: cao nhất là người da đen (17 - 27%) ; Venezuela 2 - 12%; người Do Thái

tỉ lệ này lên đến 70%

Đông Nam châu Á, tỉ lệ này dao động từ 0 - 14% Ở Lào 7,2%; TháiLan 11,5%; Indonesia 3,7%; Myanmar 4,4%; Taiwan và Nam Trung Quốc

2 - 16%

1.4.2 Tại Việt Nam

Các nghiên cứu cho thấy tỉ lệ thiếu hụt G6PD ở Việt Nam cũng khácnhau tùy từng vùng và từng dân tộc Những nghiên cứu đầu tiên ở Việt Nam

về thiếu hụt G6PD phải kể đến các tác giả như: Ngô Gia Thạch, Hoàng VănSơn Theo nghiên cứu của tác giả Đoàn Hạnh Nhân và cộng sự : thiếu G6PD

có tỉ lệ cao tại một số vùng sốt rét lưu hành như Kim Bôi (34,1%); Mai Châu(20,4%); Như Xuân (19,7%); Mường La (17,8%) và thấp tại một số vùngkhông có sốt rét lưu hành như Mèo Vạc (5,3%) và Nga Sơn (0,5%) Theonghiên cứu của Trần Thị Chính, Nguyến Thị Ngọc Dao và cộng sự, ở ngườikinh Hà Nội và quanh Hà Nội là 1,75% ; ở các tỉnh phía Nam theo nghiên cứucủa Nguyễn Thị Ngọc Phượng tỉ lệ thiếu hụt G6PD là 5,5%

Năm 2004 tác giả Huỳnh Thị Diễm Thúy với đề tài “ Phát hiện thiếu hụt enzym G6PD và dạng đột biến gen của nó ở một số trường hợp trẻ sơ sinh người Kinh sinh tại Hà Nội ” nghiên cứu phát hiện thiếu hụt G6PD ở 2886

trẻ sơ sinh người Kinh sinh tại Hà Nội có kết luận phát hiện được tần suấtthiếu hụt G6PD ở trẻ sơ sinh người Kinh sinh tại Hà Nội là 1,63%, trẻ trai caohơn ở trẻ gái bằng kỹ thuật tạo vòng Formazan bán định lượng với độ nhạy là100% và độ đặc hiệu là 81,08% và sử dụng kỹ thuật PCR-MPTP tìm dạng độtbiến gen gây thiếu hụt G6PD của một cặp mẹ- con là G6PD Viangchan vàmột cặp mẹ -con là Kaiping

Năm 2008 tác giả Đinh Thị My và cộng sự nghiên cứu đề tài: “Xác định

tỷ lệ thiếu hụt G6PD và nghiên cứu một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàngcủa trẻ sơ sinh bệnh lý có xét nghiệm thiếu G6PD tại khoa sơ sinh Bệnh viện

Nhi Trung Ương" cho biết: Qua nghiên cứu sàng lọc trên 730 trẻ sơ sinh tại

khoa Sơ Sinh Bệnh Viện Nhi Trung Ương thấy tỷ lệ thiếu hụt G6PD là 1,43%trẻ nam là 2,4%, nữ là 0,31%; tỷ lệ thiếu hụt G6PD hoàn toàn là 26,6%,không hoàn toàn là 73,3%; Triệu chứng lâm sàng của bệnh nhân bị thiếuG6PD phụ thuộc nhiều vào bệnh chính của bệnh nhân khi nhập viện và vấn đề

sử dụng thuốc khi trẻ ốm chứ không phụ thuộc vào mức độ thiếu hụt G6PDcủa bệnh nhân

Theo nghiên cứu của Quách Xuân Hinh với đề tài luận án tiến sĩ y họcnăm 2009 “Nghiên cứu các chỉ số sinh lý hồng cầu và đột biến gen G6PDhồng cầu ở người bị thiếu hụt G6PD trên một số dân tộc tại Việt Nam” chothấy kết quả tỷ lệ cao nhất là người Thái 7,26%, người Kinh 1,74%, Gia Rai3,07%, Dao 1,77%, thấp nhất người H’mông 0,6% Cũng theo tác giả tiếnhành tìm đột biến gen trên các exon 2,9,11 là những gen thường xuyên xảy rađột biến ở các nước Đông Nam Á bằng kỹ thuật PCR – MPTP thấy trên exon

9 thường xảy ra đột biến Viangchan chiếm tỷ lệ cao nhất 71,4% gặp ở tất cả