NGHIÊN cứu đặc điểm THỰC vật và THÀNH PHẦN hóa HỌCTHEO ĐỊNH HƯỚNG tác DỤNG CHỐNG OXY hóa của cây HỒNGRỪNG THU hái tại SAPA, lào CAI

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VĂN THÙY LINH NGHI£N CøU ĐặC ĐIểM THựC VậT Và THàNH PHầN HóA HọC THEO ĐịNH HƯớNG TáC DụNG CHốNG OXY HóA CủA CÂY HồNG RừNG THU HáI TạI SAPA, LàO CAI NGHIấN CU C ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CỦA CÂY HỒNG RỪNG (DIOSPYROS KAKI THUNB VAR SILVESTRIS MAKINO) THU HÁI TẠI SAPA, LÀO CAI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VĂN THÙY LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CỦA CÂY HỒNG RỪNG (DIOSPYROS KAKI THUNB VAR SILVESTRIS MAKINO) THU HÁI TẠI SAPA, LÀO CAI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU - DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Mạnh Tuyển HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực hồn thành luận văn này, em nhận nhiều quan tâm, động viên giúp đỡ tận tình từ thầy cơ, gia đình bạn bè Nhân dịp này, em xin bày tỏ kính trọng lòng biết ơn sâu sắc đến: PGS TS Nguyễn Mạnh Tuyển Thầy trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành luận văn Đồng thời em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: PGS TS Trần Thế Bách, TS Nguyễn Văn Tài hỗ trợ cho em nhiều trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, bạn anh chị môn Dược học cổ truyền, môn Thực vật - Trường đại học Dược Hà Nội, mơn Hóa thực vật I, môn Dược lý - Viện Dược Liệu, Viện sinh thái tài nguyên sinh vật - Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam, Trạm kiểm lâm Núi xẻ - Sapa, Vườn quốc gia Hồng Liên hỗ trợ em suốt q trình nghiên cứu Xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo, tồn thể thầy giáo, cán Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện để em lĩnh hội kiến thức quý giá ngành Dược thời gian qua Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè, người thân ln sát cánh, động viên em hoàn thành luận văn Hà Nội, ngày 30 tháng năm 2019 Học viên Văn Thùy Linh DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt C-NMR 13 Tên đầy đủ Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 H-NMR ALAT ASAT BuOH CAT CC D DPPH ESI-MS (Carbon (13) Nuclear magnetic resonance) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Alanin aminotransferase Aspartat aminotransferase Butanol Catalase Sắc ký cột (Column chromatography) Diospyros 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl Phổ khối lượng ion hóa tia điện EtOAc EtOH GSH GSH - Px IC50 IR LOP MBC MDA MIC MS NMR ROS/RNS/RC (Electrospray ionization mass spectrometry) Ethyl acetat Ethanol Glutathion Glutathion peroxidase Nồng độ ức chế 50% Phổ hồng ngoại (Infrared Spectroscopy) Lipid Oxidation Product Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu Malondialdehyd Nồng độ ức chế tối thiểu Phổ khối (Mass Spectrometry) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear magnetic resonance) Reactive oxygen species/Reactive nitrogen species/Reactive N UV-VIS chlorine species Phổ tử ngoại DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt CK EDTA HDL LDL MCF-7 NBT Tên đầy đủ Creatin-kinase Ethylenediaminetetraacetic acid High-density lipoprotein Low-density lipoprotein Michigan Cancer Foundation-7 Nitro blue tetrazolium SKLM SOD TBA TCA TG Sắc ký lớp mỏng Superoxide dismutase Tert-butyl alcohol Trichloroacetic acid Triglycerid MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 Chương TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN CHI DIOSPYROS L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Diospyros L .3 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.3 Một số loài thuộc chi Diospyros L 1.1.4 Tác dụng sinh học 10 1.1.5 Tổng quan Hồng rừng 1112 1.2 GỐC TỰ DO VÀ CHẤT CHỐNG OXY HÓA 13 1.2.1 Gốc tự 13 1.2.2 Chất chống oxy hóa 1314 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1415 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 1415 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 1415 2.1.2 Thiết bị hóa chất nghiên cứu 1415 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1516 2.2.1 Giám định tên khoa học đặc điểm thực vật nghiên cứu .1516 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 1617 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu - đánh giá kết .2324 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 2425 3.1 VỀ THỰC VẬT 2425 3.1.1 Đặc điểm thực vật 2425 3.1.2 Giám định tên khoa học 2627 3.1.3 Đặc điểm vi phẫu thân Hồng rừng 2627 3.1.4 Đặc điểm phần bột thân Hồng rừng 2930 3.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC, CHIẾT XUẤT VÀ SÀNG LỌC TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO CỦA CAO CÁC PHÂN ĐOẠN 3132 3.2.1 Định tính sơ số nhóm chất hữu Hồng rừng 3132 3.2.2 Chiết xuất 3637 3.2.3 Sàng lọc tác dụng chống oxy hóa in vitro cao phân đoạn dịch chiết phương pháp dọn gốc tự do: 3839 3.3 PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ THỬ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA CỦA MỘT SỐ CHẤT TRONG PHÂN ĐOẠN ĐÃ LỰA CHỌN 4344 3.3.1 Phân lập 4344 3.3.2 Xác định cấu trúc 4950 3.3.3 Thử tác dụng chống oxy hóa chất phân lập phương pháp dọn gốc tự 5659 Chương BÀN LUẬN 6163 4.1 VỀ ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 6163 4.1.1 Đặc điểm hình thái giám định tên khoa học loài nghiên cứu .6163 4.1.2 Đặc điểm vi học loài nghiên cứu 6264 4.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC, CHIẾT XUẤT VÀ SÀNG LỌC TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO CỦA CAO CÁC PHÂN ĐOẠN 6264 4.2.1 Định tính sơ số nhóm chất hữu 6264 4.2.2 Chiết xuất 6264 4.2.3 Sàng lọc tác dụng chống oxy hóa in vitro cao phân đoạn dịch chiết phương pháp dọn gốc tự 6365 4.3 PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ THỬ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA IN VITRO CỦA MỘT SỐ CHẤT TRONG PHÂN ĐOẠN ĐÃ LỰA CHỌN6466 4.3.1 Phân lập, xác định cấu trúc 6466 4.3.2 Thử tác dụng chống oxy hóa chất phân lập phương pháp dọn gốc tự 6668 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .6870 KIẾN NGHỊ 6971 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học số thuộc chi Diospyros L Bảng 2.1 Hỗn hợp phản ứng 1920 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu phương pháp hóa học 3435 Bảng 3.2 Độ ẩm dược liệu hồng mẫu cao 3739 Bảng 3.3 % độ ẩm cao so với dược liệu ban đầu 3839 Bảng 3.4 Khả dọn gốc DPPH cao chiết phân đoạn từ Hồng rừng 3940 Bảng 3.5 Giá trị IC50 mẫu thử mơ hình dọn gốc DPPH 4041 Bảng 3.6 Khả dọn gốc Superoxide cao chiết Hồng rừng .4142 Bảng 3.7 Hoạt tính dọn gốc Superoxide Quercetin 43 Bảng 3.8 Giá trị IC50 mẫu thử mô hình dọn gốc tự Superoxide 4344 Bảng 3.9 Dữ kiện phổ NMR hợp chất I2Đ4,5F5,6 5051 Bảng 3.10 Dữ kiện phổ NMR hợp chất A5Đ4F8 5253 Bảng 3.11 Dữ kiện phổ NMR hợp chất Đ3F5,6 5455 Bảng 3.12 Dữ kiện phổ NMR hợp chất C6N3I4Đ4,5F5,6 .5658 Bảng 3.13 Khả dọn gốc DPPH chất chiết phân đoạn từ Hồng rừng 5759 Bảng 3.14 Khả dọn gốc DPPH Quercetin 5860 Bảng 3.15 Khả dọn gốc Superoxide chất phân lập .5961 Bảng 3.16 Hoạt tính dọn gốc Superoxide Quercetin 6062 Bảng 3.17 Giá trị IC50 mẫu thử mô hình dọn gốc tự Superoxide .6062 Phụ lục 3.5 Phổ 1H-NMR hợp chất A5Đ4F8 (Quercetrin) Phụ lục 3.6 Phổ 13C-NMR hợp chất A5Đ4F8 (Quercetrin) Phụ lục 3.7 Phổ DEPT hợp chất A5Đ4F8 (Quercetrin) Phụ lục 3.8 Phổ ESI-MS (-) hợp chất A5Đ4F8 (Quercetrin) Phụ lục 3.9 Phổ ESI-MS (+) hợp chất A5Đ4F8 (Quercetrin) Phụ lục 3.10 Phổ 1H-NMR hợp chất C6N3I4Đ4,5F5,6 (1A2A) Phụ lục 3.11 Phổ 13C-NMR hợp chất C6N3I4Đ4,5F5,6 (1A2A) Phụ lục 3.12 Phổ HSQC hợp chất C6N3I4Đ4,5F5,6 (1A2A) Phụ lục 3.13 Phổ HMBC hợp chất C6N3I4Đ4,5F5,6 (1A2A) Phụ lục 3.14 Phổ ESI-MS (-) hợp chất C6N3I4Đ4,5F5,6 (1A2A) Phụ lục 3.15 Phổ ESI-MS (+) hợp chất C6N3I4Đ4,5F5,6 (1A2A) Phụ lục 3.16 Phổ 1H-NMR hợp chất Đ3F5,6 (Mearnsetin) Phụ lục 3.17 Phổ 13C-NMR hợp chất Đ3F5,6 (Mearnsetin) Phụ lục 3.18 Phổ ESI-MS (-) hợp chất Đ3F5,6 (Mearnsetin) Phụ lục 3.19 Phổ ESI-MS (+) hợp chất Đ3F5,6 (Mearnsetin) ... dụng thu c có nguồn gốc từ thảo dược chọn đề tài: Nghiên cứu đặc điểm vật thành phần hóa học theo định hướng tác dụng chống oxy hóa Hồng rừng thu hái Sapa, Lào Cai với mục tiêu sau: Mô tả đặc. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VĂN THÙY LINH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO ĐỊNH HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CỦA CÂY HỒNG RỪNG (DIOSPYROS KAKI THUNB... tiêu sau: Mô tả đặc điểm thực vật, đặc điểm vi học giám định tên khoa học Hồng rừng thu hái Sapa, Lào Cai Nghiên cứu thành phần hóa học, chiết xuất, sàng lọc tác dụng chống oxy hóa in vitro lựa