Báo cáo môn kiểm nghiệm dược liệu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO BÁO CÁO HẾT MÔN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU VÀ THUỐC TỪ DƯỢC LIỆU Lớp cao học khóa 2016 - 2018 PHÂN TÍCH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BÁO BÁO CÁO HẾT MÔN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU VÀ THUỐC

TỪ DƯỢC LIỆU Lớp cao học khóa 2016 - 2018

PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG QUERCETIN TRONG DỊCH CHIẾT METHANOL

DƯỢC LIỆU BẰNG HPLC

Chuyên ngành: Dược liệu – Dược học cổ truyền

Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO

TP HCM, 05/2017

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ KHOA DƯỢC - ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BÁO BÁO CÁO HẾT MÔN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU VÀ THUỐC

TỪ DƯỢC LIỆU

Lớp cao học khóa 2016 - 2018

PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG QUERCETIN TRONG DỊCH CHIẾT METHANOL

DƯỢC LIỆU BẰNG HPLC Chuyên ngành: Dược liệu – Dược học cổ truyền

Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC Thầy hướng dẫn: TS VÕ VĂN LẸO

TP HCM, 05/2017

Bài báo được sưu tầm từ tạp chí Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry

ISSN 2278- 4136

ZDB-Number: 2668735-5

IC Journal No: 8192

Volume 2 Issue 1

Tác giả

Neelam Verma1, Nitu Trehan2*

1 Biotechnology Department, Punjabi University, Patiala, India

[E-mail: neelemverma@gmail.com]

2 Biotechnology Department, Mata Gujri College, Fatehgarh Sahib, India

[E-mail: nitutrehan@yahoo.com]

Tóm tắt

Các loại dược liệu là nguồn flavonoid phong phú Flavonoid là các hợp chất polyphenol có mặt khắp nơi trong tự nhiên và được phân loại theo cấu trúc hóa học của chúng, thành flavon, isoflavon và flavon-3-ol, anthocyanidin Chúng được quan tâm đáng kể vì có tiềm năng có lợi cho sức khoẻ con người Chúng đã được báo cáo có hoạt tính kháng virus, chống dị ứng, chống kết tập tiểu cầu, chống viêm, kháng thể, chống ung thư và chống lão hóa Phương pháp phân tích bằng HPLC có thể được sử dụng để phân loại các loại dược liệu dựa trên các chất chuyển hóa thứ sinh Dược liệu được chiết xuất ở điều kiện tối ưu sau

đó được phân tích bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để định lượng các hợp chất flavonoid sinh học Kết quả cho thấy rằng Bạc hà chứa nồng độ quercetin cao nhất khoảng 10,8mg /g

Giới thiệu

Thực vật chiếm một vị trí quan trọng làm nguyên liệu thô cho các loại thuốc quan trọng Là trung tâm sản xuất nhiều chất chống oxy hoá bao gồm carotenoid, flavonoid, axit cinnamic

và axit ascorbic, tocopherol để ngăn ngừa quá trình oxy hóa chất nền dễ bị tổn thương

(Hollman, 2001) Chúng tôi chủ yếu quan tâm đến một loại chất chống oxy hóa là flavonoid Đã có 4000 flavonoid đã được xác định cho đến nay Flavonoids chủ yếu có trong thực phẩm chứ không phải là tổng hợp về mặt chuyển hóa Gần đây các flavonoid được quan tâm đáng kể vì chúng ảnh hưởng có lợi đến sức khoẻ con người Chúng đã được báo cáo có thuốc kháng virus, chống dị ứng, chống kết tập tiểu cầu, chống viêm, chống ung thư, chống ung thư và tính chống lão hóa (Cody và cộng sự, 1986;Kuhnau, 1976, Havsteen, 1983; Middleton, 1984) Flavonoids có thể giúp bảo vệ chống lại những bệnh này bằng cách đóng góp cùng với các chất chống oxy hóa vitamin và enzym Quercetin là một loại flavonol Hoạt tính tốt nhất của quercetin là nó hoạt động như một chất chống oxy hoá (Lakhanpal và Rai, 2007)

1.1 Cây sả chanh

Thuộc họ Lúa Poaceae Sả chanh là được sử dụng rộng rãi trong các loại trà và đồ uống khác, thảo dược, thuốc men và làm gia vị cho món ăn Đông Nam Á, đặc biệt là cá và nước chấm Sả chanh cũng được trồng trong chậu trong nhà, để cung cấp mùi hương tươi mát

Cymbopogon citratus có liên quan chặt chẽ đến C nardus Tinh dầu chiết xuất từ Sả chanh

Cũng được sử dụng làm thuốc chống côn trùng, cũng như sản phẩm làm đẹp nước hoa

1.2 Parsley hoặc mùi tây vườn (Petroselinum crispum)

Là một loài Petroselinum trong họ Apiaceae Nó được trồng rộng rãi như là một dược liệu,

gia vị và rau Parsley được sử dụng trong nhiễm trùng đường tiểu (UTIs), sỏi thận (Nephrolithiasis), rối loạn dạ dày ruột (GI), táo bón, vàng da, khí ruột (đầy hơi), khó tiêu, đau bụng, tiểu đường, ho, hen suyễn, ứ dịch (phù), viêm xương khớp, thiếu máu, huyết áp cao, bệnh tuyến tiền liệt Nó cũng được sử dụng để bắt đầu chu kỳ kinh nguyệt, phá thai, và Dùng như một chất làm mát hơi thở

1.3 Rau mùi (Coriander sativum)

Nguồn gốc ở nam châu Âu,thỉnh thoảng được tìm thấy mọc hoang trong những cánh đồng, những bãi rác và bên bờ sông ở Anh

1.4 Bạc hà (Mentha canadensis)

Đây là một thực vật đã được sử dụng trong nhiều nền văn hoá, chẳng hạn như Ấn Độ, Trung Đông và Châu Âu Đặc điểm của loài cây này cho cảm giác ngọt sau khi ăn Kẹo Bạc hà tốt cho cơ thể, chẳng hạn như làm lạnh đường tiêu hóa, giảm bớt triệu chứng đau bụng Uống trà thảo dược có thể làm gảm hội chứng ruột kích thích, và cũng làm giảm các rối loạn da, lành mụn trứng cá Dùng ngoài tạo cảm giác mát mẻ trên da, có thể khắc phục sự kích ứng

da Không chỉ vậy, Bạc hà cũng có thể giúp loại bỏ độc tố trong cơ thể và làm sạch máu khi

sử dụng thường xuyên Trong thực tế, nghiền nát lá Bạc hà để làm trắng răng và chữa hôi miệng

Kỹ thuật HPLC cho phép phân tích dấu vân tay các thành phần của thảo dược Các loại dược liệu đa dạng được sử dụng như là một nguồn flavonoid phong phú trong đó quercetin cho thấy tác dụng chống oxy hóa tốt Trong bài báo này, chúng tôi đã phân tích hàm lượng quercetin của các loài thảo dược

2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu

Các loại dược liệu thu được từ Đại học Punjab Agriculture, Ludhiana

Hóa chất:

Quercetin chuẩn của Sigma Aldrich, loại dùng cho HPLC

Methanol, axit photphoric, bộ lọc ống tiêm (0.45 Μm), nước cấp dùng cho HPLC

2.1 Chuẩn bị:

Các loại dược liệu được làm khô và nghiền nát, chiết xuất cao chiết toàn phần Sau đó 1% chất chiết xuất được chuẩn bị trong

Methanol HPLC loại Sau đó, mẫu đã được

Sonicated bằng cách sử dụng ultrasonicator trong 10 min Sau đó

Chiết xuất đã được lọc và tiêm vào HPLC

Cột sử dụng pha di động là 36:64 (acetonitrile

Và 0,1% axit photphoric)

2.2 Chuẩn bị chuẩn:

Quercetin chuẩn 100 ppm chạy theo các điều kiện tương tự Các bước sóng cho sự hấp thu tối đa của quercetin là 365 nm và tốc độ dòng chảy được duy trì là 0,5ml / phút

3 Kết quả và bàn luận:

Mẫu được lấy từ các dược liệu phân tích cho thấy Bạc hà có diện tích tối đa Các dược liệu còn lại có hàm lượng thấp hơn Vì vậy, bạc hà có thể được sử dụng như là một nguồn dược liệu giàu quercetin

4 Kết luận

Kết quả cho thấy Bạc hà có nồng độ quercetin cao nhất Vì vậy, có thể được sử dụng như một nguồn cung cấp quercetin tốt Thực vật có tầm quan trọng rất lớn trong cả y học cổ truyền lẫn Tây y Do đó cần thiết phân tích thành phần hóa thực vật hiện diện trong cây thông qua kỹ thuật tiềm năng dựa trên HPLC Có thể kết luận kỹ thuật phân tích vân tay là một phương pháp thuận lợi để xác định sự có mặt của nhiều thành phần hiện diện trong dịch chiết metanol Nồng độ quercetin trong dược liệu lần lượt là: 10,8 mg/g trong Bạc hà; 6,15 mg/g rau mùi, 4.2 mg / g trong rau mùi tây và 0.12mg / g trong sả chanh

5 Tài liệu tham khảo

1 Cody,V, Middleton, E and Harborne , J B (1986) Plants flavonoids in Biology and MedicineBiochemical and Structure Activity Relationships Alan R.Liss., NY

2 Hollman , P C H (2001) Evidence for health effects of plant phenols : local or systemic effects J Sci Food Agri., 81: 842-852

3 Havsteen , B (1983) Flavonoids , a class of natural products of high pharmacological potency Biochem Pharma., 32(7): 1141-1148

4 Lakhanpal , P and Rai,K D (2007) Quercetin : A Versatile Flavonoid International Journal of Medical Update , 2(2)

5 Middleton, E (1984) The flavonoids Trends in Pharmaceutical Science 5: 335-338

ISSN 2278- 4136 ZDB-Number: 2668735-5

IC Journal No: 8192 Volume 2 Issue 1 Online Available at www.phytojournal.com

Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry

HPLC Analysis of Methanolic Extract of Herbs for

Quercetin Content

Neelam Verma1, Nitu Trehan2*

1 Biotechnology Department, Punjabi University, Patiala, India

[E-mail: neelemverma@gmail.com]

2 Biotechnology Department, Mata Gujri College, Fatehgarh Sahib, India

[E-mail: nitutrehan@yahoo.com]

Herbs are rich source of flavonoids Flavonoids are polyphenolic compounds that are ubiquitous in nature and are categorized according to their chemical structure, into flavones, isoflavonoes and flavon-3-ol, anthocyanidins They have aroused considerable interest because of their potential beneficial effect on human health They have been reported to have antiviral, anti allergic, anti platelet, anti inflammatory, antitumor, anti carcinogenic and anti ageing properties HPLC analysis can be used for classification of herbs based upon secondary metabolites Extract yield at optimum condition was then analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) for quantifying bioactive flavonoid compounds It was observed that mint contains the highest concentration of quercetin i.e about 10.8mg/g

Keyword: Flavonol, HPLC, Quercetin

1 Introduction

Plants occupy a significant place as raw material for important drugs Plants produce a variety of antioxidants that include carotenoids, flavonoids, cinnammic acid and ascorbic acid, tocopherols to prevent the oxidation of the susceptible substrate (Hollman, 2001) We are mainly concerned with one class of anti oxidants i.e flavonoids Over

4000 flavonoids have been identified so far Flavonoids are essentially ingested through food rather than metabolically synthesized The flavonoids have aroused considerable interest recently because of their potential beneficial effects on human health They have been reported to have antiviral, anti allergic, anti platelet, anti inflammatory, antitumor, anti carcinogenic and anti ageing properties (Cody et al., 1986; Kuhnau, 1976;Havsteen, 1983; Middleton, 1984).Flavonoids may help provide protection against these diseases by contributing along with antioxidants vitamins and enzymes Quercetin is a type of flavonol The best property of quercetin is that it acts as an antioxidant ( Lakhanpal and

Rai, 2007)

1.1 Lemon grass: which belongs to the family Poaceae The culms (stems) of lemon grass

are widely used in teas and other beverages, herbal medicines, and to flavour southeast Asian cuisine, particularly fish stews and sauces Lemon grass is also grown in pots indoor,

to provide rooms with its „fresh‟ fragrance Cymbopogon citratus is closely related to C nardus, the species of grass from which the insect-repellent citronella is derived The oil extracted from lemon grass hasJournal of Pharmacognosy and Phytochemistry also been used as an insect-repellent, as well as toperfume beauty products

1.2 Parsley or garden parsley (Petroselinumcrispum): is a species of Petroselinum in the

family Apiaceae It is widely cultivated as an herb, a spice and a vegetable Parsley is used for urinary tract infections (UTIs), kidney stones (nephrolithiasis), gastrointestinal (GI) disorders, constipation, jaundice, intestinal gas (flatulence), indigestion, colic, diabetes, cough, asthma, fluid retention (edema), osteoarthritis, “tired blood” (anemia), high blood pressure, prostate conditions, and spleen conditions It is also used to start menstrual flow,

to cause an abortion, and as a breath freshener

1.3 Coriander: an umbelliferous plant indigenous to southern Europe, is found occasionally

in Britain in fields and waste places, and by the sides of rivers It is frequently found in

a semi-wild state Coriander (Coriander Sativum), an umbelliferous plant indigenous to southern Europe, is found occasionally in Britain in fields and waste places, and by the sides

of rivers It is frequently found in a semi-wild state in the east of England, having escaped from cultivation

1.4 Mint (Mentha canadensis): is a plant that has been used in a variety of cultures, such

as India, the Middle East, and Europe Characteristic of this plant that has a sweet flavor with a cool sensation after eating Eating mint is good for the body, such as cooling the digestive tract, or if abdominal pain will greatly help relieve the pain While herbal mint tea drinking may reduce irritable bowel syndrome, stomach cleaning, and also cleans skin disorders such as acne.While cool mint sensation on the skin can help overcome skin irritation Not only that, mint can also help eliminate toxins in the body and purify the blood

by eating them regularly In fact, crushed mint leaves believed to whiten teeth and eliminate bad breath

HPLC technique gives a finger print analysis ofherbs for its components Various commonly used herbs are a rich source of flavonoids and mainly quercetin which shows good antioxidant properties In this paper, we have analyzed herbs for their quercetin content

2 Materials and Methods

Herbs were obtained from Punjab Agriculture University, Ludhiana Chemicals required: quercetin from Sigma Aldrich, HPLC grade methanol, phosphoric acid, syringe filters(0.45 µm), HPLC grade water

2.1 Sample Preparation: Herbs were dried and then crushed Then 1% of extract was

prepared in HPLC grade methanol Then the sample was sonicated using ultrasonicator for

10 min Then extract was filtered and injected into the HPLC column using mobile phase of 36:64(acetonitrileand 0.1 %phosphoric acid)

2.2 Standard Preparation: Quercetin was used as standard 100 ppm quercetin standard

was prepared run under similar conditions The wavelength for maximum absorption of quercetin is 365 nm and the flow rate was maintained at 0.5ml / min

3 Results and Discussion:

It was observed when similar kind of weight of sample was taken the analysed herbs shows the peak area maximum in case of mint The rest of herbs showed lower content So mint can be used as a rich source of quercetin from herb

Table 1.1: shows the peak area and retention time of different herbs and their quercetin content in mg/g:

S No Name of the herb Retention

time Peak area Conc.in mg/g

4 Conclusion

It was observed that mint showed highest concentration of quercetin So it can be used as a good source of quercetin Herbs are enormously important in both traditional and western medicine Hence it is essential to analyze the phytochemicals present in the plant through a

potential technique Based upon the HPLC fingerprints, it can be concluded that this analytical technique is a convenient method to identify the presence of numerous constituents present in the methanolic extract The concentration of quercetin in herbs follows the order 10.8 mg/g in mint , 6.15mg/g in coriander, 4.2 mg/g in parsley and 0.12mg/g in lemon grass

5 References

1 Cody,V, Middleton, E and Harborne , J B (1986) Plants flavonoids in Biology and MedicineBiochemical and Structure Activity Relationships Alan R.Liss., NY

2 Hollman , P C H (2001) Evidence for health effects of plant phenols : local or systemic effects J Sci Food Agri., 81: 842-852

3 Havsteen , B (1983) Flavonoids , a class of natural products of high pharmacological potency Biochem Pharma., 32(7): 1141-1148

4 Lakhanpal , P and Rai,K D (2007) Quercetin : A Versatile Flavonoid International Journal of Medical Update , 2(2)

5 Middleton, E (1984) The flavonoids Trends in Pharmaceutical Science 5: 335-338