tiểu luận gốc tự do và chất chống oxy hóa bài dịch chủ đề bắt buộc và nhận xét Hiệu quả của vitamin chống oxy hóa C và E trong việc giảm kích thước vùng nhồi máu cơ tim ở bệnh nhân đã nong mạch vành qua da (thử nghiệm PREVEC): nghiên cứu thử nghiệm với thử nghiệm mù đôi ngẫu nhiên có kiểm soát bài dịch chủ đề tự chọn và nhận xétNhững ảnh hưởng của axit lascorbic và alphatocopherol đến các thông số sinh hóa của stress oxy hóa gây ra khi bơi trong huyết thanh của chuột lang.
Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ mơn Hóa ĐC - Vô Tiểu luận Gốc tự do&Chất chống oxy hóa Mã bài: AO-12 Họ tên: Nguyễn Thế Phương Mã HV: 1811048 Khóa: CH23 Chun ngành: Cơng nghệ dược phẩm bào chế thuốc Hà Nội, tháng / 2019 MỤC LỤC I PHẦN CHỦ ĐỀ BẮT BUỘC 1.1 Bài dịch Tập tin PDF tạm thời có nội dung tương ứng với báo chấp nhận xuất Phiên PDF đầy đủ toàn văn (HTML) sớm cung cấp Hiệu vitamin chống oxy hóa C E việc giảm kích thước vùng nhồi máu tim bệnh nhân nong mạch vành qua da (thử nghiệm PREVEC): nghiên cứu thử nghiệm với thử nghiệm mù đơi ngẫu nhiên có kiểm sốt Trials 2014, 15:192 doi:10.1186/1745-6215-15-192 Ramón Rodrigo (rrogrigo@med.uchile.cl) Daniel Hasson (danielhasson2@gmail.com) Juan C Prieto (jprieto@med.uchile.cl) Gastón Dussaillant (gdussaillant@redclinicauchile.cl) Cristóbal Ramos (kristobalramos@gmail.com) Lucio Leon (lleoncl@yahoo.com) Javier Gárate (javier_garate@hotmail.com) Nicolás Valls (nvallsj@ug.uchile.com) ISSN Loại báo Ngày nộp Ngày chấp nhận Ngày xuất Đường dẫn báo 1745-6215 Nghiên cứu thử nghiệm 27 / / 2013 / / 2014 29 / / 2014 http://www.trialsjournal com/content/15/1/192 Bài viết tải xuống, in phân phát miễn phí với mục đích sử dụng (xem thông báo quyền bên dưới) Những báo Trials liệt kê Pubmed lưu trữ Pubmed Central Để biết thông tin việc xuất nghiên cứu bạn Trials tạp chí BioMed Central bất kỳ, truy cập vào đường dẫn http://www trialjournal.com/authors/instructions/ Để biết thông tin ấn phẩm BioMed Central khác, truy cập vào đường dẫn http://www.biomedcentral.com/ © 2014 Rodrigo et al Đây báo truy cập mở phân phối theo điều khoản Giấy phép ghi nhận sáng tạo (http://creativecommons.org/ licenses /by/2.0), cho phép sử dụng, phân phối chép lại không hạn chế hồn cảnh nào, miễn gốc có thơng tin Hiệu vitamin chống oxy hóa C E việc giảm kích thước vùng nhồi máu tim bệnh nhân nong mạch vành qua da (thử nghiệm PREVEC): nghiên cứu thử nghiệm với thử nghiệm mù đơi ngẫu nhiên có kiểm sốt Ramón Rodrigo 1* * Đồng tác giả Email: rrogrigo@med.uchile.cl Daniel Hasson Email: danielhasson2@gmail.com Juan C Prieto 1,2 Email: jprieto@med.uchile.cl Gastón Dussaillant Email: gdussaillant@redclinicauchile.cl Cristóbal Ramos Email: kristobalramos@gmail.com Lucio Leon Email: lleoncl@yahoo.com Javier Gárate Email: javier_garate@hotmail.com Nicolás Valls Email: nvallsj@ug.uchile.com Juan G Gormaz Email: jgormaz@med.uchile Chương trình Dược lý Phân tử Lâm sàng, Viện Khoa học Y sinh, Khoa Y, Đại học Chile, Santiago, Chile Khoa Tim mạch, Bệnh viện Lâm sàng Đại học Chile, Santiago, Chile Khoa Chẩn đốn hình ảnh, Bệnh viện Lâm sàng Đại học Chile, Santiago, Chile Trung tâm tim mạch, Bệnh viện Lâm sàng San Borja Arriarán, Santiago, Chile Tóm tắt Nền tảng nghiên cứu Nhồi máu tim cấp (AMI) nguyên nhân hàng đầu gây tử vong toàn giới Stress oxy hóa có liên quan đến tượng chấn thương tái tưới máu sau thiếu máu cục AMI Có ý kiến cho tái tưới máu góp phần tạo lên khoảng 50% kích thước cuối vùng nhồi máu tim, phần tổn thương có khả ngăn ngừa Do đó, chúng tơi cho tăng cường chất chống oxy hóa thơng qua bổ sung vitamin C E giúp chống lại chấn thương tái tưới máu sau thiếu máu cục bộ, nhờ làm giảm kích thước vùng nhồi máu Thử nghiệm PREVEC (Ngăn ngừa tổn thương tái tưới máu liên quan đến nong tạo hình mạch vành qua da sau nhồi máu tim cấp) tìm cách đánh giá xem vitamin chống oxy hóa C E có làm giảm kích thước vùng nhồi máu bệnh nhân bị nhồi máu động mạch vành sau nhồi máu tim cấp hay không Phương pháp/Thiết kế nghiên cứu Đây thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên, 1:1, mù đôi, giả dược có kiểm sốt Nghiên cứu diễn hai trung tâm Chile: Bệnh viện lâm sàng Đại học Chile Bệnh viện lâm sàng San Borja Arriarán Đối tượng nghiên cứu 134 người trưởng thành bị nhồi máu tim cấp tính định điều trị nong tạo hình mạch vành qua da Thử nghiệm thực nghiên cứu sơ bộ, đối tượng nghiên cứu tiêm truyền vitamin C liều cao uống vitamin E (nhóm điều trị vitamin) sử dụng giả dược (nhóm đối chứng) q trình nong mạch vành Sau đó, nhóm điều trị Vitamin uống vitamin C E, nhóm đối chứng uống giả dược 84 ngày sau nong mạch vành Kết chính: kích thước vùng nhồi máu, đánh giá cộng hưởng từ tim mạch (CMR) vào ngày thứ 84 sau nong mạch vành Kết thứ phát: phân suất tống máu, đánh giá vào ngày thứ 84 sau nong mạch vành CMR báo sinh học (biomarkers) stress oxy hóa, tình trạng chống oxy hóa, tổn thương tim viêm, đánh giá thời điểm trước phẫu thuật, bắt đầu tái tưới máu, đến sau tái thông mạch, xuất viện Bàn luận Việc tái tưới máu sau thiếu máu cục xảy trình nong mạch vành biết làm tăng kích thước vùng nhồi máu tim Những lợi ích việc bảo vệ tim mạch vitamin C liều cao kết hợp với vitamin E chưa nghiên cứu đầy đủ Thử nghiệm PREVEC tìm cách xác định phù hợp điều trị sử dụng vitamin C E nhằm chống lại tổn thương tái tưới máu trình phẫu thuật nong mạch vành Việc tuyển chọn bệnh nhân bắt đầu vào tháng năm 2013 Thử nghiệm lên kế hoạch kết thúc vào tháng năm 2016 Đăng ký tham gia thử nghiệm ISRCTN56034553 Từ khóa Nong tạo hình mạch vành qua da, tái tưới máu sau thiếu máu cục bộ, stress oxy hóa, Vitamin C, Vitamin E, nhồi máu tim cấp Tổng quan Nong tạo hình mạch vành qua da (PCA) tiên phát công nhận cách hữu hiệu để phục hồi lưu lượng máu vào mạch vành ca nhồi máu tim cấp (AMI) Phục hồi tim hạn chế mở rộng kích thước vùng nhồi máu chế mà nhờ bệnh nhân bị nhồi máu tim có ST chênh lên (STEMI) hưởng lợi từ tái tưới máu [1] Mặc dù có tiến quan trọng điều trị thuốc phương pháp tái tưới máu, suy tim hậu mặt chức nhồi máu tim cấp - tiên lượng xấu lâu dài bệnh nhân mạch vành [2] Trong hậu khác, chức toàn thể thất trái xem yếu tố tiên lượng quan trọng sau bị AMI Các phương pháp khác thử nghiệm nhằm bảo tồn chức tâm thất trái giảm kích thước vùng nhồi máu bệnh nhân bị STEMI trải qua PCA [3,4], không đạt hiệu lâm sàng mong muốn Hiện nay, người ta chấp nhận hình ảnh cộng hưởng từ tim mạch (CMR) tiêu chuẩn vàng để đo đạc kích thước vùng nhồi máu liên quan đến AMI thực hành lâm sàng [5,6,7,8] thử nghiệm lâm sàng [9] CMR giúp đo mơ xác phân suất tống máu, thể tích thất khối lượng tim [5] Kích thước vùng nhồi máu coi tiêu chí quan trọng giúp đánh giá kết thử nghiệm nhóm hiệp hội ESC/ACCF/AHA/WHF việc xác định nhồi máu tim [10] tiêu chí thường dùng thử nghiệm đánh giá cải thiện tổn thương tái tưới máu [11,12,13 ,14,15], giá trị vừa phản ánh ảnh hưởng lẫn yếu tố sinh lý trao đổi chất, vừa cung cấp thước đo trực tiếp lượng tế bào tim bị [16] Phép đo trực tiếp đặc biệt có giá trị trường hợp AMI, phép đo khác, ví dụ tượng vùng tim bị choáng vùng tim ngủ đơng, khơng phản ánh mức độ bị làm tổn thương lâu dài tim Tổn thương tái tưới máu có biểu giống tổn thương tim tim tưới máu lại sau tượng tắc động mạch vành nguy kịch [17] Tái tưới máu sau thiếu máu cục vấn đề lâm sàng có liên quan đến thủ thuật liệu pháp tan huyết khối, nong mạch vành phẫu thuật bắc cầu mạch vành, thường sử dụng để thiết lập lại dòng chảy giảm thiểu tổn thương tim thiếu máu tim nặng Tổn thương tái tưới máu bao gồm loạt tượng: (a) loạn nhịp tái tưới máu, (b) tượng khơng dòng chảy - liên quan đến “tổn thương vi mạch”, (c) vùng tim choáng - “cơ tim chức co bóp”, (d) tái tưới máu gây chết người - “chết tế bào”, tượng xảy lúc riêng lẻ [18,19] Hai giả thuyết stress oxy hóa tải Ca 2+ đề xuất để giải thích chế bệnh sinh tổn thương tái tưới máu sau thiếu máu cục [20,21] Liên quan đến điều này, stress oxy hóa, thường liên quan đến hình thành dạng oxy hoạt động (ROS), làm thay đổi cấu trúc phospholipid protein, dẫn đến peroxid hóa lipid oxy hóa nhóm thiol; thay đổi làm thay đổi tính thấm cấu hình màng tế bào gây biến đổi chức hàng loạt protein khác tế bào [22] Một vài nghiên cứu vai trò thiết yếu ROS chế bệnh sinh tổn thương tái tưới máu tim sau thiếu máu cục Có nhiều thay đổi xảy trường hợp tim bị thiếu máu cục tái tưới máu, ví dụ chức co bóp, rối loạn nhịp tim, thay đổi biểu gen rối loạn đường adrenergic quan sát thấy [23] Những thay đổi tương tự ghi nhận trái tim tưới máu với hệ thống khác tạo ROS Hơn nữa, hoạt động tiền xử lý ROS bào quan tế bào tim cho thấy thay đổi tương tự Do đó, stress oxy hóa góp phần gây thay đổi tim trình tái tưới máu sau thiếu máu cục Ngoài ra, tái tưới máu sau thiếu máu cục biết gây tăng H 2O2, nồng độ Ca 2+ nội bào, hàm lượng malondialdehyde (MDA) hình thành dien liên hợp tim Việc điều trị động vật thí nghiệm enzyme chống oxy hóa superoxide dismutase (SOD với enzym catalase giúp bảo vệ chống lại thay đổi [24,25] ROS dường tăng đáng kể sau vài phút tái tưới máu, gia tăng chúng giai đoạn thiếu máu cục gây tranh cãi Dựa vào thay đổi này, đưa giả thiết gia tăng anion superoxide ROS khác trình tái tưới máu nguyên nhân dẫn đến peroxid hóa lipid oxy hóa nhóm sulfhydryl Người ta chứng minh tế bào nội mô, tế bào viêm (bạch cầu trung tính, đại thực bào) tế bào tim có khả tạo ROS thơng qua số phản ứng xúc tác enzyme Các nhà khoa học đề xuất giải phóng lượng lớn ROS từ tế bào nội mô tế bào tim giai đoạn đầu q trình tái tưới máu ảnh hưởng đến bạch cầu trung tính gần đó, từ bắt đầu chu trình khuếch đại phản ứng tế bào thông qua chất trung gian gây viêm Hơn nữa, sau bạch cầu trung tính bám vào nội mạc, chúng trở thành nguyên nhân gây giải phóng yếu tố cytokine, tạo lượng ROS lớn nhiều Sau bùng nổ ban đầu ROS bắt đầu tái tưới máu, việc xảy sau di chuyển bạch cầu trung tính đại thực bào làm chậm lại việc tiếp tục tạo ROS trình tái tưới máu [26,27] Các bạch cầu trung tính hoạt hóa sản xuất superoxide, vừa tác nhân gây độc tế bào, vừa phần bùng nổ hô hấp thông qua phản ứng enzym NADPH oxidase bám màng với oxy phân tử Bạch cầu trung tính tạo tác nhân nitric oxide (NO) phản ứng với superoxide để tạo peroxynitrite - tác nhân oxy hóa mạnh dạng nitơ hoạt động (NOS), phân hủy để tạo thành gốc hydroxyl [28] Trong AMI, mơ hình lâm sàng stress oxy hóa, ROS tạo tim bị thiếu máu cục bộ, đặc biệt sau tái tưới máu ROS làm tổn thương trực tiếp màng tế bào gây chết tế bào [29] Tuy nhiên, ROS kích thích truyền tín hiệu đến cytokine gây viêm (ví dụ, yếu tố hoại tử khối u (TNF-α), interleukin (IL) -1β IL-6) vùng thiếu máu cục xung quanh tim phản ứng chủ yếu Các cytokine gây viêm điều hòa sống chết tế bào phản ứng dây chuyền với ROS Apoptosis hay chết theo chương trình hình thức phá hủy tế bào riêng biệt, có liên quan đến tổng hợp enzyme làm thối hóa phân cắt DNA tế bào Có thêm thơng tin cho thấy thiếu máu cục sau tái tưới máu gây tổn thương tim đáng kể thông qua đường chết theo chương trình Nhờ hiểu biết chế truyền tín hiệu điện liên quan đến trình apoptosis ROS kích hoạt, báo cáo gần tải Ca 2+ tế bào tăng cường hoạt động họ enzym protein kinase hoạt hóa mitogen (MAPK) q trình tái tưới máu góp phần vào q trình gây apoptosis qua trung gian ROS, thêm vào hoại tử, cuối yếu tố định kích thước vùng nhồi máu [30] Sự chết tế bào coi khơng có chế kiểm sốt Hiện nay, người ta biết rõ chết tế bào có phần tn theo quy trình chết thơng thường Loại chết biểu nhiều hình thái khác Trong có apoptosis từ lâu cơng nhận trung gian tích cực chế làm sáng tỏ Ngồi có hoại tử (necrosis), ví dụ chết tế bào không kiểm soát, diễn số trường hợp Autophagy (Sự tự thực bào) thường biết đến chế sinh tồn xảy liên quan đến tăng ROS dẫn đến chết tế bào Tuy nhiên, hiểu biết việc tế bào autophagic chết hạn chế [31] Apoptosis, hoại tử autophagy xảy tế bào tim trình nhồi máu tim, thiếu máu cục - tái tưới máu suy tim Ức chế vài giai đoạn trình ức chế khởi phát apoptosis hoại tử giúp làm giảm kích thước vùng nhồi máu cải thiện chức tim rối loạn [32] ROS NOS tác nhân khởi xướng gây tổn thương tim q trình tái tưới máu Theo đó, AMI thường khởi đầu tượng thiếu máu tim tắc nghẽn động mạch vành Khi tim bị thiếu máu cục bộ, ROS tạo tác nhân tiền oxy hóa (prooxidant) đặc biệt tăng cường sau tái tưới máu Vì vậy, bạch cầu trung tính nguồn chủ yếu cung cấp ROS trình tái tưới máu Các tế bào nội mơ tế bào tim tạo ROS ROS tăng sản xuất chủ yếu hoạt hóa enzym xanthine oxidase (enzyme xúc tác hình thành axit uric với đồng sản xuất superoxide) tế bào nội mơ [33], kích thích hoạt động chuỗi vận chuyển điện tử ty thể tế bào tim hoạt hóa enzym NADPH oxidase tế bào viêm [34] Trong trường hợp này, tác dụng chống oxy hóa enzym có liên quan đến khả chống lại tác động bất lợi ROS Đồng ý với quan điểm này, có báo cáo chuột biến đổi gen có enzym superoxide dismutase (SOD) biểu mức, kích thước vùng nhồi máu giảm đáng kể [35,36] Theo đó, allopurinol, chất ức chế enzym xanthine oxidase, chứng minh ngăn chặn sản xuất superoxide quan tái tưới máu sau thiếu máu cục tim [37], gan [33], thận [38] ruột non [39] Do đó, cần phải dự kiến việc tăng cường hệ thống phòng thủ chống oxy hóa thơng qua yếu tố “dọn rác” ROS (scavengers) đưa đến hiệu bảo vệ tim trình tái tưới máu tim Sau đợt thiếu máu tim cục bộ, tái cấu trúc thất trái (left ventricle remodeling) biết xảy ra; chế phức tạp, ROS cytokine gây viêm gây phản ứng đình trệ tim 10 độ lệch chuẩn Sự khác biệt nhóm đối chứng nhóm thử phân tích khác biệt có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy p ≤ 0,005 Phương pháp thống kê phân tích Kết thu từ lần lặp lại thí nghiệm (n = 5) Các giá trị mô tả thể qua giá trị trung bình, độ lệch chuẩn (SD), giá trị nhỏ (min) giá trị lớn (max), sai số chuẩn (SE) hệ số biến thiên (CV%) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê nhóm thử nghiệm kiểm định hai phía cách sử dụng phương pháp kiểm định Student t-test kiểm định Mann-Whitney tùy thuộc vào dạng phân phối liệu (chuẩn phi tham số) SPSS phiên 19.0 sử dụng để phân tích liệu Xác suất có ý nghĩa thống kê thiết lập mức p ≤ 0,05 Kết bàn luận Kết ảnh hưởng axit L-ascorbic alpha-tocopherol hỗn hợp vitamin có khơng có tiếp xúc với stress thể chất lên cường độ peroxid hóa lipid, hoạt tính xanthine oxidase, hoạt tính tồn hệ thống chống oxy hóa, hàm lượng glutathione hoạt tính catalase chuột lang mô tả bảng 1-5 Các phép thử để đo lường thông số nêu thực huyết chuột lang Trên chuột lang, thử nghiệm sức bền làm tăng đáng kể cường độ peroxid hóa lipid (LPx) huyết chúng (Bảng 1) Dùng liều axit L-ascorbic alpha-tocopherol làm giảm đáng kể hoạt tính enzym tiền oxi hóa (pro-oxidative enzyme) nhóm động vật thí nghiệm đối chứng nhóm tham gia thử nghiệm sức bền Trên chuột lang, thử nghiệm sức bền làm tăng thêm đáng kể hoạt tính xanthine oxidase (XOD) huyết chúng (Bảng 2) Dùng liều axit L-ascorbic alpha-tocopherol làm giảm đáng kể tăng hoạt tính XOD nhóm đối chứng nhóm tham gia thử nghiệm sức bền động vật thí nghiệm Ngồi ra, việc dùng kết hợp vitamin cho thấy hiệu hiệp đồng rõ ràng 35 Trên chuột lang, thử nghiệm sức bền làm tăng nhẹ hoạt tính tồn hệ thống chất chống oxy hóa (TAS) huyết chúng tác dụng ý nghĩa thống kê (Bảng 3) Việc sử dụng lần axit L-ascorbic alpha-tocopherol làm giảm nhẹ hoạt tính TAS nhóm động vật thí nghiệm đối chứng nhóm tập thể dục, hiệu tác dụng không đáng kể Trên chuột lang, thử nghiệm sức bền làm tăng hàm lượng glutathione (GSH) huyết chúng kết khơng có ý nghĩa thống kê (Bảng 4) Dùng lần axit L-ascorbic alphatocopherol làm giảm nhẹ tăng hoạt tính so sánh với nhóm đối chứng, tác dụng làm giảm nhẹ khơng đáng kể Thêm vào đó, hỗn hợp vitamin làm thay đổi hàm lượng glutathione dao động mà chúng gây không khác biệt đáng kể so sánh với nhóm đối chứng nhóm tập thể dục Bài tập sức bền làm tăng đáng kể hoạt tính enzym catalase (CAT) huyết chuột lang (Bảng 5) So với nhóm đối chứng, việc sử dụng liều axit L-ascorbic alpha-tocopherol làm tăng hoạt tính catalase, hiệu có ý nghĩa thống kê trường hợp sử dụng axit L-ascorbic Việc dùng đồng thời axit Lascorbic alpha-tocopherol có tác dụng lên hoạt tính CAT so với dùng riêng, so với nhóm đối chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê So với nhóm tham gia thử sức bền, sử dụng liều axit L-ascorbic alpha-tocopherol làm giảm hoạt tính catalase huyết thanh, dùng kết hợp vitamin làm tăng nó, khác biệt có ý nghĩa thống kê xảy trường hợp sử dụng axit L-ascorbic Từ kết nghiên cứu, thấy chuột lang, tập sức bền gây stress oxy hóa tăng peroxid hóa lipid hoạt tính xanthine oxidase huyết động vật thí nghiệm Chế độ sử dụng đơn độc kết hợp axit L-ascorbic alpha-tocopherol gây tác dụng ức chế đáng kể hai thông số báo trên, điều chứng tỏ tác dụng quan trọng chống oxy hóa vitamin Tập thể dục gây bùng nổ trao đổi chất (metabolic stress) thông qua việc tạo lượng lớn dạng oxy hoạt động (Mason et al., 2014) Các 36 dạng oxy hoạt động liên tục phản ứng với phân tử lipid tế bào làm sản sinh gốc peroxid lipid bên tế bào (Zsolt et al., 2013) Vitamin C vitamin E chất chống oxy hóa nghiên cứu rộng rãi Cả vitamin E vitamin C có khả phản ứng dọn dẹp hàng loạt dạng oxy hoạt động, giúp bảo vệ tế bào khỏi stress oxy hóa gây tác nhân khác (Janero, 1991; Packer, 1991; Fischer et al., 2004; Wu et al., 2014) Cuối cùng, vitamin C mô tả chất có khả tái tạo vitamin E (Krishnamurthy Wadhwani, 2012) Tất điều giúp giải thích kết nghiên cứu tác dụng hiệp đồng vitamin E vitamin C việc làm giảm peroxid hóa lipid góp phần chứng minh giả thuyết chúng tơi tính hữu ích việc kết hợp vitamin nhằm mục đích bảo vệ tế bào khỏi tổn thương stress oxy hóa tập thể dục Trong nghiên cứu này, việc sử dụng vitamin E vitamin C ngăn chặn hoạt động xanthine oxidase, loại enzyme tác nhân tiền oxy hóa (Pro-oxidant) tự nhiên Vitamin E có cường độ tác dụng lớn hỗn hợp vitamin cho tác dụng ức chế tốt Trước đây, nhà nghiên cứu khác chứng minh tác dụng ức chế vitamin E vitamin C (dùng liều thấp so với nghiên cứu này) hoạt tính xanthine oxidase, điều này giúp củng cố cho kết nghiên cứu (Mohd et al 2012, Dwenger et al., 1992) Theo biết, trước khơng có nghiên cứu tác động việc kết hợp sử dụng axit L-ascorbic alpha-tocopherol có thiết kế thí nghiệm tương tự chuột lang lồi động vật có vú khác, điều làm cho kết nghiên cứu cơng bố chúng tơi có tính Trong nghiên cứu này, chúng tơi nghiên cứu chế có hoạt tính chống oxy hóa axit L-ascorbic alpha-tocopherol thông qua đánh giá ba dấu hiệu bảo vệ (protective marker) mẫu huyết lấy từ động vật thí nghiệm: tổng hoạt tính chống oxy hóa (total antioxidant activity), hàm lượng glutathione hoạt tính catalase Vấn đề khám phá tập thử sức bền axit L-ascorbic gây gia tăng hoạt tính catalase, alpha tocopherol khơng có tác dụng Sự suy giảm đáng kể dung lượng chống oxy hóa tồn phần (total antioxidant capacity) hoạt tính glutathione nghiên cứu 37 chúng tơi có thể, phần, giải thích vấn đề phương pháp luận Nhiều nghiên cứu viên báo cáo xét nghiệm khác sử dụng để phát dấu hiệu chống oxy hóa (bao gồm xét nghiệm chúng tơi sử dụng nghiên cứu) có hiệu suất chẩn đốn khác (Cighetti et al 2015, Güngor et al., 2011) Vì vậy, chúng tơi khơng thể loại trừ khả xét nghiệm làm nghiên cứu chúng tơi cho hai phân tích cho kết âm tính giả, đặc biệt trường hợp thay đổi có cường độ nhỏ Axit L-ascorbic alpha-tocopherol gây kích hoạt phân tử chống stress oxy hóa khác nhau, phân tử đóng vai trò việc chống lại hiệu ứng stress oxy hóa bơi gây Gần có nghiên cứu theo dõi vài báo mặt sinh hóa phân tử liên quan đến tổn thương oxy hóa bảo vệ chống oxy hóa báo cáo tác dụng qua lại hỗn hợp vitamin C vitamin E, tác nhân tiền oxy hóa (pro-oxidant) chất chống oxy hóa, tùy thuộc vào liều điều kiện thí nghiệm (de Oliveira et al., 2013) Như vậy, nghiên cứu tương lai cần áp dụng thiết kế nghiên cứu chi tiết tập trung hơn, sử dụng đa dạng xét nghiệm với điều kiện thử nghiệm khác để làm rõ chế hoạt động xác vitamin C vitamin E phản ứng stress oxy hóa gây tập thử sức bền Bảng 1: Cường độ peroxid hóa lipid (LPx) huyết chuột lang thí nghiệm nhóm nghiên cứu khác C = đối chứng; E = thử sức bền; A = L-ascorbic acid; T = alpha-tocopherol; *so sánh với nhóm đối chứng; **so sánh với nhóm thử sức bền Cường độ LPx biểu thị số nmol malondialdehyde/mg protein 38 Bảng 2: Hoạt tính xanthine oxidase (XOD) huyết chuột lang thí nghiệm nhóm nghiên cứu khác C = đối chứng; E = thử sức bền; A = axit L-ascorbic; T = alpha-tocopherol; *so sánh với nhóm đối chứng; **so sánh với nhóm thử sức bền Hàm lượng XOD biểu thị số nmol XOD /mg protein.phút -1 Bảng 3: Tình trạng chống oxy hóa tồn phần (total antioxidant status -TAS) huyết chuột lang thí nghiệm nhóm nghiên cứu khác C = đối chứng; E = thử sức bền; A = axit L-ascorbic; T = alpha-tocopherol; *so sánh với nhóm đối chứng; **so sánh với nhóm thử sức bền Hàm lượng TAS biểu thị số nmol TAS /l Bảng 4: Hàm lượng glutathione (GSH) huyết chuột lang thí nghiệm nhóm nghiên cứu khác C = đối chứng; E = thử sức bền; A = axit L-ascorbic; T = alpha-tocopherol; *so sánh với nhóm đối chứng; **so sánh với nhóm thử sức bền Hàm lượng GSH biểu thị số nmol GSH/mg protein 39 Bảng 5: Hoạt tính catalase (CAT) huyết chuột lang thí nghiệm nhóm nghiên cứu khác C = đối chứng; E = thử sức bền; A = axit L-ascorbic; T = alpha-tocopherol; *so sánh với nhóm đối chứng; **so sánh với nhóm thử sức bền Hàm lượng CAT biểu thị số nmol CAT/mg protein.phút-1 Kết luận Nghiên cứu ảnh hưởng axit L-ascorbic alphatocopherol kết hợp vitamin có khơng tiếp xúc với ảnh hưởng tập thể dục đến thay đổi thơng số sinh hóa quan trọng huyết chuột lang Các phương pháp sử dụng hỗn hợp vitamin có tác dụng bảo vệ stress oxy hóa bơi bắt buộc hiệu hiệp đồng tác dụng rõ ràng Tài liệu tham khảo (như báo gốc) 2.2 Nhận xét cá nhân chủ đề tự chọn Từ thông tin đưa báo cơng bố nghiên cứu rút số vấn đề sau: - Gốc tự (GTD) phân tử hay mảnh phân tử chứa electron độc thân Các electron độc thân làm cho GTD có khả phản ứng đáng kể Các GTD sản phẩm từ q trình chuyển hóa bình thường tế bào với vai trò vừa có lợi vừa có hại Chúng có lợi cho thể giúp tham gia số q trình sinh lý bình thường truyền tín hiệu tế bào, phân hủy chất độc Nhưng bị tải gốc tự tạo tượng stress oxy hóa có hại cho thể GTD sản phẩm phụ phản ứng chuyển hóa bình thường tế 40 bào (nguồn nội sinh), từ nguồn ngoại sinh tiếp xúc với khói thuốc lá, chất nhiễm mơi trường, phóng xạ ion hóa, nhiễm vi khuẩn, nấm, virus Trong tế bào có sẵn hệ thống tác nhân chống oxy hóa (các enzym phức hợp enzym) giúp loại bỏ gốc tự trì trạng thái cân oxy hóa khử - Stress oxy hóa trạng thái bùng nổ GTD, xảy có sản sinh mức GTD suy giảm chất chống oxy hóa hệ thống sinh học dẫn đến cân oxy hóa khử tế bào Hậu dư thừa GTD dẫn đến phá hủy ức chế chức bình thường lipid, protein, DNA tế bào Trong đánh giá mức độ stress oxy hóa, dựa vào việc đánh giá hoạt tính hệ chất chống oxy hóa Thêm vào đó, gốc tự có thời gian bán hủy ngắn nên muốn đo lường mức độ stress oxy hóa, đo lường sản phẩm sinh phá hủy lipid, protein, DNA tế bào - Tập thể dục mức gây bùng nổ trao đổi chất tạo lượng lớn dạng oxy hoạt động Các dạng oxy hoạt động phản ứng với phân tử lipid tế bào làm sản sinh gốc peroxid lipid Và chuột lang, hoạt động thể lực liên tục đến kiệt sức gây tượng stress oxy hóa: tăng peroxid hóa lipid tăng hoạt tính xanthine oxidase huyết - Vitamin C Vitamin E đóng vai trò quan trọng việc bảo vệ tế bào chống lại dạng oxy hoạt động Cơ chế tác dụng vitamin C có liên quan đến việc chuyển axit ascorbic thành dạng oxy hóa cách nhường điện tử cho dạng oxy hoạt động Axit ascoricic tác dụng gián tiếp thơng qua việc hồn ngun tocopherol - Chế độ sử dụng đơn độc kết hợp axit L-ascorbic alphatocopherol gây tác dụng ức chế đáng kể tăng mức độ peroxid hóa lipid hoạt tính xanthine oxidase huyết chuột lang, điều chứng tỏ tác dụng quan trọng chống oxy hóa vitamin - Hai vitamin E vitamin C có tác dụng hiệp đồng việc làm giảm peroxid hóa lipid hiệu việc kết hợp vitamin nhằm 41 mục đích bảo vệ tế bào khỏi tổn thương stress oxy hóa tập thể dục mức có chứng rõ ràng - Nghiên cứu này, thời điểm công bố, nghiên cứu có thiết kế khác biệt so với nghiên cứu trước đây, điều chứng tỏ tính nghiên cứu Tuy nhiên xét nghiệm khn khổ nghiên cứu có hiệu suất chẩn đốn khác gây sai số tượng âm tính giả (trường hợp mà nhà nghiên cứu loại trừ) - Nghiên cứu sử dụng vài báo sinh học nhằm đánh giá ảnh hưởng vitamin lên stress oxy hóa gây thử nghiệm bơi kiệt sức chuột lang Như vậy, có yếu tố chưa xét đến Và loài động vật dùng để thử chuột lang, vấn đề đặt ở lồi động vật khác người kết luận có có thay đổi nào? Vì thế, tương lai, việc mở rộng nghiên cứu đối tượng thử nghiệm khác, với thông số báo khác, sử dụng đa dạng xét nghiệm với điều kiện thử nghiệm khác để làm rõ chế hoạt động xác vitamin C vitamin E cần thiết 2.3 Bài báo gốc chủ đề tự chọn - Tên báo gốc: EFFECTS OF L-ASCORBIC ACID AND ALPHA-TOCOPHEROL ON BIOCHEMICAL PARAMETERS OF SWIMMING-INDUCED OXIDATIVE STRESS IN SERUM OF GUINEA PIGS - Đường dẫn báo: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5566150/ - Nguyên văn báo: (trang tiếp theo) 42 EFFECTS OF L-ASCORBIC ACID AND ALPHA-TOCOPHEROL ON BIOCHEMICAL PARAMETERS OF SWIMMING-INDUCED OXIDATIVE STRESS IN SERUM OF GUINEA PIGS Marija Bursać-Mitrović, Dragan R Milovanović, Radoslav Mitić, Danijela Jovanović, Miroslav 2 Sovrlić, Perica Vasiljević, Jovica Tomović, * Nedeljko Manojlović Department of Pharmacology, Medical faculty, University of Kosovska Mitrovica, Serbia Department of Pharmacy, Faculty of Medical Sciences, University of Kragujevac, Kragujevac, Serbia, Department of Anesthesiology, Clinical Centre “Kragujevac”, Kragujevac, Serbia Department of Biology, Faculty of Sciences, University of Niš, Niš, Serbia, * Corresponding author E-mail: mtnedelj ko@ yahoo com Abstract Background: The purpose of this study is to determine the effect of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol as well as combination of these vitamins with or without exposure to physical exercise on intensity of lipid peroxidation, activity of xanthine oxidase, activity of total antioxidative system, concentration of glutathione, and activity of catalase in the serum of guinea pigs Materials and Methods: The experimental measurements of intensity of lipid peroxidation, activity of xanthine oxidase, activity of total antioxidative system, concentration of glutathione, and activity of catalase were done in the serum of guinea pigs The animals were exposed to the test load to achieve exhaustion and the test was terminated when the animal for the third time to sink into the water Results: The results of this study demonstrated that endurance exercise of guinea pigs induced oxidative stress response in terms of increased lipid peroxidation and activity of xanthine oxidase in the serum of experimental animals Our study investigated the antioxidant activity of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol also measuring three protective markers in the serum: total antioxidant activity, content of glutathione and activity of catalase The results obtained show that the vitamins influence the concentrations of above mentioned biochemical parameters, which points out their protective effect of swimming-induced oxidative stress Conclusion: Single or combined administration of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol caused significant inhibition of these markers indicating the important antioxidant activity of the vitamins Results lead to conclude that the combined treatments with vitamins with or without exposure to physical exercise showed the clear synergistic effect Key words: L-ascorbic acid, alpha-tocopherol, guinea pigs, oxidative stress, biochemical parameters Introduction The term oxidative stress was first defined in 1985 as “a disturbance in the pro-oxidant-antioxidant balance in favor of the former” (Sies, 1985; Sies at al., 1985) Dean Jones has proposed that the term “oxidative stress” should be redefined as “a disruption of redox signaling and control” and this definition is gaining widespread acceptance (Jones, 2006) Practically, under physiological conditions (endogenous sources) as well as under some adverse events (exogenous sources), in biological systems there is continuous production of free radicals i.e, ions, molecules and compounds that have unpaired electron and are highly reactive with biological molecules (Halliwell аnd Gutteridge, 1999) As a result of their reaction with lipids, proteins or DNA, oxidized products are made (Halliwell and Whiteman, 2004) Cells are equipped with enzymatic and nonenzymatic antioxidant system to eliminate free radicals and to maintain redox homeostasis (Valko et al., 2007) In oxidative stress assessment, instead of measuring free radicals themselves (which have very short half-life) we can rely on measurement of products of biological damage as well as on measurement of antioxidative capacity (enzymatic and nonenzymatic components) Vitamin C and Vitamin E play pivotal role in cellular protection against reactive oxygen species (Halliwell and Whiteman, 2004) Vitamin E (alpha-tocopherol) as a low-molecular-weight agent is the primary chain-breaking lipid-soluble antioxidant located primarily in the membranes of tissues and it is capable of scavenging reactive oxygen species (Janero, 1991; Packer, 1991) Ascorbic acid (vitamin C) is found in two chemical forms, as reduced (L-ascorbic acid, and its ionized form of L-ascorbate) and oxidized form as (L-dehydroascorbic acid; and its ionized form of L- 43 dehydroascorbate) Ascorbic acid is hydrophilic compound and functions better in an aqueous environment The ascorbate anion is the predominant form existing at physiological pH (pKa of ascorbic acid is 4.25) (Powers and Jackson, 2008; Yu, 1994) The most striking chemical activity of ascorbic acid is its ability to act as a reducing agent, implicated in detoxifying various oxygen radicals in vivo The speed of conversion of ascorbic acid into dehydroascorbic acid in aerobic conditions is facilitated by the higher pH values, compared to the acidic environment (Carr and Frei, 1999) Mechanism of antioxidant activity involves the conversion of ascorbic acid into its oxidized form (dehydro-ascorbic acid) by donating two electrons to reactive oxygen species (Fischer et al., 2004) Ascorbic acid can act directly scavenging lipid hydroperoxide, superoxide and hydroxyl radicals or, indirectly, playing an important role in recycling of tocopherol, a process that results in the conversion of ascorbic acid into semiascorbyl radical (Packer at al., 1979) Some authors have shown the influence of physical exercise on oxidative stress and changes in sleep pattern (Esteves et al., 2014) The aim of this work was to study the effect of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol on some biochemical parameters of oxidative stress in the serum of guinea pigs as no previous study known to us investigated their effects on the experimental model exploited in our research We hypothesized that the combination of two vitamins would achieve significant synergistic effects in the terms of oxidative protection Materials and methods Chemicals All the chemicals were purchased from Sigma-Aldrich, Germany Analytical grade chemicals vitamin C (L-Ascorbic acid, ampule 1000 mg) and vitamin E ((+/-)-аlphа-tocopherol, ampule 100 mg) were used Study animals Forty guinea pigs were used during the experiment The animals were obtained from VMA-Department for breeding laboratory and experimental animals, Belgrade, Serbia) At the start of the experiment, the both sexes of guinea pigs weighed 450 g ± 50 g and were kept under constant environmental conditions (temperature 25˚C ± 2˚C; humidity 60 ± 1.5 %, with 12 h light period, 10 days before the beginning experiment and during the experiment) All the animals received human care according to the criteria outlined in the ‘Guide for the Care and Use of Laboratory Animals’ prepared by the National Academy of Science and published by the National Institute of Health The ethic regulations have been followed in accordance with National and institutional guidelines for the protection of animal welfare during experiments Experimental design The animals were randomly assigned into eight groups consisting five animals for each experiment The first experimental group was the control group The second experimental group is exposed to a test of excessive physical activity swimming to exhaustion The third group was administered with 20 mg/kg, L-ascorbic acid (Vitamin C) intraperitoneally (ip), without exposing test physical load The test substances (alpha-tocopherol and L-ascorbic acid) were administered intraperitoneally in one of the quadrants lower abdominal guinea pigs lateral to the midline, taking care to avoid injury of the bladder, liver or intestines After the needle stick, before the injection of the substance required aspirated content The fourth experimental group is exposed to a test of physical load and supplementation of L-ascorbic acid (20 mg/kg) The fifth group was administered with 25 mg/kg, alpha-tocopherol (vitamin E) intraperitoneally (ip), without exposure to physical stress test The sixth group experimental group is exposed to a test of physical load and supplementation of alpha-tocopherol (25 mg/kg) The seventh group was administered with a combination of 20 mg/kg of L-ascorbic acid and 25 mg/kg alpha-tocopherol ip, without exposure to a test of the physical load The eighth experimental group is exposed to a test of physical load and supplementation of combination of L-ascorbic acid (20 mg/kg) and alpha-tocopherol (25 mg/kg) The test load was determined by swimming to exhaustion The experimental animals were swimming around in the water tank depth of 60 cm, with the average amount of water and 20 dm , a temperature of 32 °C The animals were exposed to the test load to achieve exhaustion and the test was terminated when the animal for the third time to sink into the water Biochemical evaluation The extent of lipid peroxidation (LPx) was determined after Buege and Aust (1988), activities of xanthine oxidase (XOD) after Bergmayer (1976), catalase (CAT) after Beers and Sizer (1952), the content of reduced glutathione (GSH) after Beuthler et al (1983) and total antioxidant status (TAS) after Miller et al (1993) The experimental measurements of above-mentioned parameters were done in the serum of guinea pigs The results of 44 biochemical analysis are presented as mean value ± standard deviation The difference between the control and test groups was analyzed by the last significant difference at the p ≤ 0.005 confidence levels Statistical analysis The results obtained from replicates (n = 5) of each experiment The descriptive values are presented as the mean, standard deviation (SD), minimal (min) and maximal (max) values, standard error (SЕ) and coefficient of variation (CV%) The significance of the difference between the experimental groups was tested two-sided using Student’s t-test or Mаnn-Whitney test depending on the data distribution pattern (normal or non-parametric) SPSS version 19.0 was employed to analyze data The level of probability of statistical significance was set up at p 0.05 Results and Discussion The results of the influence of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol and the combination of these vitamins with or without exposure to physical stress on the intensity of lipid peroxidation, the activity of xanthine oxidase, the activity of total antioxidative system, content of glutathione, and the activity of catalase in guinea pigs are given in Tables 1-5 The experimental measurements of above-mentioned parameters were done in the serum of guinea pigs The endurance exercise of guinea pigs significantly increased the lipid peroxidation values (LPx) in their serum (Table 1) Single administration of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol decreased significantly activity of this pro-oxidative enzyme in both the control and the endurance-exercise group of experimental animals The endurance exercise of guinea pigs significantly increased the activity of xanthine oxidase (XOD) in their serum (Table 2) Single administration of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol gave significantly lower increase in comparison with both the control and the endurance-exercise group of experimental animals In addition, the combination of the vitamins showed the clear synergistic effect The endurance exercise of guinea pigs slightly increased the activity of total antioxidant system (TAS) in their serum but the effect was not statistically significant (Table 3) Single administration of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol slightly reduced the activity in the comparison with both the control and the endurance-exercise group of experimental animals but the effect was not significant The endurance exercise of guinea pigs very slightly increased the content of glutathione (GSH) in their serum but the effect was not statistically significant (Table 4) Single administration of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol slightly reduced the activity in comparison with the control group but the effects were not significant On the other side, the combination of the vitamins had variable effects on glutathione content and the oscillation which they induced was not significantly different from both the control and the endurance activity groups The endurance exercise of guinea pigs significantly increased the activity catalase (CAT) in their serum (Table 5) In comparison with the control, single administration of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol increased catalase activity but only in the case of L-ascorbic acid the effect was statistically significant The combination of Lascorbic acid and alpha-tocopherol had the effect of lesser magnitude than the individual vitamins and in comparison with the control the difference was not statistically significant In comparison with endurance-exercise group, single administration of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol decreased serum catalase activity and their combination increased it but only in the case of L-ascorbic acid the difference was statistically significant The results of our study showed that the endurance exercise of guinea pigs induced oxidative stress response in terms of increased lipid peroxidation and activity of xanthine oxidase in the serum of experimental animals Single or combined administration of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol caused significant inhibition of both markers indicating the important antioxidant effects of the vitamins It is well-known that exercise induced metabolic stress by the generation of wide range of reactive oxygen species (Mason et al., 2014) Reactive oxygen species, in turn, react with cellular lipids producing lipid peroxides within tissues (Zsolt et al., 2013) Vitamin C and vitamin E are among the most widely studied dietary antioxidants Both, vitamin E and vitamin C, react with and scavenge various reactive oxygen species providing protection from oxidative stress induced by different triggers (Janero, 1991; Packer, 1991; Fischer et al., 2004; Wu et al., 2014) Finally, vitamin C has been cited as being capable of regenerating vitamin E (Krishnamurthy and Wadhwani, 2012) This all explain our results about synergistic effects of vitamin E and vitamin C in diminishing lipid peroxidation and it support our hypothesis of usefulness of the vitamin combination for protection from exercise- induced oxidative stress damage In our study, administration of vitamin E and vitamin C suppressed the activity of xanthine oxidase, an enzyme having pro-oxidant nature The effect of vitamin E was of greater magnitude and the most inhibition was achieved with their combination Previous investigators proved the inhibitor effect of both vitamin E and in some lesser extent of vitamin C on xanthine oxidase activity supporting the results of our study (Mohd et al 2012, Dwenger et al., 1992) 45 To our knowledge, no previous study investigated the effects of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol combination in similar settings neither in the same or other mammal species, making our results the novelty in the available published literature Our study investigated the possible mechanism of antioxidant activity of L-ascorbic acid and alpha-tocopherol measuring three protective markers in the serum samples taken from experimental animals: total antioxidant activity, activity of glutathione and activity of catalase The major finding was the increase of catalase activity, induced with endurance exercise and L-ascorbic acid but not with alpha tocopherol The absence of significant changes of total antioxidant capacity and glutathione activity in our study could be, at least partly, explained with methodological issues Researchers reported that different assays used for detection of these antioxidative markers (including those used in our research) could have different diagnostic performances (Cighetti et al 2015, Güngör et al., 2011) Consequently, we could not exclude the possibility that the laboratory assays used in our study for these two analytes gave false-negative results, particularly if their changes were of small magnitude L-ascorbic acid and alpha-tocopherol had triggered different molecules of oxidative stress defense which played the role in the protection from swimming-induced oxidative stress response A recent research tracing several biochemical and molecular markers of oxidative damage and antioxidative defense reported dual effects of vitamin C and vitamin E combination, pro-oxidant and antioxidant, depending on the doses and other experimental conditions (de Oliveira et al., 2013) Therefore, the future research with more detailed and focused designs, using various laboratory assays and different experimental conditions, are necessary in order to clarify the exact mechanisms of action of vitamin C and vitamin E on oxidative stress response during endurance exercise Table 1: The intensity of lipid peroxidation (LPx) in the serum of experimental guinea pigs in different study groups C = control; E = endurance exercise; A = L-ascorbic acid; T = alpha-tocopherol; *compared with the control group; **compared with the endurance exercise group Content of LPx is expressed in nmol malondialdehyde/mg protein Table 2: The activity of (XOD) in the serum of experimental guinea pigs in different study groups C = control; E = endurance exercise; A = L-ascorbic acid; T = alpha-tocopherol; *compared with the control group; **compared with the endurance exercise group Content of XOD is expressed in nmol/mg protein·min -1 Table 3: The total antioxidant status (TAS) in the serum of experimental guinea pigs in different study groups 46 C = control; E = endurance exercise; A = L-ascorbic acid; T = alpha-tocopherol; *compared with the control group; **compared with the endurance exercise group Content of TAS is expressed in mmol/l Table 4: The glutathione (GSH) content in the serum of experimental guinea pigs in different study groups C = control; E = endurance exercise; A = L-ascorbic acid; T = alpha-tocopherol; *compared with the control group; **compared with the endurance exercise group Content of GSH is expressed in nmol GHS/mg protein Table 5: The activity of catalase (CAT) in the serum of experimental guinea pigs in different study groups C = control; E = endurance exercise; A = L-ascorbic acid; T = alpha-tocopherol; *compared with the control group; **compared with the endurance exercise group Content of CAT is expressed in nmol/mg protein•min-1 Conclusion L-ascorbic acid and alpha-tocopherol and the combination of these vitamins with or without exposure to physical exercise influence on the changes of important biochemical parameters in the serum of guinea pigs The combined treatments with vitamins has a protective effect on forced swimming-induced oxidative stress and show the clear synergistic effect References Beers, R.F and Sizer, I.W (1952) Spectrophotometric method for measuring of breakdown of hydrogen peroxide by catalase J Biol Chem 195: 133-140 47 Bergmayer, U.H (1970) Methoden Der Enzymatischen analyse Pharmazie in unserer Zeit Verlag Chemies: Weinhem: 483-484 Beuthler, E., Duron, O and Kelly, B (1983) Improved method for the determination of blood glutathione J Lab Clin Med.61(5): 882-888 Buege, A.J., Aust, D.S (1988) Methods in enzymology; Fleischer S, Parker L (Eds.) Academic Press, New York Carr, A and Frei, B (1999) Does vitamin C act as a pro-oxidant under physiological conditions? FASEB J 13: 1007–1024 Cighetti, G, Bamonti, F, Aman, CS, Gregori, D, De Giuseppe, R, Novembrino, C, de Liso F, Maiavacca, R and Paroni, R (2015) Oxidative status in different settings and with different methodological approaches compared by receiver operating characteristic curve analysis Clin Biochem 48(1-2): 73-78 Dwenger A., Funck M., Lueken B., Schweitzer G and Lehmann U (1992) Effect of ascorbic acid on neutrophil functions and hypoxanthine/xanthine oxidase-generated, oxygen-derived radicals Eur J Clin Chem Clin Biochem 30(4): 187-191 Esteves, A.M., Ackel-D'Elia, C., Tufik, S and De Mello, M.T (2014) Sleep patterns and acute physical exercise: the effects of gender sleep disturbances, type and time of physical exercise J Sports Med Phys Fitness 54(6): 809815 Fischer, H., Schwarzer, C and Illek, B (2004) Vitamin C controls the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator chloride channel Proc Nat Acad Sci USA 101(10): 3691–3696 10 Glatzle, D and Vuilleumier, F (1974) Glutathione reductase test with whole blood a convenient procedure for the assessment of the riboflavin status in human Experientia 30(6): 665-667 11 Gỹngửr, N., Ozyỹrek, M., Gỹỗlỹ, K., Cekiỗ, S.D and Apak R (2011) Comparative evaluation of antioxidant capacities of thiol-based antioxidants measured by different in vitro methods Talanta 83(5): 1650-1658 12 Halliwell, B and Whiteman, M (2004) Measuring reactive species and oxidative damage in vivo and in cell culture: how should you it and what the results mean? Bras J Pharmacol 142(2): 231-255 13 Halliwell, B and Gutteridge, J Free radicals in biology and medicine 4th ed Oxford, Oxford University Press, 2007 14 Jones, D.P (2006) Redefining oxidative stress Antioxid Redox Signal 8: 1865-1879 15 Janero, D.R (1991) Therapeutic potential of vitamin E in the pathogenesis of spontaneous atherosclerosis Free Radic Biol.Med 11: 129-144 16 Kanagasabai, T and Ardern, C.I (2015) Contribution of inflammation, oxidative stress, and antioxidants to the relationship between sleep duration and cardiometabolic health Sleep sp-00153-15 17 Mason S and Wadley G.D (2014) Skeletal muscle reactive oxygen species: a target of good cop/bad cop for exercise and disease Redox Rep 19(3): 97-106 18 Miller N.J., Rice-Evans C., Davies M.J., Gopinathan V and Milner A (1993) A novel method for measuring antioxidant capacity and its application to monitoring the antioxidant status in premature neonates Clin Sci 84(4): 407412 19 Mohd F.N.A., Ibrahim I.A., Kamisah Y and Mohd I.N (2012) Palm vitamin E reduces catecholamine, xanthine oxidase activity and gastric lesions in rats exposed to water-immersion restraint stress BMC Gastroenterol 28: 12-54 20 de Oliveira, B.F., Costa, D.C., Nogueira-Machado J.A and Chaves, M.M (2013) β-Carotene, α-tocopherol and ascorbic acid: differential profile of antioxidant, inflammatory status and regulation of gene expression in human mononuclear cells of diabetic donors Diabetes Metab Res Rev 29(8): 636-645 21 Packer, L (1991) Protective role of vitamin E in biological systems Am Clin Nutr 53: 1050S–1055S 22 Packer, J E., Slater, T F., Willson, R L (1979) Direct observation of a free radical interaction between vitamin E and vitamin C Nature 278: 737–738 23 Powers, S.K., Jackson and M.J (2008) Exercise-induced oxidative stress: cellular mechanisms and impact on muscle force production Physiol Rev 88: 1243-1276 24 Simon, L.M., Fatrai, Z., Jonas, D E and Matkovics, B (1974) Study of metabolism enzyme during the development of Phaseoum vulgaris Biochem Physiol Pflanz 166: 389-393 25 Sies, H (1985) Oxidative stress, Introductory remarks, In: Oxidative Stress (H Sies, ed.) Academic Press, London 26 Sies, H., Cadenas, E., Symons, M C R and Scott, G (1985) Oxidative stress: Damage to intact cells and organs [and discussion] Philos Trans R Soc Lond., B, Biol Sci 311: 617-631 27 Valko, M., Morris, H and Cronin, M.T (2005) Metals, toxicity and oxidative stress Curr Med Chem 12(10): 1161-1208 28 Yu, B P (1994) Cellular defenses against damage from reactive oxygen species Physiol Rev 74: 139–162 29 Wu, C.M., Cheng, Y.L., Dai, Y.H., Chen, M.F., Wang, C.C (2014) α-Tocopherol protects keratinocytes against ultraviolet A irradiation by suppressing glutathione depletion, lipid peroxidation and reactive oxygen species generation Biomed Rep 2(3): 419-423 48 30 Zsolt, R., Orsolya, M., Eniko, N Erika, K., and Sataro, G (2013) The complex role of physical exercise and reactive oxygen species on brain J Sport Health Sci 2(2): 87-93 49 ... tác động lên thể sống với gốc tự chất chống oxy hóa, chất giúp bảo vệ thể, kết hợp với chất oxy hóa để làm chậm oxy hóa chất Ngày nay, có nhiều chất có tác dụng chống oxy hóa phát nghiên cứu lúc... yếu hậu stress oxy hóa, tác hại ROS, NOS tải ion canxi nội bào 27 - Sự an toàn sử dụng liều cao chế chống oxy hóa Vitamin C E đem đến tác dụng chống gốc tự do, chống lại stress oxy hóa vitamin... sinh gốc tự lipid, ức chế q trình peroxy hóa lipid thơng qua việc chuyển đổi thành sản phẩm oxy hóa α-tocopheroxyl α-tocopherol phục hồi cách khử gốc α-tocopheroxyl chất có hoạt tính oxi hóa khử