1. Trang chủ
  2. » Thể loại khác

Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A bằng kỹ thuật Microsatellite dna

9 86 0

Đang tải... (xem toàn văn)

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 9
Dung lượng 2,51 MB

Nội dung

Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành hoàn thiện kỹ thuật Microsatellite - DNA và áp dụng kỹ thuật này để xác định người lành mang gen bệnh thông qua việc khuếch đại các vùng trình tự lặp lại STR (short tandem repeat) và so sánh với kết quả phát hiện đột biến bằng kỹ thuật giải trình tự gen. Kỹ thuật giải trình tự gen và kỹ thuật Microsatellite - DNA cho kết quả trùng khớp nhau cho thấy đã hoàn thiện được kỹ thuật Microsatellite - DNA phát hiện người lành mang gen bệnh; 10/10 người mẹ đã được phát hiện là người lành mang gen bệnh, 24/38 thành viên nữ trong gia đình bệnh nhân là người lành mang gen bệnh.

Trang 1

XÁC ĐỊNH NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH HEMOPHILIA A

BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE-DNA

Đỗ Thị Hiến, Trần Huy Thịnh, Trần Vân Khánh

Trường Đại học Y Hà Nội

Hemophillia A là bệnh di truyền lặn trên nhiễm sắc thể giới tính X gây nên do thiếu hụt yếu tố đông máu FVIII Xác định đột biến gen, phát hiện người lành mang gen bệnh và tư vấn di truyền là giải pháp hiệu quả nhất giúp ngăn ngừa và giảm tỉ lệ mắc bệnh Việc phát hiện người lành mang gen bệnh thường được thực hiện bằng kỹ thuật phát hiện đột biến trực tiếp trên gen F8 dựa vào đột biến chỉ điểm của bệnh nhân Tuy nhiên, trong một số trường hợp không phát hiện thấy đột biến hoặc việc phát hiện đột biến gặp khó khăn do cấu trúc gen lớn, kỹ thuật phân tích gián tiếp có thể được áp dụng dựa vào xác định allele đột biến (Linkage analysis)…Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành hoàn thiện kỹ thuật Microsatellite - DNA và áp dụng kỹ thuật này để xác định người lành mang gen bệnh thông qua việc khuếch đại các vùng trình tự lặp lại STR (short tandem repeat) và so sánh với kết quả phát hiện đột biến bằng kỹ thuật giải trình tự gen Kỹ thuật giải trình tự gen và kỹ thuật Microsatellite - DNA cho kết quả trùng khớp nhau cho thấy đã hoàn thiện được kỹ thuật Microsatellite - DNA phát hiện người lành mang gen bệnh; 10/10 người mẹ đã được phát hiện là người lành mang gen bệnh, 24/38 thành viên nữ trong gia đình bệnh nhân là người lành mang gen bệnh Kỹ thuật Microsatellite - DNA hứa hẹn là một phương pháp hữu hiệu để phát hiện người lành mang gen bệnh Hemophillia A ở Việt Nam.

Từ khóa: Hemophilia A, người lành mang gen bệnh, Microsatellite-DNA

Địa chỉ liên hệ: Trần Vân Khánh, Trung tâm Gen - Protein,

Trường Đại học Y Hà Nội

Email: tranvankhanh@hmu.edu.vn

Ngày nhận: 23/12/2016

Ngày được chấp thuận: 26/2/2017

I ĐẶT VẤN ĐỀ

Hemophillia A là bệnh di truyền lặn trên

nhiễm sắc thể giới tính X gây nên do thiếu hụt

yếu tố đông máu FVIII Gen bệnh nằm trên

nhiễm sắc thể X không có allele tương ứng

trên nhiễm sắc thể Y, do vậy người mẹ mang

gen bệnh có thể truyền bệnh cho 50% con trai

và truyền gen bệnh cho 50% con gái của họ

[1; 2] Bệnh có thể di truyền qua nhiều thế hệ

và có nhiều người mắc bệnh trong cùng một

gia đình Tại Việt Nam, ước tính có khoảng

6000 người bị bệnh Hemophilia A và khoảng

30.000 người mang gen bệnh Hemophilia A [3]

Phụ nữ chắc chắn mang gen bệnh nếu có con

trai bị bệnh Hemophilia A, hoặc là con gái của người mẹ mang gen bệnh; hoặc chị em con dì với người bị bệnh hemophilia A [4] Cùng với

sự tiến bộ của kỹ thuật phân tử, nhiều loại đột biến gen F8 đã được phát hiện bao gồm: đột biến điểm, đột biến xoá đoạn, đột biến đảo đoạn [5] Việc phát hiện đột biến gen, xác định người lành mang gen bệnh và tư vấn di truyền

là giải pháp hiệu quả giúp ngăn ngừa và làm giảm tỉ lệ mắc bệnh

Ngày nay, phát hiện người lành mang gen bệnh thường được thực hiện bằng kỹ thuật phát hiện đột biến trực tiếp trên gen F8 dựa vào đột biến chỉ điểm của bệnh nhân [6; 7] Tuy nhiên, vẫn còn một tỷ lệ đáng kể bệnh nhân chưa phát hiện được đột biến và đôi khi việc phát hiện đột biến gặp khó khăn do cấu trúc gen lớn, giá thành phân tích cao [8] Kỹ

Trang 2

thuật phân tích gián tiếp Microsatellite-DNA

dựa vào phân tích các vùng trình tự lặp lại

STR có thể được áp dụng để xác định allele

đột biến với giá thành rẻ hơn và độ chính xác

khá cao [9; 10] Vì vậy, nghiên cứu này được

tiến hành với mục tiêu:

Hoàn chỉnh quy trình xác định người lành

mang gen bệnh Hemophillia A bằng kỹ thuật

Microsatellite-DNA

Xác định người lành mang gen bệnh

He-mophillia A bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA

trên các thành viên gia đình bệnh nhân

II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP

1 Đối tượng

+ 3 gia đình của các bệnh nhân Hemophilia

A đã được xác định đột biến gen F8 dùng để

xây dựng quy trình microsatellite-DNA phát

hiện người mang gen

+ 7 gia đình của các bệnh nhân Hemophilia

A chưa xác định được đột biến gen F8

Tổng số 38 người gồm 10 mẹ bệnh nhân

và 28 thành viên gia đình (em gái, chị gái, dì,

bác gái, bà ngoại, chị họ, em gái họ)

Các mẫu máu được thu thập tại Trung tâm

nghiên cứu Gen - Protein, Trường Đại học Y

Hà Nội

2 Phương pháp

2.1 Thiết kế nghiên cứu: mô tả cắt

ngang

2.2 Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên

cứu

- Tách chiết DNA

DNA được tách chiết theo phương pháp

phenol/chloroform từ bạch cầu máu ngoại vi

của người nhà bệnh nhân

Kiểm tra độ tinh sạch của DNA: bằng phương pháp đo quang, dựa vào tỷ lệ A260nm/

A280nm= 1,8÷2,0

- Kỹ thuật giải trình tự gen xác định đột biến điểm

Sử dụng các cặp mồi tương ứng với các vị trí đột biến chỉ điểm của bệnh nhân để xác định người mang gen cho các thành viên gia đình bằng kỹ thuật giải trình tự gen Exon tương ứng với vị trí đột biến trên gen F8 được khuếch đại bằng kỹ thuật PCR và tiến hành giải trình tự theo 2 chiều [5]

- Kỹ thuật Microsatellite-DNA

Để xác định allele bệnh người mẹ truyền cho con trai bị bệnh, trước tiên cần tiến hành

kỹ thuật single PCR sử dụng 14 cặp mồi được đánh dấu huỳnh quang FXS8061, DXS9897, DXS9901, FXS52, FXS8087, FXS9796, FXS7501, FXS7153, FXS1073, FXS7532, FXS1108, DXS1073, F8int13, F8int22 để khuyếch đại các vùng trình tự lặp lại STR đặc hiệu trên mẫu mẹ, chọn ra được ít nhất 2 mar-ker dị hợp tử [11; 12] Tiếp tục, tiến hành với DNA của bệnh nhân trên marker dị hợp tử đã lựa chọn và so sánh kết quả thu được từ mẫu

mẹ và mẫu con để xác định allele đột biến, các đỉnh có kích thước tương đương nhau giữa mẫu mẹ và mẫu con thể hiện allele đột biến (allele bệnh)

Thành phần của phản ứng PCR: 1X đệm PCR; 2,5mM dNTP; 0,2µl mồi xuôi và ngược;

0,5unit Taq polymerase; 20ng DNA và H2O, tổng thể tích 20µl Chu kỳ nhiệt phản ứng PCR:

94oC/30 giây; [94oC/12 giây, 62oC/30 giây,

72oC/30 giây] x 35 chu kỳ; 72oC/5 phút Sản phẩm khuếch đại PCR được điện di trên hệ thống sequencing của hãng Beckman Coulter Kết quả được phân tích bằng phần mềm Ge-neMapper v3.2

Trang 3

3 Đạo đức nghiên cứu

Bệnh nhân và người nhà hoàn toàn tự

nguyện tham gia vào nghiên cứu Bệnh nhân

hoàn toàn có quyền rút lui khỏi nghiên cứu khi

không đồng ý tiếp tục tham gia vào nghiên

cứu Bệnh nhân và người nhà bệnh nhân sẽ

được thông báo về kết quả xét nghiệm gen để

giúp cho các bác sỹ tư vấn di truyền hoặc lựa

chọn phác đồ điều trị phù hợp Các thông tin

cá nhân sẽ được đảm bảo bí mật

III KẾT QUẢ

1 Hoàn chỉnh quy trình xác định người lành mang gen bệnh Hemophillia A bằng

kỹ thuật Microsatellite DNA

* Gia đình bệnh nhân mã số HA11:

- Kết quả phát hiện người lành mang gen F8 bị đột biến bằng kỹ thuật giải trình tự gen của gia đình HA11:

Hình 1 Ảnh giải trình tự gen của gia đình mã số HA11

Hình ảnh giải trình tự exon 14 gen F8 của người mẹ và chị gái bệnh nhân HA11 xuất hiện 2 đỉnh chồng lên tại vị trí đột biến đã phát hiện được ở bệnh nhân HA11 (c.2776_2777insC), chứng

tỏ mẹ và chị gái bệnh nhân mang gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử Bác gái bệnh nhân không mang gen bệnh

- Kết quả phát hiện người lành mang gen F8 bị đột biến bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA: Marker dị hợp tử được tìm thấy khi khuếch đại các vùng STR trên mẹ bệnh nhân HA11 là DXS9901, DXS 9897

Người bình thường Bệnh nhân HA Mẹ bệnh nhân HA

Chị gái bệnh nhân HA Bác gái bệnh nhân HA

Trang 4

Hình 2 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901, DXS9897

của gia đình mã số HA11

Kết quả trên cho thấy với marker dị hợp tử DXS9901, DXS 9897, mẹ và chị của bệnh nhân xuất hiện 2 đỉnh, mỗi đỉnh tương ứng với 1 allele Ở đỉnh trùng với đỉnh của bệnh nhân chính là đỉnh của allele đột biến Xb, tức là bệnh nhân sẽ nhận allele đột biến này từ người mẹ, mẹ và chị gái bệnh nhân mang gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử Bác gái bệnh nhân không có đỉnh trùng với đỉnh của allele đột biến Xbnên không mang gen bệnh Kết quả này cũng trùng khớp với kết quả xác định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật giải trình tự gen tức là cả mẹ bệnh nhân và chị gái bệnh nhân là người lành mang gen bệnh

- Phả hệ gia đình HA11:

Allele đột biến Allele đột biến

Nữ mang gen bệnh

Nữ bình thường

Nam bị bệnh đã tử vong

Nam bị bệnh Bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu

Nam bình thường

Hình 3 Sơ đồ phả hệ gia đình bệnh nhân HA11

Mẹ bệnh nhân HA

Chị bệnh nhân HA Bệnh nhân HA

Bác gái bệnh nhân HA

Trang 5

Hình trên cho thấy, trong 4 thành viên nữ (I1, II1, II2, III1) của gia đình bệnh nhân HA11 đã xác định được:

- 2 thành viên nữ chắc chắn mang gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử là mẹ và bà ngoại bệnh nhân (II2; I1) (vì có một con trai bị bệnh và có ít nhất 1 người đàn ông trong họ mẹ bị bệnh)

- 1 thành viên nữ (II1– bác bệnh nhân) không mang gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử

- 1 thành viên nữ (II1– chị bệnh nhân) là người lành mang gen bệnh

Kết quả phân tích bằng kỹ thuật

Microsa-tellite - DNA cũng trùng khớp với kết quả xác

định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật

giải trình tự gen tức là mẹ và chị gái bệnh

nhân là người lành mang gen bệnh, bác gái

không phải là người lành mang gen bệnh

Tiến hành tương tự với gia đình HA37,

HA02 cũng cho kết quả tương đồng giữa 2

phương pháp giải trình tự gen và

Microstellite-DNA Như vậy, kết quả phát hiện người lành

mang gen bệnh bằng kỹ thuật giải trình tự gen

và kỹ thuật Microsatellite - DNA cho kết quả

trùng khớp nhau

2 Xác định người lành mang gen bệnh Hemophillia A bằng kỹ thuật Microsatellite DNA

Áp dụng quy trình xác định người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA cho các thành viên nữ trong 7 gia đình của các bệnh nhân Hemophillia A chưa xác định được đột biến chỉ điểm trên bệnh nhân

* Kết quả phát hiện người lành mang gen

F8 bị đột biến bằng kỹ thuật Microsatellite-DNAcủa gia đình bệnh nhân HA42:

Ở gia đình HA42 marker dị hợp tử được tìm là FXS 7153, F8int22:

Allele đột biến Allele đột biến

Hình 4 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS7153, F8int22

của gia đình mã số HA42

Kết quả trên cho thấy ở marker dị hợp tử: FXS7153, F8int22, mẹ của bệnh nhân xuất hiện 2 đỉnh, mỗi đỉnh tương ứng với 1 allele Ở đỉnh trùng với đỉnh của bệnh nhân chính là đỉnh của

alle-le đột biến Xb, tức là bệnh nhân sẽ nhận allele đột biến này từ người mẹ, mẹ bệnh nhân mang

Trang 6

gen F8 đột biến ở trạng thái dị hợp tử Em gái bệnh nhân xuất hiện 2 đỉnh không trùng với allele đột biến Xbcủa bệnh nhân nên em gái bệnh nhân không mang gen bệnh

Bảng 1 Kết quả phát hiện người lành mang gen bệnh bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA

Thành viên gia đình Mang gen bệnh Không mang gen bệnh Tổng số

* Thành viên nữ khác bao gồm em gái, chị gái, dì, bác gái, bà ngoại, chị họ, em gái họ của bệnh nhân.

Kết quả bảng 1 cho thấy, 10/10 người mẹ đã được phát hiện là người lành mang gen bệnh, 14/28 thành viên nữ khác trong gia đình bệnh nhân là người lành mang gen bệnh

IV BÀN LUẬN

Hemophilia A là bệnh di truyền lặn liên kết

với nhiễm sắc thể giới tính X, không có allele

tương ứng trên nhiễm sắc thể Y, bệnh di

truyền qua nhiều thế hệ nên việc xác định

chính xác dạng đột biến và vị trí đột biến

trên gen F8 của bệnh nhân là bước đầu tiên

rất quan trọng và là cơ sở khoa học cho

những phân tích phát hiện người lành mang

gen bệnh

Người phụ nữ mang gen bệnh là người có

hoạt tính yếu tố VIII trong máu giảm, tuy nhiên

nhiều trường hợp hoạt tính yếu tố VIII không

giảm hoặc giảm ít Người phụ nữ chắc chắn

mang gen bệnh khi có ít nhất 2 con trai bị

bệnh hoặc có bố bị hemophilia A hoặc có một

con trai bị bệnh và có ít nhất 1 người đàn ông

trong họ mẹ bị bệnh hoặc có một con trai bị

bệnh và trong gia đình họ mẹ có ít nhất 1

người được chẩn đoán là người lành mang

gen bệnh [3] Việc xác định người lành mang

gen bệnh thường được thực hiện bằng kỹ

thuật phát hiện đột biến trực tiếp trên gen F8

dựa vào đột biến chỉ điểm của bệnh nhân Tuy

nhiên, theo một nghiên cứu năm 2014, 10,3% bệnh nhân hemophilia A chưa phát hiện được đột biến hoặc việc phát hiện đột biến thường khó khăn do cấu trúc gen lớn, kỹ thuật phân tích gián tiếp Microsatellite - DNA có thể được

áp dụng dựa vào xác định allele đột biến [8] Trong nghiên cứu này, trước tiên chúng tôi tiến hành hoàn chỉnh quy trình xác định người lành mang gen bệnh Hemophillia A bằng kỹ thuật Microsatellite - DNA bằng cách so sánh kết quả xác định người lành mang gen bệnh bằng phương pháp giải trình tự gen và phương pháp Microsatellite - DNA Kết quả giữa 2 phương pháp hoàn toàn trùng khớp nhau cho thấy đã hoàn thiện được quy trình

kỹ thuật Microsatellite - DNA phát hiện người lành mang gen bệnh Hemophillia A Để xác định tình trạng mang gen bệnh Hemophilia A bằng kỹ thuật Microsatellite - DNA, cần phải tiến hành phân tích các vùng trình tự lặp lại (short tandem repeat - STR) Trình tự lặp lại là các đoạn lặp nối tiếp ngắn từ 2 đến 6 cặp base, có tính đa hình rất cao Do kích thước nhỏ nên các trình tự này được gọi là các trình

Trang 7

tự lặp lại ngắn và số lần lặp lại này đặc trưng

cho từng cá thể, mang tính di truyền STR

được ứng dụng trong chẩn đoán xác định

huyết thống, xác định người mang gen và

chẩn đoán trước sinh [9 - 13] Trong nghiên

cứu này, các cặp mồi sử dụng khuếch đại

STR của gen F8, nhằm xác định allele mang

đột biến Xbvà allele không mang gen đột biến

X Với kết quả phân tích STR, người mẹ hoặc

các thành viên nữ khác trong gia đình có 2

đỉnh tương ứng với 2 allele do họ có 2 nhiễm

sắc thể X, bệnh nhân nam nhận nhiễm sắc thể

Y từ bố và một nhiễm sắc thể X từ mẹ nên sẽ

chỉ có 1 trình tự lặp lại giống của mẹ vì gen F8

chỉ có trên nhiễm sắc thể X; trên hình ảnh điện

di sẽ cho một đỉnh duy nhất tương ứng với

trình tự STR trên nhiễm sắc thể X nhận từ mẹ

Đỉnh của allele đột biến sẽ được xác định dựa

trên đỉnh allele của bệnh nhân Với các thành

viên gia đình bệnh nhân có 1 đỉnh trùng với

đỉnh của allele đột biến Xb chứng tỏ họ là

người lành mang gen bệnh và ngược lại

không trùng với đỉnh của allele đột biến chứng

tỏ họ không phải là người lành mang gen

bệnh [14]

Thành viên gia đình bệnh nhân HA42 có

marker dị hợp tử: FXS7153, F8int22 Với mỗi

marker dị hợp tử ở mẹ bệnh nhân xuất hiện 2

đỉnh, mỗi đỉnh tương ứng với 1 allele Ở đỉnh

trùng với đỉnh của bệnh nhân chính là đỉnh

của allele đột biến Xb, tức là bệnh nhân sẽ

nhận allele đột biến này từ người mẹ, mẹ

bệnh nhân mang gen F8 đột biến ở trạng thái

dị hợp tử Em gái bệnh nhân xuất hiện 2 đỉnh

không trùng với allele đột biến Xb của bệnh

nhân nên em gái bệnh nhân không mang gen

bệnh

Trong số 38 thành viên nữ của 10 gia đình

bệnh nhân Hemophilia A có 10/10 người mẹ

(chiếm 100%) và 24/38 thành viên nữ trong gia đình bệnh nhân (chiếm 63,1%) đã được phát hiện là người lành mang gen bệnh, kết quả này phù hợp với nghiên cứu trên 102 gia đình bệnh nhân Hemophilia A ở Ấn Độ thấy

tỷ lệ người lành mang gen bệnh là 64,5% [7]

và cao hơn nghiên cứu ở 50 gia đình bệnh nhân Hemophilia A Việt Nam thấy tỷ lệ người lành mang gen bệnh là 47,4% [15] Có sự khác biệt này có thể do đối tượng trong các nghiên cứu có tiền sử bệnh khác nhau, mà các thành viên nữ trong gia đình có tiền sử bệnh càng rõ ràng thì có nguy cơ mang gen bệnh cao hơn [7]

Đây là nghiên cứu xác định người lành mang gen F8 đột biến đầu tiên được thực hiện

ở Việt Nam sử dụng kỹ thuật Microsatellite DNA Nghiên cứu phát hiện được chính xác tình trạng mang gen F8 đột biến ở các đối tượng này sẽ là cơ sở khoa học cho công tác

tư vấn di truyền, chẩn đoán trước sinh và chẩn đoán tiền làm tổ (PGD), giúp ngăn ngừa sinh ra những đứa trẻ bị bệnh Hemophilia A, tăng hiệu quả trong công tác phòng ngừa bệnh tật, hạn chế tối đa tình trạng chảy máu cũng như giảm thiểu khả năng trở thành tàn tật, giảm bớt gánh nặng cho gia đình và xã hội, nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe cộng đồng

V KẾT LUẬN

Nghiên cứu này đã hoàn thiện quy trình xác định người lành mang gen bệnh Hemop-hilia A bằng kỹ thuật Microsatellite-DNA Kết quả cho thấy 10/10 (chiếm 100%) người mẹ mang gen bệnh Hemophilia A và 24/38 (chiếm 63,1%) các thành viên nữ trong gia đình bệnh nhân là người lành mang gen bệnh Hemophilia A

Trang 8

Lời cám ơn

Nghiên cứu được thực hiện với sự hỗ trợ

kinh phí bởi Đề tài cấp nhà nước: “Xây dựng

quy trình chẩn đoán trước làm tổ bằng kỹ

thuật Microsatellte DNA để sàng lọc một số

bệnh lý di truyền liên kết nhiễm sắc thể giới

tính” thuộc chương trình KC04.17/11-15

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Gill Swallow ( 2013) Guideline for the

Obstetric Management of Carriers of

Haemo-philia A and B, NHS Nottingham University

Hospitals Cookie Disclaime

2 Trần Thị Liên và Trần Thị Thanh

Hương (2014) Di truyền đơn gen, Di truyền y

học, Nhà xuất bản giáo dục, 146 - 149,

3 Bộ trưởng Bộ Y tế (2016) Hướng dẫn

chẩn đoán và điều trị bệnh Hemophilia A

Quyết định số 4984/QD-BYT, Hà Nội, ngày 17

tháng 19 năm 2016

4 Street AM, Ljung R and Lavery SA

(2008) Management of carriers and babies

with haemophilia Haemophilia, 14(3), 181

-187

5 Azza A.G Tantawy (2010) Molecular

genetics of hemophilia A: Clinical

perspec-tives The Egyptian Journal of Medical Human

Genetics, 11, 105 – 114.

6 Goodeve AC (1998) Advances in

car-rier detection in haemophilia Haemophilia, 4

(4), 358 - 364.

7 Shetty S, Ghosh K, Bhide A và cộng

sự (2001) Carrier detection and prenatal

ldi-agnosis in families with hemophilia Nat Med J

Ind, 14, 81 - 83.

8 Lưu Vũ Dũng, Trần Huy Thịnh, Tạ

Thành Văn, Nguyễn Đức Hinh, Trần Vân

Khánh (2014) Phát hiện đột biến gen F8 gây

bệnh Hemophilia A Tạp chí Nghiên cứu Y

học, 91(5), 13 - 18.

9 Machado FB và Medina-Acosta E (2009). High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect

haemophilia A carrier detection Haemophilia,

15(1), 297 - 308.

10 Ding QL., Lu YL., Dai J et al (2012).

Characterisation and validation of a novel panel of the six short tandem repeats for ge-netic counselling in Chinese haemophilia A

pedigrees Haemophilia,18(4), 621 - 625,

11 Hussein IR., El-Beshlawy A., Salem

A et al (2008) The use of DNA markers for

carrier detection and prenatal diagnosis of

haemophilia A in Egyptian families

Haemo-philia, 14(5), 1082 - 1087.

12 Saha A, Nayak S (2011) A set of five

Microsatellite markers linked to F8 gene can detect haemophilia A carriers across India

Haemophilia, 17(5), 928 - 935.

13 De Carvalho FM, De Vargas Wolf-gramm E, Spagnol Perrone AM et al (2007).

Analysis of Factor VIII polymorphic markers as

a means for carrier detection in Brazilian

fami-lies with haemophilia A Haemophilia, 13(4),

409 - 412

14 Massaro JD., Wiezel CE., Muniz YC

et al (2011) Analysis of five polymorphic DNA

markers for indirect genetic diagnosis of

hae-mophilia A in the Brazilian population

Haemo-philia, 17(5), 936 - 943.

15 Bùi Thị Thu Hương, Trần Huy Thịnh, Nguyễn Thị Hà, Nguyễn Đức Hinh và cộng

sự (2014) Phát hiện người lành mang gen

bệnh trong gia đình bệnh nhân Hemophilia A

Tạp chí Nghiên cứu Y học, 90(5), 1 - 8.

Trang 9

Summary CARRIER DETECTION OF HEMOPHILIA A

USING MICROSATELLITE DNA

Hemophilia A is an inherited X-linked coagulation disorder caused by the deficiency of factor VIII (FVIII) Carrier detection and genetic counseling are effective solutions to prevent and reduce the incidence of disease Normally, carrier are preferably performed by direct mutation detection; however, in certain situations, indirect family studies may also be useful in cases of undetectable mutation due to of huge structure F8 gene, linkage analysis is a common indirect method for the detection of female carriers in families with Hemophilia A In this study, we aimed to complete Microsatellite - DNA technology to detected female carriers family of HA disease from linkage us-ing STR (short tandem repeat) and compared to sequencus-ing analysis results The result of se-quencing analysis is similar to result of Microsatellite - DNA analysis We completed Microsatellite

- DNA technology to detected female carriers in family of HA disease 10/10 mother was found to

be healthy carriers, 24/38 female family members was detected as carriers in ten families of HA patients In Conclusions: Microsatellite - DNA is cost-effective method to detect hemophilia A car-riers in Vietnam

Keywords: Hemophilia A, carriers, Microsatellite-DNA

Ngày đăng: 21/01/2020, 05:09

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w