PHỔ CỘNG HƯỞNG TỪ HẠT NHÂN 2

A Thông tin lý lịch / thông số kỹ thuật phổ Từ phổ *.PDF Từ phổ *.FID B Thông tin khai thác từ phổ cấu trúc mẫu B1 Phổ chiều (1H-NMR, 13C-CPD, 13C-DEPT) Từ phổ *.PDF Từ phổ *.FID B2 Phổ chiều (HSQC, HMBC, COSY, NOESY, ROESY ) Từ phổ *.PDF Từ phổ *.FID Từ phổ *.PDF NS # 4.3 sec NS 16 # 1.2 Đọc trực tiếp từ phần text in kèm theo phổ *.pdf Từ phổ *.FID  NS # 3.04 sec NS 160 # 8.00 ngày đo mẫu loại probehead dùng dung môi đo bề rộng phổ # 20 ppm thời gian thu tín hiệu số điểm ghi phổ số lần scan độ phân giải FID thời gian trễ tín hiệu thời gian chờ lặp lại thời gian phát xung nhiệt độ vùng mẫu đo tần số “làm việc” máy hạt nhân đo phổ (1H) công suất xung tần số chuẩn (TMS)  SFO1 = 500,2030889 MHz (tần số “làm việc” phổ 1H-NMR) Từ phổ *.PDF SF = Đọc trực tiếp từ phần text in kèm theo phổ *.pdf 500,2000042 MHz (tần số chuẩn TMS) NS = 16 lần scan Dung môi đo mẫu = DMSO-d6 = (CD3)2S=O SW = 10000 Hz (SWH, bề rộng phổ 1H ~ 20 ppm × 500 MHz) Từ phổ *.FID (dùng MestReNova) TD = 65536 points (= 64 K; số điểm ghi phổ, Total of Digital Points) Mở View > Tables > Parameters FIDRES = SWH/TD (độ phân giải tín hiệu) = 0,152588 Hz/điểm AQ = TD/(2.SWH) = (65536/20000) = 1/(2.FIDRES) = (1/0,305176) AQ = 3,2768 sec (thời gian thu nhận, ghi tín hiệu FID) D1 = 1,0000 sec (thời gian “hồi phục” lần scan) P1 = 10 sec (thời lượng phát xung RF để kích thích hạt nhân) Parameter Value Title 113KINH-AK-5 Data File Name D:/AK-5/1H/fid Comment AK-5-DMSO-1H Origin Bruker Analytik GmbH Acquisition Time 3.2769 sec Acquisition Date 2017-09-21 (16:45:00) Modification Date 2017-09-21 (16:45:20) Nucleus 1H proton Number of Scans NS 16 10 Solvent DMSO 11 Temperature 300.0 K 12 Relaxation Delay 1.0000 sec 13 Pulse Width P1 8.7500 usec 14 SFO1 (Spectr Frq.) 500.1335009 MHz 15 SF 500.1300054 MHz (TMS Frq.) 16 Spectral Width (SWH) 10000 Hz 17 Spectral Size 65536 Cường độ tín hiệu Cường độ phân-đỉnh Tín hiệu dung mơi đo Tín hiệu (các loại) tạp 0.000  Sự chia đỉnh Hằng số ghép 1.600 1.560 1.520 1.480 Hình dạng tín hiệu (A) 3.048 3.024 3.000  Độ dời hóa học 4.800 4.768 Vị trí tín hiệu 7.402 Số lượng tín hiệu 6.500 6.480 6.300 6.280 (B1, B2) 11 1.006 (C) 1.002 2.008 Thời lượng đo phổ 2.014 N Các thông tin khác 1.000 Độ tín hiệu (S/N) Số scan (NS) 12 Loại thông tin khai thác Phổ 13C-CPD Phổ 1H-NMR Số lượng tín hiệu   Vị trí tín hiệu   Hình dạng tín hiệu khơng cần  Cường độ tín hiệu   Tín hiệu dung mơi đo   Tín hiệu (các loại) tạp   Số lần scan (NS)  cần Độ tín hiệu (S/N)  cần A Vị trí tín hiệu (Độ dời hóa học H) B Hình dạng tín hiệu B.1 Độ bội tín hiệu (Sự chia đỉnh) B.2 Bố trí phân đỉnh (Hằng số ghép J) C Cường độ tín hiệu (Số lượng proton) Các thông tin khác 13 14 Tần số tín hiệu cộng hưởng hạt nhân khảo sát tạo (ở đây: 13C, 1H) mơ tả theo cách: theo TSCH tuyệt đối X; ví dụ C = 125.785.142 Hz theo TSCH tương đối // tần số chuẩn S: (Δ = X – S) ví dụ Δ = 9.686 Hz = (125.785.142 – 125.775.456) theo thang ĐDHH (X, ppm): ví dụ C = 77,0 ppm Mơ tả theo thang ĐDHH (, ppm) tiện lợi, dễ hình dung 4.060 4.035 4.010 3.985 Về ý nghĩa, ĐDHH # Rf, Rt SKLM, HPLC 3.960 15 16 13 Phổ 13C-NMR CDCl3 (máy 11,75 Tesla) Phổ 1H-NMR CHCl3 (máy 11,75 Tesla) tần số làm việc SFO1 = 125,787967 MHz theo tần số tuyệt đối tần số chuẩn TMS (SF) S = SF = 125.775.456 Hz C = 125.785.142 Hz theo Δ so với chuẩn TMS; (Δ = C – 80 70 60 50 40 tần số làm việc SFO1 = 500,133500 MHz 30 20 S) = 9.686 Hz 10 ppm theo thang  ppm C = 77,0 ppm = (Δ/SFO1) = (9686 Hz / 125,787967 MHz) theo tần số tuyệt đối H= 500.133.616 Hz tần số chuẩn TMS (SF) s = SF = 500.129.980 Hz theo Δ so với chuẩn TMS: Δ = (H – s) = 3.636 Hz theo thang  ppm: H = (Δ/SFO1) = (3636 Hz / 500,1335 MHz) = 7,27 ppm 17 18 Các giá trị SF, SFO1 thường in phần lý lịch phổ (để biết) ĐDHH tín hiệu hạt nhân X – ký hiệu X (ppm) : X (ppm) = • • X (X – ref ) SFO1 = Δ (Hz) SFO1 (MHz) TSLV TSLV TMS TMS tần số (Hz) tín hiệu (H hay C…) ref = SF, tần số (Hz) chất chuẩn (TMS…) • SFO1 tần số làm việc (MHz) máy Note: (tần số làm việc) SFO1 > SF (tần số chuẩn TMS) X khoảng cách (ppm) tín hiệu X & chuẩn Trên thực tế, máy tự tính tốn ghi giá trị H (hoặc C), ppm Vậy, tín hiệu chất chuẩn (ví dụ TMS) 0,00 ppm vào tín hiệu 1H (hoặc ĐDHH = déplacement (Pháp) = chemical shift (Anh) 13C) Ta khỏi cần quan tâm điều Kỹ thuật viên điều chỉnh để giá trị có 2, 3, số lẻ 19 20 Khi đo phổ 1H (chuẩn TMS) máy 11,75 T; SFO1 ~ 500 MHz, Khi đo phổ proton có tín hiệu tần số cách tín hiệu chuẩn 2500 Hz (= Δ ) C có tín hiệu tần số cách tín hiệu chuẩn Δ = 12000 Hz H có ĐDHH H = (Δ / SFO1) = (2500 / 500) = 5,00 ppm C có ĐDHH C = (Δ / SFO1) = (12000 / 125) = 96 ppm Δ = 3000 2500 2000 13C (chuẩn TMS) máy 11,75 T; SFO1 ~ 125 MHz, Hz 1000 Δ = 12000 Hz Δ = 2500 Hz Δ = 7875 Hz H 5,00 ppm Δ = 1000 Hz ppm H 5,00 ppm H 2,00 ppm TMS 0,00 ppm 21 C 96 ppm C 187 ppm (Hertz) (Hertz) 2358,22 Hz (ppm) (ppm) 4,715 ppm C 63 ppm TMS 22 (ví dụ máy 11,75 Tesla) Khi Δ C Khi Δ = 12500 Hz (ví dụ) H H = Δ C = (Δ C) / SFO1 vùng giảm chắn (deshielded) = 2500 Hz (ví dụ) H downfield / SFO1 lấy C = 12500 / 125 (nguyên) lấy H = 2500 / 500 (nguyên) = 100,00 ppm (a) = 5,000 ppm (a) = 4,999 ppm (b) = 99,387 ppm (b) (Δ / SFO1) ≈ (Δ / |SFO1|)  vùng giảm chắn (deshielded) downfield X thay đổi nhỏ Thường thì: C lấy số lẻ (chú ý ! ví dụ 77,0 ppm) H lấy số lẻ (chú ý ! ví dụ 7,27 ppm) Đó lý ta “chia cho |SFO1|” thay “chia cho SFO1” H upfield  nhỏ hay H = 2500 / 500,1335009 hay C = 12500 / 125,7715724 (vd H: lấy Δ  lớn vùng chắn, bị chắn (shielded) chia cho 500 thay chia cho 500,1335009)  lớn vùng chắn, bị chắn (shielded) upfield  nhỏ Ghi chú: Trong up/downfield; chữ field dùng để từ trường chắn 25 26 • (tín hiệu qua trái, downfield) hạt nhân giảm chắn • ĐDHH thường máy tự ghi tín hiệu có ý nghĩa, • (tín hiệu qua phải, upfield) với thang đo (, ppm) tăng dần từ phải qua trái hạt nhân bị chắn • ĐDHH thay đổi tùy vị trí hạt nhân cấu trúc upfield so với X tín hiệu downfield so với X - H tín hiệu CH3 ≠ CH2 ≠ CH ≠ OH ≠ NH2 X - CH3 tín hiệu -OCH3 ≠ NCH3 ≠ RCCH3 ≠ HCCH3 Y - CHCH3 tín hiệu [=CH-CH3] ≠ [>CH-CH3] chuẩn TMS • ĐDHH thay đổi nhiều tùy theo dung mơi đo phổ tín hiệu downfield so với Y không thay đổi theo từ trường B0 loại máy đo Y 27 28 • Khi đo phổ 13C • Khi tín hiệu dời qua trái ( tăng), ta nói tín hiệu downfield (ở máy 11,75 T; tần số làm việc ~ 125 MHz) ta giá trị C (0 – 240 ppm) trải rộng vùng SWH ~ (240 × 125) ~ 30.000 Hz (30 KHz với phổ (do hạt nhân “chủ” giảm chắn, deshielded) • Khi tín hiệu dời qua phải ( giảm), ta nói tín hiệu upfield 13C-NMR) (do hạt nhân “chủ” bị chắn, shielded) • Khi đo phổ 1H (ở máy 11,75 T; tần số làm việc ~ 500 MHz) • Càng bị chắn nhiều, tín hiệu upfield ( giảm) ta giá trị H (0 – 20 ppm) trải rộng vùng  tín hiệu dời vùng trường cao (từ trường chắn Bi lớn) SWH ~ (20 × 500) ~ 10.000 Hz (10 KHz với phổ 1H-NMR) • Càng giảm chắn, tín hiệu downfield ( tăng)  tín hiệu dời vùng trường thấp (từ trường chắn Bi nhỏ) SWH = Spectral Width in Hertz (bề rộng phổ, tính Hertz) 29 30 Tín hiệu dời qua trái ( , downfield) mật độ điện tử Tín hiệu dời qua phải ( ; upfield) mật độ điện tử quanh hạt nhân “chủ” (# từ trường chắn Bi) giảm quanh hạt nhân “chủ” (# từ trường chắn Bi) tăng (Bi tăng  Beff = [B0 – Bi] giảm  ν giảm   giảm) (Bi giảm  Beff = [B0 – Bi] tăng   tăng   tăng) ĐDHH  giảm (qua phải, upfield) hạt nhân đó: ĐDHH  tăng (qua trái, downfield) hạt nhân đó: • gắn với ngun tố có độ âm điện lớn (>C; F, O, N…) • gắn với nguyên tố có độ âm điện nhỏ (như Si, *H*) • có nối cầu hydrogen với O, N, S • lọt vào vùng tăng chắn nối ba, vòng thơm, >C=O… • lọt vào vùng giảm chắn vòng thơm, olefin, >C=O… • lọt vào vùng tăng chắn đặc biệt khác • lọt vào vùng giảm chắn đặc biệt khác (axial; ortho-Oxy / phenyl, β-effect ) (equatorial, γ-effect, meta-Oxy / Phenyl) 31 32 (Trên phổ 13C-NMR) • Tín hiệu OH, NH biến đo D2O, MeOD (do R-XH + R’OD  R-XD + R’-OH;  tín hiệu “nước”) Ví dụ: Khi đo phổ • Đo phổ 1H CDCl3, DMSO: dễ quan sát tín hiệu -OH SF (rất cần / phân tích cấu trúc polyphenol flavonoid) 13C-NMR (của TMS) SFO1 (của máy) • Đo phổ 1H MeOD, tín hiệu -OH, -NH biến (với chuẩn TMS) máy 11,75 T: = 125.757.850 Hz = 125,771 MHz Δ = 9684 Hz Tín hiệu C CDCl3 = 125.767.534 Hz ( dễ phân tích tín hiệu proton khác glycosid) • D2O test (hydroxy test): mẫu đo lần: có C = - lần 1: CDCl3 hay DMSO (khơng có D2O MeOD), - lần (+ D2O): tín hiệu biến -OH, -NH Δν (SFO1) = 9684 Hz 125,771 MHz = 77,0 ppm Thực tế, đo phổ, máy tự tính in sẵn thang đo • Giá trị H OH, NH tăng nồng độ mẫu tăng (≠ CH) & giá trị c cho tín hiệu có ý nghĩa (ta khỏi lo) 33 (Trên phổ 1H-NMR) 34 Nói chung, ĐDHH đỉnh bội # trung điểm cụm tín hiệu Giá trị H đại diện # trung bình cộng H phân đỉnh Ví dụ: Khi đo phổ 1H-NMR (với chuẩn TMS) máy 11,75 T: SF (của TMS) = 500.130.005 Hz SFO1 (của máy) = 500,133 MHz Δ = 3636 Hz Tín hiệu H CHCl3 = 500.133.641 Hz có H = Δν (SFO1) = 3636 Hz 500,133 MHz = 7,270 ppm Thực tế, đo phổ, máy tự tính in sẵn thang đo Máy ghi giá trị H phân đỉnh (# nhọn), & giá trị c cho tín hiệu có ý nghĩa (ta khỏi lo) 35 không ghi giá trị H chung cho cụm đỉnh bội 36 Với đỉnh phức tạp, thường ghi giá trị vùng tín hiệu [chận – chận dưới] thay ghi giá trị H đỉnh [3.90 – 3.85] m, (1H) 37 X-Me H ppm X-CH2- H ppm X-CH< H ppm khác 1.0 >C-CH2- 1.3 >C-CH< 1.5 >N-H 1–3 >C=C-Me 1.6 >C=C-CH2- 2.3 >C=C-CH< 2.6 R-OH – ** R-CO-Me 2.1 R-CO-CH2- 2.4 R-CO-CH< 2.5 -C  CH 2–3 ROOC-Me 2.2 R-OOC-CH2- 2.4 R-OOC-CH< 2.5 >C=CH- 4.5 – 6.5 R2N-Me 2.2 R2N-CH2- 2.5 R2N-CH< 2.9 Ar-H 6.7 – 7.9 Ar-Me 2.3 Ar-CH2- 2.7 Ar-CH< 3.0 -CHO 9.5 – 10 -CONH-Me 2.6 -CONH-CH2- 3.0 CONH-CH< 3.2 Ar-OH – 13 R-OMe 3.3 R-O-CH2- 3.4 R-O-CH< 3.7 -COOH 10 – 12 Ar-OMe 3.8 Ar-O-CH2- 4.0 Ar-O-CH< 4.2 >C=C-OH 11 – 12 R-COO-CH2- 4.1 R-COO-CH< 5.0 R-CH3 ~ 1,0 ppm aromatic Ar-H 6,0 – 8,5 bậc R-CH2 ~ 1,3 ppm benzylic Ar-C-H 2,2 – 3,0 bậc R-C-H ~ 1,5 ppm phenolic Ar-O-H 4,0 – 13,0* alkyn R-C≡C-H 2,0 – 3,0 phenolic Ar-O-C-H 3,6 – 4,0 vinyl C=C-H 4,6 – 5,9 hydroxyl C-O-H 1,0 – 5,5 allyl C=C-C-H 1,7 ester RCOO-C-H 3,7 – 4,1 ether C-O-C-H 3,3 – 4,0 ester ROOC-C-H 2,0 – 2,6 alcol HO-C-H 3,4 – 4,0 aldehyd O=C-H 9,0 – 10,3* enol C=C-O-H 15 – 17 carbonyl O=C-C-H 2,0 – 2,7 amino R-N-H 1,0 – 5,0 carboxyl RCO-OH 10,5 – 15,0* amino R-N-C-H 2,5 acid HOOC-C-H 2,0 – 2,2 amino R-CO-N-H 5,0 – 8,0 38 H ppm >C-Me R-COO-Me 3.9 bậc -CH=CH-OH > 15 39 40 Thường thực định kỳ để kiểm tra máy, theo SOP* phổ 1H; S/N thay đổi theo nhiều yếu tố - cường độ từ trường B0, - tần số đo SFO1 máy, NS 16, triethylbenzen (TEB) dd 1% /CDCl3 Tín hiệu chọn: - loại hạt nhân & [C] mẫu, - số lần quét mẫu NS (số scan) vạch cao (trong vạch) quartet (>CH2, H ~ 2.55 ppm) - loại ống đo, nhiệt độ đo, - loại probe & kỹ thuật phát Để tính S/N, sử dụng chức SpectView máy Với loại máy (B0) & loại hạt nhân xác định (ví dụ 13C) thì: TEB (MW = 162, bé) TEB có nhóm × đủ loại C Muốn (S/N) tăng n lần NS (và thời gian) tăng gấp n2 lần (3CH3 + 3CH2 + 3CH + 3CIV) Phổ 1H cho t + q+ d + s 169 Phổ 13C-CPD 170 Phổ 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) trans-tilirosid (MW = 594) (DMSO-d6, 125 MHz) trans-tilirosid (MW = 594) m ~ mg, NS 2048 (2 đo) ~ mg, NS 32 ~ 140 sec ~ mg, NS 64 ~ 280 sec m ~ mg, NS 64828, 56 đo Dù NS 64 (quá lớn; thường cần NS 16 đủ) Dù NS lớn (64828 lần) phổ bên bị sót tín hiệu 171 phổ xấu (do mẫu ~ mg q ít) 172 • Vì (S/N) Phổ 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) triterpen biosid có MW 752  k.(BA)3/2  k.(SFO1)3/2 Chú ý: hình từ phổ nhất, S/N nhau! Khi đổi máy từ 300 MHz  500 MHz (tăng 1,67 lần) 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) saponin (trích) (S/N) tăng (1,67)3/2 # 2,3 lần (hơn gấp đơi) • Và (S/N)  k.C.(NS)1/2 Muốn (S/N) tăng 10 lần C mẫu phải tăng 10 lần NS (tức thời gian đo) phải tăng gấp 100 lần! a Vì khơng thể tăng [C] (dd mẫu đo bị đục tủa) b Nên phải tăng NS (số lần scan mẫu  tăng thời gian đo mẫu) Đây điều mà CW-NMR khơng giải (quá lâu!) 173 174 Phổ 1H: NS # hàng chục* Phổ 13C: NS # hàng ngàn* NS số lần thực việc [chuẩn bị + kích thích + thu tín hiệu] thời gian định (~ Σ thời gian đo mẫu) 175 176 • Khi đo phổ NMR (từ nói FT-NMR), nếu: • Khi đo phổ NMR (từ nói FT-NMR), nếu: - NS nhỏ: tín hiệu yếu; S/N kém, res (phổ xấu) - NS nhỏ: bỏ sót tín hiệu yếu, S/N (phổ xấu) - NS lớn : tốn thời gian đo mẫu (TTNS lớn) - NS lớn : tốn thời gian đo mẫu (TTNS q lớn) • Vì NS phụ thuộc vào γ, Ab%, độ nhạy & thời gian hồi phục d1 • Lưu ý rằng, lý lịch phổ, ta thường gặp: phổ 1H-NMR: d1 ~ 1,0 sec ̉̉ phô 13C-NMR: aq ~ 3,3 sec hạt nhân, nên NS phổ NS 16* TT16 ~ 70 sec (> phút để đo phố d1 ~ 2,0 sec aq ~ 1,1 sec > NS phổ 1H-NMR: - Phổ 1H-NMR: NS = 8, 16, 32 (thường đo NS 16 / phổ 1H) 1H) - Phổ NS 1024 (1K) TT1K ~ 3200 sec (> 50 phút để đo phố 13C 13C-NMR: NS = 126, 256, 512, 1024 (1K), 2K, 3K, 4K, 5K… 13C) 177 Phổ 13C-CPD 178 (CDCl3, 200 vs 100 MHz) mg Strychnin (đều NS 1024; thời gian đo = 50 phút) Thực tế, máy 500 MHz, đo phổ hợp chất có MW < KDa, • 1H-NMR: với NS # 16 đủ để phân tích phổ (Σ ~70 sec) • 200 MHz NS 1024 13C-NMR: phải đo với NS 256, 512, 1024, 4K, 5K… tùy trường hợp (ví dụ, với NS 1024 ~ 1K, tốn Σ # 50 phút/mẫu) • Trên phổ 100 MHz 13C, nhìn đường (base line) ước lượng tỉ số S/N (chấp nhận hay khơng) NS 1024 • Trên phổ 1H, mắt-thường, khơng thể ước lượng điều • Để định kỳ kiểm tra chất lượng máy, người ta dùng chức Đo 50 phút, phổ có (S/N) # 10 lần phổ Ở phổ muốn  S/N 10 lần: thời gian đo phải  100 lần (5000 phút) (Đo C-NMR 200 MHz  Đo với máy 800 MHz!) 179 (sẵn có máy) để tính tốn S/N theo SOP chung* 180 13 Như nói, với phổ 1H-NMR, người ta quan tâm đến độ phân giải Khi khác mẫu đo, NS yếu tố định đến S/N (Res, resolution) phổ (vì NS ~ 16, S/N thường lớn, OK) Với phổ 13C-NMR, người ta lại thường quan tâm đến NS S/N chất A NS 4096 NS 15.360 chất C NS 5120 NS 256 chất B (Res thường khơng đáng ngại, SWH # 30 KHz, khó overlapped) Ở phổ 13C-NMR, S/N phụ thuộc vào NS & vào nồng độ mẫu đo Với ống d dịch mẫu nhất, tất nhiên NS tăng S/N tăng Với nhiều lần đo khác (về máy, loại mẫu, nồng độ mẫu…) chất D chưa hẳn NS lớn (tức đo lâu hơn) cho tỉ số S/N tốt 181 182 Quan sát phổ 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) Quercetin Xét tín hiệu tách rõ A & B có Δ = 0.004 ppm  Δ = Hz Khả phân giải (res.) máy khả phân biệt chênh lệch tần số (Δ, Hz) điểm tín hiệu kế cận Độ phân giải (resolution) máy định nghĩa tỉ số [bề rộng vạch phổ nửa độ cao] [tần số máy ghi] z A B z (ko có đơn vị) Wh/2 Thường chọn vạch phổ tín hiệu 1H Me/Me-CHO hay –CH/o-diclorobenzen A = 500.133.204 Hz B = 500.133.202 Hz Res ~ 2/500 triệu = phần tỉ (CDCl3, tube mm) Hiện nay, máy dễ dàng phân biệt tín hiệu có Δ ~ 0,001 ppm Hiện nay, res # 10–9 (phần tỉ) (Hertz) Độ phân giải máy ~ phần tỉ (Res # mg / tấn)! 184 Thời gian thực lần quét: 1 = (1 – SF) / SFO1 (TT1) = (d1 + p1 + aq) Vì d1 (vài sec) 50 phút) 187 188 Quan sát sơ đồ đo phổ 1H-NMR (và phổ 13C-NMR tương tự): Thời gian cho scan phổ 1H # 4,3 sec (và • Phổ 1H: NS 16 • Phổ 13C: cần # (4,3 x 16) # 13C Khi đo phổ NMR, dung môi pha mẫu có vai trò quan trọng, # 3,1 sec) (Bài 1B) Khác dung mơi đo, tín hiệu thường khác; có 70 sec (# phút) tín hiệu cần thiết; tín hiệu nước khác vv… NS 1024 cần # (3,1 x 1024) # 3200 sec (# giờ)! Chính vậy, ghi tên phổ, dung mơi thường ghi trước Khi đo phổ chất có MW < 2-3 KDa (máy 500 MHz) thì: NS cần thường, NS = đo mẫu Note 1H-NMR 4,28 sec 16 # 70 sec H: # phút 13C-NMR 3,05 sec 1024 # 52 phút C: NS/20 phút thơng số máy đo (dung mơi đo có ý nghĩa tần số đo) Ví dụ ghi: Phổ 1H-NMR (pyridin-d5, 500 MHz) ginsenosid Rd mà ko ghi: Phổ 1H-NMR (500 MHz, pyridin-d5) ginsenosid Rd (Ghi chú: Hai ký tự d5 Italic, riêng số phải subscript!) 189 190 Trên phổ 1H-NMR: tín hiệu d mơi đo thường yếu, dễ nhầm với mẫu (là tín hiệu dung mơi chưa deuterium hóa, vd 0,1% CHCl3) vùng thơm, olefin • singlet: pyridin-d5 (đều tḥc vùng thơm) • singlet: CDCl3, MeOD, D2O, DMSO-d6 có H định (x bảng) vùng glycosid D3C • Cường độ tín hiệu: tùy lượng 1H sót lại dung mơi đo vùng no S CD3 O • Thường, phổ 1H-NMR có tín hiệu H2O (xem bảng) • H tín hiệu H2O tăng theo độ ph cực dung môi đo Lưu ý: Trên phổ 1H-NMR, nói tín hiệu dung mơi CDCl3 H 7,27 ppm phải hiểu tín hiệu CHCl3 sót lại dung mơi gồm [>99% CDCl3 + 99% dung mơi đo) Vì vậy, tín hiệu dung mơi phổ 13C-CPD lớn! 193 Dung môi đo > 99% C ppm, [m] H ppm, [m]* H ppm of H2O 194 • Trên phổ NMR nói chung (nhất 13C 1H) thấy dấu vết tạp nội sinh, tạp ngoại sinh lẫn mẫu đo aceton-d6 (CD3)2CO 29.8 [7], 206.5 [7] 2.04 [5]* 2.8 acetonitrild3 CD3CN 1.3 [7], 118.2 [7] 1.93 [5]* 2.1 benzen-d6 C6D6 128.0 [3] 7.15 [br] 0.4 phân lập thường kết tinh, kết tủa lẫn theo chất cloroform-d CDCl3 77.0 [3] 7.27 [1] 1.66 (ví dụ: stigmasterol / sitosterol hay quercitrin / isoquercitrin…) DMSO-d6 (CD3)2SO 39.5 [7] 2.50 [5]* 3.33 • Do ngoại sinh: DAP, DEP (từ dm chiết tách), grease (bôi trơn)… methanol-d4 CD3OD 49.0 [7] 4.78 [1], 3.30 [5]* 4.8 • Tín hiệu “tạp” thường nhỏ tín hiệu mẫu DCM-d2 CD2Cl2 53.2 [5] 5.32 [3]* 1.5 nước-d2 D2O 4.63 / DSS, 4.67 / TSP 4.8 • Nói chung, tạp cản trở việc giải phổ; chí ko giải phổ pyridin-d5 C5D5N 128.5, 135.5, 149.2 all [3] 7.19, 7.55, 8.71 all [br] 4.9 • Trước đo mẫu, cần kiểm tra thật kỹ độ tinh khiết mẫu • Do nội sinh: thường đồng đẳng, độ phân cực #, % thấp, (STP phổ 1H thường