Phát hiện người lành mang gen bệnh và chẩn đoán trước làm tổ bệnh hemophilia a bằng kỹ thuật microsatellite DNA

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ MINH PHƯỢNG PHÁT HIỆN NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ MINH PHƯỢNG PHÁT HIỆN NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA Chun ngành: Hóa sinh Mã sớ: 62720112 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Tạ Thành Văn PGS.TS Trần Vân Khánh HÀ NỘI - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi Bùi Thị Minh Phượng, nghiên cứu sinh khóa 34, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa sinh, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn Thầy GS.TS Tạ Thành Văn Cô PGS.TS Trần Vân Khánh Công trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết này./ Hà Nội, ngày tháng năm 2018 NGƯỜI VIẾT CAM ĐOAN Bùi Thị Minh Phượng DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BMD Becker Muscular Dystrophy BVSKTE Bảo vệ sức khoẻ trẻ em CK Creatine Kinase DMD Duchenne Muscular Dystrophy DNA Deoxyribo Nucleic Acid FISH Fluorescent In Situ Hybridization ICSI Intracytoplasmic Sperm Injection IVF In Vitro Fertilization KB Kilo Base MLPA Multiplex Ligation Probe Amplification NST X Nhiễm sắc thể X NST Y Nhiễm sắc thể Y PCR Polymerase Chain Reaction PGD Preimplantation Genetic Diagnosis RNA Ribo Nucleic Acid RT – RCR Reverse Transcription PCR STR Short Tandem Repeat MỤC LỤC CÁC DANH MỤC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với phát triển kinh tế xã hội, tỷ lệ vô sinh ngày gia tăng nỗi lo cho nhiều cặp vợ chồng Ra đời vào năm 1970 kỷ trước, nói phương pháp thụ tinh ống nghiệm “in vitro fertilization - IVF” trở thành cứu cánh cho nhiều cặp vợ chồng vô sinh mong ḿn có đứa [1] Vào năm 2010 bác sỹ Robert G.Edwards vinh dự trao giải thưởng Nobel sinh lý Y khoa cho cống hiến to lớn hiệu mà phương pháp mang lại [2] Phương pháp mang lại niềm vui, niềm hạnh phúc cho bao cặp vợ chồng khắp nơi giới, nhiên cặp vợ chồng may mắn sinh đứa mong muốn phương pháp Tỷ lệ thành công phương pháp đạt 35% tùy theo quốc gia [3] Có nhiều yếu tớ ảnh hưởng đến thành công phương pháp như: tuổi bố mẹ, tình trạng sức khỏe, tinh thần tâm lý, chất lượng tinh trùng trứng… đặc biệt chất lượng phơi sau thụ tinh Các phơi bất thường nhiễm sắc thể (NST) thường hay NST giới tính làm giảm khả mang thai sau cấy phơi vào buồng tử cung, gây sảy thai sinh đứa không khỏe mạnh [4], [5], [6], [7] Để làm giảm tỷ lệ sinh đứa không khỏe mạnh làm tăng tỷ lệ thành công phương pháp thụ tinh ống nghiệm, thời gian gần nhà khoa học áp dụng quy trình sàng lọc phơi “Pre-Implantion Genetic Diagnosis, PGD” gọi “chẩn đốn di truyền trước làm tổ” nhằm có phơi tớt cho q trình chuyển phơi [8],[9],[10] Cùng với phát triển kỹ thuật chọc hút phôi ứng dụng tiến sinh học phân tử vào chẩn đốn, có nhiều bệnh lý di truyền hầu hết bất thường NST, đột biến gen quan trọng gây ung thư sàng lọc kỹ thuật PGD [11], [12],[13],[14-15] Trong sớ đó, bệnh hemophilia A (bệnh ưa chảy máu) loại bệnh có tỷ lệ mắc cao, bệnh cảnh lâm sàng nặng nề thường gây sang chấn lớn tâm lý cho gia đình cho người bệnh Vì vấn đề đặt phải giúp cho cặp vợ chồng mang gen bệnh hemophilia A sinh đứa hoàn toàn khỏe mạnh Hemophilia A bệnh di truyền thiếu hụt bất thường chức yếu tố đông máu VIII [16],[17] Hemophilia A bệnh di truyền alen lặn NST X khơng có alen NST Y, nên người mẹ mang gen bệnh di truyền cho trai biểu bệnh lâm sàng [18] Theo thống kê tổ chức hemophilia A giới, có khoảng 250.000 bệnh nhân mắc bệnh hemophilia A có khoảng 50.000 điều trị đặc hiệu [19] Tại Việt Nam, ước tính có khoảng 6000 người bị bệnh hemophilia A khoảng 30.000 người mang gen bệnh hemophilia A [20] Biểu lâm sàng chủ yếu chảy máu nơi thể, chảy máu kéo dài: chảy máu khớp, chảy máu cơ, chảy máu não, chảy máu cổ ngực… Mức độ biểu lâm sàng liên quan trực tiếp nồng độ yếu tố VIII huyết tương 10 Việc tầm soát trước sinh bệnh hemophilia A việc làm quan trọng giúp cho việc sinh đứa trẻ hoàn toàn khỏe mạnh Việc xác định đột biến gen gây bệnh, sàng lọc người lành mang gen bệnh chẩn đoán trước sinh bệnh hemophilia A nghiên cứu nhiều Việt Nam.Việc quản lý bệnh nhân người mang gen bệnh lý tiền đề vững để triển khai thành cơng quy trình chẩn đốn trước làm tổ sàng lọc phôi Phương pháp giúp giảm biến chứng di chứng cho người mẹ mang thai bệnh lý, giảm chấm dứt thai kỳ phát bệnh thai nhi chẩn đoán tiền sản, mang lại niềm vui hạnh phúc cho cặp vợ chồng mang gen bệnh, đồng thời giảm tỷ lệ mắc bệnh cộng đồng Cùng với phát triển sinh học phân tử phát đột biến gây bệnh hemophilia A, kỹ thuật microsatellite DNA kỹ thuật sử dụng primer gắn huỳnh quang để khuếch đại vùng trình tự lặp lại ngắn (short tandem repeat-STR) phân tích kích thước chúng thơng qua điện di mao quản máy giải trình tự gen để xác định alen đột biến Kỹ thuật có nhiều ưu điểm dễ dàng phát alen đột biến mà không cần xác định đột biến trực tiếp, giảm chi phí cho gia đình bệnh nhân Hiện kỹ thuật mẻ Việt Nam ứng dụng chẩn đoán bệnh lý di truyền Xuất phát từ thực tế đề tài: “Phát người lành mang gen bệnh chẩn đoán trước làm tổ bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA” đưa vào nghiên cứu với mục tiêu: Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA Chẩn đoán trước làm tổ cho người mẹ mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 24 H S Chen YC, Cheng SN,et.al (2010) Genetic analysis of haemophilia A in Taiwan Haemophilia, 16, 538–544 25 N h l m h a 60-benh-nhan-mau-kho-dong-chua-duoc-dieu-trị., 26 T A Franchini.M, Mannucci.P (2007) The management of hemophilia in elderly patients Clinical Interventions in Aging, (3), 361-368 27 F N Gigarel N, Burlet P,et.al (2004) Single cell co amplification of polymorphic markers for the indirect preimplantation genetic diagnosis of hemophilia A, X-linked adrenoleukodystrophy, X-linked hydrocephalus and incontinentia pigmenti loci on Xq28 Hum Genet., 114, 298–305 28 B R H Hoffman E.P., Kunkel LM (1987) Dystrophin: The protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus Cell, 51, 914-928 29 H.-H B Jochen Graw, Johannes Oldenburg,et al (2005) Heamophilia A: from mutation analysis to new therapies Nature reviews Genetics, 6, 488501 30 W J Shima M, Yoshioka A,et.al (1989) An arginine to cysteine amino acid substitution at a critical thrombin cleavage site in a dysfunctional factor VIII molecule Blood, 74, 1612-1617 31 L h R Jaquemin M, Benhida A, et al (2000) A novel cause of mild/moderate hemophilia A:mutation scattered in the factor VIII C1 domain reduce factor VIII binding to von Willebrand factor Blood, 96, 958-965 32 G F Bagnall RD, Green PM (2006) Int22h-related inversions causing hemophilia A: a novel insight into their origin and a new more discriminant PCR test for their detection J Thromb Haemost, 4, 591–598 33 M P Franchini M (2009) Multiple gene interaction and modulation of hemostatic balance Clin Chem Lab Med, 47 (2), 1455–1460 34 D S Shrestha S, Zuhua L,et.al (2016) Evaluation of factor VIII polymorphic short tandem repeat markers in linkage analysis for carrier diagnosis of hemophilia A BIOMEDICAL REPORTS, 5, 228 -232 35 W F o Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia.Carriers and women with hemophilia WFH 50 years of advancing treatment for all, 36 N T M Nguyễn Anh Trí (2015) Người mang gen Hemophillia Hội rối loạn đông máu Việt nam, 1-9 37 S J L e al (2005) Carriers of Hemophilia What you need to know J Natl Cancer Inst Monogr, 87-90 38 S R Oldenburg.J , Grimm.T,et.al (1993) Direct and Indirect Estimation of the Sex Ratio of Mutation Frequencies in Hemophilia A Am J Hum Genet, 53, 1229-1238 39 T H T Lưu Vũ Dũng, Tạ Thành Văn, Trần Vân Khánh CS (2015) Phát đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia A Tạp chí nghiên cứu y học, 91 (5), 13-18 40 C P R Liliana Carmen Rossetti, Irene Beatriz Larripa, et al (2005) Genotyping the Hemophilia Inversion Hotspot by Use of Inverse PCR Clinical Chemistry, 51, 1154–1158 41 N W Richard D Bagnall, et al (2019) Recurrent inversion breaking intron of the factorVIII gene is a frequent cause of severe hemophilia A Blood, 99 (1), 168 - 174 42 C J M E Jan P Schouten, Raymon Waaijer, et al (2002) Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation-dependent probe amplification Nucleic Acids Res, 30 (12), e57 43 E R Steptoe PC (1978) Birth after the reimplantation of a human embryo Lancet, (8085), 366 44 V S Hamilton BE (2006) Fertility and abortion rates in the United States, 1960-2002 Int J Androl, 29, 34-45, 29, 34-45 45 R S a R V.C (2005) Timing effects on first marriage: twentieth-century experience in England and Wales and the USA Popul Stud (Camb),, 59, 135146 46 N ZP (2000) Sperm centriole disfunction and sperm immotility Mol Cell Endocrinol,, 166, 59-62 47 P K Ziebe S, Lindenberg S (1997) Embryo morphology or cleavage stage: how to select the best embryos for transfer after in-vitro fertilization Hum Reprod, 12 (7), 1545–1549 48 C D S Jones G.M, Song B,et.al (2008) Novel strategy with potential to identify developmentally competent IVF blastocysts Human Reproduction, 23, 1748–1759 49 H J Callahan TL, Ettner SL,et.al (1994) The economic impact of multiple-gestation pregnancies and the contribution of assisted-reproduction techniques to their incidence N Engl J Med, 331, 244-249 50 S C Wenstrom KD, Hammitt DG, Van Voorhis BJ (1993) Increased risk of monozygotic twinning associated with assisted reproduction Fertil Steril, 60, 51 W D V van der Schoot, J.C.F.M Dreesen, et al (2019) Preimplantation genetic testing for more than one genetic condition: clinical and ethical considerations and dilemmas Human Reproduction,, 34 (6), 1146-1154 52 P S Braude P, Flinte F, Ogilvie CM (2002) Preimplantation genetic diagnosis NATURE REVIEWS, 3, 941-955 53 J Baruch S, Kaufman DJ,et.al (2008) Preimplantation genetic screening: a survey of in vitro fertilization clinics Genetics IN Medicine, 10 (9), 685– 690 54 H J C Harton G.L, Coonen E,et.al (2010) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Human Reproduction,, (0), 1-8 55 K E Handyside AH, Hardy K, Winston RM (1990) Pregnancies from biopsied human preimplantation embryos sexed by Y-specific DNA amplification nature, 344, 768–770 56 L J Handyside AH, Tarin JJ,et.al (1992) Birth of a normal girl after in vitro fertilization and preimplantation diagnostic testing for cystic fibrosis N Engl J Med, 327, 905–509 57 H A Griffin D K, Harper JC, et al (1994) Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization J Assist Reprod Genet, 11, 132–143 58 H J C D JD (1996) Detection of chromosomal abnormalities in human preimplantation embryos using FISH J Assist Reprod Genet, 13, 137–139 59 V O Rechitsky S, et al (2002) Preimplantation genetic diagnosis for cancer predisposition Reprod Biomed Online, 5, 148-155 60 V A Van de Velde, Sermon K,et al (2000) Embryo implantation after biopsy of one or two cells from cleavage-stage embryos with a view to preimplantation genetic diagnosis Prenat Diag,, 20, 1030–1037 61 V S A De Vos A (2001) Aspects of biopsy procedures prior to preimplantation genetic diagnosis Prenat Diagn, 21, 767–780 62 C S Chen HS, Ma GC, et al (2017) Preimplantation genetic diagnosis and screening: Current status and future challenges Journal of the Formosan Medical Association, 1-7 63 W L Mertzanidou A, Cheng J, et al (2013) Microarray analysis reveals abnormal chromosomal complements in over 70% of 14 normally developing human embryos Human Reproduction, 28, 256–264 64 A S Fragouli E, Daphnis D.D, et al (2011) Cytogenetic analysis of human blastocysts with the use of FISH, CGH and aCGH: scientific data and technical evaluation Human Reproduction, 26, 480–490 65 B S Vassena R, Gonzalez-Roca E, et al (2011) Waves of early transcriptional activation and pluripotency program initiation during human preimplantation development Development, 38, 3699–3709 66 L M Fragouli E, Ross R , et al (2008) Comprehensive molecular cytogenetic analysis of the human blastocyst stage Human Reproduction, 23, 2596–2608 67 S M Veiga A, Benkhalifa M,et al (1997) Laser blastocyst biopsy for preimplantation diagnosis in the human Zygote, 5, 351–354 68 Sermon (2002) Current concepts in preimplantation genetic diagnosis (PGD): a molecular biologist's view Hum Reprod, 8, 1–10 69 S J Wells D (1998) Strategies for preimplantation genetic diagnosis of single gene disorders by DNA amplification Prenat Diagn, 18, 1389–1401 70 B A Fiorentino F, Nuccitelli A (2006) Strategies and clinical outcome of 250 cycles of Preimplantation Genetic Diagnosis for single gene disorders Hum Reprod, 21 (3), 670–684 71 M K I Woodson A.H, Lin H, et.al (2014) Breast Cancer, BRCA Mutations, and Attitudes Regarding Pregnancy and Preimplantation Genetic Diagnosis TheOncologist, 19, 797–804 72 F F Mullis K, Scharf S,et.al (1986) Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 51 (1), 263–273 73 J L Dreesen JC, Bras M, et.al (2000) Multiplex PCR of polymorphic markers flanking the CFTR gene, a general approach for preimplantation genetic diagnosis of cystic fibrosis Mol Hum Reprod, (5), 391–396 74 V M Ray PF, Munnich A (2001) Single cell multiplex PCR amplification of five dystrophin gene exons combined with gender determination Mol Hum Reprod, , (5), 489–494 75 H A Griffin DK, Harper JC, et al (1994) Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization J Assist Reprod Genet, 11, 132–143 76 H J Harton GL, Coonen E, et al (2001) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Hum Reprod, 26 (1), 25–32 77 W I Malmgren.H, Johansson.S,et.al (2006) PGD for dystrophin gene deletions using fluorescence in situ hybridization Molecular Human Reproduction, 12 (5), 353-356 78 E T Colls P, Cekleniak N, et al (2007) Increased efficiency of preimplantation genetic diagnosis for infertility using ‘‘no result rescue" Fertility and Sterility, 88, 53–61 79 Q P Findlay I, Hall J & Rutherford A (1996) Fluorescent PCR: a new technique for PGD of sex and single-gene defects J Assist Reprod Genet, 13, 96–103 80 D V A Sermon K, Velde HV,et al (1998) Fluorescent PCR and automated fragment analysis for the clinical application of preimplantation genetic diagnosis of myotonic dystrophy (Steinert's disease) Mol Hum Reprod 4,791–796 81 M Y Miah G , Rafii,et.al (2013) A Review of Microsatellite Markers and Their Applications in Rice Breeding Programs to Improve Blast Disease Resistance .Int J Mol Sci., 14, 22499-22528 82 A P Raquel M Fernández, et.al (2015) Experience of Preimplantation Genetic Diagnosis for Hemophilia at the University Hospital Virgen Del Rocío in Spain: Technical and Clinical Overview BioMed Research International, 1-9 83 P L A T Trần vân Khánh, Nguyễn Q Hồi,et.al (2016) Chẩn đốn tiền làm tổ bệnh hemophillia A kỹ thuật microssatelite Tạp chí nghiên cứu y học, 100 (2), 10-17 84 D H Hussey ND, Froiland DA,et.al (1999) Analysis of five Duchenne muscular dystrophy exons and gender determination using conventional duplex polymerase chain reaction on single cells Mol Hum Reprod, (11), 1089-1094 85 H A M Laurie.AD, AHarraw.J.M, et.al (2010) Preimplantation genetic diagnosis for hemophilia A using indirect linkage analysis and direct genotyping approaches Journal of Thrombosis and Haemostasis, 8, 783–789 86 H A M Laurie A.D, Harraway, et al (2010) Preimplantation genetic diagnosis for hemophilia A using indirect linkage analysis and direct genotyping approaches J Thromb Haemost 8,783 -789 87 M P S a P M G J R Harrawy (2006) A highly informative, multiplexed assay for the indirect detection of hemophilia A using five-linked microsatellites Journal of Thrombosis and Haemostasis, 4, 587 - 590 88 M.-A E Machado FB (2009) High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect haemophilia A carrier detection Haemophilia, 15 (1), 297-308 89 N S Saha A, mani K.R,et.al (2011) A set of five microsatellite markers linked to F8 gene can detect haemophilia A carriers across India Haemophilia, 17, e928 - e935 90 D S Shrestha.S, Li.Z (2016) Evaluation of factor VIII polymorphic short tandem repea markers in linkage analysis for carrier diagnosis of hemophilia A BIOMEDICAL REPORTS, 5, 228 - 232 91 R Y Slaoui M, Ferrandis M ,et.al (2007) Factor VIII (FVIII) gene mutations in 120 patients with hemophilia A: detection of 26 novel mutations and correlation with FVIII inhibitor development Thrombosis and Haemostasis,, 5, 1469–1476 92 L V Dũng (2014) Nghiên cứu xác định đột biến gen F8 gây bệnh hemophillia A Luận án tiến sĩ y học, 93 L Y L Ding.L.Q, _Dai J,et al (2012) Characterisation and validation of a novel panel of the six short tandem repeats for genetic counselling in Chinese haemophilia A pedigrees Haemophilia, 1-5 94 T H T Bùi Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Hà,et al (2014) Phát người lành mang gen bệnh chẩn đoán trước sinh bệnh Hemophilia A Tạp chí nghiên cứu y học, 88 (3), 1-9 95 N T M Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Thị Nữ, et al (2012) Nghiên cứu phát hemophilia dựa vào phả hệ gia đình bệnh nhân chẩn đốn viện Huyết học – Truyền máu TW Y học Việt Nam, 8, 566 - 571 96 Goodeve A.C (1998) Advances in carrier detection in haemophilia Haemophilia, 4(4), 358-364 97 Shetty S, Ghosh K, Bhide A cộng (2001) Carrier detection and prenatal ldiagnosis in families with hemophilia Natl Med J India, 14,81–83 98 Machado FB Medina-Acosta E (2009) High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect haemophilia A carrier detection Haemophilia, 15(11), 297308 99 W C E V massaro J.D, Muniz Y.C.n, et.al (2011) Analysis of five polymorphic DNA markers for indirect genetic diagnosis of haemophilia A in the Brazilian population Haemophilia, 17, 936 - 943 100 Bộ trưởng Bộ Y tế (2016) Hướng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh Hemophilia A Quyết định số 4984/QD-BYT, Hà nội, ngày 17 tháng 19 năm 2016 101 Josephson N (2013) The hemophilias and their clinical management Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 261-267 102 World Federation of Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia.WFH 50 years of advancing treatment for all 103 Gill Swallow ( 2013) Guideline for the Obstetric Management of Carriers of Haemophilia A and B, NHS Nottingham University Hospitals Cookie Disclaime 104 Trần Thị Liên Trần Thị Thanh Hương (2014 ) Di truyền đơn gen, Di truyền y học Nhà xuất giáo dục, 146-149 105 Leuer M, Oldenburg J Lavergne JM (2001) Somatic mosaicism in hemophilia A: a fairly common event Am J Hum Genet, Epub 2001 Jun 14, 69(61), 75-87 106 S Lavery (2008) Preimplantation genetic diagnosis of haemophilia British Journal of Haematology, 144, 303 - 307 107 S J Kulkarni R, Lusher J, et al (2009) Haemophilia Treatment Center Network Investigators; Sites of initial bleeding episodes, mode of delivery and age of diagnosis in babies with haemophilia diagnosed before the age of years a report from The Centers for Disease, PHỤ LỤC Bảng mã acid amin Viết tắt Viết tắt Viết tắt Viết tắt Tên axit Codon (3 chữ (1 chữ Codon (3 chữ (1 chữ amin cái) cái) cái) cái) TTT Phenylalanine Phe F ATT Isoleucine Ile I TTC Phenylalanine Phe F ATC Isoleucine Ile I TTA Leucine Leu L ATA Isoleucine Ile I TTG Leucine Leu L ATG Methionine Met M TCT Serine Ser S ACT Threonine Thr T TCC Serine Ser S ACC Threonine Thr T TCA Serine Ser S ACA Threonine Thr T TCG Serine Ser S ACG Threonine Thr T TAT Tyrosine Tyr Y AAT Asparagine Asn N TAC Tyrosine Tyr Y AAC Asparagine Asn N TAA Termination Ter X AAA Lysine Lys K TAG Termination Ter X AAG Lysine Lys K TGT Cystein Cys C AGT Serine Ser S TGC Cystein Cys C AGC Serine Ser S TGA Termination Ter X AGA Arginine Arg R TGG Tryptophan Trp W AGG Arginine Arg R CTT Leucine Leu L GTT Valine Val V CTC Leucine Leu L GTC Valine Val V CTA Leucine Leu L GTA Valine Val V CTG Leucine leu L GTG Valine Val V CCT Proline Pro P GCT Alanine Ala A CCC Proline Pro P GCC Alanine Ala A CCA Proline Pro P GCA Alanine Ala A CCG Proline Pro P GCG Alanine Ala A CAT Histidine His H GAT Aspartate Asp D CAC Histidine His H GAC Aspartate Asp D CAA Glutamine Gln Q GAA Glutamate Glu E CAG Glutamine Gln Q GAG Glutamate Glu E CGT Arginine Arg R GGT Glycine Gly G CGC Arginine Arg R GGC Glycine Gly G CGA Arginine Arg R GGA Glycine Gly G CGG Arginine Arg R GGG Glycine Gly G Tên axit amin Bảng tổng kết sử dụng marker khuếch đại cho 112 thành viên ( bệnh nhân + người nhà bệnh nhân) TT GĐ H3 H4 H28 H9 H13 H14 H15 H16 H17 10 H19 12 H22 Mã số Họ tên H3.0 H3.1 H4.0 H4.1 H28.0 H281 H28.2 H28.3 H9.0 H9.1 H9.2 H13.0 H13.1 H13.2 H14.0 H14.1 Nguyễn Tiến Đ mẹ: Nguyễn Thị H Nguyễn Gia B mẹ: Hoàng Thị Ng Nguyễn Duy A mẹ: Nguyễn Thị Thu H Nguyễn Thị Bích Hường (?) Em gái: nguyễn Hà M Trần Minh T Phạm Thị Thanh V Trần Thị Thanh Nh Nguyễn Đức Tr Mẹ Nguyễn Đức Tr ối nuôi cấy H13.1 H Lê Thị Ch H15.0 H15.1 H16.0 H16.1 H16.2 H16.3 H17.0 H17.1 H19.0 H19.1 H22.0 H22.1 Nguyễn Khánh D mẹ: Bùi Khánh L Vương Đức M Phan thị H Dì: Phan Thị Ph bác: Phan Thị Th Nguyễn Văn Đ Vũ Thị L C Mẹ Nguyễn Thị MinhV Nghuễn Văn A Mẹ Lê Thị Thanh H Đột biến 17 8.7 10,7 15.6 48.1 20.8 c.2777-78, p.907ins 9,8 12,9 34,9 34,4 45,8 12,9 86.5 6545G>A 29.7 c.4996-4997insA, 20.7 41.1 37.8 23.8 8.4 16.7 13.4 58.2 Kich thước Marker (10) FXS1108 (11) DXS9897 (14) F8int22 (15) DXS9901 167 167/178 179 179 167 167/178 167/178 180 178 178/180 178/180 178 168/178 168 167 167/178 256 256 252 252/264 256 256/264 256 264 255 248/255 248/255 257 253/257 253 252 256 213 213 212 214 215 215 215 214 214 214 212/214 216 214/216 214 214 215 202 201 214 214/216 216 216 216 202 202 202/212 194/202 202 202/204 204 208 194/208 167 167/178 167 167 167/178 167 178 178 167 167/178 167 167/178 248 248/260 252 248/252 252/254 256 260 256/260 244 244 252 256 215 215 213 213/217 213/215 213/217 217 215/217 215 215/217 212 215 196 196 195 195/198 212 195/212 202 199/202 202 198/202 202 212 19 H36 20 H37 21 H42 22 H44 23 H46 24 H47 25 H48 26 H49 H50 H36.0 H36.1 H36.2 H37.0 H37.1 H37.2 H37.3 H37.4 H37.5 H42.0 H42.1 H42.2 H44.0 H44.1 H44.2 H46.0 H46.1 H47.0 H47.1 H48.0 H48.3 H48.4 H49.0 H49.1 H49.2 H49.3 H49.4 H50.0 H50.1 H50.2 Tạ Công M mẹ: Nguyễn Thị Ng em gái: Tạ Thị L Vũ Hải Đ mẹ: Nguyễn Thị Thanh Nh Bác Nguyễn T S Bác Nguyễn Thị Y Bác Nguyễn Thanh Ng Chị họ Bùi Diệu H Nguyễn Kiên Q Mẹ Nguyễn Thị Th Bác Nguyễn Thị Th Phạm Hoàng N Mẹ Phạm Hoàng N chị gái: Phạm Lan Phương Trần Sỹ Ph Mẹ Phạm Thị T Nguyễn Đức A Mẹ Phạm Thị L Nguyễn Tuấn M Lưu Thị L(dì BN) Tạ Thị H (bà ngoại BN) Nguyễn Mạnh D Mẹ Nguyễn mạnh D dì: Nguyễn Thị H chị họ: Nguyễn Khánh L dì: Hồng Thị H Lê Trần Tr Mẹ Lê Trần Tr chị họ: Lê Hồng L 9.8 174.6 184.5 5092 T>C 34.8 23.8 30.7 31 21.9 eexon 8G>A 23.8 34.9 9.8 39.5 40.6 21.9 30.3 17.8 57.5 15.9 27.8 30.8 12.9 25.7 34.9 8.6 35.5 4026G>T 24.8 29 166 166/177 166/177 177 177 177 177 177 166 166/177 177 166 166/177 166/177 177 177 177 166/177 166 166 166/177 175 175/177 175/177 175/177 175/177 167 167/178 178 255 251/255 251/255 251 251/255 251/259 247/259 251/255 251/255 252 251 251 251 251/255 251/255 251 251/255 256 256/260 248 248/260 248/256 248 248/259 248 255/259 255/259 256 252/256 252/256 212 214 214 214 214 214 214 214 212 212/214 212/214 214 214/216 214/216 212 212 214 212/214 214 214 214 214 214/216 212/214 214/216 214/216 213 213/215 215 202 202/206 202/206 198 198/202 198/202 198/202 198/215 198/202 198 198/204 198/202 194 194/202 194/202 194 194/202 202 202 208 204/208 208/212 194 194/202 204 194/202 194/202 204 195/204 195/204 H60.0 H60.1 H60.2 H60.3 34 H60 H60.4 H60.5 H60.6 H60.7 35 H61 H61.0 H61.1 Đỗ bá Th1958 Đỗ Thị H 1979 Đỗ Thị H 1978 Đỗ Thị H 1983 Nguyễn Thị Hồng Ng (con H60.1) Nguyễn Thị Minh A 1998 Đỗ Thị Huế 1986 Lê Hương Gi (con H60.3)23,9 Nguyễn Văn H Nguyễn Thị Th 75.5 23.9 34.7 45.9 176 166/176 176 176 252 252 252 252/260 214 212/214 214 214 202 194/202 202/206 202/206 23,9 23.6 14.8 176 176 176 244/252 244/252 252 214 214 214 202 202 202 176 252/260 214 202 23.9 166 255 212 202 56.7 166/177 248/255 212/214 202 ... người lành mang gen bệnh chẩn đoán trước làm tổ bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA đ a vào nghiên cứu với mục tiêu: Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite. .. microsatellite DNA Chẩn đoán trước làm tổ cho người mẹ mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 11 12 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG BỆNH HEMOPHILIA A 1.1.1 Định ngh a Bệnh hemophilia. .. mang gen bệnh việc sinh đ a trẻ bị bệnh đ a mang gen bệnh, đ a mang gen bệnh lại có khả sinh đ a bị bệnh Vì vậy, không quản lý hay phát người phụ nữ mang gen bệnh hệ gia tăng tỷ lệ đ a mang bệnh