BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÉ KHOA DƢỢC - ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO BÁO CÁO HẾT MÔN PHƢƠNG PHÁP THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU Lớp cao học khóa 2016 - 2018 Chuyên ngành: Dƣợc liệu – Dƣợc học cổ truyền Học viên cao học: TRÌ KIM NGỌC TP HCM, 05/2017 Chuyên đề 1: Lập hồ sơ liệu thiết lập chất đối chiếu 1_ACV 1/ Hợp chất sau tổng hợp với mục đích thiết lập chất đối chiếu (CĐC) Dự đoán đặc điểm cấu trúc CĐC dựa vào liêu phổ: IR, UV, 1H-NMR, 13C-NMR, MS, CHN analysis ? Biện luận phù hợp phổ với cơng thức dự đốn? 2/ Nêu bước để thiết lập CĐC theo hướng dẫn ASEAN ? BÀI LÀM LẬP HỒ SƠ BỘ DỮ LIỆU THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 1_ACV Xác lập cấu trúc hóa học hợp chất 1_ACV Cấu trúc hóa học 1_ACV xác định phổ UV, IR, MS NMR 1.1 Phổ UV-Vis 1_ACV Phổ UV-Vis 1_ACV đo MeOH có đỉnh hấp thu cực đại 254 nm, đo HCl 0,1 N có đỉnh hấp thu cực đại 255 nm, đo NaOH 0,1 N có đỉnh hấp thu cực đại 254 – 264 nm Acyclovir đo NaOH 0,1 N có đỉnh hấp thu cực đại 264 nm 1.2 Phổ khối lƣợng Phổ EI-MS(-) 1_ACV cho khối lượng phân tử 225, M phù hợp với công thức phân tử Aciclovir C8H11N5O3 (M = 225,21) 1.3 Phổ hồng ngoại Phổ IR ACV xuất đỉnh đặc trưng Aciclovir Các băng hấp thụ đặc trưng phổ IR 1_ACV: - Dao động hóa trị nhóm –OH (3522 cm-1) - Dao động hóa trị nhóm C=C vòng thơm (1574 cm-1, 1542 cm-1, 1483 cm-1) 1.4 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân Phân tích liệu phổ 13C-NMR 1H-NMR cho thấy số lượng vị trí proton, carbon phù hợp với công thức cấu tạo aciclovir ứng với công thức C8H11N5O3 1_ACV C δC (ppm) Proton Aciclovir δH (ppm), δC (ppm) m (J, Hz) Proton δH (ppm), m (J, Hz) 153,9 153,80 151,5 151,40 116,5 116,37 156,9 156,80 137,8 H-8 7,82 s 137,80 H-8 7,82 s NCH2O, 1’ 72,0 H-1’ 5,35 s 72,00 H-1’ 5,35 s CH2O, 3’ 70,4 H-3’ 3,46 s 70,38 H-3’ 3,47 s CH2OCO, 4’ 59,9 H-4’ 3,46 s 59,89 H-4’ 3,47 s H-1 10,66 s H-1 10, 67 s 2-NH H-2 6,52 s H-2 6,52 s 4’-OH H-4’ 4,68 s H-4’ H-1 O HN H2N N N N 1' 2' 4' O OH 3' Câu 2: Các bƣớc để thiết lập chất đối chiếu theo hƣớng dẫn ASEAN Lựa chọn nguyên liệu Đánh giá chất lượng nguyên liệu Đóng gói Xác định độ đồng Xác định giá trị ấn định Xác định độ không đảm bảo đo Bảo quản Chương trình đánh giá lại Nghiên cứu độ ổn định Thông tin chất đối chiếu Phân phối chất đối chiếu Hạn dùng chất đối chiếu 2.1 Nhận xét phân loại chất đối chiếu Tùy vào hàm lượng công bố chất đối chiếu mà chất đổi chiếu phân loại theo mục đích sử dụng khác nhau: ≥ 90,0 % để định tính, xác định tính phù hợp hệ thống, xác định Rs ≥ 99,0 % tạp chất đối chiếu tổng hợp, chất điểm (marker) từ dược liệu ≥ 99,5 % sử dụng cho phép thử định lượng để hiệu chỉnh thiết bị Hàm lượng chất 1_ ACV 90,9% nên phù hợp để thiết lập chất đối chiếu với mục đích định tính, xác định tính phù hợp hệ thống, xác định Rs 2.2 Kết định lƣợng HPLC từ phòng thí nghiệm tham gia Hàm lƣợng (%) STT PTN1 PTN PTN3 90.90 90.90 90.95 90.90 90.90 90.90 90.91 90.91 90.78 90.91 90.90 90.81 90.61 90.79 90.91 90.90 90.91 90.90 90.91 90.91 90.91 90.93 90.61 90.93 90.90 90.93 90.93 2.3 Đánh giá đồng liên phòng thí nghiệm Kết định lượng từ phòng thí nghiệm đánh giá phân tích ANOVA yếu tố Giả thuyết: Ftn < Flt : Độ tinh khiết sắc ký 1_ ACV khơng phụ thuộc vào phòng thí nghiệm tham gia đánh giá Ftn > Flt: Độ tinh khiết sắc ký 1_ ACV phụ thuộc vào phòng thí nghiệm tham gia đánh giá Kết quả: Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance PTN1 817,87 90,87444 0,009928 PTN 817,76 90,86222 0,010569 PTN3 818,02 90,89111 0,003286 MS F P-value F crit 0,238729 0,789476 3,402826 ANOVA Source of Variation SS df Between Groups 0,003785 0,001893 Within Groups 0,190267 24 0,007928 Total 0,194052 26 Nhận xét: Ftn = 0,2387 < Flt = 3,4028: Độ tinh khiết sắc ký 1_ ACV không phụ thuộc vào phòng thí nghiệm tham gia đánh giá 2.4 Xác định giá trị ấn định Phương pháp Robust analysis: Algorithm A (ISO 13528 (2015) - Anex C trang 53-54 Kết quả: Chu kỳ δ = 1,5.s* - 0,022 0,025 x* - δ - 90,88 90,88 /z/ x* + δ - 90,92 90,93 90,61 90,88 90,88 17,93 90,61 90,88 90,88 17,93 90,78 90,88 90,88 7,53 90,79 90,88 90,88 6,92 90,81 90,88 90,88 5,69 90,90 90,90 90,90 0,19 90,90 90,90 90,90 0,19 90,90 90,90 90,90 0,19 90,90 90,90 90,90 0,19 10 90,90 90,90 90,90 0,19 11 90,90 90,90 90,90 0,19 12 90,90 90,90 90,90 0,19 13 90,90 90,90 90,90 0,19 14 90,90 90,90 90,90 0,19 15 90,91 90,91 90,91 0,43 16 90,91 90,91 90,91 0,43 17 90,91 90,91 90,91 0,43 18 90,91 90,91 90,91 0,43 19 90,91 90,91 90,91 0,43 20 90,91 90,91 90,91 0,43 21 90,91 90,91 90,91 0,43 22 90,91 90,91 90,91 0,43 23 90,93 90,92 90,92 1,65 24 90,93 90,92 90,92 1,65 STT 25 90,93 90,92 90,92 1,65 26 90,93 90,92 90,92 1,65 27 90,95 90,92 90,92 2,87 x* 90,90 90,90 90,90 s* 0,015 0,017 0,016 Độ không đảm bảo đo giá trị ấn định: µx = 1,25 x √ = 0,004 Từ kết cho thấy giá trị x* s* không thay đổi sau lần tính, giá trị ấn định chất đối chiếu 90,90 % với độ lệch chuẩn 0,016 độ không đảm bảo đo giá trị ấn định 0,004 Tập hợp giá trị có /z/ < 2,0 => Hàm lượng công bố 90,91% 2.5 Lập hồ sơ chất đối chiếu – Nhãn chất đối chiếu Lập hồ sơ chất đối chiếu - Tên chất chuẩn, số kiểm soát - Các thông tin ban đầu nguyên liệu - Kết kiểm tra nguyên liệu ban đầu (đạt yêu cầu) - Thơng tin đóng lọ - Kết đồng lọ - Kết đánh giá độ đồng gói - Kết kiểm tra bán thành phẩm chất chuẩn, xử lý kết kiểm tra bán thành phẩm chuẩn - Thông tin đề nghị phê duyệt - Người lập hồ sơ, người sốt xét (trưởng phòng), người phê duyệt (lãnh đạo) - Phiếu kiểm nghiệm thành phẩm Ghi chú: Kèm theo toàn hồ sơ kiểm nghiệm liệu phân tích: phổ, sắc ký đồ, số cân, độ pha loãng,… Nhãn chất đối chiếu - Tên chất đối chiếu - Tên đơn vị thiết lập chất đối chiếu - Công thức phân tử - Hàm lượng (ngun trạng) - Khối lượng đóng/lọ - Số kiểm sốt hay số lô - Điều kiện bảo quản ... định Thông tin chất đối chiếu Phân phối chất đối chiếu Hạn dùng chất đối chiếu 2.1 Nhận xét phân loại chất đối chiếu Tùy vào hàm lượng công bố chất đối chiếu mà chất đổi chiếu phân loại...Chuyên đề 1: Lập hồ sơ liệu thiết lập chất đối chiếu 1_ACV 1/ Hợp chất sau tổng hợp với mục đích thiết lập chất đối chiếu (CĐC) Dự đoán đặc điểm cấu trúc CĐC dựa... tạp chất đối chiếu tổng hợp, chất điểm (marker) từ dược liệu ≥ 99,5 % sử dụng cho phép thử định lượng để hiệu chỉnh thiết bị Hàm lượng chất 1_ ACV 90,9% nên phù hợp để thiết lập chất đối chiếu