NGHIÊN cứu mối LIÊN QUAN GIỮA NỒNG độ FOLATE, HOMOCYSTEIN và TÌNH TRẠNG GEN MTHFR ở một số PHỤ nữ có bất THƯỜNG SINH sản

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRỊNH THỊ QUẾ Nghiªn cøu mối liên quan nồng độ folate, homocystein tình trạng gen MTHFR số phụ nữ có bất thêng sinh s¶n ĐỀ CƯƠNG DỰ TUYỂN NGHIÊN CỨU SINH HÀ NỘI – 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRỊNH TH QU Nghiên cứu mối liên quan nồng độ folate, homocystein tình trạng gen MTHFR số phụ nữ có bất thờng sinh sản Chuyờn ngnh : Hóa sinh Y học Mã số: 62720112 ĐỀ CƯƠNG DỰ TUYỂN NGHIÊN CỨU SINH Người dự kiến hướng dẫn khoa học GS.TS Tạ Thành Văn Ts.Bs Đoàn Thị Kim Phượng HÀ NỘI – 2016 PHẦN I: BÀI LUẬN VỀ DỰ ĐỊNH NGHIÊN CỨU CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc -BÀI LUẬN VỀ DỰ ĐỊNH NGHIÊN CỨU Họ tên thí sinh : TRỊNH THỊ QUẾ Cơ quan công tác : Bệnh viện Đa khoa MEDLATEC Chuyên ngành dự tuyển : Hóa sinh y học Mã số : 62720112 Từ trở thành bác sỹ, thạc sỹ, mang kiến thức chuyên môn để phục vụ chăm sóc sức khỏe cho người dân, nhận thấy kiến thức y học mênh mơng việc hiểu biết nhiều điều bí ẩn Mỗi gặp phải vấn đề chưa sáng tỏ tự nhủ: phải học nữa, học để tiếp cận mới, để hiểu lý luận khoa học, để có kỹ thực hành Đó lý tơi định làm nghiên cứu sinh Với phát triển ngày phức tạp đời sống xã hội nay, tỷ lệ bất thường sinh sản ngày phát nhiều hơn, sớm Các bất thường sinh sản sảy thai, thai chết lưu (TCL), thai dị tật, vô sinh nhiều nguyên nhân gây ra, phải kể đến nguyên nhân liên quan đến di truyền đột biến nhiễm sắc thể (NST), đột biến gen Sảy thai, TCL,thai dị tật, vô sinh gây nhiều hậu nặng nề cho sức khỏe, tâm lý người mẹ, cho gia đình cho xã hội Do việc tìm ngun nhân, cách phòng tránh khắc phục bất thường sinh sản nói ln vấn đề quan tâm, nghiên cứu Có nhiều cơng trình nghiên cứu nước giới NST trường hợp sảy thai, TCL, thai dị tật, vô sinh phát nhiều loại bất thường NST số lượng cấu trúc ví dụ loại trisomy 13, 18, 21, bất thường thể đa bội, lệch bội… Các bất thường có ảnh hưởng rõ rệt đến kiểu hình nguy sảy thai, TCL, thai dị tật, vô sinh phụ nữ Việc giải mã gen người, phát đột biến gen mang lại nhận định chẩn đoán, theo dõi điều trị bệnh Gen Methylenetetrahydrofolat reductase (MTHFR) gen nằm vùng 36.3 nhánh ngắn nhiễm sắc thể số Gen MTHFR sản xuất enzyme làm chuyển đổi homocysteine (Hcy) thành methionine Nó thủy phân 5,10-methylene THF thành 5-methyl THF 5-methyl THF hoạt động chất trung gian đe chuyển homocystein thành methionine Khi enzyme MTHFR đột biến dẫn đến giảm khả giáng hóa homocystein, làm nồng độ homocysteine tăng mức gây độc cho thể Homocysteine cao gây tình trạng viêm mạch máu làm tăng nguy hình thành cục máu đơng nhỏ gây bất thường sinh sản sẩy thai, thai lưu Sự thủy phân Homocystein thành methionine bị ảnh hưởng tình trạng thiếu acid folic, làm tăng nồng độ Hcy huyết tương Axit folic chứng minh có vai trò quan trọng việc tạo tế bào mới, đặc biệt giai đoạn đầu thai kì Nó đóng vai trò thiết yếu phát triển hệ thần kinh thai tuần đầu thai kỳ Thiếu axit folic ảnh hưởng đến phát triển thai, dẫn đến tượng bất thường sinh sản sẩy thai, thai lưu Một số nghiên cứu đột biến MTHFR gây cục máu đông thành tử cung rau thai, ảnh hưởng đến dòng máu mẹ -nhau thai, cản trở vận chuyển dinh dưỡng quan trọng cho thai nhi phát triển Điều thường xảy sớm thai kỳ, thời kì thai nhi dễ bị tổn thương Để đóng góp cho nghiên cứu bất thường sinh sản, giúp cho việc chẩn đốn xác nguyên nhân điều trị kịp thời, giảm gánh nặng cho gia đình cho tồn xã hội, mong muốn thực nghiên cứu: “Nghiên cứu mối liên quan nồng độ Folate, Homocystein đột biến gen MTHFR (Methylene tetrahydrofolate reductase) nhóm đối tượng có bất thường sinh sản” Đại học Y Hà Nội trường danh tiếng nước Với truyền thống 110 năm xây dựng phát triển, Đại học Y Hà Nội nôi đào tạo nên nhiều nhà khoa học lớn nước giới Hiện nay, Đại học Y Hà Nội nơi tập trung nhiều nhà khoa học có uy tín, có nhiều kinh nghiệm nghiên cứu khoa học vào bậc nước Bên cạnh đó, Trung tâm nghiên cứu Gen Protein Trường nơi trang bị sở vật chất đại bậc sinh học phân tử với đội ngũ nhà khoa học, nhà nghiên cứu giàu kinh nghiệm đào tạo từ quốc gia phát triển giới Nhật Bản, Pháp Tôi đào tạo trở thành bác sỹ đa khoa, trường Đại học Y Hà Nội với tâm phấn đấu vinh dự đứng hàng ngũ lớp thạc sỹ chun ngành Hóa sinh ngơi trường giàu truyền thống này, tơi ln mong ước lựa chọn Đại học Y Hà Nội cho đường học tập, nghiên cứu Sau kết thúc khóa học nghiên cứu sinh này, tiếp tục công việc với vai trò bác sỹ xét nghiệm Tôi chia sẻ kiến thức, kinh nghiệm chun mơn nghiên cứu khoa học cho đồng nghiệp hệ kế cận Tôi hy vọng kiến thức y sinh học phân tử, di truyền mà học thực nghiên cứu giúp tơi đóng góp cho cơng chăm sóc sức khỏe sinh sản phụ nữ Việt Nam Tôi mong tiếp tục thực nghiên cứu khác nữa, để khơng ngừng học tập, khơng ngừng nâng cao kiến thức hồn thiện thân nâng cao chất lượng công việc Đề xuất người hướng dẫn: GS.TS Tạ Thành Văn - Chuyên ngành: Hóa sinh y học Phó hiệu trưởng trường Đại học Y Hà Nội, trưởng mơn Hóa Sinh Trường Đại học Y Hà Nội TS.BS Đoàn Thị Kim Phượng - Bộ môn Y sinh học - Di truyền trường Đại học Y Hà Nội PHẦN II ĐỀ CƯƠNG NGHIÊN CỨU DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TCL : Thai chết lưu NST : Nhiễm sắc thể MTHFR : Methylenetetrahydrofolat reductase BTSS : Bất thường sinh sản ST : Sẩy thai DTBS : Dị tật bẩm sinh TCYTTG : Tổ chức Y tế giới HCY : Homocysteine MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan bất thường sinh sản 1.1.1 Sẩy thai .3 1.1.2 Thai chết lưu 1.1.3 Dị tật bẩm sinh 1.2 Nguyên nhân bất thường sinh sản 1.2.1 Bất thường sinh sản rối loạn vật chất di truyền 1.2.2 Bất thường sinh sản tác nhân môi trường 1.2.3 Bất thường sinh sản bất thường thể bố mẹ 1.3 Vai trò folate, Homocystein gen MTHFR người 1.3.1 Vai trò folate 1.3.2 Vai trò Homocystein 11 1.3.3 Cấu trúc, chức vai trò gen MTHFR 16 1.4 Mối liên quan homocystein, acid folic vitamin B12 19 1.5 Mối liên quan homocystein emzym MTHFR .19 1.6 Các phương pháp xét nghiệm Homocystein, Folate, MTHFR 20 1.6.1 Phương pháp xét nghiệm Homocystein 20 1.6.2 Phương pháp xét nghiệm Folate .23 1.6.3 Các phương pháp phát đột biến gen MTHFR 25 Chương 30 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .30 2.1 Đối tượng địa điểm nghiên cứu 30 2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 30 Nghiên cứu áp dụng nghiên cứu bệnh chứng nên cơng thức tính cỡ mẫu sau: 30 N= 30 (1+r)2 C 30 40 DỰ KIẾN KẾT LUẬN Dựa vào kết nghiên cứu đưa kết luận theo mục tiêu nghiên cứu Nồng độ trung bình folate, homocystein huyết phụ nữ độ tuổi sinh sản Các dạng đột biến, đa hình gen MTHFR Mối liên quan nồng độ folate homocysteine huyết tương số phụ nữ bất thường sinh sản Mối liên quan nồng độ folate homocysteine huyết tương tình trạng gen MTHFR số phụ nữ bất thường sinh sản TÀI LIỆU THAM KHẢO Trương Quang Đạt (2014) “Nghiên cứu thực trạng số bất thường sinh sản huyện Phù Cát - Bình Định thử nghiệm ghi nhận bất thường sinh sản cộng đồng”, Luận án tiến sĩ y học, Đại Học Y Hà Nội, 3-7 Institute of Medicine (1995) Adverse Reproductive Outcomes in Families of Atomic Veterans: The Feasibility of Epidemiologic Studies, National Academy Press, Washington D C., 42 - 43 Trịnh Văn Bảo, Phan Thị Hoan, Trần Đức Phấn (2008) Bất thường bẩm sinh Di truyền Y học, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội, 201 - 211 Dương Thị Tuyết (2006), Nghiên cứu nồng độ Homocystein máu mối liên quan với số số cận lâm sang bệnh nhân đái tháo đường type II, Luận văn thạc sỹ y học, 1-68 Ðặng Vạn Phước, Phan Thị Danh, Nguyễn Hữu Khoa Nguyên (2003) Homocysteine bệnh động mạch vành Y học thành phố Hồ Chí Minh Hội nghị khoa học kỹ thuật lần thứ 20, 7-13 Prasad VVTS, Vilkhoo H (2011) Association of the functional polymorphism C677T in the Methylenetetrahydrofolate Reductase gene with colorectal, thyroid, breast, ovarian, and Cervical Cancer Onkologie 34:422-426 Christina Balander-Gouaille, Teodoro Bottiglieri (2003) Homocysteine related vitamins and neuropsychiatric disorders Stroke Baylor University Medical Center Institute of Metabolic Disease, 134-140 Goyette P, Frosst P, Rosenblatt DS, Rozen R (1995) Seven novel mutation in the Methylenetetrahydrofolate Reductase gene and Genotype/phenotype Correlations in severe Methylenetetrahydrofolate Reductase Deficiency American Jounal of Human Genetics 56: 1052-1059 Chango A, Boisson F et.al (2000) The effect of 677 C>T and 1298A>C mutayion on plasma homocystein and 5,10 methylenetetrahydrofolate Reductase Activity in healthy Subjects British Journal of Nutrition 83:593-596 10 World Health Organization (2011) International Statistical Classification of Diseases and Related Health problem, Geneva (ICD-10), Tenth Revision 11 Bộ Y tế (2009) Hướng dẫn Quốc gia dịch vụ chăm sóc sức khỏe sinh sản, Hà Nội 12 Petrozza J C (2014) Recurrent Early Pregnancy Loss Medscape, Updated: Apr 28, 2014, Accessed May 4, 2014 13 Nguyễn Đức Hinh (2013) Thai chết lưu Bài giảng Sản phụ khoa - tập 1, Nhà xuất Y học, 154 - 161 14 Mohangoo A D et al (2011) Gestational Age Patterns of Fetal and Neonat al Mortality in Europe: Results from the Euro-Peristat Project PLos One, (11), e24727 15 Nguyen R H and A J Wilcox (2005) Terms in reproductive and perinatal epidemiology: Perinatal terms J Epidemiol Community Health, 59(12), 1019 - 21 16 Barfield W D (2011) Standard terminology for fetal, infant, and perinatal deaths Pediatrics, 128(1),177 - 81 17 Gordon A et al (2011) Histological chorioamnionitis is increased at extremes of gestation in stillbirth: a population-based study Infect Dis Obstet Gynecol., 456728 18 Simonet F et al (2010) Individual - and Community - Level Disparities in Birth Outcomes and Infant Mortality among First Nations, Inuit and Other Populations in Quebec Open Womens Health J, 4, 18 - 24 19 Christianson A D et al (2006) Global Report on Birth Defects, March of Dimes 20 Fucic A et al (2009) Spontaneous abortions in female populations occupationally exposed to ionizing radiation Int Arch Occup Environ Health, 81(7), 873 - 21 Wiesel A et al (2011) Maternal occupational exposure to ionizing radiation and birth defects Radiat Environ Biophys, 50(2), 325 - 22 Pflugbeil S (2011) Health Effects of Chernobyl 25 years after the reactor catastrophe, German Affiliate of International Physicians for the Prevention of Nuclear War (IPPNW), 34 - 38 23 Williams P M and S Fletcher (2010) Health effects of prenatal radiation exposure Am Fam Physician, 82(5), 488 - 93 24 Padmaja T et al (2006) Reproductive Epidemiology in Radiographers Exposed to Diagnostic X-ray J Hum Ecol., 20(3), 233 - 235 25 Lawson C C., Rocheleau C M , Whelan E A et al (2012) Occupational exposures among nurses and risk of spontaneous abortion Am J Obstet Gynecol, 206:327, e1 - 26 Weintraub A Y and Eyal Sheiner (2011) Early Pregnancy Loss Bleeding During Pregnancy, Springer, 26 - 40 27 Mattison D R et al (2011) Environmental Exposures and Development Curr Opin Pediatr., 22(2), 208 - 218 28 Ngo A D et al (2006) Association between Agent Orange and birth defects: systematic review and meta - analysis Int J Epidemiol., 35(5), 1220 - 30 29 Sanborn M R et al (2012) OCFP 2012 Systematic Review of Pesticide Health Effects, Ontario College of Family Physicians 30 Hackshaw A., C Rodeck and S Boniface (2011) Maternal smoking in pregnancy and birth defects: a systematic review based on 173.687 malformed cases and 11.7 million controls Hum Reprod Update, 17(5), 589 - 604 31 Hwang B F., Y L Lee, and J J Jaakkola (2011) Air pollution and stillbirth: a population-based case-control study in Taiwan Environ Health Perspect 119(9), 1345 - 32 Moridi M., S Ziaei et al (2014) Exposure to ambient air pollutants and spontaneous abortion J Obstet Gynaecol Res, 40(3), 743-8 33 Hwang B F., J J Jaakkola and H R Guo (2008) Water disinfection byproducts and the risk of specific birth defects: a population-based crosssectional study in Taiwan Environ Health, 7, 23 34 Gilboa S M et al (2012) Association between maternal occupational exposure to organic solvents and congenital heart defects, National Birth Defects Prevention Study, 1997-2002 Occup Environ Med, 69(9), 628-635 35 Morales Suarez Varela M M et al (2011) Parental occupational exposure to endocrine disrupting chemicals and male genital malformations: a study in the Danish National Birth Cohort study Environ Health, 10(1), 36 Vigeh M., K Yokoyama et al (2010) Early pregnancy blood lead and spontaneous abortion Women Health, 50(8), 756 - 66 37 Duong A., C Steinmaus et al (2011) Reproductive and developmental toxicity of formaldehyde: a systematic review Mutat Res, 728(3), 118-38 38 Ness R B et al (1999) Cocaine and tobacco use and the risk of spontaneous abortion N Engl J Med, 340(5), 333 - 39 O'Leary C M et al (2010) Prenatal alcohol exposure and risk of birth defects Pediatrics, 126(4), 843 - 50 40 Bailey B A and R J Sokol (2011) Prenatal alcohol exposure and miscarriage, stillbirth, preterm delivery, and sudden infant death syndrome Alcohol Res Health, 34(1), 86 - 91 41 Greenwood D C et al (2010) Caffeine intake during pregnancy, late miscarriage and stillbirth Eur J Epidemiol, 25(4), 275 - 80 42 Schmidt R J et al (2010) Caffeine, selected metabolic gene variants and risk for neural tube defects Birth Defects Res A Clin Mol Teratol, 88, 560-9 43 Ito T., H Ando et al (2010) Identification of a primary target of thalidomide teratogenicity Science, 327(5971), 1345 - 50 44 Lin S et al (2012) Maternal asthma medication use and the risk of selected birth defect Pediatrics, 129(2), 317 - 24 45 Nakhai - Pour H R et al (2011) Use of nonaspirin nonsteroidal antiinflammatory drugs during pregnancy and the risk of spontaneous abortion Cmaj, 183(15), 1713 - 20 46 Daniel S., G Koren et al (2014) Fetal exposure to nonsteroidal antiinflammatory drugs and spontaneous abortions Cmaj, 186(5), E177-82 47 Crider K S et al (2009) Antibacterial medication use during pregnancy and risk of birth defects: National Birth Defects Prevention Study Arch Pediatr Adolesc Med, 163(11), 978 - 85 48 Weber-Schoendorfer C., C Chambers et al (2014) Pregnancy outcome after methotrexate treatment for rheumatic disease prior to or during early pregnancy: a prospective multicenter cohort study Arthritis Rheumatol, 66(5), 1101-10 49 Bader E., A M Alhaj et al (2010) Malaria and stillbirth in Omdurman Maternity Hospital, Sudan Int J Gynaecol Obstet, 109(2), 144 - 50 Visnovsky J et al (2013) Early Fetal Loss and Chlamydia Trachomatis Infection Gynecol Obstet 3: 181 doi:10.4172/2161-0932.1000181 51 Stothard K J et al (2009) Maternal overweight and obesity and the risk of congenital anomalies: a systematic review and meta-analysis JAMA, 301(6), 636 - 50 52 Felisbino-Mendes, M S., F P Matozinhos et al (2014) Maternal obesity and fetal deaths: results from the Brazilian cross-sectional Demographic Health Survey BMC Pregnancy Childbirth, 14: 53 Medina M, Urdialess L,et al (2001) “ Roles of homocysteine in cell metabolism: old and new functioncs”, Eur J Biochem, (268), pp 82-3871 54 Martínez-Frías ML The Biochemical Structure and Function of Methylenetetrahydrofolate Reductase Provide the Rationale to Interpret the Epidemiological Results on the Risk for Infants With Down Syndrome American Journal of Medical Genetics 146A:1477-1482, 2008 55 Wilcken B, Bamforth F, Li Z, Zhu H, Ritvanen A et.al Geographical and ethnic variation of the 677C>T allele of 5,10 methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR): findings from over 7000 newborns from 16 areas world wide Journal of Medical Genetics 40:619-625, 2003 56 Kölling K, Ndrepepa G, Koch W, Braun S, Mehilli J, Schömig A, Kastrati A Methylenetetrahydrofolate reductase gene C677T and A1298C polymorphisms, plasma homocysteine, folate, and vitamin B12 levels and the extent of coronary artery disease The American Journal of Cardiology 93:1201-1206, 2004 57 Sucker C, Kurschat C, Farokhzad F, Hetzel GR, et.al The TT Genotype of the C677T Polymorphism in the Methylentetrahydrofolate Reductase as a Risk Factor in Thrombotic Microangiopathies: Results From a Pilot Study Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis 15:283-288, 2009 58 Batschauer AP, Cruz NG, Oliveira VC et.al HFE, MTHFR, and FGFR4 genes polymorphisms and breast cancer in Brazilian women.Molecular and Cellular Biochemistry 357:247–253, 2011 59 Yuan JM, Lu SC, Van Den Berg D, Govindarajan S Genetic Polymorphisms in the Methylenetetrahydrofolate Reductase and Thymidylate Synthase Genes and Risk of Hepatocellular Carcinoma Hepatology 46: 749–758, 2007 60 Ueland PM, Hustad S, Schneede J, Refsum H, Vollset SE Biological and clinical implications of the MTHFR C677T polymorphism TRENDS in Pharmacological Sciences 22:195-201, 2001 61 Arpino C, Compagnone E, Cacciatore D et.al MTHFR C677T and A1298C polymorphisms and cerebralstroke in two twin gestations.Childs Nerv Syst 27:665–669, 2011 62 Christensen B, Arbour L, Tran P, Leclerc D et.al Genetic Polymorphisms in Methylenetetrahydrofolate Reductase and Methionine Synthase, Folate Levels in Red Blood Cells, and Risk of Neural Tube Defects American Journal of Medical Genetics 84:151– 157,1999 KẾ HOẠCH TIẾN HÀNH Nội dung 10- 01/2017- công việc 12/2016 6/2018 7- 11- 01- 5- 10/2018 12/2018 04/2019 10/2019 Thu thập tài liệu bổ sung Chuẩn bị dụng cụ, hóa chất Thu thập số liệu Phân tích số liệu sơ Làm sử lý số liệu Phân tích số liệu viết luận văn Làm slide tập báo cáo Báo cáo thức DỰ TRÙ KINH PHÍ Đây đề tài hỗ trợ kinh phí từ đề tài cấp sở bệnh viện ĐK MEDLATEC: Nghiên cứu mối liên quan số số hóa sinh đột biến gen MTHFR bệnh nhân có bất thường sinh sản đến khám bệnh viện ĐK MEDLATEC Phụ lục QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA TỪ MÁU TỒN PHẦN Qui trình tách chiết máy Qiacube sử dụng hóa chất QIAamp DNA Blood Mini Kit Đối tượng Mẫu máu toàn phần, huyết thanh, huyết tương, dịch thể, mẫu máu khô, tế bào nuôi cấy Hóa chất, vật tư tiêu hao - Buffer AL 54ml: biến tính Protein ly giải DNA, gắn DNA lên màng - Buffer AE 60ml: đệm hòa tan giải phóng DNA khỏi cột lọc, lưu giữ DNA - Buffer AW1 95ml: trước sử dụng hóa chất AW1 pha với cồn tuyệt đối theo công thức: 95ml AW1 + 125 ml Ethanol AW1 rửa protein, polyssacharid,… khỏi màng lọc - Buffer AW2 66ml: trước sử dụng AW2 pha với cồn tuyệt đối sau: 66ml AW2 + 160 ml Ethanol AW2 loại bỏ muối dư để tăng sản lượng độ tinh DNA - Ethanol: loại bỏ muối - Proteasa: bổ sung 1,2 ml Protease solvent – phù hợp tách DNA từ mẫu máu, dịch thể Protease dùng để ly giải Protein (bổ sung 1.2 ml Protease solvent Đối với Proteinase K thích hợp cho tách mẫu mơ - Các vật tư tiêu hao: Rotor Adapter, Sample tube, filter-tips 200µl, filter-tips 1000µl đồng Qiagene, ống Eppendort 1,5 mL - Pipet loại 10 µl, 200µl, 1000µl loại đầu có đầu lọc tương ứng - Máy li tâm thường, votex, block nhiệt (56oC) Tiến hành tách chiết Có thể tiến hành tách chiết DNA tự động máy QIACUBE tách chiết thủ công, nội dung chi tiết sau: B1 Bổ sung 20 uL Protease (hoặc proteinase K) vào ống epp 1.5 mL B2 Bổ sung 200 uL mẫu (máu tổng số, huyết thanh, dịch chiết, buffy coat…) vào ống bước (1) vortex B3 Bổ sung 200 uL Buffer AL Vortex 15s (Lưu ý không cho Protease/Proteinase K trực tiếp vào AL) B4 Ủ 56oC/10 phút, lắc dung dịch trình ủ Spin down cho dung dịch lắng hết xuống đáy, khơng dính nắp B5 Bổ sung 200 uL EtOH 100% vào mẫu Invert 15s Spin down B6 Lên cột Ly tâm 8000 rpm/phút phút Loại dịch chảy qua cột, chuyển cột sang ống thu (được cấp kit) B7 Cho 500 uL Buffer AW1 Ly tâm 8000 rpm/phút phút Loại dịch chảy qua cột, thay ống thu (được cấp kit) B8 Cho 500 uL Buffer AW2 Ly tâm 14000 rpm/ phút phút B9 Chuyển cột ly tâm sang ống thu Ly tâm khan tốc độ tối đa (14,000 rpm) phút B10 Chuyển cột sang ống 1.5ml thêm 50 - 200 uL Buffer AE Ủ nhiệt độ phòng phút Ly tâm 8000 rpm/phút phút, thu dịch DNA Phụ luc PHIẾU THU THẬP BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Hà Nội, ngày tháng năm 2016 I Phần hành II III Họ tên bệnh nhân: Tuổi: Địa chỉ: Thông tin lâm sàng - Sản khoa:  Có mang thai  Có  Khơng  Số lần mang thai  Có  Khơng  Số lần sẩy thai  Có  Khơng  Số lần thai chết lưu  Có  Khơng  Số lần mang thai dị tật  Có  Khơng - Bệnh mãn tính:  Tiểu đường  Có  Khơng  Tăng huyết áp  Có  Khơng  Bệnh tim mạch  Có  Khơng Kết thu thập - HA - Kết điện tim - Đã điều trị chưa:  Đã  Chưa Mã XN Folate Homocystein Glucose máu Kết Kết xét nghiệm gen Kiểu gen 677 CC CT TT AA AC CC Mã XN Kiểu gen 1298 Mã XN BS khai thác thông tin BẢN CAM KẾT THỰC HIỆN ĐÚNG NGUYÊN TẮC VỀ ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU Kính gửi: - Hội đồng Đạo đức nghiên cứu Y sinh học - Trường Đại học Y Hà Nội Họ tên chủ nhiệm đề tài: TRỊNH THỊ QUẾ Đơn vị công tác: Bệnh viện Đa khoa MEDLATEC Tên đề tài: “Nghiên cứu mối liên quan nồng độ folate, homocystein tình trạng gen MTHFR số phụ nữ có bất thường sinh sản” Tên đơn vị chủ trì đề tài: Bệnh viện Đa khoa MEDLATEC Tôi xin cam kết thực theo nguyên tắc đạo đức thể đề cương nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Người viết cam kết (Họ tên chữ ký) Trịnh Thị Quế ... homocystein tình trạng gen MTHFR số phụ nữ có bất thường sinh sản Với mục tiêu: Khảo sát nồng độ Folate, Homocystein huyết phụ nữ độ tuổi sinh sản Xác định tình trạng gen MTHFR nhóm phụ nữ sẩy thai, thai... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRỊNH TH QU Nghiên cứu mối liên quan nồng độ folate, homocystein tình trạng gen MTHFR số phụ nữ có bất thờng sinh sản Chuyờn ngnh : Hóa sinh Y... gây bất thường thai sản; dự phòng nguy bất thường thai sản Với lý lợi ích xét nghiệm gen MTHFR, folate homocysteine, thực đề tài: Nghiên cứu mối liên quan nồng độ folate, homocystein tình trạng