Chiết xuất, phân lập một số hợp chất trong lá trà hoa vàng cúc phương (camellia cucphuongensis ninh rosmann)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TRẦN THỊ THƠM CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ TRÀ HOA VÀNG CÚC PHƯƠNG (Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TRẦN THỊ THƠM CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ TRÀ HOA VÀNG CÚC PHƯƠNG (Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA : NGƯỜI HƯỚNG DẪN : QHY 2014 TS VŨ ĐỨC LỢI PGS TS ĐỖ THỊ HÀ HÀ NỘI 2019 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực khóa luận này, em nhận nhiều quan tâm giúp đỡ từ thầy cô Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, anh chị Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu, bạn bè người thân Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội, PGS TS Đỗ Thị Hà, Khoa Hóa Thực Vật - Viện Dược liệu tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi để em th ực hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn tới ThS Phạm Thị Thúy anh chị chun viên Phịng Hóa Thực vật II - Viện Dược liệu trực tiếp hướng dẫn tận tình dạy em trình thực hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô giảng viên Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội, người thân gia đình, bạn bè truyền dạy kiến thức, kỹ năng, tạo điều kiện, quan tâm, giúp đỡ, động viên em năm học trườ ng Cuối cùng, em xin kính chúc thầy cô mạnh khỏe, hạnh phúc thành công sống, giữ vững nhiệt huyết đường truyền đạt tri thức mình! Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 30 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Trần Thị Thơm MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Về thực vật 1.1.1 Vị trí phân loại chi Camellia L loài Camellia cucphuongensis 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Camellia L .2 1.1.3 Đặc điểm thực vật phân bố loài Camellia cucphuongensis .3 1.2 Thành phần hóa học 1.2.1 Thành phần hóa học chi Camellia 1.2.1.1 Nhóm polyphenol 1.2.1.2 Nhóm saponin 1.2.1.3 Nhóm polysaccarit 1.2.1.4 Nhóm sterol tinh dầu 1.2.1.5 Nhóm acid amin vitamin 10 1.2.2 Thành phần hóa học loài Trà hoa vàng 10 1.2.2.1 Nhóm polyphenol 10 1.2.2.2 Nhóm saponin 12 1.2.2.3 Nhóm tinh dầu 12 1.2.2.4 Nhóm acid amin 13 1.3 Tác dụ ng sinh học 14 1.3.1 Tác dụng chống oxi hóa 14 1.3.2 Tác dụng chống ung thư 14 1.3.3 Tác dụng kháng khuẩn 15 1.3.4 Tác dụng giảm cân làm đẹp 15 1.3.5 Tác dụng theo y học cổ truyền 16 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên liệu thiết bị 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Phương pháp định tính nhóm chất 18 2.2.2 Phương pháp chiết xuất phân lập 18 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 19 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Định tính nhóm chất hữu thường gặp phản ứng hóa học 20 3.1.1 Định tính nhóm chất dịch chiết ether dầu hỏa 20 3.1.2 Định tính nhóm chất dịch chiết c ồn 20 3.1.3 Định tính nhóm chất dịch chiết nước 23 3.1.4 Định tính nhóm chất khác khác 24 3.2 Chiết xuất phân lập chất 27 3.2.1 Chiết xuất cao toàn phần cao phân đoạn 27 3.2.2 Chiết xuất phân lập hợp chất CC1 29 3.2.3 Chiết xuất phân lập hợp chất CC5 30 3.2.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 31 3.2.4.1 Hợp chất CC1 31 3.2.4.2 Hợp chất CC5 32 3.3 Bàn luận 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Bảng 1.1 Danh mục số loài T Bảng 3.1 Kết định tính sơ c dược liệu Bảng 3.2 Bảng so sánh liệu phổ kaempferol Bảng 3.3 Bảng so sánh liệu phổ vanillin DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Hình 1.1 Một số polyphenol Hình 1.2 Một số tinh dầu Hình 1.3 Một số acid amin Hình 2.1 Hình ảnh hoa Trà h Hình 2.2 Hình ảnh mẫu dược liệu Hình 2.3 Sơ đồ phương pháp chiế chất Hình 3.1 Sơ đồ chiết cao cồn 96% Trà hoa vàng Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất acetat Trà hoa vàng Hình 3.3 Sơ đồ phân lập hợp chất dichloromethan Trà hoa vàn 10 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợ 11 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp ĐẶT VẤN ĐỀ Những năm gần đây, vấn đề chống oxi hóa, chống lão hóa chống ung thư đề tài nóng nhiều người quan tâm Một xu hướng đầu sản phẩm bảo vệ sức khỏe có nguồn gốc từ thiên nhiên, loại thảo dược có lợi cho sức khỏe, tiểu biểu loại trà thuộc chi Camellia L Từ xa xưa, trà thức uống phổ biến u thích nhờ tác dụng có lợi cho sức khỏe Trong lồi trà Trà hoa vàng loại trà đặc biệt quý, mệnh danh nữ hoàng loài trà Các nghiên cứu từ y học cổ truyền phương Đông đến chứng khoa học đại tác dụng bật Trà hoa vàng chống oxi hóa, chống ung thư, chống nhiễm khuẩn, hạ mỡ máu, giảm cân làm đẹp,…[44], [27], [41], [8] Hiện nay, Việt Nam trở thành trung tâm phân bố với 40 lồi Trà hoa vàng cơng bố Loài Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann giới lần viết Jean-Claude Rosmann vào năm 1995 tờ Jardins de France, Pháp, sau đăng tạp chí International Camellia Journal [29] Đây loài đặc hữu Việt Nam, phát Vườn Quốc gia Cúc Phương, Ninh Bình Tuy nhiên, nghiên cứu nước tập trung vào phát hiệ n mô tả đặc điểm hình thái lồi mới, thành phần hóa học làm nên cơng dụng giá trị Trà hoa vàng chưa tìm hiểu sâu sắc toàn diện Về loài Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann, nhóm nghiên cứu TS Nguyễn Đức Tùng, Đại học Dược Hà Nội Viện Dược liệ u nghiên cứu lần đầu tiên, mô tả chi tiết đặc điểm thực vật, đặc điểm sinh thái phân lập số thành phần hóa học lồi Chính vậy, đề tài “ Chiết xuất, phân lập số hợp chất trà hoa vàng Cúc Phương (Camellia cucphuongensis) ” - phần nghiên cứu trên, thực với mục tiêu: Định tính số nhóm chất hữu Trà hoa vàng Cúc Phương Chiết tách, phân lập 1- hợp chất từ Trà hoa vàng Cúc Phương Xác định cấu trúc hợp chất phân lập KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đề tài thực mục tiêu nội dung đặt sau: Định tính nhóm chất hữu thường gặp Trà hoa vàng Cúc Phương, thu kết quả: • Các nhóm chất có mặt mẫu dược liệu: Caroten, Sterol, Flavonoid, Saponin, Acid amin, Acid hữu cơ, Đường khử, Tanin • Các nhóm chất khơng có mặt mẫu dược liệu: Chất béo, Coumarin, Glycosid tim, Alcaloid, Anthranoid Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc hai h ợp chất từ Trà hoa vàng Cúc • Từ cao chiết phân đoạn ethyl acetat phân lập hợp chất kaempferol (CC1) • Từ cao chiết phân đoạn dichloromethan phân lập hợp chất vanillin (CC5) Kiến nghị • • Tiếp tục phân lập h ợp chất khác từ loài Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann Từ kết thành phần hóa học, tiến hành nghiên cứu tác dụng sinh học tiềm chống oxi hóa, chống ung thư, hỗ trợ bệnh nhân đái tháo đường, tim mạch,… 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tập 2, trang 1025 Ngô Thị Minh Duyên cộng (2011), "Đánh giá tình hình sinh trưởng khả tái sinh trà hoa vàng số tỉnh phía Bắc", Tạp chí Khoa học Lâm nghiệp số 4, trang 1954-1965 Trần Ninh Hakoda Naotoshi (2009), Các loại trà Vườn quốc gia Tam Đảo TÀI LIỆU TIẾNG ANH Ashihara H, et al (1998), "Biosynthesis and metabolism of purine alkaloids in leaves of cocoa tea (Camellia ptilophylla)", Journal of Plant Research 111, pp 599–604 Axel M, et al (1996), "Determination of adenine, caffeine, theophylline and theobromine by HPLC with amperometric detection", Fresenius Journal of Analytical Chemistry 356, pp 284–287 Ben Saad H, et al (2017), "Effects of vanillin on potassium bromate-induced neurotoxicity in adult mice: impact on behavior, oxidative stress, genes expression, inflammation and fatty acid composition", Arch Physiol Biochem 123 (3), pp 165-174 Calderón-Monto JM , et al (2011), "A review on the dietary flavonoid kaempferol", Mini Reviews in Medicinal Chemistry 11 (4), pp 298–344 Chen IJ, et al (2016), "Therapeutic effect of high-dose green tea extract on weight reduction: A randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial.", Clinical Nutrition 35 (3), pp 592-599 Chen JH, et al (1993), "The healthcare value of yellow Camellia", Study Trace Elements Health 10 (51-52), pp 61 10 Chen JH, et al (1993), "The wholesome function and trace elements of leaves in artificial asexual propagation of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama (golden camellia).", Weiliang Yuansu Yu Jiankang Yanjiu 10, pp 51−52 11 Chen SS, et al (2012), "Advances in the treatment of ovarian cancer: a potential role of antiinflammatory phytochemicals", Discovery Medicine 13 (68), pp 7-17 12 Cui C, et al (2018), "Triterpenoid Saponins from the Genus Camellia: structures, biological activities, molecular simulation for structureactivity relationship ", Food & Function (6), pp 3069–3091 13 Douglas AB, et al (1997), "The Chemistry of Tea Flavonoids", Critical Reviews in Food Science and Nutrition 37 (38), pp 693-704 14 Dung VL, et al (2016), "Camellia thuongiana - a new yellow camellia species from vietnam", Dalat University journey of science (3), pp 338– 344 15 Dung VL, et al (2016 ), "Camellia Ninhii – A New Yellow Camellia Species from Vietnam", Proceedings of Dali International Camellia Congress pp 75-78 16 Grzesik M (2017), "Antioxidant properties of catechins: Comparison with other antioxidants", Food Chemistry 241, pp 480-492 17 Huang XC (1994), "Development and prospect forecast of yellow Camellia", Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine 1, pp 10– 11 18 Itokawa H, et al (1968), "Isolation of Camelliagenin A, B and C from the Fruits of Camellia japonica L", Yakugaku zasshi : Journal of the Pharmaceutical Society of Japan 88, pp 1463-1466 19 Jaganathan SK, et al (2009), "Antiproliferative effects of honey and of its polyphenols: a review", Journal of Biomedicine & Biotechnology, pp 1-13 20 Khalil MI, et al (2010), "The potential role of honey and its polyphenols in preventing heart diseases: a review", African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines (4), pp 315-321 21 Kim SH, et al (2013), "Anti-cancer Effect and Underlying Mechanism(s) of Kaempferol, a Phytoestrogen, on the Regulation of Apoptosis in Diverse Cancer Cell Models", Toxicological Research 29 (4), pp 229-234 22 Kujawskaa M, et al (2016 ), "Protective effect of yellow tea extract on Nnitrosodiethylamine-induced liver carcinogenesis", Pharmaceutical Biology 54 (9), pp 1891–1900 23 Kurihara HKJ, et al (1991), "Oligostilbenes from Carex kobomugi", Phytochemistry 30 (2), pp 649-653 24 Lee J, et al (2014), "Vanillin protects human keratinocyte stem cells against ultraviolet B irradiation", Food Chem Toxicol 63 (7), pp 30 25 Li YF, et al (2008), "An improved HPLC method for simultaneous determination of phenolic compounds, purine alkaloids and theanine in Camellia species", Journal of Food Composition and Analysis 21, pp 559– 563 26 Lieu TN, et al (2018), "Two new species of Camellia (Theaceae) from Vietnam", Korean Journal of Plant Taxonomy 48 (2), pp 115-122 27 Lin JN, et al (2013), "Chemical Constituents and Anticancer Activity of Yellow Camellias against MDA-MB-231 Human Breast Cancer Cells ", Journal of Agricultural and Food Chemistry 61, pp 9638−9644 28 Ling-Ling D, et al (2016), "Tea Polysaccharides and Their Bioactivities", Molecules 21 (11), pp 1449 29 Ninh T, et al (1998), " Camellia cucphuongensis: a new species of yellow Camellia from Vietnam ", International Camellia Journal 1998, pp 71 - 72 30 Ninh T, et al (2012), "A New Species of Yellow Camellia (Sect Piquetia) from Vietnam ", International Camellia Journal 44, pp 161- 162 31 Ninh T, et al (2016), " General information about the Yellow Camellia species in Vietnam", Proceedings of Dali International Camellia Congress Dali, Yunnan, China, pp 76 - 84 32 Nöthlings U, et al (2007), "Flavonols and pancreatic cancer risk: the multiethnic cohort study", American Journal of Epidemiology 166 (8), pp 924-931 33 Orel G, et al (2010), "Camellia luteocerata sp nov and a new section of Camellia (Dalatia) from Vietnam", Nordic Journal of Botany 28, pp 280284 34 Orel G, et al (2012), "Camellia cattienensis: a new species of Camellia (sect Archaecamellia: Theaceae) from Vietnam", Kew Bulletin 66, pp 565-569 35 Orel G, et al (2012), "Camellia inusitata (Theaceae), a new species forming a new section (Bidoupia) from Vietnam", Edinburgh Journal of Botany 69, pp 347-355 36 Orel G, et al (2013), "Camellia oconoriana (Theaceae), a new species from Vietnam", Edinburgh Journal of Botany 70, pp 439-447 37 Pouységu L, et al (2010), "Hypervalent iodine -mediated oxygenative phenol dearomatization reactions", Tetrahedron , pp 5908-5917 38 Sahar R, et al (2016), "Evaluation of seven different drying treatments in respect to total flavonoid, phenolic, vitamin C content, chlorophyll, antioxidant activity and color of green tea (Camellia sinensis or C assamica) leaves", Journal of Food Science and Technology 53 (1), pp 721–729 39 Takhtajan (2009), Flowering plant 40 Veeresham C, et al (2014), "Aldose reductase inhibitors of plant origin", Phytotherapy Research 28 (3), pp 317-333 41 Wang B, et al (2018), "Essential oils and ethanol extract from Camellia nitidissima and evaluation of their biological activity", Journal of Food Science and Technology 55 (12), pp 5075-5081 42 Wang X, et al (2016), "Flavanols from the Camellia sinensis var assamica and their hypoglycemic and hypolipidemic activities", Acta Pharmaceutica Sinica B, pp 7(3):342-346 43 Wang X, et al (20217), "Fatty acid and sterol composition of tea seed oils: Their comparison by the "FancyTiles" approach", Food Chemistry 233, pp 302-310 44 Wei JB, et al (2015), "Characterization and determination of antioxidant components in the leaves of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama based on compositioneactivity relationship approach", Journal of food and drug analysis 23 (1), pp 40-48 45 Xiao TJ, et al ( 1991 ), "Development and utilization of Camellia genus plant resources.", China's Wild Plant Resources 1, pp 44–45 46 Yang CS, et al (2002), "Inhibition of carcinogenesis by tea " , Review of Pharmacology and Toxicology 42, pp 25–54 47 Yang XR, et al (2007), "Simultaneous analysis of purine alkaloids and catechins in Camellia sinensis, Camellia ptilophylla and Camellia assamica var kucha by HPLC", Food Chemistry 100, pp 1132–1136 48 Ye CX, et al (1997), "Isolation and analysis of purine alkaloids from Camellia ptilophylla Chang ", Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni 36, pp 30–33 49 Zheng XQ, et al (2002), "Theacrine (1,3,7,9- tetramethyluric acid) synthesis in leaves of a Chinese tea, kucha (Camellia assamica var kucha)", Phytochemistry 60, pp 129–134 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết giám định tên khoa học Phụ lục 2: Bộ liệu phổ hợp chất CC1 Phụ lục 3: Bộ liệu phổ hợp chất CC5 PHỤ LỤC 1: KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC 2: BỘ DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT CC1 PHỤ LỤC 3: BỘ DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT CC5 ... tài “ Chiết xuất, phân lập số hợp chất trà hoa vàng Cúc Phương (Camellia cucphuongensis) ” - phần nghiên cứu trên, thực với mục tiêu: Định tính số nhóm chất hữu Trà hoa vàng Cúc Phương Chiết. .. 2.2.2 Phương pháp chiết xuất phân lập Phương pháp chiết xuất phân lập chất từ Trà hoa vàng Cúc Phương đượ c thể sơ đồ Hình 2.3 sau đây: 18 Lá Trà hoa vàng Cúc Phương Chiết dung môi ethanol Cao chiết. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TRẦN THỊ THƠM CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ TRÀ HOA VÀNG CÚC PHƯƠNG (Camellia cucphuongensis Ninh & Rosmann) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI