Chiết xuất, phân lập một số hợp chất trong lá trà hoa vàng cúc phương (camellia cucphuongensis ninh rosmann)

Tuy nhiên, các nghiên cứu trong nước hầu như chỉ tập trung vào phát hiện và mô tả đặc điểm hình thái của các loài mới, trong khi các thành phần hóa học làm nên công dụng giá trị của Trà

Trang 1

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

KHOA Y DƯỢC

TRẦN THỊ THƠM

CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ TRÀ HOA VÀNG CÚC PHƯƠNG

(Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

NGÀNH DƯỢC HỌC

Trang 2

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

KHOA Y DƯỢC

TRẦN THỊ THƠM

CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ TRÀ HOA VÀNG CÚC PHƯƠNG

(Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

NGÀNH DƯỢC HỌC

KHÓA : QHY 2014 NGƯỜI HƯỚNG DẪN : TS VŨ ĐỨC LỢI

PGS TS ĐỖ THỊ HÀ

HÀ NỘI 2019

Trang 3

LỜI CẢM ƠN

Trong thời gian thực hiện khóa luận này, em đã nhận được rất nhiều sự quan tâm giúp đỡ từ các thầy cô Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, các anh chị của Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu, cùng bạn bè và người thân

Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm

Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia

Hà Nội, PGS TS Đỗ Thị Hà, Khoa Hóa Thực Vật - Viện Dược liệu đã tận

tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi để em thực hiện và hoàn thành khóa luận này

Em xin chân thành cảm ơn tới ThS Phạm Thị Thúy và các anh chị

chuyên viên của Phòng Hóa Thực vật II - Viện Dược liệu đã trực tiếp hướng dẫn và tận tình chỉ dạy em trong quá trình thực hiện và hoàn thành khóa luận

Em cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô giảng viên trong Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội, người thân trong gia đình, bạn bè đã truyền dạy kiến thức, kỹ năng, đã tạo điều kiện, quan tâm, giúp đỡ, động viên em trong 5 năm học tại trường

Cuối cùng, em xin kính chúc các thầy cô luôn mạnh khỏe, hạnh phúc

và thành công trong cuộc sống, luôn giữ vững được nhiệt huyết trên con đường truyền đạt tri thức của mình!

Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 30 tháng 05 năm 2019

Sinh viên

Trần Thị Thơm

Trang 4

MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Về thực vật 2

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Camellia L và loài Camellia cucphuongensis 2

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Camellia L 2

1.1.3 Đặc điểm thực vật và phân bố của loài Camellia cucphuongensis 3

1.2 Thành phần hóa học 8

1.2.1 Thành phần hóa học của chi Camellia 8

1.2.1.1 Nhóm polyphenol 8

1.2.1.2 Nhóm saponin 9

1.2.1.3 Nhóm polysaccarit 9

1.2.1.4 Nhóm sterol và tinh dầu 9

1.2.1.5 Nhóm acid amin và vitamin 10

1.2.2 Thành phần hóa học của các loài Trà hoa vàng 10

1.2.2.1 Nhóm polyphenol 10

1.2.2.2 Nhóm saponin 12

1.2.2.3 Nhóm tinh dầu 12

1.2.2.4 Nhóm acid amin 13

1.3 Tác dụng sinh học 14

1.3.1 Tác dụng chống oxi hóa 14

1.3.2 Tác dụng chống ung thư 14

1.3.3 Tác dụng kháng khuẩn 15

1.3.4 Tác dụng giảm cân và làm đẹp 15

1.3.5 Tác dụng theo y học cổ truyền 16

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17

Trang 5

2.1 Nguyên liệu và thiết bị 17

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17

2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu 17

2.2 Phương pháp nghiên cứu 18

2.2.1 Phương pháp định tính các nhóm chất 18

2.2.2 Phương pháp chiết xuất và phân lập 18

2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất 19

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20

3.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ thường gặp bằng phản ứng hóa học 20

3.1.1 Định tính các nhóm chất trong dịch chiết ether dầu hỏa 20

3.1.2 Định tính các nhóm chất trong dịch chiết cồn 20

3.1.3 Định tính các nhóm chất trong dịch chiết nước 23

3.1.4 Định tính các nhóm chất khác khác 24

3.2 Chiết xuất và phân lập các chất 27

3.2.1 Chiết xuất cao toàn phần và cao phân đoạn 27

3.2.2 Chiết xuất và phân lập hợp chất CC1 29

3.2.3 Chiết xuất và phân lập hợp chất CC5 30

3.2.4 Xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được 31

3.2.4.1 Hợp chất CC1 31

3.2.4.2 Hợp chất CC5 32

3.3 Bàn luận 33

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

Trang 6

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Ký hiệu, chữ viết tắt Tên đầy đủ

Trang 7

DANH MỤC CÁC BẢNG

1 Bảng 1.1 Danh mục một số loài Trà hoa vàng ở Việt Nam 4 - 7

2 Bảng 3.1 Kết quả định tính sơ bộ các nhóm chất có trong

4 Hình 2.1 Hình ảnh lá và hoa Trà hoa vàng Cúc Phương 17

5 Hình 2.2 Hình ảnh mẫu dược liệu 17

6 Hình 2.3 Sơ đồ phương pháp chiết xuất và phân lập các

7 Hình 3.1 Sơ đồ chiết cao cồn 96% và các cao phân đoạn lá

8 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất CC1 từ phân đoạn ethyl

acetat của lá Trà hoa vàng 29

9 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập hợp chất CC5 từ phân đoạn

dichloromethan của lá Trà hoa vàng 30

Trang 8

1

ĐẶT VẤN ĐỀ

Những năm gần đây, vấn đề chống oxi hóa, chống lão hóa và chống ung thư đang là đề tài nóng được rất nhiều người quan tâm Một trong những xu hướng đi đầu đó là các sản phẩm bảo vệ sức khỏe có nguồn gốc từ thiên nhiên, các loại thảo

dược có lợi cho sức khỏe, tiểu biểu là các loại trà thuộc chi Camellia L

Từ xa xưa, trà đã là một thức uống phổ biến và được yêu thích nhờ các tác dụng có lợi cho sức khỏe Trong các loài trà thì Trà hoa vàng là một loại trà đặc biệt quý, được mệnh danh là nữ hoàng của các loài trà Các nghiên cứu từ y học cổ truyền phương Đông đến các bằng chứng khoa học hiện đại đều chỉ ra các tác dụng nổi bật của Trà hoa vàng như chống oxi hóa, chống ung thư, chống nhiễm khuẩn, hạ

mỡ máu, giảm cân và làm đẹp,…[44], [27], [41], [8]

Hiện nay, Việt Nam đã trở thành một trong những trung tâm phân bố với hơn

40 loài Trà hoa vàng được công bố Loài Camellia cucphuongensis Ninh &

Rosmann được giới lần đầu tiên trong một bài viết của Jean-Claude Rosmann vào

năm 1995 trên tờ Jardins de France, Pháp, sau đó là đăng trên tạp chí International

Camellia Journal [29] Đây là một loài đặc hữu của Việt Nam, được phát hiện tại

Vườn Quốc gia Cúc Phương, Ninh Bình Tuy nhiên, các nghiên cứu trong nước hầu như chỉ tập trung vào phát hiện và mô tả đặc điểm hình thái của các loài mới, trong khi các thành phần hóa học làm nên công dụng giá trị của Trà hoa vàng thì vẫn chưa

được tìm hiểu sâu sắc và toàn diện Về loài Camellia cucphuongensis Ninh &

Rosmann, nhóm nghiên cứu của TS Nguyễn Đức Tùng, Đại học Dược Hà Nội và Viện Dược liệu là nghiên cứu lần đầu tiên, đã mô tả chi tiết đặc điểm thực vật, đặc điểm sinh thái và phân lập được một số thành phần hóa học của loài này

Chính vì vậy, đề tài “ Chiết xuất, phân lập một số hợp chất trong lá trà

hoa vàng Cúc Phương (Camellia cucphuongensis) ” - là một phần của nghiên cứu

trên, đã được thực hiện với các mục tiêu:

1 Định tính một số nhóm chất hữu cơ trong lá Trà hoa vàng Cúc Phương

2 Chiết tách, phân lập 1- 2 hợp chất từ lá Trà hoa vàng Cúc Phương

3 Xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được

Trang 9

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Về thực vật

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Camellia L và loài Camellia cucphuongensis

Vị trí của chi Camellia L trong hệ thống phân loại thực vật của Takhtajan

Tên khoa học: Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann

Tên Việt Nam: Trà hoa vàng Cúc Phương

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Camellia L

Cây bụi hoặc cây nhỏ thường xanh, cành nhẵn hay có lông Lá thường có cuống; đơn, mọc cách, không có lá kèm, kích thước lá thay đổi, dài từ vài cm đến

45 cm; chất lá thường dạng da, dày mỏng khác nhau, ít khi chất màng mỏng; chóp

lá nhọn, có đầu nhọn hoặc kéo dài thành đuôi; gốc lá hình nêm hẹp, nêm rộng, tròn hay hình tim; mép lá có răng cưa nhọn hay tù Hoa đều, lưỡng tính, kích thước lớn hoặc nhỏ, mọc đơn độc hoặc tập trung 2-5 hoa ở nách lá hoặc đỉnh cành Hoa màu

đỏ, trắng hay màu vàng Cuống hoa ngắn hoặc gần như không Lá bắc 2-10, mọc xoắn trên cuống hoa, tồn tại hoặc sớm rụng Lá đài thường 5 phiến, tồn tại hoặc sớm rụng Cánh hoa 4-19, hợp một phần ở gốc cùng với vòng nhị ngoài Nhị nhiều, những nhị ngoài thường dính nhau thành cái chén hay ống ở phía gốc; vòng nhị phía trong rời nhau; chỉ nhị dài Bầu trên, 1-5 ô; vòi nhụy 1-5, dạng sợi, rời hoặc dính nhau ở mức độ khác nhau, bầu và vòi nhụy nhẵn hay phủ lông mịn Quả nang

Trang 10

loài Camellia [3], trong đó có hơn 40 loài có hoa màu vàng, tập trung ở khu vực

phía Bắc (Thái Nguyên, Vĩnh Phúc, Quảng Ninh,…) và phía Nam ở một số tỉnh

như Lâm Đồng, Đồng Nai,…( xem bảng 1.1)

1.1.3 Đặc điểm thực vật và phân bố của loài Camellia cucphuongensis

Cây gỗ nhỏ, cao 3 - 6 m Cành già màu nâu đậm, sần sùi Lá có cuống ngắn, dài 2,5 mm, có lông Lá thuôn dài hoặc hình elip, dài 6-12 cm, rộng 2,7 – 4,5

cm, mỏng, gốc lá tròn nhẵn Hoa màu vàng, mọc ở đầu cành, đường kính khi nở 4,5 – 5 cm; cuống hoa nhẵn, dài 5 – 7 mm; lá bắc 5 – 6 lá, hình trứng, dài 2 – 5 mm; lá đài 8 – 9 lá, dài 0,4 – 1 cm, có lông Có 13 – 15 cánh hoa, hình trứng, dài 1,8 – 2,3

cm, rộng 1,5 cm, đầu tròn, mặt dưới có lông Nhị hoa dài 0,8 – 2,4 cm, chỉ nhị rời,

có lông Noãn có 5 ô, có 5 vòi nhụy, rời, dài khoảng 1,3 cm Quả hình cầu, dài 3,9

cm, đường kính 3,8 cm, màu đen gỗ khi khô, quả có 5 ô với 6 – 8 hạt trong mỗi ô, hạt hình nêm dài 1,2 – 1,4 cm [29]

Mùa hoa kéo dài từ tháng 10 năm trước đến tháng 2 năm sau [2]

Loài này ưa ẩm mọc trong các thung lũng của rừng nhiệt đới ở độ cao

300-400 m (khu vực gần hồ Mạc thuộc Vườn Quốc gia Cúc Phương) [2] Đây là loài đặc hữu, được phát hiện tại Vườn quốc gia Cúc Phương, Ninh Bình bởi Jean-Claude Rosmann và Tiến sĩ Trần Ninh của Khoa Thực vật học, Đại học Quốc gia Hà Nội [29]

Trang 11

Bảng 1.1 Danh mục một số loài Trà hoa vàng ở Việt Nam

2 Camellia bugiamapensis Orel, Curry,

Vườn quốc gia Bù Gia Mập, Bình

Quảng Ninh; Quế Phong, Nghệ An;

Tam Đảo, Vĩnh Phúc; Ninh Bình; Đà Lạt; Tuyên Quang; Ba Vì,Hà Nội; Vĩnh

Vườn Quốc gia Cúc Phương, Ninh

7 Camellia crassiphylla Ninh &

Camellia dalatensis V.D.Luong,

Trang 12

Nai

11 Camellia dormoyana (Pierre) Sealy Trà vàng đo-môi

Hồi Xuân, Thanh Hóa; Nghệ An;

Quảng Trị; Lâm Đồng; Tây Ninh; Biên Hòa, Đồng Nai, Phú Quốc, Kiên Giang

19 Camellia hatinhensis Luong, Tran &

Trang 13

21 Camellia indochinensis Merr Lạng Sơn [31]

22 Camellia inusitata Orel, Curry &

Vườn quốc gia Biduop-Núi Bà, Lâm

24 Camellia limonia C.F.Liang &

S.L.Mo

Trà hoa vàng da

27 Camellia megasepala Hung T.Chang

& Trin Ninh

Trà hoa vàng Ba

30 Camellia oconoriana Orel, Curry &

Tam Đảo, Vĩnh Phúc

Trang 14

35 Camellia sonthaiensis Luu, Luong,

36 Camellia tamdaoensis Hakoda &

Ninh

Trà hoa vàng Tam

37 Camellia thanxaensa Hakoda et

39 Camellia thuongiana Luong, Anna

40 Camellia tonkinensis (Pit.)

Cohen-Stuart

Trà hoa vàng Bắc

41 Camellia vuquangensis Luong, Tran

Trang 15

1.2 Thành phần hóa học

Hiện nay trên thế giới đã có nhiều nghiên cứu khá đầy đủ về thành phần hóa

học của các loài hay gặp thuộc chi Camellia L, đặc biệt là trà xanh Tuy nhiên, các

nghiên cứu đã thực hiện về thành phần hóa học của các loài Trà hoa vàng cho thấy

có điểm khác biệt với trà xanh thông thường Các nghiên cứu đã xác định thành phần của Trà hoa vàng thuộc 13 nhóm chất khác nhau, trong đó các thành phần quan trọng nhất liên quan đến các nhóm chất polyphenol, flavonoid, tanin, saponin, đường khử tự do, acid amin, sterol, acid hữu cơ, tinh dầu và các nguyên tố vi lượng [10], [44]

1.2.1 Thành phần hóa học của chi Camellia L

1.2.1.1 Nhóm polyphenol

Thành phần hóa học của chi Camellia rất đa dạng, các alcaloid purin và

polyphenol là các hợp chất có hoạt tính sinh học chính trong trà, được báo cáo rộng rãi là đóng vai trò quan trọng trong việc giảm nguy cơ mắc bệnh [46]

Các alcaloid purin chính trong trà bao gồm caffein (1), theobromin (2), theophylin (3) và theacrin (4) [4], [5], [48], [49]

Các hợp chất phenolic là axit gallic và tám loại catechin tự nhiên bao gồm

(+) - catechin (C) (5), epicatechin (EC) (6), gallocatechin (GC) (7), epigallocatechin (EGC) (8), (-)-catechin gallat (CG) (9), (-)-gallocatechin gallat (GCG) (10), (-)-epicatechin gallat (ECG) (11) và (-)-epigallocatechin gallat (EGCG) (12) [47]

)-Nghiên cứu năm 2016 của Wang Xin đã phân lập được 17 loại flavonol là

epicatechin-3-O-(Z)-coumarat (13), epicatechin-3-O-(E)-coumarat (14), epicatechin-3-O-(E)-caffeat (15), (+)-catechin (5), ampelopsin (16), (-)-epicatechin (6) , (-)-epiafzelechin (17), (-)-epicatechin-3-O-gallat (11), (-)-epiafzelechin-3-O- gallat (18), (+)-catechin-3-O-gallat (9), (+)-epiafzelechin-3-O-gallat (19), epicatechin- 3-O-p-hydroxybenzoat (20), (-)-epigallo-catechin (8), (-)-gallocatechin (7), (-)-epigallo-catechin-3-O-gallat (12), (+)-gallocatechin-3-O-gallat (10) và (-)-

Trang 16

(-)-Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

9

1.2.1.2 Nhóm saponin

Cho đến nay, chỉ có saponin triterpenoid pentacyclic được báo cáo phát hiện

từ chi Camellia, và hầu hết chúng là các saponin triterpenoid loại oleanane Các

nghiên cứu đã phân lập được 188 hợp chất saponin từ rễ, thân, lá, hoa và hạt của các

loài thuộc chi Camellia Trong đó có 87 saponin từ C sinensis; 33 từ C japonica;

24 từ C sinensis var assamica; 37 từ C oleifera và 7 từ C sasanqua [18]

Một nghiên cứu năm 2018 trên các bộ phận của sáu loài gồm C sinensis, C

sinensis var assamica, C oleifera, C japonica và C sasanqua cho kết quả các

nhóm saponin chính là camelliasaponin (22); theasaponin (23); assamsaponin (24); teaseedsaponin (25); oleiferasaponin (26); floratheasaponin (27); camelliosid (28); chakasaponin (29); yuchasaponin (30); jegosaponin (31); sasanquasaponin (32); sanchakasaponin (33); maetenosid (34); ternstoemiasid (35); oleiferosid (36); camelliaolean (37);… [12]

1.2.1.3 Nhóm polysaccarit

Polysaccarit trong trà (TPS) là một polysacarit có tính axit liên kết với protein không chứa tinh bột, chứa 44,2% đường trung tính, 43,1% axit uronic và 3,5% protein Thành phần carbohydrate của TPS bao gồm glucose (Glc), galactose (Gal), arabinose (Ara), rhamnose (Rha), xyloza (Xyl), mannose (Man), ribose (Rib)

và axit glucuronic TPS có thể được chia thành polysacarit trung tính (NTPS) và polysacarit axit (ATPS) Đường và axit uronic có nhiều trong TPS NTPS chứa 82,7% đường, 12,9 % axit uronic, trong khi ATPS chứa 85,5% đường, 39,8% axit uronic Thành phần đường trong NTPS chủ yếu là Gal (67,6%), trong khi Rha, Ara, Gal thường nằm trong ATPS Axit nucleic cũng được phát hiện trong ATPS TPS từ một số nguồn trà cũng mang các nguyên tố đất hiếm (REE) bao gồm La, Ce và Nd, trong đó La chiếm hơn 75% tổng số REE Sắt, magiê, kẽm và selen cũng được phát hiện trong TPS [28]

1.2.1.4 Nhóm sterol và tinh dầu

Dầu từ hạt của các loài trà đã được biết đến từ lâu, với thành phần chính là sterol và acid béo Theo một nghiên cứu của Wang Xin và cộng sự năm 2017 có thể

thấy rằng C sinensis và các loài khác có thành phần sterol như sau: các loại dầu C

Trang 17

sinensis có hàm lượng tương đối cao của canophyllol (38),

24-methylenecycloartan-3-ol (39), spinasterol (40) và (-)sitosterol (41); dầu C oleifera có hàm lượng tương đối cao của (-)amyrin (42) và stigmast-7-en-3-ol (43); các loại dầu C

chekiangoleosa có hàm lượng tương đối cao của betulin (44),

24-methylenecycloartan-3-ol (45), amyrin (46) và stigmast-7-en-3-ol (47) Trong khi

đó lupanol (48) và obtusifoliol (49) chỉ được phát hiện trong dầu C magnocarpa từ

Quảng Châu - Ngô Châu, Trung Quốc [43]

1.2.1.5 Nhóm acid amin và vitamin

Các loài thuộc chi Camellia cũng chứa nhiều vitamin, đặc biệt là vitamin C,

mang lại tác dụng giải nhiệt và chống oxi hóa của trà [38]

Trong khi đó, theanin (29) là axit amin đặc trưng và chính trong trà [25]

1.2.2 Thành phần hóa học của các loài Trà hoa vàng

1.2.2.1 Nhóm polyphenol

Nhóm polyphenol được coi là nhóm chất quan trọng nhất trong Trà hoa vàng do các tác dụng sinh học nổi bật của chúng

Nghiên cứu năm 2013 của Jia-Ni Lin và cộng sự trên 6 loài Trà hoa vàng là

Camellia murauchii, Camellia impressinervis, Camellia euphlebia, Camellia tunghinensis, Camellia nitidissima var microcarpa và Camellia nitidissima đã phát

hiện 8 loại catechin là (-)-epigallocatechin gallat (EGCG) (12), (-)-epigallocatechin (EGC) (8), (-)-epicatechin gallat (ECG) (11), (-)-epicatechin (EC) (6), (+)-catechin (C) (5), (-)-gallocatechin (GC) (7), (-)-gallocatechin gallat (GCG) (10), (-)-catechin gallat (CG) (9) [44]

Bên cạnh đó, các flavonol như quercetin (50), kaempferol (51), myricitin (52) và các glycosid của chúng như myricetin-3-glucosid (53), kaempferol-3- glucosid (54), quercetin-3- hamnoglucosid (55),… cũng được tìm thấy, trong đó

flavonol glycosid chiếm 2 đến 3% chất rắn chiết xuất tan trong nước của trà [13], [27], [41], [44]

Trang 18

11

O HO

OH

OH OH

OH

O

OH

OH OH OH O

O HO

OH

O O O

OH

OH OH

OH

O OH

OH

O HO

OH

O O O

OH

OH OH

OH

O HO

OH

O OH OH

Myricitin (52) Myricetin-3-glucosid (53) Quercetin (50)

Hình 1.1 Một số polyphenol chính

Trang 19

1.2.2.2 Nhóm saponin

Các saponin (triterpenoid saponin) là nhóm chất được tìm thấy từ tất cả các

bộ phận của cây, trong đó bộ phận phân lập được nhiều nhất là hạt Các saponin đại

diện như camelliasid A, B (19);…[12]

1.2.2.3 Nhóm tinh dầu

Từ loài C nitidissima, các nhà khoa học Trung Quốc đã phân lập được 56

chất tinh dầu từ lá và 34 chất từ hoa Các tinh dầu chính là linalool (56), phytol (57), cis-geranyl aceton (58), n-hexanal (59), methyl salicylat (60), eudesmol (61),…

CH3

CH2

H3CO

Trang 20

13

1.2.2.4 Nhóm acid amin

Cũng trong nghiên cứu của Jia-Ni Lin và cộng sự đã phát hiện các acid amin

trong 6 loài trà hoa vàng như GABA (62), theanin (63), Arg (64), Glu (65), Tyr (66), Trp (67), Thr (68),…[27]

GABA (Gamma-Aminobutyric Acid) (62) là một dẫn truyền thần kinh quan

trọng với hoạt động chính trong hệ thống thần kinh trung ương của động vật có vú

Trong nghiên cứu này, C euphlebia có hàm lượng GABA cao nhất trong số sáu loài

[27]

Theanin (63) là một axit amin tự do được tìm thấy độc quyền trong cây trà

Nó là một thành phần chính chịu trách nhiệm cho vị ngọt và hương vị umami của

trà, đồng thời sở hữu một số tác dụng dược lý Kết quả nghiên cứu cho thấy C

nitidissima var microcarpa có hàm lượng theanin cao nhất trong số sáu loài được

O

NH2

N H

OH O

OH

NH2O

Hình 1.3 Một số acid amin chính

Trang 21

1.3 Tác dụng sinh học

1.3.1 Tác dụng chống oxi hóa

Các nghiên cứu về hoạt tính chống oxi hóa của các loài thuộc chi Camellia,

đặc biệt là trà xanh đã được thực hiện từ lâu, cả trong nước và quốc tế Từ kết quả các nghiên cứu cho thấy tác dụng chống oxi hóa của trà là do hoạt tính của các hợp chất nhóm polyphenol, đây cũng là nhóm chất đặc trưng của Trà hoa vàng

Nghiên cứu năm 2014 về tác dụng chống oxi hóa của loài Camellia

chrysantha (Hu) Tuyama đã tìm thấy các chất có tác dụng chống gốc tự do, theo thứ

tự tác dụng là glucopyranosid > catechin > epicatechin > kaempferol > vitexin > isovitexin [44]

Một nghiên cứu năm 2017 so sánh khả năng chống gốc tự do của các catechin với các chất chống oxi hóa khác (các flavonoid, vitamin C) cho thấy khả năng bắt các gốc tự do của catechin cao hơn các chất cùng so sánh Trong đó (+)-catechin và (-)-epicatechin là những hợp chất hiệu quả nhất trong việc bảo vệ chống lại sự tan máu hồng cầu do AAPH (2,2'-Azobis (2-amidinopropan) dihydrochlorid), trong khi (-)-epicatechin gallat, (-)-epigallocatechin gallat và (-)-epigallocatechin chống tan máu do thuốc (-)-Epigallocatechin gallat và (-)-epicatechin gallat có hiệu quả nhất trong việc ức chế quá trình oxy hóa do AAPH gây ra bởi 2'7'-dichlorodihydroflurescein có trong hồng cầu [16]

Trong nghiên cứu của Wang Bing và cộng sự năm 2018 đã cho thấy tác dụng chống oxi hóa và bắt gốc tự do của thành phần tinh dầu và chiết xuất ethanol của

Camellia nitidissima Bằng cách so sánh chỉ số IC50 của tinh dầu hoa và lá cây, chiết xuất ethanol với vitamin C trong các test DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) và ABTS (2,2’- azino-bis(3-ethylbenz -thiazoline-6-sulfonic acid),

đã cho thấy tác dụng tương đương [41]

1.3.2 Tác dụng chống ung thư

Nghiên cứu năm 2016 của Małgorzata Kujawska và các cộng sự về tác dụng

của chiết xuất Camellia sinensis chống lại tác nhân gây ung thư gan là

Trang 22

N-Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

15

sinh hóa đã cho kết luận rằng điều trị bằng chiết xuất của lá trà cho tác dụng bảo

vệ một phần gan chuột khỏi bệnh ung thư tế bào gan do NDEA gây ra [22]

Độc tính lên tế bào của trà hoa vàng đã được thử nghiệm in vitro lên tế bào ung thư vú của người MDA-MB231 Sau 48 giờ điều trị với 100−800 g / mL chiết xuất từ lá hoa trà vàng, Tỷ lệ ức chế khả năng sống của tế bào tại 800 μg / mL dao

động từ khoảng 80% ở C tunghinensis đến khoảng 25% ở C impressinervis và C

nitidissima var microcarpa, theo thứ tự C tunghinensis> C murauchii> C.euphlebia> C nitidissima> C nitidissima var microcarpa> C impressinervis

[27]

FASN được xác định là đóng một vai trò quan trọng trong quá trình tạo mỡ

và ung thư tiến triển Để làm sáng tỏ tác dụng của lá hoa Trà hoa vàng với sinh tổng hợp axit béo, một nghiên cứu đã được thực hiện Kết quả nghiên cứu cho thấy điều

trị với 400 g / mL lá hoa trà vàng C nitidissima có tác dụng ức chế tốt đối với

FASN Ức chế FASN làm suy giảm sự phát triển và tăng sinh tế bào khối u bằng một số cơ chế như ngăn chặn cung cấp năng lượng, xáo trộn chức năng màng, ức chế sao chép DNA… Ngoài ra chiết xuất Trà hoa vàng còn được chứng minh là có khả năng khởi động quá trình chết theo chu trình của tế bào ung thư [27]

1.3.3 Tác dụng kháng khuẩn

Hai vi khuẩn gram dương (S aureus và B subtilis) và hai vi khuẩn gram âm (E coli và P aeruginosa) được chọn để đánh giá các hoạt động diệt khuẩn trong in vitro của tinh dầu và chiết xuất ethanol C nitidissima trên đĩa thạch agar loãng Các

giá trị MIC cho thấy hiệu quả kháng khuẩn đáng kể khi so sánh với ampicillin và

tobramycin, trong đó phần tinh dầu hiệu quả hơn với S aureus, B.subtilis và E coli (các giá trị MIC lần lượt là 0,625; 1,25 và 1,25 mg/mL), nhưng không chống lại P

aeruginosa (MIC 10,0 mg/mL) Chiết xuất ethanol của C nitidissima thể hiện hiệu

quả tốt hơn với hai chủng vi khuẩn gram dương [41]

1.3.4 Tác dụng giảm cân và làm đẹp

Nhóm catechin (EG, EC, ECG, EGCG,…) được biết đến là nhóm chất chính tạo nên tác dụng giảm cân và làm đẹp của trà Một nghiên cứu về việc sử dụng catechin liều cao chiết xuất từ trà xanh trên đối tượng phụ nữ béo bụng cho thấy sau

Trang 23

12 tuần điều trị mang lại hiệu quả giảm cân đáng kể, giảm chu vi vòng eo, giảm nồng độ cholesterol và LDL trong huyết tương Bên cạnh đó không có tác dụng phụ hoặc tác dụng bất lợi nào được ghi nhận Trong đó, EGCG là catechin dồi dào nhất

và được coi là thành phần có hoạt tính sinh học cao nhất để giảm trọng lượng cơ thể, bằng cách giảm sự biệt hóa và tăng sinh tế bào mỡ trong quá trình tạo mỡ [8]

Trang 24

17

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu và thiết bị

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Hình 2.1 Hình ảnh lá và hoa Trà hoa

vàng Cúc Phương [2]

Hình 2.2 Hình ảnh mẫu dược liệu

- Nơi thu hái: Vườn quốc gia Cúc Phương, huyện Nho Quan, tỉnh Ninh Bình, Việt Nam

- Thời điểm thu hái: 26/02/2018

Mẫu thực vật được giám định bởi Thạc sĩ Nguyễn Anh Đức, đại diện Tổ giám định mẫu, Bảo tàng Thực vật, Khoa Sinh học, Đại học Khoa học tự nhiên, Đại

học Quốc gia Hà Nội Kết quả cho thấy mẫu dược liệu có tên khoa học là Camellia

cucphuongensis Ninh & Rosmann, thuộc chi Camellia, họ Chè – Theaceae Mẫu

cây được lưu tại Bảo tàng Thực vật, số hiệu mẫu HNU 024061(xem phụ lục 1)

2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu

2.1.2.1 Dụng cụ, thiết bị, máy móc

- Tủ sấy Memmert, Binder-FD115

- Các dụng cụ thí nghiệm thường quy: cốc có mỏ, bình nón, ống nghiệm, đũa thuỷ tinh, pipet, bình gạn, phễu lọc, giấy lọc…

- Máy cô cách thủy GFL

- Cân kỹ thuât Precisa BJ 610C, cân phân tích Precisa 262SMA-FR

- Đèn soi từ ngoại hai bước sóng 254 nm và 365 nm

Trang 25

- Pha tĩnh dùng trong sắc ký cột: silica gel pha thường cỡ hạt 0,063-0,200 mm (Merck), (0,040 - 0,063 mm, Merck); Sephadex LH-20 (Amersham Bioscience, Uppsala, Thụy Sỹ) Bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck) (silica gel, 0,25 mm) và bản mỏng pha đảo RP-18 F254 (Merck, 0,25 mm)

- Sắc ký cột: các loại cột sắc ký có kích cỡ khác nhau

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR được ghi trên máy Bruker Avance 500MHz tại

Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

2.1.2.2 Hóa chất, dung môi

- Dùng trong nghiên cứu thành phần hóa học: TT Mayer, TT Dragendorff, TT Bouchardat, TT diazo mới pha, FeCl3 5%, geletin 1%, chì acetat 5%, TT Legal, dung dịch natri nitroprussiat, TT ninhydrin 3%, ethanol 96%, dicloromethan, ether, acid formic, acid chlohidric, acid sulfuric,…

- Dung môi hóa chất dùng để chiết xuất và phân lập: ethanol (EtOH) 96%, n-hexan (Hx), ethyl acetat (EtOAc), methanol (MeOH), dichloromethan (DCM), aceton (Ace) đạt tiêu chuẩn tinh khiết

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp định tính các nhóm chất

Định tính sơ bộ các nhóm chất có trong lá Trà hoa vàng Cúc Phương: tiến hành định tính các nhóm chất bằng các phản ứng hóa học đặc trưng cho từng nhóm

chất theo tài liệu

2.2.2 Phương pháp chiết xuất và phân lập

Phương pháp chiết xuất và phân lập các chất từ lá Trà hoa vàng Cúc

Phương được thể hiện trong sơ đồ Hình 2.3 sau đây:

Trang 26

Cao chiết ethanol 96%

Cao chiết phân đoạn

Các phân đoạn tiềm năng

Phân lập 1-2 hợp chất từ các phân đoạn tiềm

năng Xác định cấu trúc các hợp chất

Trang 27

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ thường gặp bằng phản ứng hóa học

3.1.1 Định tính các nhóm chất trong dịch chiết ether dầu hỏa

Cân khoảng 10g dược liệu vào túi lọc đã chuẩn bị sẵn rồi cho vào bình chiết Shoxhlet Chiết hồi lưu trên bếp cách thủy với dung môi là ether dầu hỏa trong 3 giờ, thu được dịch lọc

Kết quả: Phản ứng dương tính

Từ kết quả trên, sơ bộ kết luận: Dược liệu có chứa sterol

3.1.2 Định tính các nhóm chất trong dịch chiết cồn

Cân 20g dược liệu, xay nhỏ, ngâm lạnh với ethanol 96% trong 3 ngày Lấy

15 ml dịch chiết, pha loãng với 20 ml ethanol 96% thu được dịch chiết cồn để làm

Trang 28

21

- Phản ứng với kiềm: cho 2 ml dịch chiết cồn vào một ống nghiệm, thêm vài giọt

dung dịch NaOH 10%, phản ứng dương tính khi màu vàng của dung dịch tăng thêm

- Phản ứng Cyanidin: cho 2 ml dịch chiết cồn vào một ống nghiệm, thêm một ít bột

magie kim loại, rồi nhỏ từ từ 4-5 giọt acid HCl đặc Đun nóng trên bếp cách thủy sau vài phút nếu xuất hiện màu tím đỏ thì phản ứng dương tính

- Phản ứng với dung dịch FeCl 3 5%: cho 2 ml dịch chiết cồn vào một ống nghiệm,

thêm vài giọt dung dịch FeCl3 5%, nếu dung dịch xuất hiện màu xanh sẫm thì phản ứng dương tính

-Phản ứng Diazo hóa: cho 2 ml dịch chiết cồn vào một ống nghiệm, kiềm hóa bằng

NaOH 10%, thêm vài giọt thuốc thử Diazoni, lắc đều, đun cách thủy vài phút Phản ứng dương tính khi dung dịch xuất hiện màu đỏ gạch

Từ các kết quả trên, sơ bộ kết luận: Dược liệu có flavonoid

3.1.2.2 Định tính saponin

- Quan sát hiện tượng tạo bọt: cho 2 ml dịch chiết cồn vào một ống nghiệm, thêm 2

ml nước cất Bịt ống nghiệm bằng ngón tay cái, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc trong 5 phút, để yên và quan sát Phản ứng dương tính khi bọt bền sau 10 phút

-Phản ứng Salkowski: cho 5 ml dịch chiết cồn vào một ống nghiệm, bốc hơi đến

cắn Hòa tan cắn bằng 2 ml anhydrid acetic, thêm vào dung dịch 1 ml chloroform Dùng pipet nhỏ từ từ 2 ml H2SO4 đặc vào thành ống nghiệm nếu mặt phân cách xuất hiện vòng màu đỏ tím, lắc nhẹ dung dịch có màu đỏ thì phản ứng dương tính

Từ các kết quả trên, sơ bộ kết luận: Dược liệu có saponin

3.1.2.3 Định tính coumarin

Định dạng
Số trang	56
Dung lượng	2,08 MB