XÁC ĐỊNH NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH HEMOPHILLIA a BẰNG kỹ THUẬT MICROSATELLITE DNA

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ HIẾN XÁC ĐỊNH NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH HEMOPHILLIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ HIẾN XÁC ĐỊNH NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH HEMOPHILLIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA Chuyên ngành: Hóa sinh Mã số: 60720106 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Vân Khánh HÀ NỘI – 2016 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm bệnh Hemophilia A .3 1.1.1 Những đặc điểm chung 1.1.2 Chẩn đoán bệnh Hemophillia A .5 1.1.3 Điều trị bệnh Hemophillia A 1.1.4 Cơ chế phân tử bệnh Hemophillia A 10 1.2 Người lành mang gen bệnh Hemophillia A 21 1.2.1 Đặc điểm chung 21 1.2.2 Đặc điểm chảy máu người lành mang gen bệnh Hemophillia A22 1.2.3 Quản lý điều trị dự phòng cho người lành mang gen bệnh Hemophillia A 24 1.2.4 Vai trò việc xác định người lành mang gen bệnh 24 1.3 Các phương pháp phát người lành mang gen bệnh HA 25 1.3.1 Dựa vào hoạt tính yếu tố VIII 25 1.3.2 Dựa vào phân tích phả hệ .25 1.3.3 Sử dụng kỹ thuật sinh học phân tử .26 1.4 Tình hình nghiên cứu người lành mang gen bệnh HA Việt Nam 37 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tượng nghiên cứu 40 2.2 Dụng cụ, trang thiết bị hóa chất sử dụng nghiên cứu 40 2.2.1 Trang thiết bị nghiên cứu .40 2.2.2 Dụng cụ nghiên cứu 40 2.2.3 Hóa chất nghiên cứu 41 2.3 Phương pháp nghiên cứu .42 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu: Mô tả cắt ngang 42 2.3.2 Nội dung nghiên cứu 43 2.3.3 Địa điểm nghiên cứu 43 2.3.4 Quy trình kỹ thuật sử dụng nghiên cứu .44 2.4 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 53 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 54 3.1 Xây dựng quy trình xác định người lành mang gen bệnh hemophillia A kỹ thuật Microsatellite DNA 54 3.2 Xác định người lành mang gen bệnh hemophillia A kỹ thuật Microsatellite DNA thành viên gia đình người bệnh 63 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 65 DỰ KIẾN KẾT LUẬN 66 DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 1.5 Hình 1.6 Hình 1.7 Hình 1.8 Hình 1.9 Hình 2.1 Bảng 2.1 Bảng 2.2 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Các hình ảnh biểu bệnh Hemophillia A Sơ đồ đông máu theo đường nội ngoại sinh 12 Cấu trúc gen protein yếu tố VIII 13 Kiểu gen kiểu hình bố mẹ hệ 18 Phả hệ di truyền bệnh hemophilia A thành viên Hoàng gia Anh 25 Hình ảnh giải trình tự exon 14 gen F8 DNA người mẹ DNA chị gái bệnh nhân bị đột biến del2605C Mũi tên thẳng đứng vị trí đột biến, chữ số mũi tên vị trí nucleotid acid amin thay đổi .26 Cơ chắt gen F8 thành đoạn (ex) .27 Cơ Chen.CITE A Mang gen bệnh Bác gái chị họ mang p.Leu2142stop c 5 G > A Mang gen bệnh gen bệnh Em gái mang gen bệnh p.Arg2182His c insA; Không mang gen Không mang gen bệnh p.674Y Stop bệnh S T T Exo n D n g đ ộ t b i ế n c.6425T>A p.Leu2142Stop 2 c.6545G>A p.Arg2182His 3 c.2196insA; p.674 Y Stop M ẹ b ệ n h n h â n Thành viên gia đình bệnh nhân Mang gen bện h Bác gái chị họ mang gen bệnh Mang gen bện h Em gái mang gen bệnh Không mang gen bệnh Không mang gen bệnh 3.2 Xác định người lành mang gen bệnh hemophillia A kỹ thuật Microsatellite DNA thành viên gia đình người bệnh Tương tự trên, sử dụng kỹ thuật Microsatellite-DNA để xác định tình trạng mang gen gia đình HA lại, kết cho bảng tổng hợp: Bảng Kết phát người lành mang gen yếu tố VIII đột biến STTGia đình STT gia đình Mẹ bệnh nhân Mẹ bệnh nhân Thành viên nữ gia đình bệnh nhân Thành viên nữ gia đình bệnh nhân 64 10 Bảng Kết phát người lành mang gen yếu tố VIII đột biến CHƯƠNG BÀN LUẬN 65 - Bàn luận theo mục tiêu nghiên cứu dựa theo kết thu được, phân tích so sánh với nghiên cứu tác giả khác nước nước 66 DỰ KIẾN KẾT LUẬN DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ 67 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO Gill Swallow ( 2013) Guideline for the Obstetric Management of Carriers of Haemophilia A and B,NHS Nottingham University Hospitals Cookie Disclaime Trần Thị Liên Trần Thị Thanh Hương (2014 ) Di truyền đơn gen,Di truyền y học, Nhà xuất giáo dục, 146-149, Nguyễn Anh Trí Mai N T (2009) Quản lí, chẩn đốn điều trị hemophilia Việt Nam: Quá khứ - Hiện – Tương lai Y học Việt Nam, , 3-12, Nguyễn Thị Mai, Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Thị Nữ cộng (2012 ) Nghiên cứu phát Hemophilia dựa vào phả hệ gia đình bệnh nhân chẩn đoán viện Huyết học – Truyền máu Trung ương Báo cáo Hội nghị nghiên cứu sinh Trường đại học Y Hà Nội lần thứ XVIII, 156-162, Dương Hải (2014) 6000 Người Việt mắc bệnh “hoàng gia” http://suckhoedoisong.vn, xem 15/6/2014, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Băng Sương, Nguyễn Hoàng Việt cộng (2009) Khảo sát tần suất người mẹ mang gen dystropin bị đột biến đoạn Việt Nam Tạp chí nghiên cứu Y học X, 62 (3), 105-112., 69 Rochelle Winikoff, Maureen Brownlow Patricia Stewart (2010) All about carriers A guide for families, 14, 1-26, Azza A.G Tantawy (2010) Molecular genetics of hemophilia A: Clinical perspectives The Egyptian Journal of Medical Human Genetics 11, 105–114, Marshall A Lichtman, Ernest Buitler, Uri Seligsohn cộng Williams hematology 7th edition MrGraw-Hill medical chapter 115, 10 Phạm Quang Vinh (2006) Bệnh Hemophilia Bài giảng Huyết họctruyền máu (Sau đại học), NXB Y học, 270-279 11 McKusick VA (1965) The Royal Hemophilia Scient Am, 213, 88-95, 12 Quế N T H (2008) Nghiên cứu tác dụng không mong muốn bệnh nhân Hemophilia A truyền chế phẩm máu viện huyết học truyền máu trung ương giai đoạn 2004-2008 Luận văn thạc sỹ, Trường Đại học Y Hà Nội, 13 Klein I, Andrikovics H, A B cộng (2001) A hemophilia A and B moleculergenetic diagnostic programme in Hungary: a highly informative and cost-effective strategy Hemophilia, 7, 306-312, 14 Barbara A Konkle, MD, Neil C Josephson cộng (1993-2014) Hemophilia A Synonyms: Classic Hemophilia, Factor VIII Deficiency 70 GeneReviews, Xem ngày 10/5/2014., 15 Cung Thị Tý và cộng (1997) Tình hình Hemophilia số địa phương miền Bắc Việt Nam Đề tài nghiên cứu cấp nghiệm thu, 16 Centers for Disease Control (1989) Contribution of birth defects to infant mortality MMWR 38, pp 633-5, 17 Hải Dương (2014) 6000 người Việt mắc bệnh " hoàng gia" http://suckhoedoisong.vn, xem 15/6/2014, 18 Nguyễn Minh Hiệp và cộng (2001) Đặc điểm lâm sàng phân loại bệnh Hemophilia trẻ em Viện nhi khoa Luận văn tốt nghiệp bác sĩ chuyên khoa cấp II, Trường Đại học Y Hà Nội, 19 Vũ Thị Minh Châu (2001) Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng bệnh Hemophilia A gặp viện Huyết học - truyền máu Luận văn tốt nghiệp bác sỹ chuyên khoa II, Trường Đại học Y Hà Nội, 20 Joan C.G Jay E M Robert R M (1995) Preparation and clinical use of plasma and plasma fractions William hematology 5th edit: pp 1649 - 659, 21 Rusel L (2001) Transfusion of cryoprecipitate - Between risk and benefit Transfusion - Clinique Biologique Vol 8(Suppl): pp 525 530, 71 22 Schutgens RE, Mannucci PM E M.-B E (2009) How I treat agerelated morbidities in elderly persons with hemophilia Blood, 52565263, 23 Katherine A (2012) The gene therapy journey for hemophilia: are we there yet Blood, 120, 375-381, 24 Edgington TS Zimmerman IS (1973) Factor VIII coagulant activity and factor VIlI-like antigen: Independent molecular entities Med, 138, 1015-1020, 25 Brockway WI, Olson ID, Fass DN cộng (1977) Purification of porcine and human ristocetin-Willebrand factor LabClin Med 89, 1278-1294, 26 Trabold NC, Tuddenham GD, Collins IA cộng (1979) The properties of factor VIII coagulant activity prepared by immunoadsorbent chromatography J Lab Clin Med 93, 40-53., 27 Weiss H Sussman (1978) Dissociation of factor VIII in the presence of proteolytic inhibitors Thromb Haemostas, 40, 316-325, 28 Laffan M A Bradshaw A E (1995) Investigation of haemostasis, in Practical Haematology (Dacie J V., Lewis S M., editors , eds) pp 297–315, Churchill Livingstone, New York, 72 29 Oldenburg J Ananyeva N.M et Saenko E.L (2004) Molecular basic of Heamophilia A Heamophilia 10;133-139, 30 Vehar G.A, Keyt B Eaton D (1984) “Structure of human factor VIII”, Nature 321, 312-337, 31 Kemball-Cook G, Tuddenham EGD Wacey AI (1998) “The factor VIII structure and mutation resource site: HAMSTeRS v4” Nucleic Acids Res, 26:216–9., 32 Ye Jee Shim Kun Soo Lee (2010) (2010) Genetic Risk Factors of Hemophilia A J Genet Med 7(1), p.1-8, 33 Graw J, Brackmann HH al O J e (2005) Haemophilia A: from mutation analysis to new therapies Nat Rev Genet, 6(6), 488-501, 34 Liu ML, Shen BW Nakaya S (2000) Hemophilic factor VIII C1and C2-domain missense mutations and their modeling to the 1.5angstrom human C2-domain crystal structure Blood 96, 979–87, 35 Ngo JC, Huang M, Roth DA cộng (2008) Crystal Structure of Human Factor VIII: Implications for the Formation of the Factor IXaFactor VIIIa Complex Structure 16, 597–606, 36 Jaquemin M, Lavend’home R Benhida A (2000) A novel cause of mild/moderate hemophilia A:mutation scattered in the factor VIII C1 73 domain reduce factor VIII binding to von Willebrand factor Blood 96, 958-965, 37 Keeney S, Mitchell M Goodeve A (2005) The molecular analysis of haemophilia A: a guideline from the UK haemophilia centre doctors' organization haemophilia genetics laboratory network Haemophilia, 11, 387–97, 38 Goodeve AC Peake I (2003) The molecular basic of hemophilia A: genotype-phenotype relationships and inhibitor development Semin Thromb Hemost, 29(1), 23-30, 39 Shima M, Ware J, Yoshioka A cộng (1989) An arginine to cysteine amino acid substitution at a critical thrombin cleavage site in a dysfunctional factor VIII molecule Bloood, 74, 1612-17, 40 Bagnall RD, Giannelli F Green PM (2006) Int22h-related inversions causing hemophilia A: a novel insight into their origin and a new more discriminant PCR test for their detection J Thromb Haemost 4, 591–8, 41 Tizzano EF, Cornet M Baiget M (2003) Inversion of intron of the factor VIII gene for direct molecular diagnosis of hemophilia A Haematologica, 88, 118 - 120, 42 Andrikovics H, Klein I, Bors A cộng (2003) Analysis of large structural changes of the factor VIII gene, involving intron and 22, in severe hemophilia A Haematologica, 88, 778–84, 74 43 David D, Ventura C, Moreira I cộng (2006) The spectrum of mutations and molecular pathogenesis of hemophilia A in 181 Portuguese patients Haematologica, 91(6), 840-43, 44 Kaufman RJ Powell JS (2013) Molecular approaches for improved clotting factors for hemophilia American Society of Hematology 122, 30-36, 45 Thompson AR Structure and function of the factor VIII gene and protein Semin Thromb Hemost, 29, 11–22, 46 Leuer M, Oldenburg J Lavergne JM (2001) Somatic mosaicism in hemophilia A: a fairly common event Am J Hum Genet (2001) Jul; 69(1), 75-87 Epub 2001 Jun 14 47 Elizabeth C, Michael W Janet B (2010) Guideline on the management of haemophilia in the fetus and neonate, British Committee for Standards in Haematology 1-19, 48 Ljung R Tedgård U (2003) Genetic counseling of hemophilia carriers Semin Thromb Hemost 29(1), 31-6, 49 Goodeve AC (1998) Advances in carrier detection in haemophilia Haemophilia, 4(4), 358-64, 75 50 Plug I, Mauser-Bunschoten EP, Brocker-Vriends AH cộng (2006) Bleeding in carriers of hemophilia Blood, 108, 52–6, 51 World Federation of Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia WFH 50 years of advancing treatment for all 52 Rodeghiero F, Ruiz-Saez A, Bolton-Maggs PH cộng (2008) Laboratory issues in bleeding disorders Haemophilia, 14(Suppl 3), 93–103, 53 Shetty S, Ghosh K, Bhide A cộng (2001) Carrier detection and prenatal ldiagnosis in families with hemophilia NatMedJInd 14, 81–83, 54 Chen YC, Hu SH, Cheng SN cộng (2010) Genetic analysis of haemophilia A in Taiwan Haemophilia, 16(3), 538–44, 55 Bagnall R, Waseem NH, Green PM cộng (1999) Start of UK confidential haemophilia A database: analysis of 142 patients by solid phase fluorescent chemical cleavage of mismatch Thromb Haemost, 8, 900-905, 56 Oelmueller U, Rainen L Jurgensen S (2002) Stabilization of mRNA expression in whole blood samples Clin Chem, 48, 1883-1890, 57 Anne Goodeve (2008) Molecular Genetic Testing of Hemophilia A Thrombosis and hemostasis 34(6), 491-501, 76 58 Kazazian HH, Jr Lakich D, Antonarakis SE cộng (1993) Inversions disrupting the factor VIII gene are a common cause of severe haemophilia A Nat Genet, 5, 236-241, 59 Nozari G, Liu Q Sommer S (1998) Single-tube polymerase chain reaction for rapid diagnosis of the inversion hotspot of mutation in haemophilia A Blood, 92, 1458–1459, 60 Radic CP, Rossetti LC, Larripa IB cộng (2005) Genotyping the hemophilia inversion hotspot by use of inverse PCR Clin Chem 51, 154-158, 61 Mauser EP, Vlot AJ, Zarkova AG cộng (2000) The half-life of infused factor VIII is shorter in hemophiliac patients with blood group O than in those with blood group A Thromb Haemost 83(1), 65-69, 62 MRC-Holland MRC-Holland MLPA homepage (2008) Available at ttp://www.mlpa.com/pages/indexpag.html Accessed February 26., 63 Ngô Thị Hường (2012) Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học lâm sàng bệnh Hemophilia A hiệu sử dụng Hemofil M điều trị bệnh Hemophilia A Luận văn tốt nghiệp bác sỹ nội trú, Trường Đại học Y Hà Nội, 77 64 Lưu Vũ Dũng (2009) Tạo dòng thiết kế vector biểu gen mã hóa yếu tố VIII người Luận văn thạc sỹ, Trường Đại học Y Hà Nội, 65 Dũng L V (2014) Nghiên cứu xác định đột biến gen F8 gây bệnh Hemophilia A Đề tài tiến sĩ, Đại học Y Hà nội, 66 Lê Nhật Minh và cs (2004) Sử dụng phương pháp ADN (PCRRFLP) vùng intron 18 để xác định cá thể mang gen bệnh máu khó đơng hemophilia A Tạp chí Di truyền học, 1, 10-14 67 Trần Thị Phương Túy và cộng (2007) Tìm hiểu tính chất gia đình bệnh nhân Hemophilia A điều trị Bệnh viện Trung ương Huế Tạp chí nghiên cứu Y học, 51(54), 20-24 68 Bùi Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Hà, Tạ Thành Văn cộng (2013) Nghiên cứu phát người lành mang gen bệnh Hemophilia A Tạp chí nghiên cứu Y học, 83- 3, 1-8, ... trình xác định người lành mang gen bệnh hemophillia A kỹ thuật Microsatellite DNA 54 3.2 Xác định người lành mang gen bệnh hemophillia A kỹ thuật Microsatellite DNA thành viên gia đình người. .. trình xác định người lành mang gen bệnh hemophillia A kỹ thuật Microsatellite DNA Xác định người lành mang gen bệnh hemophillia A kỹ thuật Microsatellite DNA thành viên gia đình người bệnh 3 Chương... người lành mang gen bệnh bắt buộc (obligate carrier) Bà ngoại cháu trai bị bệnh Hemophillia A, gái người mẹ mang gen bệnh Hemophillia A, dì em gái người bệnh Hemophillia A người có nguy cao mang