Báo cáo môn kiểm nghiệm dược liệu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO BÁO CÁO HẾT MÔN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU VÀ THUỐC TỪ DƯỢC LIỆU Lớp cao học khóa 2016 - 2018 PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG QUERCETIN TRONG DỊCH CHIẾT METHANOL DƯỢC LIỆU BẰNG HPLC Chuyên ngành: Dược liệu – Dược học cổ truyền Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO TP HCM, 05/2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO BÁO CÁO HẾT MƠN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU VÀ THUỐC TỪ DƯỢC LIỆU Lớp cao học khóa 2016 - 2018 PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG QUERCETIN TRONG DỊCH CHIẾT METHANOL DƯỢC LIỆU BẰNG HPLC Chuyên ngành: Dược liệu – Dược học cổ truyền Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO TP HCM, 05/2017 Bài báo sưu tầm từ tạp chí Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry ISSN 2278- 4136 ZDB-Number: 2668735-5 IC Journal No: 8192 Volume Issue Tác giả Neelam Verma1, Nitu Trehan2* Biotechnology Department, Punjabi University, Patiala, India [E-mail: neelemverma@gmail.com] Biotechnology Department, Mata Gujri College, Fatehgarh Sahib, India [E-mail: nitutrehan@yahoo.com] Tóm tắt Các loại dược liệu nguồn flavonoid phong phú Flavonoid hợp chất polyphenol có mặt khắp nơi tự nhiên phân loại theo cấu trúc hóa học chúng, thành flavon, isoflavon flavon-3-ol, anthocyanidin Chúng quan tâm đáng kể có tiềm có lợi cho sức khoẻ người Chúng báo cáo có hoạt tính kháng virus, chống dị ứng, chống kết tập tiểu cầu, chống viêm, kháng thể, chống ung thư chống lão hóa Phương pháp phân tích HPLC sử dụng để phân loại loại dược liệu dựa chất chuyển hóa thứ sinh Dược liệu chiết xuất điều kiện tối ưu sau phân tích sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) để định lượng hợp chất flavonoid sinh học Kết cho thấy Bạc hà chứa nồng độ quercetin cao khoảng 10,8mg /g Giới thiệu Thực vật chiếm vị trí quan trọng làm ngun liệu thơ cho loại thuốc quan trọng Là trung tâm sản xuất nhiều chất chống oxy hoá bao gồm carotenoid, flavonoid, axit cinnamic axit ascorbic, tocopherol để ngăn ngừa trình oxy hóa chất dễ bị tổn thương (Hollman, 2001) Chúng chủ yếu quan tâm đến loại chất chống oxy hóa flavonoid Đã có 4000 flavonoid xác định Flavonoids chủ yếu có thực phẩm tổng hợp mặt chuyển hóa Gần flavonoid quan tâm đáng kể chúng ảnh hưởng có lợi đến sức khoẻ người Chúng báo cáo có thuốc kháng virus, chống dị ứng, chống kết tập tiểu cầu, chống viêm, chống ung thư, chống ung thư tính chống lão hóa (Cody cộng sự, 1986;Kuhnau, 1976, Havsteen, 1983; Middleton, 1984) Flavonoids giúp bảo vệ chống lại bệnh cách đóng góp với chất chống oxy hóa vitamin enzym Quercetin loại flavonol Hoạt tính tốt quercetin hoạt động chất chống oxy hố (Lakhanpal Rai, 2007) 1.1 Cây sả chanh Thuộc họ Lúa Poaceae Sả chanh sử dụng rộng rãi loại trà đồ uống khác, thảo dược, thuốc men làm gia vị cho ăn Đơng Nam Á, đặc biệt cá nước chấm Sả chanh trồng chậu nhà, để cung cấp mùi hương tươi mát Cymbopogon citratus có liên quan chặt chẽ đến C nardus Tinh dầu chiết xuất từ Sả chanh Cũng sử dụng làm thuốc chống côn trùng, sản phẩm làm đẹp nước hoa 1.2 Parsley mùi tây vườn (Petroselinum crispum) Là loài Petroselinum họ Apiaceae Nó trồng rộng rãi dược liệu, gia vị rau Parsley sử dụng nhiễm trùng đường tiểu (UTIs), sỏi thận (Nephrolithiasis), rối loạn dày ruột (GI), táo bón, vàng da, khí ruột (đầy hơi), khó tiêu, đau bụng, tiểu đường, ho, hen suyễn, ứ dịch (phù), viêm xương khớp, thiếu máu, huyết áp cao, bệnh tuyến tiền liệt Nó sử dụng để bắt đầu chu kỳ kinh nguyệt, phá thai, Dùng chất làm mát thở 1.3 Rau mùi (Coriander sativum) Nguồn gốc nam châu Âu,thỉnh thoảng tìm thấy mọc hoang cánh đồng, bãi rác bên bờ sông Anh 1.4 Bạc hà (Mentha canadensis) Đây thực vật sử dụng nhiều văn hố, chẳng hạn Ấn Độ, Trung Đơng Châu Âu Đặc điểm loài cho cảm giác sau ăn Kẹo Bạc hà tốt cho thể, chẳng hạn làm lạnh đường tiêu hóa, giảm bớt triệu chứng đau bụng Uống trà thảo dược làm gảm hội chứng ruột kích thích, làm giảm rối loạn da, lành mụn trứng cá Dùng ngồi tạo cảm giác mát mẻ da, khắc phục kích ứng da Khơng vậy, Bạc hà giúp loại bỏ độc tố thể làm máu sử dụng thường xuyên Trong thực tế, nghiền nát Bạc hà để làm trắng chữa hôi miệng Kỹ thuật HPLC cho phép phân tích dấu vân tay thành phần thảo dược Các loại dược liệu đa dạng sử dụng nguồn flavonoid phong phú quercetin cho thấy tác dụng chống oxy hóa tốt Trong báo này, chúng tơi phân tích hàm lượng quercetin loài thảo dược Vật liệu phương pháp nghiên cứu Các loại dược liệu thu từ Đại học Punjab Agriculture, Ludhiana Hóa chất: Quercetin chuẩn Sigma Aldrich, loại dùng cho HPLC Methanol, axit photphoric, lọc ống tiêm (0.45 Μm), nước cấp dùng cho HPLC 2.1 Chuẩn bị: Các loại dược liệu làm khô nghiền nát, chiết xuất cao chiết tồn phần Sau 1% chất chiết xuất chuẩn bị Methanol HPLC loại Sau đó, mẫu Sonicated cách sử dụng ultrasonicator 10 Sau Chiết xuất lọc tiêm vào HPLC Cột sử dụng pha di động 36:64 (acetonitrile Và 0,1% axit photphoric) 2.2 Chuẩn bị chuẩn: Quercetin chuẩn 100 ppm chạy theo điều kiện tương tự Các bước sóng cho hấp thu tối đa quercetin 365 nm tốc độ dòng chảy trì 0,5ml / phút 3 Kết bàn luận: Mẫu lấy từ dược liệu phân tích cho thấy Bạc hà có diện tích tối đa Các dược liệu lại có hàm lượng thấp Vì vậy, bạc hà sử dụng nguồn dược liệu giàu quercetin 4 Kết luận Kết cho thấy Bạc hà có nồng độ quercetin cao Vì vậy, sử dụng nguồn cung cấp quercetin tốt Thực vật có tầm quan trọng lớn y học cổ truyền lẫn Tây y Do cần thiết phân tích thành phần hóa thực vật diện thơng qua kỹ thuật tiềm dựa HPLC Có thể kết luận kỹ thuật phân tích vân tay phương pháp thuận lợi để xác định có mặt nhiều thành phần diện dịch chiết metanol Nồng độ quercetin dược liệu là: 10,8 mg/g Bạc hà; 6,15 mg/g rau mùi, 4.2 mg / g rau mùi tây 0.12mg / g sả chanh 5 Tài liệu tham khảo Cody,V, Middleton, E and Harborne , J B (1986) Plants flavonoids in Biology and MedicineBiochemical and Structure Activity Relationships Alan R.Liss., NY Hollman , P C H (2001) Evidence for health effects of plant phenols : local or systemic effects J Sci Food Agri., 81: 842-852 Havsteen , B (1983) Flavonoids , a class of natural products of high pharmacological potency Biochem Pharma., 32(7): 1141-1148 Lakhanpal , P and Rai,K D (2007) Quercetin : A Versatile Flavonoid International Journal of Medical Update , 2(2) Middleton, E (1984) The flavonoids Trends in Pharmaceutical Science 5: 335-338 ISSN 2278- 4136 ZDB-Number: 2668735-5 IC Journal No: 8192 Volume Issue Online Available at www.phytojournal.com Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry HPLC Analysis of Methanolic Extract of Herbs for Quercetin Content Neelam Verma1, Nitu Trehan2* Biotechnology Department, Punjabi University, Patiala, India [E-mail: neelemverma@gmail.com] Biotechnology Department, Mata Gujri College, Fatehgarh Sahib, India [E-mail: nitutrehan@yahoo.com] Herbs are rich source of flavonoids Flavonoids are polyphenolic compounds that are ubiquitous in nature and are categorized according to their chemical structure, into flavones, isoflavonoes and flavon-3-ol, anthocyanidins They have aroused considerable interest because of their potential beneficial effect on human health They have been reported to have antiviral, anti allergic, anti platelet, anti inflammatory, antitumor, anti carcinogenic and anti ageing properties HPLC analysis can be used for classification of herbs based upon secondary metabolites Extract yield at optimum condition was then analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) for quantifying bioactive flavonoid compounds It was observed that mint contains the highest concentration of quercetin i.e about 10.8mg/g Keyword: Flavonol, HPLC, Quercetin Introduction Plants occupy a significant place as raw material for important drugs Plants produce a variety of antioxidants that include carotenoids, flavonoids, cinnammic acid and ascorbic acid, tocopherols to prevent the oxidation of the susceptible substrate (Hollman, 2001) We are mainly concerned with one class of anti oxidants i.e flavonoids Over 4000 flavonoids have been identified so far Flavonoids are essentially ingested through food rather than metabolically synthesized The flavonoids have aroused considerable interest recently because of their potential beneficial effects on human health They have been reported to have antiviral, anti allergic, anti platelet, anti inflammatory, antitumor, anti carcinogenic and anti ageing properties (Cody et al., 1986; Kuhnau, 1976;Havsteen, 1983; Middleton, 1984).Flavonoids may help provide protection against these diseases by contributing along with antioxidants vitamins and enzymes Quercetin is a type of flavonol The best property of quercetin is that it acts as an antioxidant ( Lakhanpal and Rai, 2007) 1.1 Lemon grass: which belongs to the family Poaceae The culms (stems) of lemon grass are widely used in teas and other beverages, herbal medicines, and to flavour southeast Asian cuisine, particularly fish stews and sauces Lemon grass is also grown in pots indoor, to provide rooms with its „fresh‟ fragrance Cymbopogon citratus is closely related to C nardus, the species of grass from which the insect-repellent citronella is derived The oil extracted from lemon grass hasJournal of Pharmacognosy and Phytochemistry also been used as an insect-repellent, as well as toperfume beauty products 1.2 Parsley or garden parsley (Petroselinumcrispum): is a species of Petroselinum in the family Apiaceae It is widely cultivated as an herb, a spice and a vegetable Parsley is used for urinary tract infections (UTIs), kidney stones (nephrolithiasis), gastrointestinal (GI) disorders, constipation, jaundice, intestinal gas (flatulence), indigestion, colic, diabetes, cough, asthma, fluid retention (edema), osteoarthritis, “tired blood” (anemia), high blood pressure, prostate conditions, and spleen conditions It is also used to start menstrual flow, to cause an abortion, and as a breath freshener 1.3 Coriander: an umbelliferous plant indigenous to southern Europe, is found occasionally in Britain in fields and waste places, and by the sides of rivers It is frequently found in a semi-wild state Coriander (Coriander Sativum), an umbelliferous plant indigenous to southern Europe, is found occasionally in Britain in fields and waste places, and by the sides of rivers It is frequently found in a semi-wild state in the east of England, having escaped from cultivation 1.4 Mint (Mentha canadensis): is a plant that has been used in a variety of cultures, such as India, the Middle East, and Europe Characteristic of this plant that has a sweet flavor with a cool sensation after eating Eating mint is good for the body, such as cooling the digestive tract, or if abdominal pain will greatly help relieve the pain While herbal mint tea drinking may reduce irritable bowel syndrome, stomach cleaning, and also cleans skin disorders such as acne.While cool mint sensation on the skin can help overcome skin irritation Not only that, mint can also help eliminate toxins in the body and purify the blood by eating them regularly In fact, crushed mint leaves believed to whiten teeth and eliminate bad breath HPLC technique gives a finger print analysis ofherbs for its components Various commonly used herbs are a rich source of flavonoids and mainly quercetin which shows good antioxidant properties In this paper, we have analyzed herbs for their quercetin content Materials and Methods Herbs were obtained from Punjab Agriculture University, Ludhiana Chemicals required: quercetin from Sigma Aldrich, HPLC grade methanol, phosphoric acid, syringe filters(0.45 µm), HPLC grade water 2.1 Sample Preparation: Herbs were dried and then crushed Then 1% of extract was prepared in HPLC grade methanol Then the sample was sonicated using ultrasonicator for 10 Then extract was filtered and injected into the HPLC column using mobile phase of 36:64(acetonitrileand 0.1 %phosphoric acid) 2.2 Standard Preparation: Quercetin was used as standard 100 ppm quercetin standard was prepared run under similar conditions The wavelength for maximum absorption of quercetin is 365 nm and the flow rate was maintained at 0.5ml / Results and Discussion: It was observed when similar kind of weight of sample was taken the analysed herbs shows the peak area maximum in case of mint The rest of herbs showed lower content So mint can be used as a rich source of quercetin from herb Table 1.1: shows the peak area and retention time of different herbs and their quercetin content in mg/g: S No Name of the herb Lemon grass Parsley Coriander Mint Quercetin 100ppm Retention time 15.625 16.842 17.249 16.913 15.967 Peak area Conc.in mg/g 215603 7392928 8796752 17700570 14541756 0.12 4.20 6.10 10.8 100ppm Conclusion It was observed that mint showed highest concentration of quercetin So it can be used as a good source of quercetin Herbs are enormously important in both traditional and western medicine Hence it is essential to analyze the phytochemicals present in the plant through a 10 potential technique Based upon the HPLC fingerprints, it can be concluded that this analytical technique is a convenient method to identify the presence of numerous constituents present in the methanolic extract The concentration of quercetin in herbs follows the order 10.8 mg/g in mint , 6.15mg/g in coriander, 4.2 mg/g in parsley and 0.12mg/g in lemon grass References Cody,V, Middleton, E and Harborne , J B (1986) Plants flavonoids in Biology and MedicineBiochemical and Structure Activity Relationships Alan R.Liss., NY Hollman , P C H (2001) Evidence for health effects of plant phenols : local or systemic effects J Sci Food Agri., 81: 842-852 Havsteen , B (1983) Flavonoids , a class of natural products of high pharmacological potency Biochem Pharma., 32(7): 1141-1148 Lakhanpal , P and Rai,K D (2007) Quercetin : A Versatile Flavonoid International Journal of Medical Update , 2(2) Middleton, E (1984) The flavonoids Trends in Pharmaceutical Science 5: 335-338 11 ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO BÁO CÁO HẾT MÔN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU VÀ THUỐC TỪ DƯỢC LIỆU Lớp cao học khóa 2016 - 2018 PHÂN TÍCH... TRONG DỊCH CHIẾT METHANOL DƯỢC LIỆU BẰNG HPLC Chuyên ngành: Dược liệu – Dược học cổ truyền Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO TP HCM, 05/2017 Bài báo sưu tầm từ tạp chí... thảo dược Các loại dược liệu đa dạng sử dụng nguồn flavonoid phong phú quercetin cho thấy tác dụng chống oxy hóa tốt Trong báo này, chúng tơi phân tích hàm lượng quercetin loài thảo dược Vật liệu