BÀI TẬP PHỔ CỘNG HƯỞNG TỪ HẠT NHÂN

• Phần Chọn cấu trúc phù hợp với phổ 13C- 1H-NMR Giải chung lớp vài (trong số 15 bộ) tập • Phần Xác định nhanh cấu trúc hợp chất đơn giản giản Giải chung lớp, theo dõi qua handouts + profector • Phần Xác định cấu trúc hợp chất (3.1 3.2.) Giải theo nhóm tự chọn chọn Bộ phổ in rời, rời riêng riêng • Từng slide đánh số (N = - 15) • Slide cấu trúc chất nhóm N (ví dụ nhóm 5) • Ba slide phổ: ví dụ phổ 5a, phổ 5b, phổ 5c • Sinh viên trả lời (ghi cấu trúc slide đầu tiên): chất có phổ là: phổ , phổ , phổ • Cho cấu trúc & phổ nhóm hợp chất (# chất) • Lựa chọn phổ 1H / 13C phù hợp với cấu trúc • Trừ phổ bình luận chung lớp, lớp SV tự trả lời cho phổ lại 1a Khung: xanthon, AQ, OMe-Flavonoid 4' OH O HO O OH OH dihydroxyxanthon (13 + 0) OH O OH OH O OMe 4’-OMe-quercetin (15 + 1) CH Me OH O O CIV CIV CH CH CIV CH CIV CH CH CIV chrysophanol (14 + 1) Phổ 1a: 1b 13C-CPD dihydroxy xanthon 1c Phổ 1b: 13C-CPD 4’-OMe-quercetin (tamarixetin) Phổ 1c: 13C-CPD Chrysophanol 2a Khung: coumarin, benzofuran, acid caffeic H OMe HO H COOH HO H HO COOH H HO O O O H H Esculetin Δ’ benzofuran Acid caffeic Phổ 2a: 13C-CPD C CPD esculetin 2b 10 2c CDCl3 Phổ 2b: 13C-CPD 13C CPD acid caffeic Phổ 2c: 13C-CPD 13C CPD Hiền 11 12 3a Khung: Flavon, Flavonol, Flavanol OH MeO O OH MeO O OH OH O rhamnocitrin a oc HO OH OH 4' O dihydro-rhamnocitrin d yd o a oc O OH OH OMe OH O tamarixetin a a e Phổ 3a: 13C-CPD 13C CPD rhamnocitrin 13 3b 14 3c Phổ 3b: 13C-CPD 13C CPD dihydro-rhamnocitrin dihydro rhamnocitrin = aromadendrin Phổ 3c: 13C-CPD 13C CPD tamarixetin 15 16 HO HO 4a Khung: aglycon vs glycosid OH C 2OH CH O O 4' O HO H HO HO O HO HO OH scutellarein 7-O-glucosid OH COOH O H 4' H O HO O OH 4' HO HO O OH OH O H O scutellarein 7-O-glucuronid H O scutellarein aglycon Phổ 4a: 13C-CPD 13C CPD scutellarein (aglycon) 17 4b 18 4c Phổ 4b: 13C-CPD 13C CPD plataginin (scutellarein-7-O-glucosid) (scutellarein O glucosid) Phổ 4c: 13C-CPD 13C CPD scutellarin (scutellarein-7-O-glucuronid) (scutellarein O glucuronid) 19 20 5a OH O OH OH 10 O HO 10 CH3 OH 9 O CH3 OH OH CH3O 10 O O O chrysophanol emodin physcion OH O OH O OH OH 10 OH COOH 10 CH3O OH CH2OH O CH3 3 10 O O O rhein h i aloe l emodin di f ll i l fallacinol CH2OH Cấu trúc của anthraquinon đơn giản Phổ 5a: 13C-CPD 13C CPD physcion (m) 21 5b 22 5c 5d Phổ 5b: 13C-CPD 13C CPD chrysophanol (m) 23 Phổ 5c, 5d: 13C-CPD emodin (và 8-O-glc emodin) 24 6a Loại đường: rhamnose, glucose, galactose HO O OH Me HO HO 3' OH ose O OH O CH2OH O HO HO  CH2OH O HO HO OH rhamnosyl OH O H O 4' HO H glucosyl H galactosyl Phổ 6a: 13C-CPD 13C CPD isoquercitrin (glucosid) 25 6b 26 6c      Phổ 6c: 13C-CPD quercitrin (rhamnosid) Phổ 6b: 13C-CPD 13C CPD hyperin (galactosid) 27 28 7a Loại glycosid: C O-glucosid 4' HO OH 4' CH2OH HO O O H OH O O HO HO O HO OH HO OH CH2OH astragalin (3-O-glucosid) O H OH OH H O iso-vitexin (6-C-glucosid) OH OH HO CH2OH H O HO 4' OH O OH H O vitexin (8-C-glucosid) Phổ 7a: 13C-CPD 13C CPD astragalin (K (K-3-O-glucosid) O glucosid) 29 7b 30 7c Phổ 7b: 13C-CPD 13C CPD vitexin (8-C-glucosid) (8 C glucosid) Phổ 7c: 13C-CPD 13C CPD isovitexin (6-C-glucosid) (6 C glucosid) 31 32 8a Vị trí gắn glycosid: 7-O 3-O-glucosid CH2OH O HO 4' O HO HO O H OH OH OH H O cynarosid y ao d (7-O-glucosid) 4' HO O H OH O O OH HO OH HO O CH2OH OH 3' O OH OH OH O O O Me HO isoquercitrin (3-O-glucosid) OH 4' HO H H OH quercitrin (3-O-rhamnosid) Phổ 1H-NMR 1H NMR cynarosid (7-O-glucosid) (7 O glucosid) 33 8b 34 8c 0.81 d (6 Hz)  Phổ 1H-NMR 1H NMR isoquercitrin (3-O-glucosid) (3 O glucosid) Phổ 1H-NMR 1H NMR quercitrin (3 (3-O-rhamnosid) O rhamnosid) 35 36 9a Loại liên kết ose: monosid vs biosid (1-2) vs (1-6) cynarosid = luteolin 7-O-glc HO  HO O O HO O luteolin HO ax H glucosyl OH quercetin glucosyl H ax OH O OH O  O HO Me O eq OH O H O H eq  HO rhamnosyl OH O HO glucosyl O luteolin ax H OH rutin = quercetin-3-O-glc6-1rha 60.6 OH O HO HO Me OH  OH O  rhamnosyl OH O O scolymosid = luteolin-7-O-glc6-1rha Phổ 13C-CPD 13C CPD cynarosid (7-O-monosid) (7 O monosid) 37 9b 38 9c       67.5 68.6 Phổ 13C-CPD 13C CPD scolymosid (7-O-biosid1-6 (7 O biosid1 ) Phổ 13C-CPD 13C CPD rutin (3-O-biosid1-6) (3 O biosid1 6) 39 40 Từ phổ stt* C 13C-NMR DEPT (đánh số thứ tự tạm* + sort c): C ppm 1* 171,2 2* 149 149,4 3* 147,0 4* 146,8 5* 127,9 6* , 122,9 7* 116,5 8* 115,7 9* 115 115,2 H ppm (J, Hz) HMBC Phổ 1H-NMR (MeOD, 500 MHz) X.2.1 COSY bỏ tín hiệu H2O MeOH  tạp EtOAc EtOAc   tạp EtOAc: (4.09 q + 2.01 s + 1.24 t) (J Org (J Org Chem., Chem 1997, 1997 62, 62 7512-7515) 7512 7515) 109 không đối xứng, all: H each 110 Phổ 1H-NMR (MeOD, 500 MHz) vùng có tín hiệu X.2.2 (Ref: J Org Chem., 1997, 62, 7512-7515) dung g môi tạp  EtOAc H H (pp (ppm)) vết dung g môi tồn dư đo g dung g môi MeOD (3.31 ppm) CDCl3 (7.27 ppm) aceton-d6 (2.05 ppm) DMSO-d6 (2.50 ppm) D2O (4.79 ppm) 2.01 s 4.09 q 1.24 t 2.05 4.12 1.26 1.97 4.05 1.20 1.99 4.03 1.17 2.07 4.14 1.24 (m) 7.55 d (16.0) (m+o) R H R R (o)   H nhánh trans olefin 111 6.24 d (16.0) 7.06 d (2.0) 6.95 dd (8.5, 2.0) 6.79 d (8.5) nhánh trans olefin 112 X.3 (5 CH) + (1 C=O) + (3 CIV) 149.4 147.0 C9H8O4 (HSQC, MeOD) 127.9 122.9 116.5 146.8 CH X.4 115.7 115,2 7,55 d (16 Hz) 1.H  (crosspeak màu đỏ: CH hay CH3) (crosspeak màu xanh: CH2 only) (CIV, OH, OH NH, NH XH: ko có crosspeak) CH3 7,06 d (2,0 Hz) 6,95 dd (8,5; 2,0) CH2 6,24 d (16,0) 113 Kết hợp 13C, 1H, DEPT C 1* −COO− 171,2 2* =C< C< stt H ppm (J, Hz) (HMBC, MeOD) COSY – – – 149 149,4 – – – =CH− 147,0 7,55 d (16,0) 4* =C< 146,8 – – – 5* =C< C< 127 127,9 – – – trans 6* vòng =CH− 122,9 6,95 dd (8,5; 2,0) o,m 7* vòng =CH− 116,5 6,79 d (8,5) ortho 8* trans =CH− 115,7 6,24 d (16,0) 9* vòng g =CH− 115,2 , 7,06 d ((2,0)) meta 1.H 1.H  114 DEPT HSQC: HMBC 3* C 1.H 6,79 d (8,5 Hz) CIV -COOR 1.H X.5 zoom lớn lớ phần hầ 115 116 171.2 -COO- 149.4 147.0 146 146.8 thông tin từ artefacts 147 147.0 55  7,55 127.9 122.9 (HMBC, MeOD) X.5 115.7 116.5 149.4 147.0 -COOCOO 115.2 (trung điểm artefact = HSQC ẩn) 7,55   122.9 115.7 proton trans (a) HMBC với -COO- 116.5 115.2 7,55 (a) HMBC với C  7,06 7,06 6,95 6,79 6,95 6,79  6,79  HMBC loại bỏ artefacts 127.9 146 146.8    7,06 146.8 171.2 tạp ạp  6,24 6,24  proton trans (b) HMBC với -COOCOO 24 6,24 (b) HMBC với C   117 7,06 Từ HMBC (H dòm thấy C qua 3-4 nối): stt 1* DEPT C ppm H ppm, m (J, Hz) HMBC (H-n  C-x) 118  7,55 d (16 Hz) 6,79 6,95 , 6,24 d (16 Hz)  (COSY, 500 MHz, MeOD) X.6* COSY  -COO- 171,2 - - - =C< 149,4 - - - =CH 147,0 4* =C< 146,8 - - -  5* =C< 127,9 - - -    xa vòng 2* 3* trans 7,55 d (16,0) 9*; 6*; 5*; 1* 6* vòng =CH CH 122 122,9 95 dd (8 6,95 (8,5; 5; 2,0) 0) 7* vòng =CH 116,5 6,79 d (8,5) 4*; 5*; 6* 8* trans =CH 115,7 6,24 d (16,0) 5*; 1* 9* vòng ò CH =CH 115 115,2 06 d (2,0) 7,06 (2 0) 6,24 d (16 Hz) nhánh trans vòng thơm 9*;; 8*;; 3*;; 2*  2* 4*; 2*; 4* 6* 119 6,79 d (8.5 Hz) 6,95 dd (8.5; 2.0) 7,06 d (2.0 Hz) 7,55 d (16 Hz) nhánh trans 120 • H thơm khơng HMBC với -COO-  -COO- phải xa vòng thơm Từ phổ COSY (H gần qua − nối): • H trans vừa có HMBC với CH thơm, vừa có HMBC với -COOstt C DEPT C ppm H ppm, m (J, Hz) HMBC (H  Cn) COSY 1* xa vòng -COO- 171,2 - - - 2* vòng? >C= 149,4 3* trans =CH- 147,0 4* vòng? >C= 146,8 5* vòng? >C= 127,9 6* vòng g =CH- 122,9 , - -  2H trans nàyy p phải trung g gian g vòng g thơm & nhóm COO5 - 7,55 d (16,0) H-8* - - - - - - 9*;; 8*;; 3*;; 2* H-7*;; H-9* H • Do H thơm phải ghép (o + m.o +m)  vị trí OH (hoặc o o, m m, p với nhau)  là: B A C H 7* vòng =CH- 116,5 6,79 d (8,5) 4*; 5*; 6* H-6* 8* trans =CH- 115,7 6,24 d (16,0) 5*; 1* H-3* 9* vòng =CH=CH 115 115,2 06 d (2,0) 7,06 (2 0) 2*;; 4*;; 6* H-6* H COOH • X khơng g đối xứng g  nhóm OH khơng g thể ((2 + 3)) hayy (3 ( + 5)) 9*; 6*; 5*; 1* 6,95 , dd ((8,5; , ; 2,0) , ) H H COOH HO HO H HO H COOH COOH H 55 d 7.55 HO H 55 d 7.55 55 d 7.55 OH OH • (B), (C) ko phù hợp H-7 HMBC với C−OH (vơ lý / phổ HMBC) 121 • Do đó, (A) cấu trúc (acid caffeic) 122 So sánh với TLTK (đều đo MeOD) Dữ liệu NMR chất A 6.79 d (8.5 Hz) 6.95 dd (8.5; 2.0) H H ● 116.5 HO 149.4 ● 146.8 ko có tín hiệu /MeOD HO 6.24 d (16.0 Hz) 171.2 115.7 127.9 122.9 ● H 115.2 H COOH ko có tín hiệu /MeOD 147.0 H 7.55 d ((16.0 Hz)) có HMBC → C-1, 2, 6, ko HMBC → C-3,, 4,, ((●)) 7.06 d (2.0 Hz) 123 δH, m (J, Hz) acid caffeic / TLTK COSY HMBC ( Hn) ( Cn) − δC δH (J, Hz) − 128,1 , − 3; 4; 115,2 − − − 146 146,7 − − − − 149,4 − 3; 1; 116 116,6 77 d (8,0) 6,77 (8 0) 5, 2; 4; 7; 122,8 6,92 dd (8; 2) 7,55 d (16) 1; 2; 6; 146,9 7,53 d (16) 6,24 , d ((16)) 1;; 116,3 , 6,21 , d (15,5) ( , ) − − 171,5 C DEPT δC =C< 127,9 , =CH− 115,2 =C< 146 146,8 =C< 149,4 =CH− CH 116 116,5 79 d (8.5) 6,79 (8 5) =CH− 122,9 6,95 dd (8.5; 2) =CH− 147,0 =CH− 115,7 , −COOH 171,2 − 7,06 d (2) − 7,02 d (2) − Các giá trị C H phù hợp đôi một, kết luận: A acid caffeic 124 + Vài thông tin hợp chất Z (kém phân cực): Nếu biết MZ = 268 (khung flavonoid + 1.OH + 1.OMe) thìì khơng thể ể biết ế cấu ấ trúc ú ủ Z (hàng trăm cas) • Chiết từ dịch EtOAc / Hoàng kỳ Astragalus membranaceus • (X + dd dd FeCl F Cl3 1% )  xanh h rêu ê ất nhạt h t O B A • (X + Mg*/HCl đ.đặc)  khơng cho màu đỏ / hồng OH O • Phổ UV (λmax, MeOH): 248.6, 248 301.9 301 nm (đính kèm) kèm) Ví dụ d vài ài cas nhóm hó khơng khơ gắn ắ vào vòng ò C (ở giữa): iữ ) • MS-ES+ cho m/z 291 [M+23]+, 269 [M+1]+, 255, 137, 132 • MS-ES− cho m/z 267 [M − O O B A HO HO OMe 1]− DEPT, HSQC, HMBC, COSY O O O OH A B B OH 125 B A MeO A MeO O • Phổ NMR (DMSO-d6, máy 500 MHz), đính kèm kỹ thuật phổ 1H, 13C, OMe OMe 126 O O + (Khi biết EI-MS+ Z  m/z 291; 269, 255, 137 132) Vòng B đính vào C-2 (isoflavon) C-3 (flavon) ?  (2 cas)  (4 cas) Chỉ [nhóm OH thuộc vòng A] / / / ? [nhóm OMe thuộc vòng B] 2’ 6’ / 3’ 5’ / 4’ ?  (3 cas) MS [M + H]+ cho mảnh m/z 137 132 (24 cas) O HO + H + H A O CH O HO B OMe A + C O B OMe MeO m/z / 269 m/z / 137 Daidzein Z 1/2 cấu trúc C m/z / 132 O HO H 2' 4' 5' 127 O O OH HO H 2' 4' 5' O O OMe H 2' 4' O 5' OH 128 OR H C=O > 190 ppm O H H O O 4  OH  O C=O ~ 175 ppm O O H O OR R3 O R3 O c -3’ 5’ 130 ppm 115 ppm 145 ppm c -2’ 6’ 125 ppm 130 ppm 105 ppm + ppm ̶ 15 ppm +40 ppm c c c O H C=O ~ 180 ppm O OR B C R3 H O H O H B O A 3 H O B O H OR 4 OH H O O H-3 ~ 6.4 singlet H-2 ~ 8.4 singlet 130 130 129 Phổ phổ 13C-NMR: phổ p 1H-NMR: c lớn ~ 175 ppm có t’ hiệu ệ H ~ 8.4 singlet g 13C-NMR có tín hiệu kép (# CH) c 130 113 ppm  có đối xứng Sự đối xứng vòng B Z isoflavon  CH đối xứng ứ phải hải thuộc th ộ vòng ò B (2’/6’ 3’/5’) 3’/5’) Δc = 17 ppm  vòng B có nhóm 4’-OR (R = H Me) • Phổ UV (MeOH) Z # Daidzein (7,4’-di-OH-isoflavon)  Z dẫn chất Daidzein Daidzein -OMe OMe / Z (H 3.78) 78) HMBC  C có c 158.9 158 (-OMe ( OMe đính vào C này) • Daidzein (7,4’-di-OH-isoflavon) có M = 254 cặp H đối xứng (H-2’/6’ & H-3’/5’) HMBC với c 158.9 • Z có M = 268 = (254 + 14) = (Daidzein tăng nhóm CH2)  nhóm OMe c 158.9 phải thuộc vòng B (4’-OMe)  Z Daidzein với nhóm (-OH) ( OH)  (-OCH ( OCH3)  nhóm hó OH ò lại l i phải hải thuộc th ộ vòng ò A (vòng ( ò A có ó nhóm hó -OH) OH) 131 132 Hợp ợp chất Z có nhóm CH ((xem DEPT)) H HO - vòng C có 1.CH (H 8.34 singlet) A H - vòng B có 4.CH CH (2 cặp đối xứng) O H H 4' O OMe  vòng A phải có 3.CH với giá trị H là: 97 d (8.5 7.97 (8 Hz; H J ortho) th ) H H 6.87 d (2.5 Hz; J meta) A HO 6.94 dd (8.5 2.5 Hz; Jo Jm) O H H O  nhóm OH vị trí mà 4' OMe Trên p phổ HMBC,, H-5 p phải có tương g tác với C-4 (q (qua nối)) Thực tế thấy H 7.97 d (8.5 Hz) có tương tác với C-4 [khơng thấy 6.87 87 d (2.5 (2 Hz) tương tác với C-4] Lư ý: Lưu ý Vì J = 8.5 Hz (J ortho), nên kế H-5 phải có H (H-6) Khơng có quy trình cứng Như vậy, ậ nhóm hó -OH OH phải hải 7-OH OH (cấu ( ấ ttrúc ú ) 133 134 Bước 1A: Quan sát phổ 13C Bước 1B: Đánh số tạm, sort theo c (1*, 2* 14*) • có 14 tín hiệu, OMe + 13 t’ hiệu downfield (thơm, olefin, có O) • có tín hiệu cao bất thường  Z có (14 + 2) = 16 C ? OH ) có cặp ặp C đối xứng g / vòng gB ((iso)flavonoid • có tín hiệu ~175 ppm  Z (isoflavon / flavonol) A đ.xứng OMe O C 10 2' 1' -OMe DMSO-d6 O 3' B 6' 4' 5' isoflavon flavonol ? 1* 34 12 89 Phổ 13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) A6 135 13* 14* 11 10 Phổ 13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) Z 136 Bước 1C: Lập bảng c (1 số thập phân thôi!) stt C 1* DEPT δH m (J, Hz) δC HMBC Bước 2A: Khảo sát phổ DEPT (phân loại bậc CHn) COSY (-CH only) 174,5 tín hiệu CH (8 nhóm CH ?) 2* 162,5 3* 158,9 4* 157,4 5* 153,1 6* *130,0* 7* 127,2  124 124,2 9* 123,1 10* 10 116 116,6 11* 115,1 12* *113,6* , 13* 102,1 -OMe -OMe 55,1 − − -OH − có nhóm CH3 (OCH3) khơng có nhóm CH2 8* 14* -CH/-CH3  CH2  CH CH (all C)     CH CH   CH  OCH3 CH (14 − 7) = nhóm CIV 137 Bước 2B: Bổ sung thông tin từ phổ DEPT vào bảng stt C DEPT δC δH m (J, Hz) 1* >C=O 174,5 − 2* C 162,5 − 3* C 158,9 − 4* C 157,4 − HMBC 138 Bước 3A: Khảo sát phổ 1H (all), ghi số lượng proton / tín hiệu COSY -OMe H2O 3.78 s 5* CH 153,1 6* x CH *130,0* 7* CH 127,2 8* C 124 124,2 − 9* C 123,1 − 10* 10 C 116 116,6 − 11* CH 115,1 12* x CH *113,6* , 13* CH 102,1 14* -OMe 55,1 -OH -OH DMSO on HSQC; H 10,80 s ko gắn với C 1 2 1H -OH 10,80 (s) 139 140 Bước 3B: Khảo sát phổ 1H-NMR (dãn), ghi H, m, J (Hz) 0.017 ppm (= 8.5 Hz) 0.018 ppm ((= 9.0 Hz)) 0.018 ppm ( 9.0 Hz)) (= 0.005 ppm ((= 2.5 Hz)) H-2 of isoflavon Bước 3C: Dự đoán phân bố proton khung 78 s 3.78 (-OMe) H-2/C H 2/C 6.94 dd (8.5; 2.5 Hz) 8.34 s 7.97 d (8.5 Hz) 7.51 d (9.0 Hz) 6.98 d (9.0 Hz) C 6.87 d (2.5 Hz) cặp proton đối xứng 94 dd 6.94 (8.5; 2.5 Hz) 8.34 s A B B 7.97 d (8.5 Hz) 7.51 d (9.0 Hz) 6.98 d (9.0 Hz) x x A A B 6.87 d (2.5 Hz) 3.78 s (-OMe) cặp proton đối xứng / B x x 141 Bước 4A: Khảo sát phổ HSQC (all; H gắn với C nào) 142 Bước 4B: Khảo sát phổ HSQC dãn (H gắn với C nào) CH CH CH CH CC C CH CH CH CH 1H CH zoom! 1H CH CH 2H -OMe CH DMSO 1H CH CH 143 2H 1H 144 Bước 5A: Ghi giá trị H, m, J (Hz) cho CHn Bước 6A: Khảo sát phổ HMBC – H “dòm thấy” C stt C DEPT δC δH m (J, Hz) HMBC COSY 1* >C=O 174,5 − − − 2* C 162,5 − − − 3* C 158,9 − − − 4* C 157,4 − − − 5* CH 153,1 8,34 s (1H) 6* x CH *130,0* 7,50 d (9,0) (2H) 7* CH 127,2 7,97 d (8,5) (1H) 8* C 124 124,2 − − − 9* C 123,1 − − − 10* 10 C 116 116,6 − − − 11* CH 115,1 6,94 dd (8,5; 2,5) (1H) 12* x CH *113,6* , 6,98 , d ((9,0) , ) (2H) ( ) 13* CH 102,1 6,87 d (2,5) (1H) 14* -OMe 55,1 3,78 s (3H) − -OH − 10,80 s (1H) (175 − 100 ppm) 145 Bước 6B: Khảo sát phổ HMBC (dãn) – H “dòm thấy” C C-4 162.5 174.5 OH  c 162.3 157.4 158.9 130.0 127.2 124.2 123.1 C-2 153.1 115.1 113.6 146 Bước 6C: Khảo sát phổ HMBC (dãn) – Xác định artefacts 102 102.1 116.6 Phổ HMBC C upfield: ko thể có OH 10.80 s (n-OH) Phổ HMBC, chưa loại bỏ artefact H-2 H 8.34 s 7.97 d 7.51 d 6.98 d 6.94 dd 6.87 d OMe  c 158.9 3.78 s (OMe) H2O 147 148 Bước 6E: Khảo sát phổ HMBC (dãn) – Ghi tương tác HMBC Bước 6D: Khảo sát phổ HMBC (dãn) – Loại bỏ artefacts C-4 174.5 162.5 157.4 158.9 130.0 153.1 127.2 124.2 123.1 115.1 113.6 102.1 116.6 Phổ ổ HMBC, bỏ artefact Phổ HMBC, loại bỏ artefact 8.34 s 7.97 d (8.5 Hz) 7.50 d 2H 6.98 d 2H 6.94 dd 6.87 d (2 Hz) (2.5 149 8.34 s 7.97 d (8.5 Hz) 7.50 d (9.0 Hz) 6.98 d (9.0 Hz) 150 Bước 7C: Xác định ị tương g tác COSY ((H g gần H / khung) g) 6.87 d (2.5 Hz) 6.87 d (2.5 Hz) 6.94 dd (8.5; 2.5 Hz) 6.98 d (9.0 Hz) COSY 7.50 d (9.0 Hz) 7.97 d (8.5 Hz) 1H 7.50 d (9.0 Hz) 2H 6.94 dd (8.5; 2.5) 1H 6.98 d (9.0 Hz) 2H 6.87 d (2.5 Hz) 1H 7.97 d (8.5 Hz) CH / vòng A Bước 7B: Khảo sát phổ COSY (zoom) CH / vòng B 34 s 8.34 151 152 Bước 8A: Ghi tương tác HMBC COSY vào bảng COSY tạm C DEPT δC δH m; (J, Hz) HMBC (H  Cn) COSY − − 1* >C=O 174,5 − − − − − − 2* C-O 162,5 − − − 158,9 − − − 3* 4’ C-O 158,9 − − − 157,4 − − − stt C DEPT δC 1* >C=O 174,5 − C-O 162,5 3* C-O 4* C-O 2* HMBC (H  Cn) δH m; (J, Hz) Bước 8B: Biện luận vị trí C & H (ghi vào cột 2) 4* C-O 157,4 − − − 5* =CH-O- 153,1 8,34 s 174,5; 157,4; 124,2; 123,1 − 5* =CH-O- 153,1 8,34 s 3; 4; 9; 1’ − 6* 2’ 6’ =CHCH x 130 130,0 50 d (9.0) 7,50 (9 0) 158 130,0; 158,9; 130 123,1; 123 113,6 113 6 98 6.98 6* 2’ 6’ =CH- x 130,0* 7,50 d (9.0)* 3; 4’; 6’ 2’; 3’ 5’ H-3’/5’ 174,5; 162,5; 157,4 7* =CH- 127,2 7,97 d (8.5) 6.94 7* =CH- 127,2 7,97 d (8.5) 4; 7; H-6 8* >C= 124 124,2 − − − 8* 1’ >C >C= 124 124,2 − − − 9* >C= 123,1 − − − 9* >C= 123,1 − − − 10* 10 >C= >C 116,6 − − − 10* 10 >C= 116 116,6 − − − 11* 12* 3’ 5’ 13* 14* 4’OMe -OH 7-OH =CH- 115,1 6,94 dd (8.5; 2.5) 116,6; 102,1 6.87 11* =CH- 115,1 6,94 dd (8.5; 2.5) 8; 10 H-8* =CH- x 113,6 , 6,98 , d (9.0) ( ) 158,9; , ; 124,2; , ; 113,6 , 7.50 12* 12 3’ 5’ =CHCH x 113 6* 113,6 98 d (9.0) 6,98 (9 0)* 4’;; 1’;; 5’ 3’ H-2’/6’ H /6 =CH- 102,1 6,87 d (2.5) 162,5; 157,4; 116,6; 115,1 6.94 6,87 d (2.5) 6; 7; 9; 10 H-6* -OMe 55,1 , 3,78 , s 158,9 , − − 10,80 s 162,5; 115,1; 102,1 13* =CH- 102,1 − 14* 4’-OMe -OMe 55,1 , 3,78 , s 4’ − − -OH 7-OH − − 10,80 s 6; 7; − 153 Note Bước 8C: Bỏ cột (vị trí tạm) Sort lại cột c (nếu cần) COSY • Sự đối xứng, có, vòng B Như vậy, tín hiệu kép C-3; 4; 9; 1’ − ((130.0;; 7.50 d,, 9.0 Hz)) ((113.6;; 6.98 d,, 9.0 Hz)) / vòng g B − − − − − − δH ppm, m (J, Hz) HMBC (H  Cn) 8.34 s C DEPT δC ppm CH 153.1 C 123.1 >C=O 174.5 CH 127.2 7.97 d (8.5) C-4; 7; H-6 CH 115.1 6.94 dd (8.5; 2.5) C-8; 10 H-8* C 162.5 CH 102.1 C 157.4 − − − 10 C 116.6 − − − 1’ C 124 124.2 − − − 2’/6’ 2.CH *130.0* *7.50 d (9.0)* C-4’; 3; 6’ 2’; 3’ 5’ H-3’/5’ 3’/5’ /5 CH 2.CH *113 6* *113.6* *6 98 d (9.0)* *6.98 (9 0)* C-4’;; C-4 1’;; 5’ 3’ H-2’/6’ H-2 /6 4’ C 158.9 4’-OMe OMe −OMe OMe 55.1 3.78 s C-4’ C − 7-OH − − 10.80 s C-6; 8; C-7 − − 6.87 d (2.5) − C-6; 7; 9; 10 − − 154 • Trên phổ HMBC: tín hiệu 7.50 d; 6.98 d 3.78 s (OMe) đề có ó tương tươ tác tá với ới tín tí hiệu hiệ c  158.9 158 ppm (gắn ( ắ -OMe) OM ) • Do đó, nhóm –OMe phải thuộc vòng B ( 4’-OMe); − H-6* 4’-OMe : [55.1; 3.78 s] CH-2’/6’: [130.0; 7.50 d (9 Hz)] C-4’ : CH-3’/5’: / [[113.6;; 6.98 d ((9 Hz)] )] [[158.9 pp ppm]] − A HO O H 1' 10 2' 3' B O 6' H 155 H C 5' H 4' H 158.9 OMe 156 Note Note X có nhóm methin (CH); Có tương tác HMBC với C-4, ngồi H-2 (H 8.34 s), ộ vòng g C ((153.1;; 8.34 s)) - nhóm CH thuộc có proton khác (7 97 d, (7.97 d J = 8.5 Hz) Hz) - nhóm CH thuộc vòng B (2 cặp đối xứng 2’/6’ 3’/5’) Đây phải H-5 Vì J = 8.5 Hz, nên phải có H-6 (ortho với H-5) - Như vậy, nhóm –OH OH + nhóm CH lại phải / vòng A: 127.2; 7.97 d (8.5 Hz)  J ortho 115.1; 6.94 dd (8.5; 2.5 Hz)  J ortho meta 102.1;; 6.87 d ((2.5 Hz))  J meta H O H H H H H Do đó, Z 7-hydroxy-4’-methoxy isoflavon (= Formononetin) H H HO Như vậy, OH phải gắn vào C-7 (OMe gắn vào C-4’ / vòng B) O H H H H H OMe HO H O H 4' H (d J ortho) (d, HO O O ((d,, J meta)) 4' H H 7-OH hay 6-OH ??? HO H H H OMe H O 4' H 10 O O OMe H 1' 2' 3' 4' 6' 5' OMe H Formononetin 157 Bước 9: Tìm & so sánh liệu phổ NMR với XYZ / TLTK 158 Formononetin / TLTK [1]* Nên chọn Ref đo máy mạnh, loại dung môi (sai) 159 (thiếu) Hợp chất Z (M = 268)* No C H m, (J Hz) 153,1 8,34 s 123,1 − 174,5 − 127 127,2 97 d (8,5) 7,97 (8 5) 115,1 6,94 dd (8,5; 2,5) 162,5 − 102,1 6,87 d (2,5) 157,4 − 10 116,6 − 1’ 124,2 − 2’ 130,0 7,50 d (9,0) 3’ , 113,6 6,98 , d ((9,0) , ) 4’ 158,9 − 5’ 113,6 6,98 d (9,0) 50 d (9,0) 7,50 (9 0) 6’ 130 130,0 4’-OMe 55,1 3.78 s 7-OH − 10.80 s * Đều đo DMSO-d6, máy 500 MHz * 160 Ref [2] đo DMSO-d6: Sai lệch ít, dễ so sánh! Ref [3] đo khác dung mơi: Sai lệch nhiều, khó so sánh! 248.6 301.9 nm (MeOH) 6.98 7.97 8.34 161 162 So sánh H (ppm) formononetin TLTK Bước 10: Kết luận cuối đo với dung môi khác Khẳng định chắn rằng: Hợp chất Z Formononetin vị trí  7-OH H-2 H-5 2’ 6’ 3’ 5’ H-6 H-8 OMe [2] (DMSO): 10.81 8.35 7.98 7.50 6.97 6.95 6.87 3.79 [Z] (DMSO): 10.80 8.34 7.97 7.50 6.98 6.94 6.87 3.78 (7-hydroxy-4’-methoxy (7 hydroxy methoxy isoflavon) H [1] (DMSO): [3] (Pyridin): n.d n.d 8.33 8.16 7.97 8.45 7.50 7.79 6.98 7.08 6.94 7.22 6.87 7.12 3.78 3.69 HO H O H HO H H H O 4' H OMe 10 O O H 1' 2' 3' 4' 6' 5' OMe H [1] & [2] cho NMR data ủ Formononetin hoàn toàn trùng ù khớp với Z làm Kết luận: [1] & [2] cũng… dạng vừa đâu ! 163 164 13 DMSO-d6, 125 MHz Formononetin o o o et HO HO O H O 3 4' O OMe R5 O H Daidzein 4' R 4' OH H Formononetin OMe Daidzein HO O OH Genistein OH Biochanin A OH OMe H 4' O DMSO d6 125 MHz DMSO-d6, OH 165 166 167 168 DMSO-d6, 500 MHz HO 4’-OMe -OMe thêm 4’-OMe O DMSO H 4' O 4’-OH OMe Formononetin 7-OH H2O 7-OH 4’-OH H2O Daidzein HO O H DMSO d6 500 MHz DMSO-d6, DMSO O 4' OH ... flavonoid (3,4,5,6 nhóm OMe) Phổ 13C-CPD 13C CPD trimethoxy flavonol Phổ 13C-CPD 13C CPD tetramethoxy flavonol 57 14c 58 14d Phổ 13C-CPD 13C CPD pentamethoxy flavonol Phổ 13C-CPD 13C CPD hexamethoxy... tạp Từ phổ C-CPD, ghi giá trị C lớn đến nhỏ (1 số lẻ thôi) Sau SOP thông dụng thường tham khảo để xác định cấu Bước (cột = cột DEPT): trúc hợp chất hữu (tự nhiên & ) Ghi bậc C (CHn) vào từ phổ. .. -OH & -OMe]: H H H Dựa vào phổ NMR, NMR xác định nhanh cấu trúc Y H H O O (+ 46) CH3O HO O O H 89 Phổ 13C-CPD Y (DMSO, 125 MHz) hợp chất Y MeO 90 Phổ DEPT: Y có tổng cộng 10 carbon, gồm DMSO Y