NGHIÊN cứu SÀNG lọc rối LOẠN CHUYỂN hóa bẩm SINH BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHỐI PHỔ kép

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ TRỊNH THỊ PHƯƠNG DUNG NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC RỐI LOẠN CHUYỂN HÓA BẨM SINH BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHỐI PHỔ KÉP Chuyên ngành : Xét nghiệm Y học Mã số : 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: 1.TS BS Trần Thị Chi Mai 2.TS BS Vũ Chí Dũng HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: TS.BS Trần Thị Chi Mai người Thầy tận tình hướng dẫn, cung cấp cho tơi kiến thức, phương pháp luận quý báu, tạo điều kiện thuận lợi, động viên tơi q trình học tập, triển khai nghiên cứu hoàn thành luận văn TS BS Vũ Chí Dũng – Trưởng khoa Nội tiết – Chuyển hóa – Di Truyền, Giám đốc Trung tâm sàng lọc sơ sinh quản lý bệnh hiếm, Bệnh viện Nhi Trung Ương ln tận tình hướng dẫn nghiên cứu, chia sẻ kiến thức, kinh nghiệm chuyên môn tạo điều kiện tốt giúp tơi hồn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban giám hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo Sau đại học, Khoa Kỹ Thuật Y học, Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu Tôi xin cảm ơn tập thể Khoa Sinh hóa, Trung tâm sàng lọc sơ sinh quản lý bệnh hiếm, Bệnh viện Nhi Trung Ươngđã cho phép, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình triển khai nghiên cứu thu thập số liệu Cuối cùng, xin gửi lòng biết ơn tình cảm u q đến Bố mẹ, chồng con, bạn bè đồng nghiệp hết lòng ủng hộ, động viên tơi suốt q trình học tập động lực giúp tơi vượt qua khó khăn để hồn thành khóa học Tôi xin trân trọng cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Học viên Trịnh Thị Phương Dung LỜI CAM ĐOAN Tôi Trịnh Thị Phương Dung, học viên Cao học khóa 26, chuyên ngành Kỹ thuật y học, Trường Đại học Y Hà Nội, xin cam đoan: Đây luận văn trực tiếp thực hướng dẫn TS.BS Trần Thị Chi Mai TS BS Vũ Chí Dũng Cơng trình nghiên cứu khơng trùng lặp với cơng trình nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Học viên Trịnh Thị Phương Dung DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BKT C0 C10 C12 C14: C16 C18:1 C2 C3 C4 C5 C5OH C8 C8 CAH CF CH CLSI CUD CTLN1 CTLN CV DBS β- ketothiolase Free carnitine Decanoylcarnitine Dodecanoylcarnitine Tetradecenoylcarnitine Hexadecanoylcarnitine Octadecenonylcarnitine Acetylcarnitine Propionylcarnitine Butyrylcarnitine C5/2-metylbutyrylcarnitine 3-Hydroxyisovalerylcarnitine Octanoylcarnitine Octanoylcarnitinine Tăng sản thượng thận bẩm sinh Xơ nang Congenital hypothyroidism - Suy giáp bẩm sinh Clinical And Laboratory Standards Institute Cartitin uptake deficiency - khiếm khuyết hấp thu carnitin Citrullinemia type – Tăng citrulin máu Citrullinemia type – Thiếu citrin Coefficient of Variation – Hệ số biến thiên Dried Blood Spot - Giọt máu thấm khô The Food and Drug Administration FDA G6PD IVA MCAD MMA MSMS MSUD PAH PKU PPA PXN QC RLCHBS Trung tâm Quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ Glucose-6-phosphate dehydrogenase Isovaleric acidemia - Tăng acid isovaleric máu Thiếu hụt acyl-CoA dehydrogenase chuỗi trung bình Methylmalonic acidemia – Tăng acid methylmalonic máu Khối phổ kép Maple syrup urine disease – Bệnh si rô niệu Enzym phenylalanin hydroxylase Phenylketonuria – Phenyl xê tôn niệu Propionic acidemia - Tăng acid propionic máu Phòng xét nghiệm Quality Control – Kiểm tra chất lượng Rối loạn chuyển hóa bẩm sinh SCAD SD SLSS TEa VLCAD Thiếu hụt enzym acyl-CoA dehydrogenases chuỗi ngắn Standard Deviation – Độ lệch chuẩn Sàng lọc sơ sinh Total Analytical error - Sai số toàn cho phép Thiếu hụt enzym acyl-CoA dehydrogenases chuỗi dài MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sàng lọc sơ sinh sàng lọc sơ sinh mở rộng .3 1.1.1 Lịch sử sàng lọc sơ sinh 1.1.2 Khái niệm mục đích sàng lọc sơ sinh .5 1.1.3 Sàng lọc sơ sinh mở rộng 1.2 Rối loạn chuyển hóa bẩm sinh 1.2.1 Khái niệm, phân loại, biểu RLCHBS 1.2.1 Một số rối loạn chuyển hóa bẩm sinh thường gặp 11 1.3 Phương pháp khối phổkép 14 1.3.1 Nguyên tắc/ nguyên lý kỹ thuật MSMS sàng lọc rối loạn chuyển hoá bẩm sinh 14 1.3.2 Bệnh phẩm dùng phân tích 16 1.3.3 Ứng dụng MSMS sàng lọc sơ sinh chẩn đoán rối loạn chuyển hóa acid béo, acid amin acid hữu 17 1.4 Xác nhận phương pháp .19 1.4.1 Khái niệm mục đích xác nhận phương pháp 19 1.4.2 Khi cần tiến hành xác nhận phương pháp 19 1.4.3 Các thông số xác nhận phương pháp 20 1.4.4 Các thực nghiệm xác nhận phương pháp 23 1.5 Xây dựng khoảng tham chiếu 24 1.5.1 Khái niệm 24 1.5.2 EP28A3 - Hướng dẫn xây dựng khoảng tham chiếu 25 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Đối tượng nghiên cứu 28 2.2 Trang thiết bị, hoá chất nghiên cứu: 28 2.3 Thiết kế nghiên cứu 28 2.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu .29 2.5 Nội dung nghiên cứu 29 2.5.1 Sơ đồ nghiên cứu 29 2.5.2 Quy trình nghiên cứu 30 2.5 Xử lý số liệu 35 2.6 Đạo đức nghiên cứu 35 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 36 3.1 Thẩm định phương pháp 36 3.1.1 Kết đánh giá độ tập trung .36 3.1.2 Kết đánh giá độ xác 40 3.2 Kết xây dựng khoảng tham chiếu acid amin acylcarnitin cho trẻ sơ sinh 42 3.2.1 Kết xây dựng khoảng tham chiếu xét nghiệm Alanin 42 3.2.2 Kết khoảng tham chiếu acid amin 44 3.2.3 Kết khoảng tham chiếu acylcarnitin .45 3.3 Áp dụng kỹ thuật sàng lọc bệnh chuyển hóa Khoa sinh hóa Bệnh viện Nhi trung ương 46 3.3.1 Rối loạn chuyển hóa acid amin 46 3.3.2 Rối loạn chuyển hóa acid béo .53 3.3.3 Rối loạn chuyển hóa acid hữu 62 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 67 4.1 Xác nhận giá trị phương pháp khổi phổ kép MSMS 67 4.2 Áp dụng sàng lọc bệnh RLCHBS .73 4.3.1 Rối loạn chuyển hóa acid amin 74 4.3.2 Rối loạn chuyển hóa acid béo .77 4.3.3 Bênh acid hữu niệu 81 KẾT LUẬN 87 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7: Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Bảng 3.12 Bảng 3.13 Bảng 3.14 Bảng 3.15 Bảng 3.16 Bảng 3.17 Bảng 3.18: Bảng 3.19 Bảng 3.20 Bảng 3.21 Bảng 3.22: Bảng 3.23 Các rối loạn chuyển hóa bẩm sinh chất điểm sàng lọc 18 Kết đánh giá độ tập trung ngắn hạn xét nghiệm acid amin máy phân tích LCMS – 8040 Shimadzu 36 Kết đánh giá độ tập trung ngắn hạn xét nghiệm acylcarnitintrên máy phân tích LCMS – 8040 Shimadzu 37 Kết đánh giá độ tập trung dài hạn xét nghiệm acid amin máy phân tích LCMS – 8040 Shimadzu 38 Kết đánh giá độ tập trung dài hạn xét nghiệm acylcarnitin máy phân tích LCMS – 8040 Shimadzu 39 Kết đánh giá độ xác xét nghiệm acid amin máy phân tích LCMS – 8040 Shimadzu 40 Kết đánh giá độ xác xét nghiệm acylcarnitin máy phân tích LCMS – 8040 Shimadzu 41 Kiểm nghiệm tính chuẩn Alanin 42 Kết khoảng tham chiếu acid amin cho trẻ sơ sinh 44 Kết khoảng tham chiếu acylcarnitin cho trẻ sơ sinh 45 Các bệnh rối loạn chuyển hoá acid amin phát sàng lọc bệnh nhân nguy cao 46 Kết sàng lọc bệnh nhân MSUD 47 Kết định lượng acid amin huyết tương bệnh nhân MSUD 49 Kết sàng lọc bệnh nhân PKU .49 Kết định lượng acid amin huyết tương bệnh nhân PKU 51 Kết sàng lọc bệnh nhân CTLN2 52 Các rối loạn chuyển hoá acid béo định theo dõi sàng lọc bệnh nhân nguy cao 53 Kết sàng lọc lần bệnh nhân theo dõi CUD .53 Kết sàng lọc lần bệnh nhân theo dõi CUD .54 Kết sàng lọc bệnh nhân theo dõi SCAD 55 Kết sàng lọc bệnh nhân theo dõi CPT I .58 Kết sàng lọc bệnh nhân theo dõi CPT II 60 Các bệnh rối loạn chuyển hoá acid hữu phát sàng lọc bệnh nhân nguy cao .62 Kết sàng lọc bệnh nhân BKT .63 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Hình 1.1: Sơ đồ minh họa nguyên tắc kỹ thuậtMSMS .15 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 29 Hình 3.1 Sự phân bố mức độ Alanin 42 Hình 3.2 Giá trị - tần số Alanin 43 Hình 3.3 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân MSUD 48 Hình 3.4: Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân PKU số .50 Hình 3.5 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân CTLN1 51 Hình 3.6: Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân CTLN2 52 Hình 3.7 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân theo dõi CUD 55 Hình 3.8 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân theo dõiSCAD 56 Hình 3.9 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân theo dõi VLCAD 57 Hình 3.10: Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân theo dõiCPT I 59 Hình 3.11: Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân theo dõi CPT II số 61 Hình 3.12 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân IVA 62 Hình 3.13 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân BKT 64 Hình 3.14 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân PPA .65 Hình 3.15 Hình ảnh sắc ký đồ MSMS bênh nhân MMA 66 ĐẶT VẤN ĐỀ Rối loạn chuyển hóa bẩm sinh (RLCHBS) (inborn errors of metabolism – IEM hay inherited metabolic diseases – IMD) thuật ngữ mô tả nhóm bệnh lý di truyền phân tử bất thường cấu trúc gen dẫn tới khiếm khuyết khác cấu trúc chức enzym, hormon, thụ thể (receptor), protein vận chuyển đồng yếu tố (cofactor) tham gia vào trình chuyển hóa chất dinh dưỡng thể Theo báo cáo từ khoa Nội tiết – Chuyển hóa – Di truyền, Bệnh viện Nhi Trung Ương kết sàng lọc sơ sinh mở rộng 60 000 trẻ sơ sinh vài năm gần tỷ lệ mắc bệnh khoảng 1/3750 trẻ sinh sống, tỷ lệ tử vong lên đến 48% trước năm 2010 giảm 10% năm gần [1] Nếu xét riêng bệnh gặp, nhóm chúng lại tỷ lệ thay đổi từ 1/800 đến 1/2400 trẻ sinh sống [2] Rối loạn chuyển hóa gánh nặng với thân người bệnh, gia đình xã hội.Việc điều trị đòi hỏi thời gian dài tùy thuộc vào mức độ nặng nhẹ bệnh Cho đến bệnh chưa có phương pháp điều trị đặc hiệu mà dừng lại biện pháp điều trị hỗ trợ nhằm hạn chế dấu hiệu bệnh Bởi vậy, sàng lọc bệnh chương trình sàng lọc sơ sinh cần thiết cho việc phát sớm, để có can thiệp, hỗ trợ kịp thời, nâng cao chất lượng sống cho bệnh nhân, đồng thời giảm bớt gánh nặng cho gia đình Ở Việt Nam, có nhiều bệnh nhân mắc rối loạn chuyển hóa bẩm sinh khơng chẩn đoán xác định sớm dẫn đến di chứng nặng nề [1] Chương trình sàng lọc sơ sinh hệ thống toàn diện bao gồm giáo dục, sàng lọc, theo dõi kết xét nghiệm bất thường, xét nghiệm khẳng định, chẩn đoán, điều trị đánh giá kết hiệu định kỳ Trong thập 20 March of Dimes (2012) Working together for stronger hb Newborn screening tests Accessed 26 May 21 Michael S Watson (2006) Newborn screening: toward a uniform screening paneland system Genet Med, 8(Suppl 1):1S-252S 22 Chen B, Kalman L, Shahangian S, Williams I, Gagnon MB, et al (2012) Good laboratory practices for biochemical genetic testing and newborn screening for inherited metabolic disorders MMWR, 61:1 – 45 23 Millington DS, Norwood DL, Roe CR (1990) Tandem mass spectrometry: a new method for acylcarnitine profiling with potential for neonatal screening for inborn errors of metabolism J Inherit Metab Dis, 13:321-4 24 Lehotay DC, Lepage J, Eichhorst JC, Etter ML, Greenberg CR (2011) LCMS/MS progress in newborn screening Clin Biochem Rev, 44:21 – 31 25 Chace DH, Terada N, Kahler SG, Roe CR, Hofman LF (1993) Rapid diagnosis of phenylketonuria by quantitative analysis for phenylalanine and tyrosine in neonatal blood spots by tandem mass spectrometry Clin Chem Lab Med, ;39:66-71 26 Liebl B, von Kries R, Fingerhut R, Olgemoller B, Zapf A, et al (2002) Expanded newborn screening in Bavaria: tracking to achieve requested repeat testing Prev Med, 34:132–7 27 T Universal (2008) Newborn Screening in Developing Countries: Obstacles and the Way Forward Carmencita David Padilla Ann Acad Med Singapore, 37(Suppl 3):6-9 28 R Bernstein, Fran; Helm, Joanna R (2015) ) Nutrition Management of Inherited Metabolic Diseases: Lessons from Metabolic University Springer p 91 ISBN 9783319146218 29 Michals K (1985) "Phenylalanine metabolites, attention span and hyperactivity" American Journal of Clinical Nutrition, 42 (2): 361–5 30 K H Sarafoglou, Georg F.; Roth, Karl S Pediatric Endocrinology and Inborn Errors of Metabolism New York: McGraw Hill Medical p 26 31 Hoàng Trung Kiên, Trần Thị Chi Mai, Vũ Thị Tú Uyên, Vũ Chí Dũng, Nguyễn Ngọc Khánh (2017) Đặc điểm lâm sàng hóa sinh bệnh nhân mắc bệnh xi rô niệu Tạp chí nghiên cứu y học, 106 (1) – 2017 32 S V Chuang DT ((2001) Maple syrup urine disease (branched- chain ketoaciduria) The metabolic and molecular Basis of Inherited Disease, th edition Mc Graw- Hill, New York, II, 1971 - 2006, 33 G K Wapper RS (2002) Disorder of leucine metabolism Physician’ guide to the laboratory diagnosis of metabolic disease, nd edition Springer, Berlin, 165 - 189 34 Freedberg et al (2003) Fitzpatrick's Dermatology in General Medicine (6th ed.) McGraw-Hill, ISBN 0-07-138076-0 35 Longo N, Pasquali M (2016) Carnitine transport and fatty acid oxidation Biochim Biophys Acta., 1863(10):2422-35 36 National Center for Advancing Translational Sciences (2015) "Propionic acidemia" Retrieved June 2018 37 National Organization for Rare Disorders(2015) "Acidemia, Methylmalonic - NORD (National Organization for Rare Disorders)" Retrieved 2015-10-29 38 Screening, Technology and Research in Genetics (STAR-G) (2011) Organic Acid Oxidation Disorders: Isovaleric Acidemia 39 Expecting Health (2019) Beta-Ketothiolase Deficiency Baby's First Test 40 Instruction manual High performance liquid chromatograph mass spectrometer LCMS – 8030, LCMS 8040 41 Wilcken B (2008) Newborn screening Pathology, 40:104 – 15 42 Florida (2012) Newborn Screening Guidelines 43 Chace DH, Van Hove JL, Naylor EW (1997) Rapid diagnosis of MCAD deficiency: quantitatively analysis of octanoylcarnitine and other acylcarnitines in newborn blood spots by tandem mass spectrometry Clin Chem Lab Med, 43:2106–13 44 Chace DH, Hillman SL, Lorey F, Cunningham GC (1998) Use of phenylalanine-to-tyrosine ratio determined by tandem mass spectrometry to improve newborn screening for phenylketonuria of early discharge specimens collected in the first 24 hours Clin Chem Lab Med, 44:2405–9 45 Debra S Regier et al (2000) Phenylalanine Hydroxylase Deficiency GeneReviews, January 10 46 Tajima G, Tsumura M (2017) Newborn screening for carnitine palmitoyltransferase II deficiency using (C16+C18:1)/C2: Evaluation of additional indices for adequate sensitivity and lower false-positivity Mol Genet Metab, 122(3):67-75 47 Gempel K1, Hofmann S et al (2002) Screening for carnitine palmitoyltransferase II deficiency by tandem mass spectrometry J Inherit Metab Dis, 25(1):17-27 48 Sarah C Grünert, Linda De Silva, (2013) Propionic acidemia: clinical course and outcome in 55 pediatric and adolescent patients Orphanet J Rare Dis., ; 8: 49 Trần Cao Sơn cộng (2010) Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật Hà Nội 50 B J Linnet K (2006) Selection and analytical evaluation of methods – with statistical techniques Tietz textbook of clinical chemistry, 4thed 51 J O.Westgard (1999) Basic method validation: Training in analytical quality management for healthcare laboratories Westgard Quality Corporattion 52 CLSI (2005) User verification of performance for precision and trueness, Approved guideline., CLSI document EP15-A2 53 Vũ Thị Thùy Trang (2014) Thẩm định phương pháp xét nghiệm hóa sinh máy hóa sinh tự động Beckman Couter AU2700 Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại Học Y Hà Nội 54 CLSI (2010) Newborn Screening by Tandem Mass Spectrometry CLSI document NBS04-A, Volume 30 Number 16 55 U.S Food and Drug Administration (2013) Bioanalytical Method Validation Guidance for Industry 56 TCQG (2014) Phòng thí nghiệm y tế - Yêu cầu chất lượng lực TCVN ISO 15189:2014, 57 Horowitz G.L, Ceriotti F et al (2010) Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory: Approved Guideline CLSI document C28-A3 Thirdedition, Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne., 58 H E Solberg (1987) Approved recommendation (1987) on the theory of reference values Part Statistical treatment of collected reference values Determination of reference limits Clinica Chimica Acta, 170(2), S13-S32 59 Sarker S et al (2018 ) Impaired acylcarnitine profile in transfusiondependent beta-thalassemia major patients in Bangladesh J Adv Res., 12: 55–66 60 R Joyce et al (2016) Development and validation of an ultraperformance liquid chromatography quadrupole time of flight mass spectrometry method for rapid quantification of free amino acids in human urine Amino Acids, 48: 219–234 61 Laboratory Quality Management System (2011).World Health Organization 62 W G Miller et al (2011) Proficiency Testing/External Quality Assessment: Current Challenges and Future Directions Clinical Chemistry 63 Suresh K, Suresh G Design (2011) Data analysis and sampling techniques for clinical research Ann Indian Acad Neurol, 14, 287–290 64 D.M McHugh et al (2011) Clinical validation of cutoff target ranges in newborn screening of metabolic disorders by tandem mass spectrometry: a worldwide collaborative project Genetics in Medicine, , 13 (11), 230 65 G L Hoffman (2010) Newborn screening by tandem mass spectrometry: approved guideline Clinical and laboratory standards institute 66 Nora Céspedes, Carlos Alberto Echeverry, el al (2017) Reference values of amino acids, acylcarnitine and succunylacetone by tandem mass spectrometry for use in newborn screening in southwest Colombia Clombia Medica, , 48( 3), 112-117 67 Sarker SK, Biswas A et al (2019) Age-Specific Cut-off Values of Amino Acids and Acylcarnitines for Diagnosis of Inborn Errors of Metabolism Using Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Biomed Res Int, Jan 6;2019:3460902 68 Lehotay, J Lepage, J.C Eichhorst, M.L Etter, C.R Greenberg ( (2011) LC–MS/MS progress in newborn screening Clinical Biochemistry 44, 21–31 69 Golbahar J, Carreon E (2014) Short-term stability of amino acids and acylcarnitines in the dried blood spots used to screen newborns for metabolic disorders J Med Screen, 21 (1): 5-9 70 Holub M, Ratschmann R et al (2006) Influence of hematocrit and localisation of punch in dried blood spots on levels of amino acids and acylcarnitines measured by tandem mass spectrometry Clin Chim Acta, 373 (1-2):27–31 71 Shibataa N, Yamada K et al (2018) Diversity in the incidence and spectrum of organic acidemias, fatty acid oxidation disorders, and amino acid disorders in Asian countries: Selective screening vs expanded newborn screening Molecular Genetics and Metabolism Reports.Volume 16, Pages 5-10 72 Ye J, Han L S, Qiu W J., Gao X L, Wang Y, Gu X F (2007) Selective screening for inborn errors of metabolism on clinical patients using tandem mass spectrometry in China: A four-year report Journal of Inherited Metabolic Disease, 30(4):507–514 73 Nagaraja D, De T, Christopher R (2010) Screening for inborn errors of metabolism using automated electrospray tandem mass spectrometry: Study in high-risk Indian population Clinical Biochemistry, 43(6):581–588 74 B Lu, M Ushikai, A Tabata, M Iijima, M.X Li, L Lei, K Kawabe, S Taura, Y Yang, T.T Liu, S.H Chiang, K.J Hsiao, Y.L Lau, L.C Tsui, D.H Lee, T Saheki (2005) Frequency and distribution in East Asia of 12 mutations identified in the SLC25A13 gene of Japanese patients with citrin deficiency J Hum Genet., 50, (50) 338-346 75 Chuang DT (2001) Maple syrup urine disease (branched- chain ketoaciduria) The metabolic and molecular Basis of Inherited Disease, , 8th edition Mc Graw- Hill, New York, II, 1971 - 2006 76 Funchal C, Quincozes dos Santos A et al (2007) Effect of the branchedchain alpha-keto acids accumulat- ing in maple syrup urine disease on S100B release from glial cells J Neurol Sci, , 260(1-2), 87 - 94 77 P Schadewaldt, A Bodner-Leidecker, H W Hammen cộng (2000) Significance of L-alloisoleucine in plasma for diagnosis of maple syrup urine disease Clin Chem, 45(10), 1734-1740 78 G J Borrajo (2016) Newborn Screening for Phenylketonuria: Latin American Consensus Guidelines Journal of Inborn Errors of Metabolism & Screening, 4: 1–5 79 Lee NC, Chien YH , Chen CA , Lin SJ , Chiu PC , Huang AC , Hwu WL (2010) Diagnoses of newborns and mothers with carnitine uptake defects through newborn screening Mol Genet Metab, 100(1):46-50 80 Merinero B, Martín-Hernández E (2018) Four Years' Experience in the Diagnosis of Very Long-Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency in Infants Detected in Three Spanish Newborn Screening Centers JIMD Rep 39:63-74 81 Fingerhut R , Muntau AC (2001) Hepatic carnitine palmitoyltransferase I deficiency: acylcarnitine profiles in blood spots are highly specific Clin Chem Lab Med, 47(10):1763-8 82 X Yang, Y Matsubara et al (2004) Mutation spectrum of the PCCA and PCCB genes in Japanese patients with propionic acidemia Mol Genet Metab, 81 , pp 335-342 83 T Yorifuji, J Muroi et al (2002) Unexpectedly high prevalence of the mild form of propionic acidemia in Japan: presence of a common mutation and possible clinical implications Hum Genet 111 (2002), pp 161-165 84 F Wang, Y Yang (2010) Clinical, biochemical, and molecular analysis of combined methylmalonic acidemia and hyperhomocysteinemia (cblC type) in China J Inherit Metab Dis, 33.S435-S442 85 T Fukao, N.T Nguyen, D.C Vu et al (2010) A common mutation, R208X, identified in Vietnamese patients with mitochondrial acetoacetyl-CoA thiolase (T2) deficiency Mol Genet Metab, 100 , pp 37-41 86 Thümmler S, Acquaviva C, Fukao T, de Ricaud D, Tohoku J (2010) Different clinical presentation in siblings with mitochondrial acetoacetylCoA thiolase deficiency and identification of two novel mutations Exp Med, 220(1):27-31 87 Ori T, Shinkaku H, Horikawa R, Shigematsu Y, Takayanagi M, Fukao T (2015) Inborn errors of ketone body utilization Pediatr Int, 57(1):41-8 88 Buhaş D, Fukao T, Décarie JC, Chouinard S, Mitchell GA (2013) A treatable new cause of chorea: beta-ketothiolase deficiency Mov Disord, 28(8):1054-6 89 Nguyen KN, Colombo R, Hasegawa Y, Can NT, Bui TP, Le HT, Tran MT, Nguyen HT, Trinh HT, Aoyama Y, Sasai H, Yamaguchi S, Fukao T, Vu DC (2017) Characterization and outcome of 41 patients with betaketothiolase deficiency: 10 years' experience of a medical center in northern Vietnam J Inherit Metab Dis., 40(3):395-401 90 E L Wright (2015) Nutrition Management of Inherited Metabolic Diseases Springer Cham Heidelberg New York Dordrecht London 91 Sarafoglou K, Redlinger-Grosse K, Bentler K, Gaviglio A, Harding CO, Rinaldo P (011) Siblings with mitochondrial acetoacetyl-CoA thiolase deficiency not 128(1):e246-50 identified by newborn screening Pediatrics., 92 Vardhan Patel, Mohit Sahni (2017) A Rare Case of Inborn Error of Metabolism - Isovaleric Acidemia IAIM, 4(12): 214-217 93 Poorthuis BJ, Onkenhout W (1993) Determination of acylcarnitines in urine of patients with inborn errors of metabolism using highperformance liquid chromatography after derivatization with 4′bromophenacylbromide Clinica Chimica Acta, 216:53–61 94 K Tanako, and Isselbacher, K J (1967) The isolation and identifica tion of N- isovalerylglycine from urine of patients with ismlvaleric ac idemia J Bio.Chem, 242, 2966 - 2972 95 D H Chace, T.A Kalas, E.W Naylo r, (2003) Use of tandem mass spectrometry fo r multianalyte screenin g o f d rie d b lood specimens from newborns Clinical Chemistry, 49: 1797-1817 96 Laila Abdel, Fadia Ali et al (2009) Screening for Organic Acid Disorders among Egyptian Children with Clinically Suspected Neurometabolic Disorders Research Journal of Medicine and Medical Sciences, 4(2): 369-385 PHỤ LỤC Một số thông số kỹ thuật sàng lọc rối loạn chuyển hóa bẩm sinh máy phân tích LCMS – 8040 Shimadzu Thơng MRM1 (m/z) ISTD MRM2 (m/z) LOD số (µM) Ala 90.1→ 44.2 H4 – Ala 94.1→ 48.2 7.2 13 Arg 175.1 →70.1 H4- C – Arg 180.1→ 75.1 0.9 Asp 134.1→ 74.0 H3 - Asp 137.1→ 75.0 4.0 Cit 176.1→ 70.1 H2 - Cit 178.1→ 72.1 1.1 Glu 148.1→ 84.1 H3 - Glu 151.1→ 87.1 3.9 13 Gly 76.1→ 30.1 H4- C - Gly 78.1→ 32.2 17.1 Leu 132.1→ 86.1 H3- Leu 135.1→ 89.1 4.6 13 15 Lys 147.1 →84.1 C6- N2 - Lys 155.1→ 90.1 2.4 Met 150.2→ 61.2 H3 - Met 153.2→ 64.2 2.6 Orn 133.2→ 70.2 H6 - Orn 139.2→ 76.2 2.5 13 Phe 166.1 →120.1 C6 - Phe 172.1 →126.1 1.7 Pro 116.2→ 70.2 H5 - Pro 121.1→ 74.2 5.9 13 Ser 106.1→ 60.1 C3 – Ser 109.1→ 62.1 6.4 13 Tyr 182.1→ 91.1 C6 – Tyr 188.1 →97.1 2.7 Val 118.1→ 72.2 H8 - Val 126.1→ 80.2 3.7 C0 162.1→ 85.0 H9 – C0 171.1 →85.0 0.8 C2 204.1→ 85.0 H3 – C2 207.1→ 85.0 0.6 C3 218.1→ 85.0 H3 – C3 221.1 →85.0 0.1 C4 232.2→ 85.0 H3 – C4 235.2→ 85.0 0.01 C5 246.2→ 85.0 H9 – C5 255.2→ 85.0 0.01 C6 260.2→ 85.0 H3– C6 263.2 →85.0 0.01 C8 288.2→ 85.0 H3– C8 291.2→ 85.0 0.03 C10 316.2→ 85.0 H3– C10 319.2→ 85.0 0.04 C12 344.2→ 85.0 H3– C12 347.2→ 85.0 0.02 C14 372.2→ 85.0 H9– C14 381.2→ 85.0 0.01 C16 400.3→ 85.0 H3– C16 403.3→ 85.0 0.11 C18 428.3→ 85.0 H3– C18 431.3→ 85.0 0.05 Chuyển đổi MRM thể hiện: ion gốc -> ion LOD giới hạn phát LOQ giới hạn định lượng LOQ (µM) 35.5 15.4 143.6 10.6 107.2 252.1 70.5 35.5 29.0 22.8 17.0 51.3 37.4 15.0 17.8 19.7 5.34 0.64 0.05 0.10 0.08 0.08 0.21 0.04 0.12 1.05 1.45 PHỤ LỤC Danh sách chất chuyển hóa sàng lọc rối loạn chuyển hóa acid amin acylcarnitin STT 10 11 12 13 Chất chuyển hóa Carnitine free Acetylcarnitine Propionylcarnitine Butyrylcarnitine Tiglylcarnitine Isovalerylcarnitine 3-Hydroxybutyrylcarnitine Hexanoylcarnitine 3-Hydroxyisovalerylcarnitine Glutarylcarnitine Octanoylcarnitine Decadienoylcarnitine Decenoylcarnitine Kí hiệu C0 C2 C3 C4 C5:1 C5 C4-OH C6 C5-OH C5-DC C8 C10:2 C10:1 STT 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 Chất chuyển hóa Kí hiệu Linoleoylcarnitine C18:2 Oleylcarnitine C18:1 Stearoylcarnitine C18 3-Hydroxylinoleoylcarnitine C18:2-OH 3-Hydroxyoleylcarnitine C18:1-OH 3-Hydroxystearoylcarnitine C18-OH Alanine Ala Valine Val Isoleucine Ile Leucine Leu Methionine Met Phenylalanine Phe Arginine Arg 14 15 16 17 18 19 20 Decanoylcarnitine Methylglutarylcarnitine Tetradecadienoylcarnitine Tetradecenoylcarnitine Tetradecanoylcarnitine Palmitoylcarnitine 3-Hydroxypalmitoleylcarnitine C10 C6-DC C14:2 C14:1 C14 C16 C16:1- 35 36 37 38 39 40 41 Citrulline Tyrosine Arginine Aspartic Glutamic acid Glycine Ornithine Cit Tyr Arg Asp Glu Gly Orn 21 3-hydroxypalmitoylcarnitine OH C16-OH 42 Proline Pro PHỤ LỤC Danh sách 55 Bệnh rối loạn chuyển hóa acid amin, acid béo acid hữu sàng lọc Bệnh viện Nhi Trung Ương Bệnh rối loạn chuyển hóa acid amin (Amino Acid Disorders) Argininemia (ARG1 Deficiency) Argininosuccinic Aciduria (ASL Deficiency) Citrullinemia I (ASS Deficiency) Citrullinemia II Homocystinuria Hypermethioninemia Hyperammonemia, Hyperornithinemia, Homocitrullinemia Syndrome1 Hyperornithinemia with Gyral Atrophy Maple Syrup Urine Disease 10 N-acetyl Glutamate Synthetase Deficiency (NAGS Deficiency) 11 Phenylketonuria 12 Benign Hyperphenylalaninemia 13 Defects of Biopterin Cofactor Biosyntheis 14 Defects of Biopterin cofactor regeneration 15 Tyrosinemia Type I 16 Tyrosinemia Type II 17 Tyrosimenia Type III 18 Ornitine transcarbamoylase deficiency (OTC) 19 Non ketotic hyperglycinemia 20 Pyruvate carboxylase deficiency 21 Hyperprolinaemia Types I-II (incr Pro), 22 Hypoprolinaemia (decr Pro) 23 HHH syndrome (Hyperammonia + Hyperornithinaemia + Homocitrullinuria) 24 Hyperlysinaemia, Lysinuric Protein Intolerance (LPI) 25 Serine deficiency disorders Bệnh lý acid hữu (Organic Acid Disorders) 3-Hydroxy-3-Methylglutaryl-CoA Lyase Deficiency Glutaric Acidemia Type I Isobutyryl-CoA Dehydrogenase Deficiency Isovaleric Acidemia 2-Methylbutryl-CoA Dehydrogenase Deficiency 3-Methylcrotonyl-CoA Carboxylase Deficiency 3-Methylglutaconyl-CoA Hydratase Deficiency Methylmalonic Acidemias Some Adenosylcobalamin Synthesis Defects 10 Maternal Vitamin B12 Deficiency 11 Mitochondrial Acetoacetyl-CoA Thiolase Deficiency (beta-ketothiolase deficiency) 12 Propionic Acidemia 13 Multiple-CoA Carboxylase Deficiency 14 Malonic Aciduria 15 Ethylmalonic encephalopathy Bệnh lý rối loạn chuyển hóa acid béo (Fatty Acid Oxidation Disorders) Medium Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency (MCAD) Very Long Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency (VLCAD) Medium/Short Chain Hydroxy Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency 3-Hydroxy Long Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency (LCHAD) Short Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency Medium Chain Ketoacyl-CoA Thiolase deficiency Carnitine uptake deficiency Carnitine/Acylcarnitine Translocase Deficiency Carnitine Palmitoyl Transferase Deficiency Type II 10 Carnitine Palmitoyl Transferase Ia deficiency 11 Carnitine Palmitoyl Transferase Ib deficiency 12 2,4-Dienoyl-CoA Reductase Deficiency1 13 Glutaric Acidemia type II 14 Trifunctional Protein Deficiency 15 Ethylmalonic encephalopathy ... sàng lọc bệnh lý rối loạn chuyển hóa, cần phải xác nhận phương pháp trước đưa vào sử dụng Do đó, đề tài Nghiên cứu sàng lọc bệnh rối loạn chuyển hóa bẩm sinh phương pháp khối phổ kép thực với... 1.1 Sàng lọc sơ sinh sàng lọc sơ sinh mở rộng .3 1.1.1 Lịch sử sàng lọc sơ sinh 1.1.2 Khái niệm mục đích sàng lọc sơ sinh .5 1.1.3 Sàng lọc sơ sinh mở rộng 1.2 Rối loạn... nghiệm để sàng lọc, phát hiện, chẩn đoán, theo dõi rối loạn chuyển hóa bẩm sinh, thường dấu ấn sinh hóa liên quan đến rối loạn sàng lọc [22] Một kết sàng lọc dương tính khơng có nghĩa trẻ sơ sinh