Nghiên cứu phân tích một số kháng sinh bêta lac tam trong chế phẩm bằng điện di mao quản

Mục lục ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN 1- TỔNG QUAN 1.1 Vài nét điện di mao quản 1.1.1 Cơ chế trình điện di mao quản 1.1.2 Điện di mao quản vùng 1.1.3 Sắc ký điện động Mixen (MEKC) 1.1.4 Một số ưu điểm CE 1.2 Đại cương kháng sinh β-lactam 1.2.1 Đại cương chung kháng sinh β-lactam 1.2.2 Amoxicilin trihydrat 1.2.3 Kali clavulanat 1.2.4 Cefuroxime axetil 1.2.5 Kết hợp Amoxicilin Kali clavulanat 1.3 Một số phương pháp định lượng kháng sinh b-lactam 1.3.1 Định lượng Penicilin 1.3.2 Định lượng kháng sinh Cephalosporin 1.3.3 Một số chương trình định lượng kháng sinh phương pháp điện di mao quản PHẦN 2- ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Các chế phẩm có hoạt chất 2.1.2 Các chế phẩm kết hợp hai thành phần 2.2 Điều kiện nghiên cứu 2.2.1 Hóa chất chất đối chiếu 2.2.2 Thiết bị - dụng cụ 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Xây dựng phương pháp định lượng Cefuroxime axetil viên nén 2.3.2 Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Amoxicilin Kali clavulanat viên nén bột cốm 2.3.3 Xử lý số liệu thực nghiệm Trang 3 14 15 17 18 18 20 20 21 22 23 23 27 28 30 30 30 30 31 31 31 32 32 34 35 Phần 3-THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 Xây dựng phương pháp CZE để định lượng Cefuroxime axetil viên nén 3.1.1.Lựa chọn điều kiện điện di 3.1.2.Chuẩn bị dung dịch chuẩn 3.1.3 Thẩm định phương pháp định lượng 3.1.4 Kết định lượng Cefuroxime axetil chế phẩm 3.2 Xây dựng phương pháp MEKC để định lượng đồng thời Amoxicilin Kali clavulanat viên nén bột cốm 3.2.1 Lựa chọn điều kiện điện di 3.2.2 Chọn chất nội chuẩn 3.2.3 Chuẩn bị mẫu chuẩn 3.2.4 Thẩm định phương pháp định lượng 3.2.5 Kết định lượng Amoxicilin Kali clavulanat chế phẩm Phần – BÀN LUẬN 4.1 Về điện 4.2 Về ưu điểm phương pháp MEKC 4.3 Về việc xử lý mẫu 4.4 Về dung dịch điện di 4.5 Về chất nội chuẩn Phần – KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận 5.2 Đề xuất TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 38 38 40 40 46 49 49 52 52 53 60 63 63 65 66 66 66 69 69 70 71 Danh mục bảng Trang Bảng 1.1 - Một số kiểu điện di chế tách Bảng 1.2 - Một số chương trình CE định lượng kháng sinh b-lactam Bảng 3.1 - Các hệ đệm dùng để khảo sát phương pháp CZE với Cefu Bảng 3.2 - Diện tích pic điện di đồ nồng độ Cefu tương ứng Bảng 3.3 - Kết xác định độ lặp lại phương pháp CZE định lượng Cefu Bảng 3.4 - Kết xác định độ phương pháp CZE định lượng Cefu Bảng 3.5 - Kết định lượng viên nén Zinnat 125mg Bảng 3.6 - Kết định lượng viên nén Zinmax Bảng 3.7 - Dãy dung dịch khảo sát nồng độ tuyến tính định lượng hỗn hợp Amox Clavu Bảng 3.8 - Diện tích pic Amox chất nội chuẩn mẫu Bảng 3.9 - Diện tích pic Clavu chất nội chuẩn mẫu Bảng 3.10 - Nồng độ Amox Clavu xác định độ lặp lại Bảng 3.11 - Kết xác định độ lặp lại phương pháp Bảng 3.12 - Kết xác định độ với định lượng Amox Bảng 3.13 - Kết xác định độ định lượng Clavu Bảng 3.14 - Kết định lượng viên nén Augmex Bảng 3.15 - Kết định lượng bột cốm Augbactam Bảng 4.1 - Kết kiểm định chuẩn nội với dẫy mẫu có nồng độ Amox thay đổi có nồng độ Clavu (0,35 mg/mL) nồng độ IS (0,055mg/mL) cố định 11 29 38 42 44 45 47 48 53 54 55 57 57 58 59 61 62 68 Danh mục Hình Trang Hình 1.1 - Sự di chuyển ion phân tử mao quản Hình 1.2 - Dòng EOF mao quản silica Hình 1.3 - Thứ tự rửa giải điện di đồ Hình 1.4 - Đổi chiều EOF nhờ chất hoạt động bề mặt cation Hình 1.5 - Sơ đồ hệ thống điện di Hình 1.6 - Quá trình tách chất CZE Hình 1.7 - Cấu trúc Mixen EOF MEKC Hình 3.1 - Phổ hấp thụ UV-VIS Cefuroxime axetil đệm A3 Hình 3.2 - Chồng pic điện di đồ Cefu mẫu chuẩn mẫu thử Hình 3.3 - Chồng pic điện di đồ Amox, Clavu IS mẫu chuẩn mẫu thử Hình 3.4 - Điện di đồ dung dịch chuẩn Cefu dãy nồng độ khảo Hình 3.5 - Quan hệ diện tích pic điện di đồ nồng độ Cefu Hình 3.6 - Điện di đồ mẫu thu từ viên nén Zinnat 125mg Hình 3.7 - Điện di đồ mẫu thu từ viên nén Zinmax Hình 3.8 - Phổ hấp thụ UV-VIS Kali clavulanat hệ đệm A Hình 3.9 - Phổ hấp thụ UV-VIS Amoxicilin trihydrat hệ đệm A Hình 3.10 - Điện di đồ khảo sát khoảng tuyến tính Amox Clavu so với nội chuẩn Hình 3.11 - Quan hệ tỷ lệ diện tích pic Amox chất nội chuẩn nồng độ Amox Hình 3.12 - Quan hệ tỷ lệ diện tích pic Clavu chất nội chuẩn nồng độ Clavu Hình 3.13 - Điện di đồ định lượng viên nén Augmex Hình 3.14 - Điện di đồ định lượng bột cốm Augbactam Hình 4.1 - Điện di đồ Cefu phương pháp CZE điện 25kV Hình 4.2 - Điện di đồ Amox Clavu phương pháp MEKC điện 30kV Hình 4.3 - Điện di đồ CZE hỗn hợp Amox, Clavu chất nội chuẩn 13 15 16 39 41 41 42 43 47 48 50 51 54 55 56 61 62 63 64 65 Các chữ viết tắt Amox Amoxicilin trihydrat Cefu Cefuroxime axetil Clavu Kali clavulanat CZE Điện di mao quản vùng (Capillary Zone Electrophoresis) H% Hệ số thu hồi HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao IS Chuẩn nội MEKC Sắc ký điện động Mixen (Micellar Electrokinetic Chromatography) MeOH Methanol PA Tinh khiết phân tích RSD% Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) SDS Sodium dodecyl sulfat SKS Số kiểm soát Lời cảm ơn Tơi xin bầy tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS.Thái Nguyễn Hùng Thu tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Từ Minh Koóng, thầy Ban Giám hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo sau đại học tạo điều kiện tốt cho thời gian học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Trần Tử An Bộ mơn Phân Tích Trường Đại học Dược Hà Nội tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập làm thực nghiệm Xin trân trọng cảm ơn Ban giám đốc Viện Kiểm Nghiệm, tập thể cán phòng Mỹ Phẩm tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian làm luận văn Cuối xin cảm ơn gia đình bạn bè ln động viên khích lệ, giúp đỡ tơi tận tình Hà Nội, ngày 10 tháng10 năm 2006 Tống Thị Thanh Vượng ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện thị trường thuốc Việt Nam lưu hành nhiều chế phẩm kháng sinh sản xuất nước nhập từ nước với nhiều loại hoạt chất dạng bào chế khác (thuốc tiêm, viên, bột, nước ) Do điều kiện khí hậu nhiệt đới mơi trường sống chưa đảm bảo vệ sinh, bệnh nhiễm khuẩn nhóm quan trọng cấu bệnh học nước ta Vì mà kháng sinh nhóm dược phẩm có tỷ trọng lớn thị trường Việt Nam, có mặt 35% đơn thuốc kê Để đảm bảo hiệu điều trị, an toàn sử dụng, việc quản lý chất lượng thuốc kháng sinh cần thiết Vì cần có phương pháp phân tích có độ tin cậy cao nhằm đáp ứng yêu cầu kiểm soát tốt chất lượng thuốc kháng sinh Cho tới nay, sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phương pháp phân tích hóa lý đa số dược điển quốc tế lựa chọn làm phương pháp để định lượng nhiều kháng sinh [9] Ưu điểm phương pháp có độ lặp lại, độ xác khả tách tốt Đồng thời thiết bị HPLC tích hợp với hầu hết kỹ thuật phát hóa lý có (phổ UVVIS, phân tích điện hóa, phổ MS, NMR ) cho phép nâng cao độ nhạy hạ thấp giới hạn phát phép phân tích Tuy vậy, phương pháp HPLC đòi hỏi sử dụng dung mơi có độ tinh khiết cao, đắt tiền, có nhiều loại ảnh hưởng xấu đến sức khỏe người làm cơng tác phân tích gây nhiễm mơi trường Đó xuất phát điểm việc lựa chọn phát triển phương pháp định lượng kháng sinh dựa kỹ thuật hóa lý khác thay cho HPLC mà thực nghiên cứu Kỹ thuật tách phân tích mà chúng tơi lựa chọn làm sở cho nghiên cứu điện di mao quản (Capillary Electrophoresis - CE) Căn cho lựa chọn số ưu điểm bật CE so với HPLC Trong HPLC, sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo (Reversed-phase liquid chromatography) tương đối hạn chế phân tích chất có khả ion hóa, CE có phạm vi áp dụng rộng nhiều, áp dụng cho phân tích chất ion hóa lẫn chất khơng ion hóa Thêm vào đó, phân tích CE tốn hóa chất HPLC Kỹ thuật CE phần lớn thực dung dịch đệm sử dụng dung mơi hữu cơ, phí vận hành rẻ nhiều đồng thời lại độc hại cho mơi trường người sử dụng Vì kỹ thuật hữu hiệu để thay hay hỗ trợ kỹ thuật sắc ký lỏng nhiều lĩnh vực phân tích, có lĩnh vực nghiên cứu dược Hơn nữa, chuyên luận chung CE quy định Dược điển số nước Hoa Kỳ, Anh, Trung Quốc Tuy nhiên Việt Nam, CE chưa ứng dụng nhiều kinh nghiệm ứng dụng phân tích dược phẩm hạn chế Do nhận định hướng nghiên cứu có ý nghĩa thực tiễn cho công tác nghiên cứu quản lý chất lượng thuốc nước ta Từ phân tích nhằm góp phần nâng cao chất lượng việc xây dựng tiêu chuẩn quản lý thuốc kháng sinh lưu hành thị trường tiến hành thực đề tài: "Nghiên cứu phân tích số kháng sinh β - lactam chế phẩm điện di mao quản" Với mục tiêu sau:  Xây dựng số chương trình điện di phù hợp ổn định để định lượng số kháng sinh β-lactam dạng đơn thành phần hay hỗn hợp  áp dụng chương trình xây dựng vào định lượng số kháng sinh β-lactam số dạng chế phẩm thông dụng PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Vài nét điện di mao quản: 1.1.1 Cơ chế trình điện di mao quản: Điện di mao quản kỹ thuật tách phân tích Việt hố từ thuật ngữ Capillary Electrophoresis, thường gọi tắt CE Nguyên tắc trình tách điện di mao quản dựa sở tính chất điện di khác phần tử chất tan Quá trình xẩy mao quản dung dịch chất điện ly có pH thích hợp, tác dụng điện trường E xác định đặt vào hai đầu mao quản Cơ chế điện di di chuyển phần tử chất tan mao quản tác dụng lực điện trường định (Electric Field Force, viết tắt EFF) tính chất dòng chảy điện thẩm (Electro-Osmotic Flow, viết tắt EOF) EOF loại dòng chảy khối chất lỏng mao quản Nó có quan hệ mật thiết với lớp điện tích thành mao quản EOF định thời gian tồn chất tan mao quản Nó tồn bao trùm lên dòng di chuyển chất tan, nghĩa chất tan di chuyển dòng [15] Hình 1.1 - Sự di chuyển ion phân tử mao quản Thế tạo điện trường E đặt vào hai đầu mao quản dùng kỹ thuật CE lớn, thông thường từ 10 - 30 kV Chính lực điện trường làm động lực cho phần tử chất tan di chuyển theo hướng định chất có điện tích độ lớn khác di chuyển với tốc độ khác Do mà tạo nên tách chất phân tích Mao quản sử dụng CE thường có độ dài từ 25 đến 100 cm, đường kính (id) 25 - 100 µm Loại mao quản có đường kính khoảng 50 - 75µm thích hợp hiệu ứng nhiệt nhỏ, dễ khống chế nhiệt độ mao quản Mao quản chế tạo từ nhiều vật liệu khác nhau, phổ biến silica nung chảy (fused silica) Trên thực tế hầu hết nghiên cứu thực CE tiến hành loại mao quản Đây loại mao quản sử dụng nghiên cứu Do chúng tơi trình bày kỹ chế trình điện di xảy với mao quản silica nung chảy[4],[7] 1.1.1.1 Dòng điện thẩm: Dòng điện thẩm (EOF) Việt hố từ thuật ngữ Electro-osmotic flow Electroendosmotic flow Trong CE dòng điện thẩm EOF thành phần tạo nên di chuyển toàn dung dịch mao quản bắt nguồn từ điện tích bề mặt thành mao quản  Nguồn gốc EOF: Khi điện di với mao quản silica, nhóm silanol (SiOH) thành mao quản giải phóng H+ vào dung dịch bề mặt thành mao quản P P mang điện tích âm Q trình giải phóng H+ phụ thuộc vào số cân P P K Với mao quản silica, khó xác định xác trị số K, thực nghiệm rõ dòng EOF có giá trị đáng kể pH dung dịch Các vật liệu khơng ion hố Teflon dùng làm mao quản cho dòng EOF hấp 59 Bảng 3.13 - Kết xác định độ định lượng Clavu Nồng độ chuẩn thêm vào (mg/mL) Số mẫu 0,050 0,150 0,275 Nồng độ Nồng độ tìm chuẩn tìm lại lại trung bình (mg/mL) (mg/mL) RSD (%) H (%) 0,050 1,80 99,2 0,149 1,73 99,5 0,273 1,62 99,3 0,050 0,049 0,049 0,051 0,049 0,147 0,152 0,148 0,147 0,152 0,273 0,280 0,268 0,271 0,273 Kết bảng 3.12 3.13 cho thấy độ tìm lại Amox biến thiên từ 102,0% đến 107,6% Clavu biến thiên từ 99,2% đến 99,5%, RSD nhỏ 2% chứng tỏ phương pháp có độ cao, áp dụng thực nghiệm xác định Amox Clavu chế phẩm 60 3.2.5 Kết định lượng Amoxicilin Kali clavulanat chế phẩm: 3.2.5.1 Kết định lượng viên nén Augmex:  Chuẩn bị mẫu thử: Khối lượng 20 viên Augmex xác định 20,2460g Do khối lượng trung bình viên là: 20,2460/20=1,0123g Nghiền 20 viên thành bột mịn, trộn Pha mẫu thử sau: Cân lượng bột viên nghiền mịn là: T = 0,2030g; T2 = 0,2040g R R R R T = 0,2060g Hoà tan định mức thành 100mL theo bước: hoà tan với R R 30mL đệm A, cho vào bình định mức 100mL, lắc siêu âm phút, thêm dung dịch đệm vừa đủ đến vạch Mẫu thử lọc qua màng lọc 0,2µm, dịch lọc thu đem điện di Tiến hành chạy điện di theo điều kiện chọn lựa thu điện di đồ hình 3.13 Căn vào diện tích pic điện di đồ tính nồng độ hoạt chất từ xác định hàm lượng hoạt chất chế phẩm bảng 3.14 61 Hình 3.13 - Điện di đồ định lượng viên nén Augmex Bảng 3.14 - Kết định lượng viên nén Augmex Mẫu thử Hàm lượng hoạt chất viên (mg) % hàm lượng so với nhãn Amoxicilin Kali Clavulanat Amoxicilin Kali Clavulanat T1 514,0 124,5 102,8 99,6 T2 507,5 123,1 101,5 98,5 T3 521,0 123,4 104,2 98,7 R R R 3.2.5.2 Kết định lượng bột cốm Augbactam Chuẩn bị mẫu thử: Khối lượng gói bột Augbactam xác định 16,4140g Do khối lượng trung bình gói bột là: 16,4140/5=3,2828g 62 Trộn gói bột này, pha mẫu thử sau: Cân lượng bột trộn là: T =1.3210g; T =1,3160g T =1,3170g Hoà tan R R R R R R định mức thành 100mL theo bước: Hoà tan với 30ml đệm A, cho vào bình định mức, lắc siêu âm phút, thêm dung dịch đệm vừa đủ đến vạch Mẫu thử lọc qua màng lọc 0,2µm, dịch lọc thu đem điện di Tiến hành điện di theo điều kiện chọn, thu điện di đồ hình 3.14 Căn vào diện tích pic tính nồng độ hoạt chất mẫu thử từ tính hàm lượng hoạt chất chế phẩm bảng 3.15 Bảng 3.15 - Kết định lượng bột cốm Augbactam Hàm lượng hoạt chất gói (mg) M Amoxicilin Kali Clavulanat % hàm lượng so với nhãn Amoxicilin Kali Clavulanat T1 258,7 61,6 103,5 98,6 T2 260,5 61,8 104,2 98,8 T3 259,0 62,0 103,6 99,1 R R R Hình 3.14 - Điện di đồ định lượng bột cốm Augbactam 63 Phần BÀN LUẬN 4.1 Về điện : Trong phương pháp điện di, điện áp vào hai đầu mao quản nhân tố định trình phân tích Thời gian di chuyển t M chất R R phân tích tỷ lệ nghịch với điện áp vào hai đầu mao quản: điện áp vào đầu mao quản lớn thời gian phân tích ngắn ngược lại Kết khảo sát với điện khác cho hai phương pháp CZE MEKC máy Hewlett Packard 3D P P CE Bộ mơn Hố Phân tích - Trường Đại học Dược Hà Nội cho thấy: thời gian di chuyển áp điện cao rút ngắn cách đáng kể Cụ thể với Cefu thời gian di chuyển 3,34 phút điện di điều kiện khác điện 25kV (hình 4.1) Hình 4.1-Điện di đồ Cefu phương pháp CZE điện 25kV 64 Cũng tương tự điện di điện 30kV với hỗn hợp Amox Clavu thời gian di chuyển Amox 2,67 phút, Clavu 3,32 phút chất nội chuẩn 3,82 phút (hình 4.2) Hình 4.2 - Điện di đồ Amox Clavu phương pháp MEKC điện 30kV Trong trình nghiên cứu phần đèn UV máy điện di Trường Đại học Dược Hà Nội phải sửa chữa nên phải tiếp tục làm thực nghiệm máy tương tự phòng Mỹ phẩm-Viện Kiểm Nghiệm Nhưng máy không áp điện cao nên tiến hành chọn điện 15kV cho phương pháp CZE 18kV cho phương pháp MEKC cho nghiên cứu Các khảo sát tiến hành điều kiện 65 Như tiến hành phân tích với điện cao để rút ngắn thời gian phân tích thiết bị cho phép Tuy nhiên cần khảo sát tiếp độ xác độ phép phân tích điều kiện 4.2 Về ưu điểm phương pháp MEKC: Chúng thử nghiệm sử dụng phương pháp CZE để định lượng hỗn hợp Amox Clavu Kết thu cho thấy đường phương pháp CZE khơng ổn định, nhiễu đường lớn (hình 4.3) khó áp dụng để định lượng hỗn hợp Việc không ổn định phần làm việc vùng bước sóng ngắn (214nm) nên nhiễu lớn bước sóng 283nm áp dụng cho Cefu Hình 4.3 - Điện di đồ CZE hỗn hợp Amox, Clavu chất nội chuẩn 66 Vì chúng tơi lựa chọn phương pháp MEKC để hạn chế nhiễu đường giúp phép đo ổn định Thực nghiệm cho thấy sử dụng MEKC để phân tích pic thu có nhiễu đường nhỏ, kết phân tích thu tốt 4.3 Về việc xử lý mẫu: Mẫu phương pháp CE xử lý đơn giản nhanh chóng Chúng tơi sử dụng dung dịch điện ly làm dung môi để xử lý mẫu Mẫu chuẩn bị phương pháp hoà tan trực tiếp 4.4 Về dung dịch điện di nền: Theo Pajchel Genowefa cộng [22], dung dịch điện ly sử dụng 0,02 M borat-phosphat 1,44%SDS Dựa nguyên tắc dung dịch điện ly đơn giản tốt, tiến hành thử nghiệm phân tích chọn dung dịch điện ly 0,03M Natri tetraborat 0,433%SDS Kết phân tích thu tốt Như chúng tơi đơn giản dung dịch điện ly nền, phần quan trọng phương pháp CE 4.5 Về chất nội chuẩn Về nguyên tắc, chất nội chuẩn phải có pic tách hoàn toàn khỏi chất nghiên cứu thời gian di chuyển gần chất khảo sát tốt Như muốn dùng chất nội chuẩn để định lượng cho chất hỗn hợp tốt pic chất nội chuẩn phải nằm pic 67 chất nghiên cứu Vì điều kiện hoá chất thời gian hạn chế nên chúng tơi khơng có nhiều hội thử nghiệm sử dụng nhiều hợp chất khác tư cách chất nội chuẩn Chúng so sánh kết sử dụng Clavu chất nội chuẩn thứ hai bên cạnh chất nội chuẩn sử dụng (IS) acid para aminobenzoic Pha dẫy chuẩn có nồng độ Amox thay đổi từ 0,4mg/mL đến 1,5 mg/mL có chứa lượng cố định Clavu với nồng độ 0,35mg/mL lượng cố định acid para aminobenzoic với nồng độ 0,055 mg/mL Tiến hành điện di mẫu mẫu lần Lấy mẫu có nồng độ nằm khoảng thang chuẩn mẫu thử Tính tốn kết mẫu theo đường chuẩn mẫu lại dẫy Kết trình bày bảng 4.1 Bảng 4.1 - Kết kiểm định chuẩn nội với dẫy mẫu có nồng độ Amox thay đổi có nồng độ Clavu (0,35 mg/mL) nồng độ IS (0,055mg/mL) cố định Diện tích pic Amox trung bình Diện tích pic IS S Amox /S Clavu trung bình (S Amox ) Diện tích pic Clavu trung bình (S Clavu ) 0,4 190,98 182,30 131,43 1,0476 1,4531 0,6 323,55 190,38 133,68 1,6995 2,4204 0,7 394,20 195,08 137,18 2,0208 2,8737 560,28 189,48 141,45 2,9570 3,9609 1,2 673,23 191,68 141,23 3,5123 4,7670 1,5 811,68 196,03 142,53 4,1407 5,6950 Nồng độ Amox (mg/mL) R R R R R R R S Amox /S IS R R R (S IS ) R R 68 Mẫu thử (0,8 mg/mL) 436,90 194,58 Các hệ số đường chuẩn y=a.C+b 136,68 2,2454 3,1966 a 2,8524 3,8283 b -0,0042 0,0829 0,79 0,81 -1,25 1,25 Nồng độ mẫu thử tính theo đường chuẩn (mg/mL) Sai số tương đối (%) Kết cho thấy sai số tương đối so với giá trị thực mẫu không lớn 1,5% Do sử dụng acid para aminobenzoic làm chất nội chuẩn cho Clavu lẫn Amox khảo sát thẩm định phương pháp Tuy nhiên nhận thấy sai khác kết tính theo chất coi nội chuẩn khơng nhiều theo chiều hướng khác Do chọn hợp chất có thời gian di chuyển nằm hoạt chất nghiên cứu chắn có kết tốt Tỷ lệ chất nội chuẩn so với chất nghiên cứu cần khảo sát kỹ cho tỷ lệ diện tích có tương quan tuyến tính cách chặt chẽ với nồng độ chất nghiên cứu 69 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận: Từ kết thực nghiệm thu được, đạt mục tiêu đề xây dựng chương trình điện di mao quản để định lượng số kháng sinh β-lactam số chế phẩm viên nén bột cốm đủ tin cậy, nhanh chóng thuận tiện Các kết thu sau: Đã xây dựng chương trình điện di phù hợp ổn định để định lượng số kháng sinh β-lactam gồm:  Quy trình định lượng kháng sinh cefuroxime axetil : * Sử dụng phương pháp điện di mao quản vùng (CZE) * Dung dịch điện ly nền: Natri citrat 20mM + natri tetraborat 15mM, pH=9,1 * Điện thế: 15kV * Nhiệt độ mao quản: 25oC P P * Bước sóng: 283nm * Điều kiện tiêm mẫu: áp suất 15mbas, thời gian 5s * Cột silica nung chảy Agilent cung cấp có l = 56cm, Id = 50µm  Quy trình định lượng đồng thời hỗn hợp amoxicilin kali clavulanat * Sử dụng phương pháp sắc ký điện động Mixen (MEKC) * Dung dịch điện ly nền: Natri borat 30mM + SDS 15mM, pH=8,6 * Điện thế: 18kV * Nhiệt độ mao quản: 25oC P P * Bước sóng: 214nm * Điều kiện tiêm mẫu: áp suất 15mbas, thời gian 5s 70 * Cột silica nung chảy Agilent cung cấp có l=56cm, Id=75µm Đã áp dụng hai quy trình vừa xây dựng để định lượng hoạt chất amoxicilin, kali clavulanat cefuroxime axetil số chế phẩm thuốc viên bột cốm lưu hành thị trường như: viên nén Zinnat 125mg, Zinmax, Augmex bột cốm Augbactam 5.2 Đề xuất : Đề nghị Hội đồng Dược điển tiến hành khảo sát phương pháp CE nhiều để áp dụng CE phương pháp phân tích có độ tin cậy cao vào kiểm tra chất lượng thuốc Cần tiếp tục nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích CE cho thuốc hỗn hợp phổ biến khác nhằm nâng cao lực quản lý chất lượng thuốc, đảm bảo cho việc sử dụng thuốc an toàn hợp lý 71 I- TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: 1.Trần Tử An (2006), Đánh giá tương đương sinh học chế phẩm hai thành phần Amoxicilin acid Clavulanic, Đề tài nghiên cứu cấp bộ, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr.15-17 Trần Thị Hồng Anh (1993), Nghiên cứu áp dụng phương pháp hố học hóa lý vào định lượng số kháng sinh vòng β-lactam, Luận văn tốt nghiệp trợ lý giảng dạy nghiên cứu khoa học, tr.5-8 Bộ mơn Hóa dược(2004), Hố dược, Trường Đại học Dược Hà Nội, tập 2, tr.150,151 Bộ mơn Hố phân tích (2006), Hố phân tích I,II, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr.2 Bộ mơn Hố phân tích (2004), Kiểm nghiệm thuốc, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr.127, 133 Bộ Y tế (2001), Dược điển Việt Nam 3, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr.20 Phạm Luận (1999), Cơ sở lý thuyết sắc ký điện di mao quản hiệu suất cao, Trường đại học Tổng hợp quốc gia Hà Nội, tr.123-128 Phạm Thiệp, Vũ Ngọc Thuý (2003), Thuốc biệt dược & cách sử dụng, NXB Y học, tr 218 Tiếng Anh: Aszalos A.(1986), Modern analysis of antibiotics, Department of Heath and Human services-Food and Drug administration, p.263, 273, 275, 351 10 Choi O.K.; Song Y.S (1997), Determination of cefuroximeeeee levels in human serum by micellar electrokinetic capillary chromatography with direct sample injection, J.Pharm Biomed.Anal, Vol 15, p.12651270 11 Cutting J.H.; Hurlbut J.A.; Sofos J.N (1997), Quantitation of penicilin 72 G in medicated premix feeds by micellar electrokinetic capillary chromatography, J.AOAC Int, Vol.80, p.951-955 12 Fanali Salvatore (1996), Identification of chiral drug isomers by capillary Electrophoresis, J.chromatography A, Vol.735, p.77-121 13 Flurer C.L.; Wolnik K.A (1994), Chemical profiling of pharmaceuticals by capillary electrophoresis in the determination of drug origin, J.Chromatogr.A, Vol 674, p 153-163 14 Hans Bundgaard and Kilver (1972), A new spectrophotometric method for the determination of Penicilin, Journal of pharmacy and pharmacology, p.790-794 15 Heifer D (2000), High performance capillary elect., A introdution, Agilent Technologies, p.61-77 16 Li Y.M.; Van Schepdael A.; Zhu Y.; Roets E.; Hoogmartens J (1998), Development and validation of amoxicillin determination by micellar electrokinetic capillary chromatography, J.Chromatogr.A, Vol 812, p.227-236 17 Lunn G (2004), Capillary electrophoresis methods for pharmaceutical analysis, John Wiley & Sons, p 109-112, 315-317, 378 18 Merck & Co., Inc, The Merck Index (1996) 12th Edition, p.97,324,395 P R P R 19 Mrestani Y.; Neubert R.; Schiewe J.; Hartl A (1997), Application of capillary zone electrophoresis in cephalosporin analysis, J.Chromatogr.B, Vol 690, p 321-326 20 Nishi H.; Tsumagari N.; Kakimoto T.; Terabe S.(1989), Separation of β-lactam antibiotics by micellar electrokinetic chromatography, J.Chromatogr, Vol 477, p 259-270 21 Nishi H.; Fukuyama T.; Matsuo N (1990), Separation and determination 73 of aspoxicillin in human plasma by micellar eletrokinetic chromatography with direct sample injection, J.Chromatogr.A, Vol.515, p.245-255 22 Pajchel G.; Krsysztof Pawlowski.; Stefan Tyski (2002), CE versus LC for simultaneous determination of amoxicilin/clavulanic acid and ampicilin/sulbactam in pharmaceutical formulations fof injections, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Vol.29, p.75-81 23 Pajchel G.; Stefan Tyski (2003), Application of MEKC for determination of ticarcillin and clavulanic acid in Timentin intravenous preparation, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Vol 32, p 59-69 24 Riley C.M.; Fell A.F (1996), Development and validation of analytical methods, Elsevier Science Ltd, p 9-71; 247-289 25 Sciacchitano C.J.; Mopper B.; Specchio J.J (1994), Identification and separation of five cephalosporins by micellar electrokinetic chromatography, J.Chromatogr.B, Vol 657, p 395-399 26 Shintani H.; Pholonsky J (1997), Handbook of capillary electrophoresis applications, Blackie academic & professional, p 158 27 USP XXVI (2003), p 2439-2442 28 Vidal (1996), p.141-142 ... chuẩn quản lý thuốc kháng sinh lưu hành thị trường tiến hành thực đề tài: "Nghiên cứu phân tích số kháng sinh β - lactam chế phẩm điện di mao quản" Với mục tiêu sau:  Xây dựng số chương trình điện. .. chế nhiệt độ mao quản để đảm bảo thu kết phân tích tốt 1.2 Đại cương kháng sinh β-lactam 1.2.1 Đại cương chung kháng sinh β-lactam: 1.2.1.1 Cấu trúc hóa học: Các kháng sinh β-lactam có chứa phân. .. cho mao quản 1.1.2 Điện di mao quản vùng : 1.1.2.1.Cơ sở điện di mao quản vùng: Điện di mao quản vùng (Capillary Zone Electrophoresis - CZE) phương pháp phân tích kỹ thuật CE, tính đơn giản chế