Nghiên cứu chiết xuất, phân lập một số hợp chất từ lá cây dâu tằm (morus alba l )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC  - - TRỊNH TRỌNG MINH NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ LÁ CÂY DÂU TẰM ( Morus alba L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC  - - TRỊNH TRỌNG MINH NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ LÁ CÂY DÂU TẰM ( Morus alba L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa QH.2013.Y Người hướng dẫn: TS VŨ ĐỨC LỢI PSG TS NGUYỄN TIẾN VỮNG Hà Nội – 2018 LỜI CẢM ƠN Lời em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc nh ấ t tới TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược - ĐHQGHN người trực tiếp hướng dẫn tận tình, chu đáo, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian thực khóa luận, đồng thời góp ý kiến giúp em hồn thành khóa luận Em xin cám ơn PGS.TS Nguyễn Tiến Vững – Viện Pháp y Quốc gia tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu cho em hoàn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Dược liệu – Dược cổ truyền Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em q trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô giảng viên Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội, bạn bè, người thân gia đình ln dạy dỗ, trang bị kiến thức tạo điều kiện, quan tâm, giúp đỡ, động viên em suốt năm qua Em xin chân thành c ảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Sinh viên TRỊNH TRỌNG MINH DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT 10 11 12 13 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Bảng 1.1 Hàm khơ DANH MỤC CÁC HÌNH Hình vẽ, đồ thị Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 1.5 Hình 1.6 Hình 1.7 Hình 1.8 Hình 1.9 Hình 1.10 Hình 1.11 Hình 2.1 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG : TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại chi Morus 1.2 Đặc điểm thực vật, phân bố chi Morus .2 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Phân bố sinh thái 1.3 Thành phần hóa học chi Morus 1.3.1 Flavonoid 1.3.2 Alcaloid .9 1.3.3 Một số thành phần khác 1.4 Tác dụng dược lý c chi Morus .13 1.4.1 Tác dụng chống oxy hóa 13 1.4.2 Tác dụng ch ống viêm 14 1.4.3 Tác dụng làm trắng da 15 1.4.4 Một số tác dụng khác 16 1.5 Tác dụng công dụng theo y học cổ truyền 17 1.5.1 Tang diệp (lá dâu) 17 1.5.2 Tang bạch bì (vỏ rễ dâu) 18 1.5.3 Tang thầm (quả dâu chín) 18 1.5.4 Tang chi (cành dâu non) 18 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nguyên vật liệu nghiên cứu 20 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .20 2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập 21 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất 25 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất 29 3.2.1 Hợp chất 1: Maesopsin-4-O-glucosid .29 3.2.2 Hợp chất 2: Leonuriside A 30 3.2.3 Hợp chất 3: Eriodictyol 31 3.3 Bàn luận kết 33 3.3.1 Về chiết xuất cao toàn phần chi ết phân đoạn phần 33 3.3.2 Về phân lập xác định cấu trúc hợp chất 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ESI-MS), cộng hưởng từ hạt nhân NMR (1H-NMR, 13CNMR, DEPT) qua đối chiếu với tài liệu công bố hợp chất liên quan phân lập, xác định cấu trúc phân tử hợp chất là: maesopsin-4-O-glucosid (1), leonuriside A (2), eriodictyol (3) Các hợp chất lần phân lập từ dâu Vì đóng góp mới, làm phong phú tri thức thành phần hoá học dâu Morus alba L MAESOPIN-4-O-GLUCOSID Maesopin-4-O-glucosid auronol glucosid tìm thấy rễ Medicago truncatula [11], vỏ Hovenia trichocarea [19], Báo cáo Trinh Thi Thuy công (2016) phân lập đượ c Maesopin-4-O-glucosid chay Artocarpus tonkinensis A Chev Ex Gagnep, đượcc hứng có hoạt tính chống ung thư, kháng u động vật có vú [30] LEONURISIDE A Leonuriside A thuộc nhóm phenolic glycosides tìm nhiều lồi thực vật từ sớm, tìm thấy phận mặt đất ích mẫu Leonurus japonicus Houtt [37], Rhus parviflora [26], loài Spatholobus sinensis [38 ], vỏ Davidia involucrate [32] … Nghiên cứu cho thấy tác dụng ức chế tích tụ triglyceride (TG) tế bào HepG2 gây cảm ứng axit béo tự [37] ERIODICTYOL Eriodictyol thuộc nhóm flavanon coi phân tử lipid flavonoid Eriodictyol thực tế khơng hịa tan (trong nước) hợp chất có tính axit yếu (dựa pKa nó) Eriodictyol tìm thấy chủ yếu máu nước tiểu, thận mô gan người Trong tế bào, eriodictyol chủ yếu nằm tế bào chất màng tế bào (được dự đoán từ logP) Eriodictyol flavanone cay đắng mặt nạ, flavonoid chiết xuất từ Yerba Santa (Eriodictyon californicum), loại thực vật có nguồn 34 gốc Bắc Mỹ Eriodictyol flavanon xác định có tính chất thay đổi vị giác, ba chất khác là: homoeriodictyol, muố i natri sterubin (Wikipedia) Eriodictyol flavonoid, hợp chất phân lập từ Eriodictyon californicum sử dụng y học mộ t chất làm đờm [42] Như vậy, với hợp chất phân lập góp phần việc định hướng nghiên cứu thêm thành phần hóa học tác dụng sinh học dâu tằm Morus alba L 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đề tài nghiên cứu thu số kết quả: ✓ Đã chiết xuất, phân lập hợp chất từ dâu tằm thu hái tỉnh Thái Nguyên ✓ Đã xác định cấu trúc hợp chất là: Maesopsin-4-Oglucosid (1), Leonuriside A (2), Eriodictyol (3) Các hợp ch-ất lần phân lập từ dâu KIẾN NGHỊ ➢ Tiếp tục nghiên cứu thành phần hoá h ọ c dâu tằm, cụ thể phân đoạn n-hexan, phân đoạn nước tiếp tục nghiên cứu phân đoạn ethylacetat, rộng nghiên cứu phận khác quả, thân, rễ dâu tằm tằm (Morus abla L) ➢ Xác định hàm lượng ba chất vừa tìm nghiên cứu đồng thời đánh giá tác dụng sinh học chúng người, từ xác định tiềm làm thuốc 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng tập 2, NXB Khoa học Kĩ thuật, tr.233 Đại học dược Hà Nội (2005), Giáo trình thực vật dược phần 3, tr 259261 Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 721 Phạm Xuân Sinh (2006), Dược học cổ truyền, NXB Y học, tr 136-195252-255 Đỗ Thị Nghĩa Tình (2017), khố luận “Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hoá học dâu tằm (Morus alba L)”, khoa Y Dược-Đại học Quốc gia Hà Nội Ngô Vân Thu, Trần Hùng (2011), Dược liệu học tập NXB Y học,tr.381 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam NXB Khoa học kỹ thu ật, tr 462-468 Anna Gryn-Rynko, Grzegorz Bazylak, Dorota Olszewska-Slonina (2016), " New potential phytotherapeutics obtained from white mulberry (Morus alba L.) leaves", Biomedicine & Pharmacotherapy, Vol 84, pp 628–636 Tài liệu tiế ng anh: Anna Stochmal, Iwona Kowalska, Bogdan Janda (2009), “Gentisic acid conjugates of Medicago truncatula roots”, Phytochemistry, Vol 70, pp 1272-1276 37 10 Ayse Kuruzum-uz, Zühal Guvenalp, Cavit Kazaz (2013), "Phenolic compounds from the roots of Anchusa azurea var azurea ", Turk J Pharm Sci, 10 (2), pp 177-184 11 genus Bao Jun Xu, Yu Qiu Deng (2003), “Chemical compositions of the Hovenia”, Journal Natural produc science, 9(3):143-153 12 Céline Rivière, Stéphanie Krisa, Laurent Péchamat, Merian Nassra, Jean-Claude Delaunay, Axel Marchal, Alain Badoc, Pierre WaffoTéguo, Jean-Michel Mérillon) (2014), "Polyphenols from the stems of Morus alba and their inhibitory activity against nitric oxide production by lipopolysaccharide-activated microglia", J Fototerapia , Vol 97, pp 253260 13 Choi J, Kang HJ, Kim SZ, Kwon To, Jeong SI, Jang SI (2013), "Antioxidant effect of astragalin isolated from the leaves of Morus alba L against free radical-induced", Archives of Pharmacal Research, Vol 36, pp 912-917 14 Eric Wei-Chiang Chan, Phui-Yan Lye, Siu-Kuin Wong (2016), "Phytochemistry, pharmacology, and clinical trials of Morus alba", Chinese Journal of Natural Medicines, pp 17-30 15 Fujie Yan, Xiaodong Zheng (2017), "Anthocyanin-rich mulberry fruit improves insulin resistance and protects hepatocytes against oxidative stress during hyperglycemia by regulating AMPK/ACC/mTOR pathway", Journal of Functional Foods, Vol 30, pp.270-281 16 Hamzah, Ahmad Sazali; Lajis, N H.; Sargent, M.V (1994), "Kaempferitrin from the leaves of Hedyotis verticillata and its biological activity", Planta Medica, pp.388–389 38 17 Jiang Du, Zhen-Dan He, Ren-Wang Jiang, Wen-Cai Ye, Hong-Xi Xu, Paul Pui-Hay But (2003), "Antiviral flavonoids from the root bark of Morus alba L.", Phytochemistry, Vol 62, pp 1235-1238 18 Katsube, Takuya, et al (2009), "Effect of air-drying temperature on antioxidant capacity and stability of polyphenolic compounds in mulberry ( Morus alba L.) leaves", Food Chemistry, Vol 113, pp 964- 969 19 Kazuko Yoshikawa, Kimura Eiko, Noriko Mimura (1998), “Hovetrichosides C -G, Five New Glycosides of Two Auronols, Two Neolignans, and a Phenylpropanoid from the Bark of Hovenia trichocarea”, J Nat Prod, 61, 786-790 20 Li Gao, Yuan-Dong Li, Bao-Kun Zhu, Zhi-Yu Li, Li-Bin Huang, Xian-Yi Li, Fei Wang, Fu-Cai Ren & Tou-Gen Liao (2017): Two new prenylflavonoids from Morus alba, Journal of Asian Natural Products Research, Vol 20, pp 117-121 21 Linxia Zhang, Yang Xu, Yuting Li, Tao Bảo, vemana Gowd, Chen Wei (2017), " Protective property of mulberry digest against oxidative stress – A potential approach to ameliorate dietary acrylamide-induced cytotoxicity ", Food chemistry, Vol 203, pp 306-315 22 Marija Radojković, Zoran Zeković, Pavle Mašković, Senka Vidović, Anamarija Mandić, Aleksandra Mišan, Saša Đurović (2016), "Biological activities and chemical composition of Morus leaves extracts obtained by maceration and supercritical fluid extraction", The Journal of Supercritical Fluids, pp 50-58 39 23 Mi Zhang, Man Chen, Han-Qing Zhang, Shi Sun, Bing Xia, Fei- Hua Wu (2009), "In vivo hypoglycemic effects of phenolics from the root bark of Morus alba.L", J Fitoterapia, Vol 80, pp 475-477 24 Nakai H.-Y Sohn, K.H Son, C.-S Kwon, G.-S Kwon, S.S Kang (2004), "Antimicrobial and cytotoxic activity of 18 prenylated flavonoids isolated from medicinal plants: Morus alba L., Morus mongolica Schneider, Broussonetia papyrifera (L.) Vent, Sophora flavescens Ait and Echino Sophora koreensis Nakai", Phytomedicine, Vol 11, pp 666-672 25 Park, Ji- Hae 21, (2014), "A new flavonoid glycoside from the root bark of Morus alba L.", Natural Product Research, Vol 28, p 1859 26 Sabina Shrestha, Dae-Young Lee, Ji-Hae Park (2013), “Phenolic components from Rhus parviflora fruits and their inhibitory effects on lipopolysaccharide-induced nitric oxide production in RAW 264.7 macrophages”, Natural Product Research, Vol 27, pp 2244-2247 27 Scientia Horticulturae, Yongcheol Lee, Keum Taek Hwang (2017), "Changes in physicochemical properties of mulberry fruits (Morus alba L.) during ripening", J Agric Food Chem, Vol 217, pp.189-196 28 Seoung Rak Lee, Jon Clardy , Donald Robert Senger , Shugeng Cao , Ki Hyun Kim (2016), " Iridoid and phenylethanoid glycosides from the aerial part of Barleria lupulina", Revista Brasileira de Farmacognosia 26: 281– 284 29 Takuya Katsube, Naoto Imawaka, Yasuhiro Kawano, Yoshimitsu Yamazaki, Kuninori Shiwaku, Yosuke Yamane (2006), "Antioxidant flavonol glycosides in mulberry (Morus alba L.) leaves isolated based on LDL antioxidant activity", Food chemistry, Vol 97, pp 25-31 40 30 Trinh Thi Thuy, Dao Duc Thien, Tran Quang Hung (2016),“In vivo anticancer activity of maesopsin 4-O-β-glucoside isolated from leaves of Artocarpus tonkinensis A Chev Ex Gagnep”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 9, 4, pp 351-356 31 Wang S, Liu X-M, Zhang J, Zhang Y-Q (2014), "An Efficient Preparation of Mulberroside A from the Branch Bark of Mulberry and Its Effect on the Inhibition of Tyrosinase Activity", Plos one, Vol (10) 32 Wu ZJ, Ouyang MA, Wang SB (2008), “Two new phenolic water- soluble constituents from branch bark of Davidia involucrate”, Natural Product Research, Vol 22, pp 483-488 33 Xuewei Wu, Ming Li, Xiaoning Wang, Tao Shen, Shuqi Wang & Dongmei Ren (2018), “Two new 2-arylbenzofurnan derivatives from the leaves of Morus alba L”, Natural Product Research, pp 1478-6419 34 Xiao-Ke Zheng, Yan-Gang Cao, Ying-Ying Ke, Yan-Li Zhang, Fang Li, Jian-Hong Gong, Xuan Zhao, Hai-Xue Kuang, Wei-Sheng Fenga (2017), "Phenolic constituents from the root bark of Morus alba L and their cardioprotective activity in vitro", Phytochemistry, Vol 135, pp 128-134 35 Yan Yang, Ting Zhang, Lei Xiao, Lixin Yang, Ruoyun Chen (2010), " Two new chalcones from leaves of Morus alba L.", Fitoterapia, Vol 81, pp 614 -616 36 Yoshiaki Miyake and Masanori Hiramitsu (2011), "Isolation and extraction of antimicrobial substances against oral bacteria from lemon peel", Journal of Food Science and Technology 48(5): 635–639 41 37 Zhang Y, Deng S, Qu L (2013), “Rare syringyl acylated flavonol glycosides from the aerial parts of Leonurus japonicus Houtt”, Molecules, pp 2967-2977 38 Yin T, Liu H, Wang B (2008), “Chemical constituents from Spatholobus sinensis”, Yao Xue Xue Bao, (1): 67-70 39 Zhenzhong Yang, Yufeng Zhang, Lijuan Sun, Yi Wang, Xiumei Gao, Yiyu Cheng (2012), "An ultrafiltration high-performance liquid chromatography coupled with diode array detector and mass spectrometry approach for screening and characterising tyrosinase inhibitors from mulberry leaves", Analytica Chimica Acta, Vol 719, pp 87 -95 40 Zhi-Gang Yang, Keiichi Matsuzaki, Satoshi Takamatsu and Susumu Kitanaka (2011), "Inhibitory Effects of Constituents from Morus alba var multicaulis on Differentiation of 3T3-L1 Cells and Nitric Oxide Production in RAW264.7 Cells", Molecules, 16(10), pp 8305-8318 41 Zong-Ping.Zheng, Hui -Yuan Tan, Mingfu Wang (2012), "Tyrosinase inhibition constituents from the roots of Morus australis", Fitoterpia, Vol 83, pp 979-1152 Trang web: 42 Human metabolome database /Showing metabocard for Eriodictyol http://www.hmdb.ca/metabolites/HMDB0005810 42 PHỤ LỤC 43 ... tài: ? ?Nghiên cứu chiết xuất, phân l? ??p số thành phần hóa học dâu tằm Morus alba L? ?? với mục tiêu sau: Chiết xuất, phân l? ??p số hợp chất từ dâu tằm Xác định cấu trúc hoá học hợp chất vừa phân l? ??p CHƯƠNG... TRỌNG MINH NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, PHÂN L? ??P MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ L? ? CÂY DÂU TẰM ( Morus alba L. ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa QH.2013.Y Người hướng dẫn: TS VŨ ĐỨC L? ??I PSG TS... học hợp chất linoleiyl diglycosid ( 1), morusflavonyl palmitate ( 2) morusflavone ( 3) Một guibourtinidol glycosid, (2R, 3S) - guibourtinidol-3-α-dapiofuranosyl-(1→ 6)- O-β-d-glucopyranosid, ba hợp chất