Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành hoàn thiện kỹ thuật Microsatellite - DNA và áp dụng kỹ thuật này để xác định người lành mang gen bệnh thông qua việc khuếch đại các vùng trình tự lặp lại STR (short tandem repeat) và so sánh với kết quả phát hiện đột biến bằng kỹ thuật giải trình tự gen. Kỹ thuật giải trình tự gen và kỹ thuật Microsatellite - DNA cho kết quả trùng khớp nhau cho thấy đã hoàn thiện được kỹ thuật Microsatellite - DNA phát hiện người lành mang gen bệnh; 10/10 người mẹ đã được phát hiện là người lành mang gen bệnh, 24/38 thành viên nữ trong gia đình bệnh nhân là người lành mang gen bệnh.
Trang 1XÁC ĐỊNH NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH HEMOPHILIA A
BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE-DNA
Đỗ Thị Hiến, Trần Huy Thịnh, Trần Vân Khánh
Trường Đại học Y Hà Nội
Hemophillia A là bệnh di truyền lặn trên nhiễm sắc thể giới tính X gây nên do thiếu hụt yếu tố đông máu FVIII Xác định đột biến gen, phát hiện người lành mang gen bệnh và tư vấn di truyền là giải pháp hiệu quả nhất giúp ngăn ngừa và giảm tỉ lệ mắc bệnh Việc phát hiện người lành mang gen bệnh thường được thực hiện bằng kỹ thuật phát hiện đột biến trực tiếp trên gen F8 dựa vào đột biến chỉ điểm của bệnh nhân Tuy nhiên, trong một số trường hợp không phát hiện thấy đột biến hoặc việc phát hiện đột biến gặp khó khăn do cấu trúc gen lớn, kỹ thuật phân tích gián tiếp có thể được áp dụng dựa vào xác định allele đột biến (Linkage analysis)…Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành hoàn thiện kỹ thuật Microsatellite - DNA và áp dụng kỹ thuật này để xác định người lành mang gen bệnh thông qua việc khuếch đại các vùng trình tự lặp lại STR (short tandem repeat) và so sánh với kết quả phát hiện đột biến bằng kỹ thuật giải trình tự gen Kỹ thuật giải trình tự gen và kỹ thuật Microsatellite - DNA cho kết quả trùng khớp nhau cho thấy đã hoàn thiện được kỹ thuật Microsatellite - DNA phát hiện người lành mang gen bệnh; 10/10 người mẹ đã được phát hiện là người lành mang gen bệnh, 24/38 thành viên nữ trong gia đình bệnh nhân là người lành mang gen bệnh Kỹ thuật Microsatellite - DNA hứa hẹn là một phương pháp hữu hiệu để phát hiện người lành mang gen bệnh Hemophillia A ở Việt Nam.
Từ khóa: Hemophilia A, người lành mang gen bệnh, Microsatellite-DNA
Địa chỉ liên hệ: Trần Vân Khánh, Trung tâm Gen - Protein,
Trường Đại học Y Hà Nội
Email: tranvankhanh@hmu.edu.vn
Ngày nhận: 23/12/2016
Ngày được chấp thuận: 26/2/2017
I ĐẶT VẤN ĐỀ
Hemophillia A là bệnh di truyền lặn trên
nhiễm sắc thể giới tính X gây nên do thiếu hụt
yếu tố đông máu FVIII Gen bệnh nằm trên
nhiễm sắc thể X không có allele tương ứng
trên nhiễm sắc thể Y, do vậy người mẹ mang
gen bệnh có thể truyền bệnh cho 50% con trai
và truyền gen bệnh cho 50% con gái của họ
[1; 2] Bệnh có thể di truyền qua nhiều thế hệ
và có nhiều người mắc bệnh trong cùng một
gia đình Tại Việt Nam, ước tính có khoảng
6000 người bị bệnh Hemophilia A và khoảng
30.000 người mang gen bệnh Hemophilia A [3]
Phụ nữ chắc chắn mang gen bệnh nếu có con
trai bị bệnh Hemophilia A, hoặc là con gái của người mẹ mang gen bệnh; hoặc chị em con dì với người bị bệnh hemophilia A [4] Cùng với
sự tiến bộ của kỹ thuật phân tử, nhiều loại đột biến gen F8 đã được phát hiện bao gồm: đột biến điểm, đột biến xoá đoạn, đột biến đảo đoạn [5] Việc phát hiện đột biến gen, xác định người lành mang gen bệnh và tư vấn di truyền
là giải pháp hiệu quả giúp ngăn ngừa và làm giảm tỉ lệ mắc bệnh
Ngày nay, phát hiện người lành mang gen bệnh thường được thực hiện bằng kỹ thuật phát hiện đột biến trực tiếp trên gen F8 dựa vào đột biến chỉ điểm của bệnh nhân [6; 7] Tuy nhiên, vẫn còn một tỷ lệ đáng kể bệnh nhân chưa phát hiện được đột biến và đôi khi việc phát hiện đột biến gặp khó khăn do cấu trúc gen lớn, giá thành phân tích cao [8] Kỹ
Trang 2thuật phân tích gián tiếp Microsatellite-DNA
dựa vào phân tích các vùng trình tự lặp lại
STR có thể được áp dụng để xác định allele
đột biến với giá thành rẻ hơn và độ chính xác
khá cao [9; 10] Vì vậy, nghiên cứu này được
tiến hành với mục tiêu:
Hoàn chỉnh quy trình xác định người lành
mang gen bệnh Hemophillia A bằng kỹ thuật
Microsatellite-DNA
Xác định người lành mang gen bệnh
He-mophillia A bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA
trên các thành viên gia đình bệnh nhân
II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP
1 Đối tượng
+ 3 gia đình của các bệnh nhân Hemophilia
A đã được xác định đột biến gen F8 dùng để
xây dựng quy trình microsatellite-DNA phát
hiện người mang gen
+ 7 gia đình của các bệnh nhân Hemophilia
A chưa xác định được đột biến gen F8
Tổng số 38 người gồm 10 mẹ bệnh nhân
và 28 thành viên gia đình (em gái, chị gái, dì,
bác gái, bà ngoại, chị họ, em gái họ)
Các mẫu máu được thu thập tại Trung tâm
nghiên cứu Gen - Protein, Trường Đại học Y
Hà Nội
2 Phương pháp
2.1 Thiết kế nghiên cứu: mô tả cắt
ngang
2.2 Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên
cứu
- Tách chiết DNA
DNA được tách chiết theo phương pháp
phenol/chloroform từ bạch cầu máu ngoại vi
của người nhà bệnh nhân
Kiểm tra độ tinh sạch của DNA: bằng phương pháp đo quang, dựa vào tỷ lệ A260nm/
A280nm= 1,8÷2,0
- Kỹ thuật giải trình tự gen xác định đột biến điểm
Sử dụng các cặp mồi tương ứng với các vị trí đột biến chỉ điểm của bệnh nhân để xác định người mang gen cho các thành viên gia đình bằng kỹ thuật giải trình tự gen Exon tương ứng với vị trí đột biến trên gen F8 được khuếch đại bằng kỹ thuật PCR và tiến hành giải trình tự theo 2 chiều [5]
- Kỹ thuật Microsatellite-DNA
Để xác định allele bệnh người mẹ truyền cho con trai bị bệnh, trước tiên cần tiến hành
kỹ thuật single PCR sử dụng 14 cặp mồi được đánh dấu huỳnh quang FXS8061, DXS9897, DXS9901, FXS52, FXS8087, FXS9796, FXS7501, FXS7153, FXS1073, FXS7532, FXS1108, DXS1073, F8int13, F8int22 để khuyếch đại các vùng trình tự lặp lại STR đặc hiệu trên mẫu mẹ, chọn ra được ít nhất 2 mar-ker dị hợp tử [11; 12] Tiếp tục, tiến hành với DNA của bệnh nhân trên marker dị hợp tử đã lựa chọn và so sánh kết quả thu được từ mẫu
mẹ và mẫu con để xác định allele đột biến, các đỉnh có kích thước tương đương nhau giữa mẫu mẹ và mẫu con thể hiện allele đột biến (allele bệnh)
Thành phần của phản ứng PCR: 1X đệm PCR; 2,5mM dNTP; 0,2µl mồi xuôi và ngược;
0,5unit Taq polymerase; 20ng DNA và H2O, tổng thể tích 20µl Chu kỳ nhiệt phản ứng PCR:
94oC/30 giây; [94oC/12 giây, 62oC/30 giây,
72oC/30 giây] x 35 chu kỳ; 72oC/5 phút Sản phẩm khuếch đại PCR được điện di trên hệ thống sequencing của hãng Beckman Coulter Kết quả được phân tích bằng phần mềm Ge-neMapper v3.2
Trang 33 Đạo đức nghiên cứu
Bệnh nhân và người nhà hoàn toàn tự
nguyện tham gia vào nghiên cứu Bệnh nhân
hoàn toàn có quyền rút lui khỏi nghiên cứu khi
không đồng ý tiếp tục tham gia vào nghiên
cứu Bệnh nhân và người nhà bệnh nhân sẽ
được thông báo về kết quả xét nghiệm gen để
giúp cho các bác sỹ tư vấn di truyền hoặc lựa
chọn phác đồ điều trị phù hợp Các thông tin
cá nhân sẽ được đảm bảo bí mật
III KẾT QUẢ
1 Hoàn chỉnh quy trình xác định người lành mang gen bệnh Hemophillia A bằng
kỹ thuật Microsatellite DNA
* Gia đình bệnh nhân mã số HA11:
- Kết quả phát hiện người lành mang gen F8 bị đột biến bằng kỹ thuật giải trình tự gen của gia đình HA11:
Hình 1 Ảnh giải trình tự gen của gia đình mã số HA11
Hình ảnh giải trình tự exon 14 gen F8 của người mẹ và chị gái bệnh nhân HA11 xuất hiện 2 đỉnh chồng lên tại vị trí đột biến đã phát hiện được ở bệnh nhân HA11 (c.2776_2777insC), chứng
tỏ mẹ và chị gái bệnh nhân mang gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử Bác gái bệnh nhân không mang gen bệnh
- Kết quả phát hiện người lành mang gen F8 bị đột biến bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA: Marker dị hợp tử được tìm thấy khi khuếch đại các vùng STR trên mẹ bệnh nhân HA11 là DXS9901, DXS 9897
Người bình thường Bệnh nhân HA Mẹ bệnh nhân HA
Chị gái bệnh nhân HA Bác gái bệnh nhân HA
Trang 4Hình 2 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901, DXS9897
của gia đình mã số HA11
Kết quả trên cho thấy với marker dị hợp tử DXS9901, DXS 9897, mẹ và chị của bệnh nhân xuất hiện 2 đỉnh, mỗi đỉnh tương ứng với 1 allele Ở đỉnh trùng với đỉnh của bệnh nhân chính là đỉnh của allele đột biến Xb, tức là bệnh nhân sẽ nhận allele đột biến này từ người mẹ, mẹ và chị gái bệnh nhân mang gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử Bác gái bệnh nhân không có đỉnh trùng với đỉnh của allele đột biến Xbnên không mang gen bệnh Kết quả này cũng trùng khớp với kết quả xác định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật giải trình tự gen tức là cả mẹ bệnh nhân và chị gái bệnh nhân là người lành mang gen bệnh
- Phả hệ gia đình HA11:
Allele đột biến Allele đột biến
Nữ mang gen bệnh
Nữ bình thường
Nam bị bệnh đã tử vong
Nam bị bệnh Bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu
Nam bình thường
Hình 3 Sơ đồ phả hệ gia đình bệnh nhân HA11
Mẹ bệnh nhân HA
Chị bệnh nhân HA Bệnh nhân HA
Bác gái bệnh nhân HA
Trang 5Hình trên cho thấy, trong 4 thành viên nữ (I1, II1, II2, III1) của gia đình bệnh nhân HA11 đã xác định được:
- 2 thành viên nữ chắc chắn mang gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử là mẹ và bà ngoại bệnh nhân (II2; I1) (vì có một con trai bị bệnh và có ít nhất 1 người đàn ông trong họ mẹ bị bệnh)
- 1 thành viên nữ (II1– bác bệnh nhân) không mang gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử
- 1 thành viên nữ (II1– chị bệnh nhân) là người lành mang gen bệnh
Kết quả phân tích bằng kỹ thuật
Microsa-tellite - DNA cũng trùng khớp với kết quả xác
định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật
giải trình tự gen tức là mẹ và chị gái bệnh
nhân là người lành mang gen bệnh, bác gái
không phải là người lành mang gen bệnh
Tiến hành tương tự với gia đình HA37,
HA02 cũng cho kết quả tương đồng giữa 2
phương pháp giải trình tự gen và
Microstellite-DNA Như vậy, kết quả phát hiện người lành
mang gen bệnh bằng kỹ thuật giải trình tự gen
và kỹ thuật Microsatellite - DNA cho kết quả
trùng khớp nhau
2 Xác định người lành mang gen bệnh Hemophillia A bằng kỹ thuật Microsatellite DNA
Áp dụng quy trình xác định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA cho các thành viên nữ trong 7 gia đình của các bệnh nhân Hemophillia A chưa xác định được đột biến chỉ điểm trên bệnh nhân
* Kết quả phát hiện người lành mang gen
F8 bị đột biến bằng kỹ thuật Microsatellite-DNAcủa gia đình bệnh nhân HA42:
Ở gia đình HA42 marker dị hợp tử được tìm là FXS 7153, F8int22:
Allele đột biến Allele đột biến
Hình 4 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS7153, F8int22
của gia đình mã số HA42
Kết quả trên cho thấy ở marker dị hợp tử: FXS7153, F8int22, mẹ của bệnh nhân xuất hiện 2 đỉnh, mỗi đỉnh tương ứng với 1 allele Ở đỉnh trùng với đỉnh của bệnh nhân chính là đỉnh của
alle-le đột biến Xb, tức là bệnh nhân sẽ nhận allele đột biến này từ người mẹ, mẹ bệnh nhân mang
Trang 6gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử Em gái bệnh nhân xuất hiện 2 đỉnh không trùng với allele đột biến Xbcủa bệnh nhân nên em gái bệnh nhân không mang gen bệnh
Bảng 1 Kết quả phát hiện người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA
Thành viên gia đình Mang gen bệnh Không mang gen bệnh Tổng số
* Thành viên nữ khác bao gồm em gái, chị gái, dì, bác gái, bà ngoại, chị họ, em gái họ của bệnh nhân.
Kết quả bảng 1 cho thấy, 10/10 người mẹ đã được phát hiện là người lành mang gen bệnh, 14/28 thành viên nữ khác trong gia đình bệnh nhân là người lành mang gen bệnh
IV BÀN LUẬN
Hemophilia A là bệnh di truyền lặn liên kết
với nhiễm sắc thể giới tính X, không có allele
tương ứng trên nhiễm sắc thể Y, bệnh di
truyền qua nhiều thế hệ nên việc xác định
chính xác dạng đột biến và vị trí đột biến
trên gen F8 của bệnh nhân là bước đầu tiên
rất quan trọng và là cơ sở khoa học cho
những phân tích phát hiện người lành mang
gen bệnh
Người phụ nữ mang gen bệnh là người có
hoạt tính yếu tố VIII trong máu giảm, tuy nhiên
nhiều trường hợp hoạt tính yếu tố VIII không
giảm hoặc giảm ít Người phụ nữ chắc chắn
mang gen bệnh khi có ít nhất 2 con trai bị
bệnh hoặc có bố bị hemophilia A hoặc có một
con trai bị bệnh và có ít nhất 1 người đàn ông
trong họ mẹ bị bệnh hoặc có một con trai bị
bệnh và trong gia đình họ mẹ có ít nhất 1
người được chẩn đoán là người lành mang
gen bệnh [3] Việc xác định người lành mang
gen bệnh thường được thực hiện bằng kỹ
thuật phát hiện đột biến trực tiếp trên gen F8
dựa vào đột biến chỉ điểm của bệnh nhân Tuy
nhiên, theo một nghiên cứu năm 2014, 10,3% bệnh nhân hemophilia A chưa phát hiện được đột biến hoặc việc phát hiện đột biến thường khó khăn do cấu trúc gen lớn, kỹ thuật phân tích gián tiếp Microsatellite - DNA có thể được
áp dụng dựa vào xác định allele đột biến [8] Trong nghiên cứu này, trước tiên chúng tôi tiến hành hoàn chỉnh quy trình xác định người lành mang gen bệnh Hemophillia A bằng kỹ thuật Microsatellite - DNA bằng cách so sánh kết quả xác định người lành mang gen bệnh bằng phương pháp giải trình tự gen và phương pháp Microsatellite - DNA Kết quả giữa 2 phương pháp hoàn toàn trùng khớp nhau cho thấy đã hoàn thiện được quy trình
kỹ thuật Microsatellite - DNA phát hiện người lành mang gen bệnh Hemophillia A Để xác định tình trạng mang gen bệnh Hemophilia A bằng kỹ thuật Microsatellite - DNA, cần phải tiến hành phân tích các vùng trình tự lặp lại (short tandem repeat - STR) Trình tự lặp lại là các đoạn lặp nối tiếp ngắn từ 2 đến 6 cặp base, có tính đa hình rất cao Do kích thước nhỏ nên các trình tự này được gọi là các trình
Trang 7tự lặp lại ngắn và số lần lặp lại này đặc trưng
cho từng cá thể, mang tính di truyền STR
được ứng dụng trong chẩn đoán xác định
huyết thống, xác định người mang gen và
chẩn đoán trước sinh [9 - 13] Trong nghiên
cứu này, các cặp mồi sử dụng khuếch đại
STR của gen F8, nhằm xác định allele mang
đột biến Xbvà allele không mang gen đột biến
X Với kết quả phân tích STR, người mẹ hoặc
các thành viên nữ khác trong gia đình có 2
đỉnh tương ứng với 2 allele do họ có 2 nhiễm
sắc thể X, bệnh nhân nam nhận nhiễm sắc thể
Y từ bố và một nhiễm sắc thể X từ mẹ nên sẽ
chỉ có 1 trình tự lặp lại giống của mẹ vì gen F8
chỉ có trên nhiễm sắc thể X; trên hình ảnh điện
di sẽ cho một đỉnh duy nhất tương ứng với
trình tự STR trên nhiễm sắc thể X nhận từ mẹ
Đỉnh của allele đột biến sẽ được xác định dựa
trên đỉnh allele của bệnh nhân Với các thành
viên gia đình bệnh nhân có 1 đỉnh trùng với
đỉnh của allele đột biến Xb chứng tỏ họ là
người lành mang gen bệnh và ngược lại
không trùng với đỉnh của allele đột biến chứng
tỏ họ không phải là người lành mang gen
bệnh [14]
Thành viên gia đình bệnh nhân HA42 có
marker dị hợp tử: FXS7153, F8int22 Với mỗi
marker dị hợp tử ở mẹ bệnh nhân xuất hiện 2
đỉnh, mỗi đỉnh tương ứng với 1 allele Ở đỉnh
trùng với đỉnh của bệnh nhân chính là đỉnh
của allele đột biến Xb, tức là bệnh nhân sẽ
nhận allele đột biến này từ người mẹ, mẹ
bệnh nhân mang gen F8 đột biến ở trạng thái
dị hợp tử Em gái bệnh nhân xuất hiện 2 đỉnh
không trùng với allele đột biến Xb của bệnh
nhân nên em gái bệnh nhân không mang gen
bệnh
Trong số 38 thành viên nữ của 10 gia đình
bệnh nhân Hemophilia A có 10/10 người mẹ
(chiếm 100%) và 24/38 thành viên nữ trong gia đình bệnh nhân (chiếm 63,1%) đã được phát hiện là người lành mang gen bệnh, kết quả này phù hợp với nghiên cứu trên 102 gia đình bệnh nhân Hemophilia A ở Ấn Độ thấy
tỷ lệ người lành mang gen bệnh là 64,5% [7]
và cao hơn nghiên cứu ở 50 gia đình bệnh nhân Hemophilia A Việt Nam thấy tỷ lệ người lành mang gen bệnh là 47,4% [15] Có sự khác biệt này có thể do đối tượng trong các nghiên cứu có tiền sử bệnh khác nhau, mà các thành viên nữ trong gia đình có tiền sử bệnh càng rõ ràng thì có nguy cơ mang gen bệnh cao hơn [7]
Đây là nghiên cứu xác định người lành mang gen F8 đột biến đầu tiên được thực hiện
ở Việt Nam sử dụng kỹ thuật Microsatellite DNA Nghiên cứu phát hiện được chính xác tình trạng mang gen F8 đột biến ở các đối tượng này sẽ là cơ sở khoa học cho công tác
tư vấn di truyền, chẩn đoán trước sinh và chẩn đoán tiền làm tổ (PGD), giúp ngăn ngừa sinh ra những đứa trẻ bị bệnh Hemophilia A, tăng hiệu quả trong công tác phòng ngừa bệnh tật, hạn chế tối đa tình trạng chảy máu cũng như giảm thiểu khả năng trở thành tàn tật, giảm bớt gánh nặng cho gia đình và xã hội, nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe cộng đồng
V KẾT LUẬN
Nghiên cứu này đã hoàn thiện quy trình xác định người lành mang gen bệnh Hemop-hilia A bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA Kết quả cho thấy 10/10 (chiếm 100%) người mẹ mang gen bệnh Hemophilia A và 24/38 (chiếm 63,1%) các thành viên nữ trong gia đình bệnh nhân là người lành mang gen bệnh Hemophilia A
Trang 8Lời cám ơn
Nghiên cứu được thực hiện với sự hỗ trợ
kinh phí bởi Đề tài cấp nhà nước: “Xây dựng
quy trình chẩn đoán trước làm tổ bằng kỹ
thuật Microsatellte DNA để sàng lọc một số
bệnh lý di truyền liên kết nhiễm sắc thể giới
tính” thuộc chương trình KC04.17/11-15
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Gill Swallow ( 2013) Guideline for the
Obstetric Management of Carriers of
Haemo-philia A and B, NHS Nottingham University
Hospitals Cookie Disclaime
2 Trần Thị Liên và Trần Thị Thanh
Hương (2014) Di truyền đơn gen, Di truyền y
học, Nhà xuất bản giáo dục, 146 - 149,
3 Bộ trưởng Bộ Y tế (2016) Hướng dẫn
chẩn đoán và điều trị bệnh Hemophilia A
Quyết định số 4984/QD-BYT, Hà Nội, ngày 17
tháng 19 năm 2016
4 Street AM, Ljung R and Lavery SA
(2008) Management of carriers and babies
with haemophilia Haemophilia, 14(3), 181
-187
5 Azza A.G Tantawy (2010) Molecular
genetics of hemophilia A: Clinical
perspec-tives The Egyptian Journal of Medical Human
Genetics, 11, 105 – 114.
6 Goodeve AC (1998) Advances in
car-rier detection in haemophilia Haemophilia, 4
(4), 358 - 364.
7 Shetty S, Ghosh K, Bhide A và cộng
sự (2001) Carrier detection and prenatal
ldi-agnosis in families with hemophilia Nat Med J
Ind, 14, 81 - 83.
8 Lưu Vũ Dũng, Trần Huy Thịnh, Tạ
Thành Văn, Nguyễn Đức Hinh, Trần Vân
Khánh (2014) Phát hiện đột biến gen F8 gây
bệnh Hemophilia A Tạp chí Nghiên cứu Y
học, 91(5), 13 - 18.
9 Machado FB và Medina-Acosta E (2009). High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect
haemophilia A carrier detection Haemophilia,
15(1), 297 - 308.
10 Ding QL., Lu YL., Dai J et al (2012).
Characterisation and validation of a novel panel of the six short tandem repeats for ge-netic counselling in Chinese haemophilia A
pedigrees Haemophilia,18(4), 621 - 625,
11 Hussein IR., El-Beshlawy A., Salem
A et al (2008) The use of DNA markers for
carrier detection and prenatal diagnosis of
haemophilia A in Egyptian families
Haemo-philia, 14(5), 1082 - 1087.
12 Saha A, Nayak S (2011) A set of five
Microsatellite markers linked to F8 gene can detect haemophilia A carriers across India
Haemophilia, 17(5), 928 - 935.
13 De Carvalho FM, De Vargas Wolf-gramm E, Spagnol Perrone AM et al (2007).
Analysis of Factor VIII polymorphic markers as
a means for carrier detection in Brazilian
fami-lies with haemophilia A Haemophilia, 13(4),
409 - 412
14 Massaro JD., Wiezel CE., Muniz YC
et al (2011) Analysis of five polymorphic DNA
markers for indirect genetic diagnosis of
hae-mophilia A in the Brazilian population
Haemo-philia, 17(5), 936 - 943.
15 Bùi Thị Thu Hương, Trần Huy Thịnh, Nguyễn Thị Hà, Nguyễn Đức Hinh và cộng
sự (2014) Phát hiện người lành mang gen
bệnh trong gia đình bệnh nhân Hemophilia A
Tạp chí Nghiên cứu Y học, 90(5), 1 - 8.
Trang 9Summary CARRIER DETECTION OF HEMOPHILIA A
USING MICROSATELLITE DNA
Hemophilia A is an inherited X-linked coagulation disorder caused by the deficiency of factor VIII (FVIII) Carrier detection and genetic counseling are effective solutions to prevent and reduce the incidence of disease Normally, carrier are preferably performed by direct mutation detection; however, in certain situations, indirect family studies may also be useful in cases of undetectable mutation due to of huge structure F8 gene, linkage analysis is a common indirect method for the detection of female carriers in families with Hemophilia A In this study, we aimed to complete Microsatellite - DNA technology to detected female carriers family of HA disease from linkage us-ing STR (short tandem repeat) and compared to sequencus-ing analysis results The result of se-quencing analysis is similar to result of Microsatellite - DNA analysis We completed Microsatellite
- DNA technology to detected female carriers in family of HA disease 10/10 mother was found to
be healthy carriers, 24/38 female family members was detected as carriers in ten families of HA patients In Conclusions: Microsatellite - DNA is cost-effective method to detect hemophilia A car-riers in Vietnam
Keywords: Hemophilia A, carriers, Microsatellite-DNA