Nghiên cứu bào chế gel acyclovir

Đến nay, thế giới đã có một số nghiên cứu làm tăng tính thấm của acyclovir bằng cách kết hợp chất tăng thấm, liposom hoá, dùng tác dụng của dòng điện để tăng thấm thuốc qua da, sử dụng d

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LÊ THỊ THANH NGỌC

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ

GEL ACYCLOVIR

LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC

CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ

MÃ SỐ: 60 73 01

Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Phạm Thị Minh Huệ

ThS Vũ Thị Thu Giang

HÀ NỘI 2011

Lời cảm ơn

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc đến:

PGS TS Phạm Thị Minh Huệ ThS Vũ Thị Thu Giang

Người đã luôn quan tâm, động viên, tận tình hướng dẫn tôi trong suốt thời gian làm luận văn, cho tôi nhiều lời khuyên bổ ích về học tập, nghiên cứu khoa học, công việc và cuộc sống

Tôi cũng xin gởi lời cảm ơn đến các quý thầy cô trong bộ môn Bào chế, các anh chị kỹ thuật viên đã động viên, tạo điều kiện cho tôi trong suốt thời gian làm thực nghiệm

Nhân đây, tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo đã dạy dỗ tôi trong những năm vừa qua, cảm ơn bộ môn Vật lý – Hoá lý, bộ môn Dược lý, Viện kiểm nghiệm thuốc Trung Ương, Viện vệ sinh dịch tễ Trung Ương đã tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tôi trong quá trình làm đề tài

Cuối cùng xin cảm ơn ba mẹ, chồng tôi, gia đình, bạn bè, các em sinh viên K61 và K62 cùng làm đề tài ở bộ môn bào chế đã luôn là chỗ dựa vững chắc, động viên, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian vừa qua

Hà Nội, ngày 20 tháng 11 năm 2011

Lê Thị Thanh Ngọc

1.1.7 Một số dạng chế phẩm acyclovir trên thị trường 4

1.2 Một số biện pháp dƣợc học đã đƣợc vận dụng trong cải thiện

tính thấm của acyclovir qua da

2.2.1 Phương pháp đánh giá tính thấm của acyclovir qua da thỏ 20

2.2.2 Phương pháp bào chế và đánh giá chất lượng liposom

acyclovir

24

2.2.3 Phương pháp bào chế và đánh giá chất lượng gel acyclovir 25

3.1 Nghiên cứu cải thiện tính thấm của acyclovir qua da 27

3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng của một số chất tăng thấm đến tính thấm

của ACV qua da thỏ

28

3.1.3 Khảo sát ảnh hưởng của liposom acyclovir đến khả năng

thấm của dược chất qua da thỏ

37

3.2.1 Nghiên cứu lựa chọn tá dược gel 45

3.2.2 Bào chế và đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng gel 51

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

High Performance Liquid Chromatography

DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU

Trang

Bảng 1.1 Độ tan của ACV theo pH môi trường ở 37o

Bảng 1.2 Hệ số thấm của ACV qua màng tế bào Caco-2 3

Bảng 2.4 Các nguyên vật liệu dùng trong nghiên cứu 19

Bảng 3.6 Nồng độ và mật độ quang tương ứng của dung dịch ACV trong

Bảng 3.7 Ảnh hưởng của DMSO đến tính thấm của ACV qua da thỏ 28 Bảng 3.8 Ảnh hưởng của PG đến tính thấm của ACV qua da thỏ 30 Bảng 3.9 Ảnh hưởng của Tween 80 đến tính thấm của ACV qua da thỏ 31 Bảng 3.10 Ảnh hưởng của NaLS đến tính thấm của ACV qua da thỏ 33 Bảng 3.11 Ảnh hưởng của việc phối hợp chất tăng thấm đến tính thấm

Bảng 3.13 Phân bố KTTP của liposom bào chế với tá dược PC 39 Bảng 3.14 Phân bố KTTP của liposom bào chế với tá dược lecithin 42 Bảng 3.15 Ảnh hưởng của liposom và chất tăng thấm phối hợp đến tính

Bảng 3.16 Công thức bào chế gel ACV 5% với tá dược Carbopol 974P 46 Bảng 3.17 Lượng ACV thấm qua da thỏ từ các chế phẩm gel bào chế với

Bảng 3.21 Giá trị pH, độ nhớt của gel và tỷ lệ dược chất trong gel 51 Bảng 3.22 Lượng ACV thấm qua da thỏ từ các chế phẩm 53

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Trang

Hình 1.1 Một số biện pháp tăng thấm thuốc qua da 7

Hình 2.3 Hình ảnh thử nghiệm đánh giá tính thấm của ACV từ hệ dung

Hình 2.4 Hình ảnh thử nghiệm đánh giá tính thấm của ACV từ dạng gel 21 Hình 3.5 Mối tương quan giữa nồng độ và mật độ quang của dung dịch

Hình 3.6 Ảnh hưởng của DMSO đến tính thấm của ACV qua da thỏ 29 Hình 3.7 Ảnh hưởng của PG đến tính thấm của ACV qua da thỏ 30 Hình 3.8 Ảnh hưởng của Tween 80 đến tính thấm của ACV qua da thỏ 32 Hình 3.9 Ảnh hưởng của NaLS đến tính thấm của ACV qua da thỏ 33 Hình 3.10 Mức độ làm tăng thấm ACV của một số chất tăng thấm đã

Hình 3.17 Phân bố kích thước tiểu phân của mẫu L1 41 Hình 3.18 Phân bố kích thước tiểu phân của mẫu L2 41 Hình 3.19 Phân bố kích thước tiểu phân của mẫu L3 42

Hình 3.21 Ảnh hưởng của liposom và chất tăng thấm phối hợp đến tính

Hình 3.22 Ảnh hưởng của nồng độ Carbopol 974P đến tính thấm của

Hình 3.23 Ảnh hưởng của nồng độ CMC đến tính thấm của ACV qua da

Hình 3.24 Lượng ACV giải phóng qua màng cellulose acetat 0,45µm 50

Hình 3.26 Tốc độ thấm qua da thỏ của ACV từ các chế phẩm 54

ĐẶT VẤN ĐỀ

Bệnh nhiễm virus Herpes là một bệnh khá phổ biến trên thế giới nói chung

và ở nước ta nói riêng Acyclovir là dược chất hiện nay được sử dụng rộng rãi trong phòng và điều trị đặc hiệu các bệnh do virus Herpes gây ra Để điều trị các bệnh ngoài da do virus Herpes, acyclovir thường được dùng bôi ngoài da hoặc kết hợp với đường uống trong trường hợp bệnh nặng Tuy nhiên, do dược chất có

độ tan hạn chế và tính thấm kém nên khả năng thấm thuốc chưa cao Vì vậy, vấn

đề cải thiện thấm acyclovir qua da là c n thiết để tăng hiệu quả điều trị của thuốc

Đến nay, thế giới đã có một số nghiên cứu làm tăng tính thấm của acyclovir bằng cách kết hợp chất tăng thấm, liposom hoá, dùng tác dụng của dòng điện để tăng thấm thuốc qua da, sử dụng dạng tiền thuốc Các nghiên cứu trong nước thường chỉ tập trung vào cải thiện tính thấm của acyclovir chứ chưa nghiên cứu ứng dụng vào bào chế dạng gel acyclovir 5% Trên thị trường, h u hết các thuốc chứa acyclovir đều ở dạng kem, mỡ, trong khi đó dạng gel có khá nhiều ưu điểm Vì vậy, trên cơ sở sàng lọc các nghiên cứu trước, chúng tôi tập trung vào nghiên cứu một số chất tăng thấm qua da hiệu quả và lựa chọn ra chất tăng thấm tối ưu, phối hợp vào dạng gel acyclovir để cải thiện tính thấm của dược chất trong chế phẩm Ngoài ra, liposom cũng là một hệ mang thuốc đang được quan tâm nghiên cứu, có khả năng cải thiện tính thấm của dược chất Do đó, việc nghiên cứu bào chế liposom acyclovir và ứng dụng vào dạng gel để làm tăng thấm dược chất cũng là một hướng đi có triển vọng Với những lý do như vậy, chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu bào chế gel acyclovir” với các mục tiêu:

1 Cải thiện thấm acyclovir qua da

2 Ứng dụng kết quả cải thiện thấm để bào chế gel acyclovir 5%

 Khối lượng phân tử: 225,2

 Tên khoa học: purin-6-on

2-amino-1,9-dihydro-9-[(2-hydroxyethoxy)methyl]-6H-hoặc 9-[(2-hydroxyethoxy)methyl]guanin [5], [13], [43], [45]

1.1.2 Tính chất lý hóa

 Acyclovir (ACV) ở dạng bột kết tinh màu trắng, ít tan trong nước, rất ít tan trong alcol, thực tế không tan trong h u hết các dung môi hữu cơ, tan tự do trong dung môi dimethyl sulfoxyd, tan được trong dung dịch kiềm hoặc acid vô cơ loãng [5], [43]

 Nhiệt độ nóng chảy khoảng 230oC, sau đó bị phân hủy [5]

 Các hằng số phân ly: ACV là chất lưỡng tính có 2 hằng số phân ly: pKa1= 2,16; pKa2 = 9,04 [20]

 Đặc điểm độ tan, tính thấm của acyclovir

 Độ tan:

ACV tan ít trong nước [5], [6], [43] Ở nhiệt độ 22-25°C, độ tan của ACV nằm trong khoảng 1,2 đến 1,6 mg/ml [20], còn ở nhiệt độ 37°C, ACV có thể tan

ở mức 2,5 mg/ml [25] Độ tan của ACV còn phụ thuộc nhiều vào pH của môi trường

Bảng 1.1 Độ tan của ACV theo pH môi trường ở 370

C [42]

pH môi trường 1,2 4,5 5,8 6,8 7,4

Độ tan(mg/ml) >3,5 2,6 2,3 2,4 2,5

 Tính thấm của ACV qua niêm mạc và qua da:

Qua niêm mạc: Một số nghiên cứu về tính thấm của ACV qua màng tế bào Caco-2 đã chỉ ra rằng hệ số thấm của dược chất này thấp, nằm trong khoảng 0,1 x 10-6 cm/s đến 12 x 10-6 cm/s như được thống kê trong bảng sau [20]:

Bảng 1.2 Hệ số thấm của ACV qua màng tế bào Caco-2

cm/s ở pH 3 và 8,3.10-8 cm/s ở pH 7,4 Các số liệu này là kết quả ở các thực nghiệm với điều kiện khác nhau, chúng đều thể hiện khả năng thấm qua da thấp của ACV

1.1.3 Tác dụng dược lý

 ACV là một chất tương tự nucleosid, có tác dụng chọn lọc trên tế bào nhiễm virus Herpes Để có tác dụng, ACV phải được phosphoryl hóa thành dạng có hoạt tính là acyclovir triphosphat Ở giai đoạn đ u, ACV được chuyển thành acyclovir monophosphat nhờ enzym của virus là thymidinkinase, sau đó chuyển tiếp thành acyclovir diphosphat và triphosphat bởi một số enzym khác của tế bào Acyclovir triphosphat ức chế

tổng hợp ADN của virus và sự nhân lên của virus mà không ảnh hưởng đến chuyển hóa của tế bào bình thường [4], [41]

 Tác dụng của ACV mạnh nhất trên virus Herpes simplex typ 1 (HSV-1) và kém hơn ở virus Herpes simplex typ 2 (HSV-2), ngoài ra ACV có tác dụng trên virus Varicella zoster (VZV), tác dụng yếu nhất trên virus Cytomegalo (CMV) [4], [5]

1.1.4 Chỉ định

 Dự phòng và điều trị các bệnh do nhiễm virus HSV-1, HSV-2 ở da và niêm mạc [4]

 Điều trị nhiễm Herpes virus zoster cấp tính ở mắt, phổi, th n kinh [4]

 Điều trị khởi đ u và tái phát nhiễm Herpes sinh dục [4]

 Dự phòng và điều trị nhiễm virus ở người suy giảm miễn dịch, bệnh thủy đậu [4]

1.1.5 Chống chỉ định, thận trọng

 Chống chỉ định cho những bệnh nhân mẫn cảm với thuốc [7]

 Thận trọng với bệnh nhân suy thận, phụ nữ có thai và cho con bú [7]

 Tiêm truyền tĩnh mạch chậm để tránh kết tủa ACV trong thận [7]

1.1.6 Tác dụng không mong muốn

 Có thể gặp buồn nôn, tiêu chảy, nôn, đau bụng, nổi ban, các phản ứng về

th n kinh như chóng mặt, ảo giác, buồn ngủ [7]

 Đường tiêm truyền tĩnh mạch có thể gặp các phản ứng như: viêm, viêm tĩnh mạch ở vị trí tiêm [7]

 Kem bôi: Có khi gặp cảm giác nóng bỏng hay nhói nhẹ ở vị trí bôi kèm theo ban đỏ nhẹ [7]

1.1.7 Một số chế phẩm acyclovir trên thị trường

Hiện nay ACV được ứng dụng bào chế dưới nhiều dạng khác nhau: kem,

mỡ tra mắt, viên nén, viên nang, hỗn dịch, bột pha tiêm Theo danh mục thuốc

đã cấp số đăng ký tính đến 7/2010 và một số trang web của các nhà sản xuất uy tín, có thể liệt kê một số biệt dược của ACV như sau [8], [14], [17], [26]:

Bảng 1.3 Một số chế phẩm ACV trên thị trường

STT Biệt dƣợc Dạng bào chế Hàm lƣợng Nhà sản xuất

1 Zovirax

Kem 5%, tuýp 2g, 10g

Glaxo Smith Kline

Mỡ tra mắt 3%, tuýp 4,5g Viên nén 200, 400, 800 mg Hỗn dịch 250 mg/5ml,

chai 25 ml, 125 ml Bột pha tiêm

4 Mediclovir Mỡ tra mắt 3%, tuýp 10g Medipharco

8 Aciclovir OPV Kem 5%, tuýp 5g, 10g OPV

11 Acyclovir 5% Kem 5%, tuýp 5g, 10g Mediplantex

Laboratories Inc (USA)

Myung-In Pharm Co., Ltd (Korea)

16 Azalovir Kem 5%, tuýp 10g

U Square Lifescience Pvt., Ltd (India)

21 Y.P.Acyclovir

Young Poong Pharmaceutical Co., Ltd (Korea)

22 Virless tablet

Y.S.P Industries (M) Sdn Bhd (Malaysia) Như vậy, mặc dù đã được bào chế dưới nhiều dạng khác nhau nhưng dạng gel ACV h u như chưa có trên thị trường Chế phẩm gel có nhiều ưu điểm như không gây trơn nhờn, dễ rửa sạch, đặc biệt cho phép giải phóng dược chất nhanh hơn, nhất là các dược chất tan trong nước, do đó giúp dược chất thấm qua da tốt hơn Ngoài ra thuốc bào chế ở dạng gel có thể chất ổn định dưới tác động của nhiệt độ, thuận lợi khi bảo quản trong điều kiện khí hậu nhiệt đới của nước ta Vì vậy, chúng tôi nghiên cứu bào chế gel ACV nhằm cải thiện khả năng giải phóng

và thấm ACV qua da

1.2 Một số biện pháp dƣợc học đã đƣợc vận dụng trong cải thiện tính thấm của acyclovir qua da

Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến khả năng thấm của thuốc qua da như yếu tố sinh lý (loại da, nhiệt độ bề mặt da và khả năng giãn mạch, mức độ hydrat hoá lớp sừng), yếu tố dược học (dược chất, tá dược và kỹ thuật bào chế) Đối với dược chất có tính thấm kém như ACV, việc nghiên cứu cải thiện tính thấm của

dược chất (DC) được xác định là một nội dung quan trọng Có nhiều biện pháp làm tăng thấm dược chất qua da, có thể chia làm 5 nhóm biện pháp như sau:

Hình 1.1: Một số biện pháp tăng thấm thuốc qua da [21]

Vì vậy, để nghiên cứu bào chế gel với dược chất ACV khó thấm, chúng tôi tập trung vào việc nghiên cứu lựa chọn các chất tăng thấm và liposom hoá để cải thiện tính thấm của dược chất trong chế phẩm

1.2.1 Sử dụng các chất tăng thấm

1.2.1.1.Một số chất thường được sử dụng để tăng thấm thuốc qua da

- Sulfoxid: ví dụ như dimethyl sulfoxid (DMSO), N,N-dimethyl acetamid

(DMA), N,N-dimethyl formamid (DMF), có khả năng hoạt động bề mặt ion hoá (decylmethyl sulfoxid) và tương tác với keratin trong lớp sừng, làm thay đổi cấu trúc protein, làm vỡ cấu trúc lipid của lớp sừng do đó giúp tăng khả năng thấm của dược chất (DMSO) [34], [47] Năm 2004, Al-Safi và cộng sự [18] đã tiến hành thử nghiệm khảo sát tác dụng làm tăng thấm của hai chất tăng thấm DMSO

và DMF đối với dược chất azathioprin Thử nghiệm được tiến hành qua màng da

chuột với thiết bị Franz, định lượng dược chất bằng phương pháp HPLC Kết quả cho thấy với tỷ lệ chất tăng thấm 5%, lượng dược chất thấm qua màng tăng 20,7% và 22,4% tương ứng với DMSO và DMF Đã có rất nhiều nghiên cứu về sulfoxid, các kết quả cho thấy nhóm này có khả năng làm tăng thấm cao Trong các dạng thuốc uống và tiêm người ta ít dùng hoặc dùng với hàm lượng thấp là

do độc tính của nó Tuy nhiên khi dùng ngoài với nồng độ rất cao chúng mới gây độc, ví dụ DMSO nồng độ cao có thể gây các kích ứng trên da, với nồng độ > 60% có thể làm nhiễu loạn tổ chức gian bào [22], [24]

- Chất diện hoạt: Nhiều chất diện hoạt được ứng dụng trong cải thiện tính

thấm qua da của dược chất Chất diện hoạt làm tăng thấm dược chất qua da do tác động với dược chất làm thay đổi độ tan, hệ số phân bố của dược chất [2]; ngoài ra chất diện hoạt có khả năng hoạt động bề mặt, tác động trực tiếp lên hàng rào lipid của lớp sừng, làm giãn các liên kết liên tế bào xen khít nhau của lớp sừng, thay đổi thành ph n và tốc độ của quá trình tổng hợp phospholipid trên da, giúp thuốc dễ thấm qua da hơn [47] Chất diện hoạt hay được dùng nhất trong dạng thuốc dùng ngoài là natri lauryl sulfat, Tween, các muối mật như natri deoxycholat, natri glycocholat Một nghiên cứu năm 1990 của Rigg và Barry [39] xem xét khả năng làm tăng thấm 5-fluorouracil (5-FU) bởi Tween 20 nồng

độ 0,1% qua các màng: da rắn lột, da chuột, da người Kết quả cho thấy với màng da chuột, Tween 20 làm dược chất tăng thấm tốt nhất là 6 l n Năm 2007, Pankaj Karande và cộng sự [30] đã nghiên cứu về khả năng tăng thấm của các chất diện hoạt là natri lauroylsarcosinat và sorbitan monolaurat 20 (Tween 20), thử nghiệm với màng da lợn theo phương pháp đánh dấu đồng vị D2O Kết quả cho thấy khi phối hợp hai chất diện hoạt trên cho tác dụng tốt hơn, tỷ lệ cho kết quả tăng thấm tốt nhất là 1,5% (w/w) tổng các chất diện hoạt và tỷ lệ natri lauroylsarcosinat:Tween 20 là 3:7

- Alcol: làm tăng độ tan, tốc độ hoà tan của dược chất ít tan, cải thiện mức

độ và tốc độ hấp thu qua da thông qua cơ chế hydrat hoá lớp sừng, thay đổi cấu

trúc lipid sừng nên làm tăng khả năng xuyên thấm qua da [2], [34] Năm 2008, R.M Watkinson và cộng sự [27] tiến hành nghiên cứu về tác động của ethanol tới tính thấm của ibuprofen qua hai loại màng: màng silicon và màng biểu bì da người Kết quả cho thấy với màng silicon thì ethanol đã làm tăng thấm Ibuprofen, tuy nhiên mức độ tăng không lớn, kể cả với tỷ lệ dung môi 100% thì

hệ số thấm chỉ tăng 1,39 l n so với dùng 100% nước Nhưng với màng biểu bì da người cho kết quả khác hẳn, ở tỷ lệ ethanol/nước là 50:50 và 75:25 mức độ tăng thấm là cao nhất (tương ứng là 11,4 l n và 12,2 l n) Lý giải điều này là do sự tác động của ethanol lên da thông qua cơ chế hydrat hoá lớp sừng, thay đổi cấu trúc lipid sừng nên làm tăng khả năng xuyên thấm qua da của dược chất

- Polyol: hay dùng nhất là propylen glycol (PG) Ngoài khả năng làm đồng

dung môi cho dược chất thân d u, làm tăng độ tan, tăng khả năng giải phóng, PG còn có tác dụng làm tăng tính thấm qua da PG tác động trực tiếp vào cấu trúc vừa thân d u, vừa thân nước của da, đặc biệt là lớp sừng Do đó làm tăng hệ số phân bố dược chất trong lớp sừng, tăng khả năng xuyên thấm qua da, tăng hấp thu Khả năng cải thiện tính thấm của thuốc qua da đạt hiệu quả cao nhất khi phối hợp với các chất làm tăng tính thấm khác, đặc biệt là acid oleic và azon Nhược điểm của PG là không có khả năng thấm sâu [2], [32]

1.2.1.2 Một số nghiên cứu sử dụng chất tăng thấm để cải thiện thấm acyclovir qua da

Năm 2004, Sales và cộng sự [40] nghiên cứu ảnh hưởng của PG tới khả năng giải phóng in vitro qua màng cellulose acetat 0,45µm của ACV từ dung

dịch PG và gel Carbopol 971P Hệ dung môi và gel Carbopol chứa PG với tỷ lệ

từ 0% - 70% đã được dùng để nghiên cứu Ở dạng dung dịch, mức độ thấm qua

da của ACV tăng lên khi tỷ lệ PG trong hỗn hợp tăng, đạt cao nhất với tỷ lệ PG

là 70% Mức độ giải phóng của ACV ra khỏi gel cũng được nghiên cứu Kết quả cho thấy hệ số khuếch tán của dược chất giảm khi tỷ lệ PG trong thành ph n gel tăng, điều này được giải thích là do PG làm tăng độ nhớt môi trường Mức độ

thấm qua da của ACV trong gel Carbopol chứa 50% PG là lớn nhất Tính thấm qua da của ACV trong gel nhỏ hơn trong hệ dung môi Nguyên nhân có thể do mạng lưới cấu trúc gel là các polyme nên ảnh hưởng tới tốc độ khuếch tán dược chất

Mới đây, năm 2009, Sanjay Dey và cộng sự [24] đã nghiên cứu khả năng

cải thiện thấm ACV qua da dưới tác động của DMSO ACV được bào chế dưới dạng gel chứa 1% ACV với Carbopol 934P (1,5% w/w) Mô hình thử nghiệm

tính thấm in vitro được thực hiện với thiết bị Franz và màng biểu bì da chuột, da

lợn Định lượng ACV bằng phương pháp đo quang ở bước sóng 251,5nm Kết quả cho thấy DMSO có tác dụng làm tăng tính thấm của ACV qua da chuột và

da lợn Khi sử dụng 10% DMSO, tốc độ thấm của ACV qua da chuột tăng 1,84

l n, qua da lợn tăng 1,55 l n so với mẫu không sử dụng DMSO Tác giả cho rằng DMSO làm tăng thấm do có khả năng tương tác và thay đổi cấu trúc của lipid lớp sừng, từ đó giảm khả năng cản trở của lớp sừng với sự hấp thu thuốc, vì vậy làm tăng hấp thu dược chất

Năm 2005, trong khuôn khổ nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đến

khả năng giải phóng ACV ra khỏi tá dược thuốc mỡ, Nguyễn Thị Minh Châu [9]

đã bào chế ACV dưới dạng emulgel với Carbopol 934 và phối hợp các chất tăng thấm khác nhau (DMA, DMSO, PG, Tween 80, Span 80, acid oleic, menthol, tinh d u tràm Úc) Sau đó, tác giả đã đánh giá khả năng giải phóng dược chất ra khỏi tá dược sau 4 giờ với thiết bị Franz và màng cellulose acetat 0,45 µm, môi trường khuếch tán là acid sulfuric 0,5M Kết quả thu được như sau:

+ Sử dụng đơn dung môi DMSO, DMA, PG: làm tăng khả năng giải phóng của ACV Nồng độ chất tăng thấm càng cao thì khả năng giải phóng càng lớn Tuy nhiên, khi nồng độ chất tăng thấm tăng đến một giới hạn nào đó, độ tan của dược chất quá bão hòa, lúc này tăng chất tăng thấm có thể làm thay đổi hệ số phân bố D/N của dược chất, làm giảm khả năng khuếch tán dược chất qua màng

Kết quả các công thức có chứa chất tăng thấm làm tăng khả năng giải phóng của ACV theo thứ tự sau: 20%PG < 25% DMSO < 25% DMA

+ Sử dụng kết hợp các chất tăng thấm: DMA 25% và menthol 0,3%, DMA 25% và acid oleic 5% làm tăng khả năng giải phóng ACV ra khỏi tá dược Sự kết hợp làm tăng khả năng giải phóng do sự hỗ trợ nhau của các chất tăng thấm theo các cơ chế khác nhau

Đỗ Thị Huyền Giang (2006) [10] với đề tài nghiên cứu biện pháp cải thiện tính thấm của ACV đã đánh giá khả năng giải phóng ACV qua màng thẩm tích

với thiết bị khuếch tán mô phỏng bình Franz trong môi trường đệm phosphat pH 6,8 sau 2,5 giờ Tác giả đã phối hợp các chất tăng thấm như 2-hydroxypropyl β-cyclodextrin, acid tartric, natri desoxycholat, natri laurylsulfat và các loại Tween Kết quả cho thấy 2-hydroxypropyl β-cyclodextrin (tỉ lệ 1:1 so với ACV), acid tatric (2,5%), natri deoxycholat (2,5%), natri laurylsulfat (1%) làm tăng tính thấm ACV tương tự nhau (1,5 l n) Khi sử dụng chất tăng thấm là Tween 80 với

tỉ lệ 10% so với ACV thì cho kết quả mức độ thấm của ACV tăng cao nhất (2,3

l n)

Cũng với mục tiêu nghiên cứu biện pháp làm tăng tính thấm của ACV, vào

năm 2008, Đỗ Thu Hằng [11] đã tiến hành đánh giá khả năng thấm của ACV

trên thiết bị khuếch tán mô phỏng bình Franz với môi trường đệm phosphat pH 7,4 trong vòng 4 giờ Một số chất tăng thấm đã được sử dụng để làm tăng tính thấm của ACV qua các loại màng: biểu bì da lợn, trung bì da lợn và màng ối Kết quả cho thấy mức độ làm tăng tính thấm ACV qua màng biểu bì da lợn: Tween80 1% là 1,7 l n; Cremophor 1% và benzalkonium clorid 1% là 1,5 l n; mức độ làm tăng tính thấm ACV qua màng ối: benzalkonium clorid 1% là 1,5

l n; cremophor 1% và Tween80 1% là 1,4 l n; natri deoxycholat 5% là 1,3 l n

Nguyễn Thị Thanh Tú (2010) [15] cũng sử dụng thiết bị khuếch tán mô

phỏng bình Franz với môi trường đệm phosphat pH 7,4 để đánh giá tính thấm của ACV trong vòng 4 giờ khi tiến hành nghiên cứu tính thấm của ACV qua

biểu bì da lợn, da chuột, da thỏ Các nhóm chất tăng thấm thân nước, thân d u tiêu biểu đã được sử dụng Kết quả cho thấy khả năng làm tăng thấm của chúng với ACV qua da thỏ như sau:

+ Chất tăng thấm thân nước: DMSO 10% (2,7 l n) > NaDC 5% (2,2 l n) > BKA 5% (1,8 l n) > NaLS 5% (1,7 l n) > Tween 80 5% (1,5 l n) > propylen glycol 10% (1,4 l n) > cremophor 5% (1,3 l n)

+ Chất tăng thấm thân d u: chỉ có acid oleic làm tăng thấm nhẹ, còn lecithin, menthol, isopropyl myristat đều làm giảm tính thấm của ACV

Tác giả cũng đã bước đ u đánh giá ảnh hưởng của các chất tăng thấm lên khả năng thấm của dược chất từ dạng gel ACV 1% với tá dược Carbopol 934P Khi sử dụng DMSO 10% trong công thức gel 1%, tính thấm cuả ACV tăng 1,68

l n và tương tự NaDC 5% làm tăng 1,51 l n

Như vậy, đã có nhiều nghiên cứu đánh giá tác động của chất tăng thấm đến khả năng giải phóng và thấm của ACV qua các loại màng khác nhau: màng cellulose acetat, da chuột, biểu bì da lợn được thực hiện Tuy nhiên các nghiên cứu được tiến hành ở các điều kiện khác nhau nên kết quả nghiên cứu thu được

có những khác biệt nhất định Vì vậy, trên cơ sở sàng lọc các kết quả nghiên cứu trước, chúng tôi tập trung vào nghiên cứu một số chất tăng thấm đã được chứng minh đem lại hiệu quả tăng giải phóng hoặc tăng thấm đối với ACV như DMSO,

PG, Tween 80, NaLS, đồng thời xem xét khả năng phối hợp các chất tăng thấm với các tỷ lệ khác nhau, đánh giá hiệu quả của chất tăng thấm đối với ACV qua

da thỏ, qua đó lựa chọn được chất tăng thấm thích hợp dùng trong bào chế gel ACV

Hơn nữa, đa số các nghiên cứu tiến đánh giá ảnh hưởng của chất tăng thấm đến khả năng giải phóng hoặc thấm qua da của ACV, dạng gel chỉ được bào chế như là phương tiện để đánh giá ảnh hưởng của các chất tăng thấm Chưa có nghiên cứu nào bào chế một chế phẩm gel ACV hoàn thiện và đánh giá đ y đủ các chỉ tiêu chất lượng của một gel thuốc Vì vậy trên cơ sở lựa chọn được chất

tăng thấm tối ưu nhất trong các chất tăng thấm khảo sát, luận văn sẽ nghiên cứu bào chế dạng gel ACV có khả năng cải thiện tính thấm của dược chất qua da và tiến hành đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng của gel bào chế

1.2.2 Liposom hoá

Ngoài phương pháp sử dụng chất tăng thấm để cải thiện tính thấm của dược chất, việc bào chế dưới dạng liposom để làm tăng tính thấm cũng là một hướng nghiên cứu đang được quan tâm trong bào chế hiện đại

1.2.2.1 Sơ lược về liposom

Liposom có cấu trúc hình c u đơn hay đa lớp, gồm một nhân nước ở giữa được bao bọc bởi một vỏ lipid kép gồm một hay nhiều lớp đồng tâm có kích thước thay đổi từ hàng chục đến hàng ngàn nanomet [1]

Hình 1.2 Cấu trúc của liposom

Có thể chia liposom thành các loại sau [3]:

- Liposom một lớp: Vỏ chỉ có một lớp phospholipid Tùy theo kích thước

- Niosom: có cấu trúc tương tự liposom trong đó các phân tử chất diện hoạt không ion hóa được dùng thay thế các phospholipid

- Liposom đàn hồi: có màng kết hợp phospholipid và chất diện hoạt không ion hóa (thường là Span) đặc trưng với khả năng đàn hồi cao

Một số phương pháp bào chế liposom thường sử dụng:

 Phương pháp hydrat hoá film [3]:

Phương pháp này thu được liposom nhiều lớp, có kích thước không đồng nhất Nếu tiếp tục xử lý với siêu âm (ở t n số 20KHz trong 3-5 phút) có thể thu được các liposom có kích thước đồng nhất hơn [3]

 Phương pháp pha loãng polyol:

Phương pháp pha loãng polyol đơn giản, dễ thực hiện và tốn ít thời gian Ngoài ra, phương pháp này còn cho hiệu suất liposom hoá cao và tạo ra liposom

ổn định [35]

 Phương pháp đông khô:

Liposom bào chế bằng phương pháp đông khô có kích thước nhỏ 200nm) Chế phẩm bào chế bằng phương pháp đông khô đảm bảo vô khuẩn, không

(100-có chất gây sốt và ổn định vì sản phẩm ở dạng khô [23]

 Phương pháp bốc hơi pha đảo:

Phương pháp này hiệu suất tạo liposome cao, áp dụng được với nhiều loại phospholipid, nhưng dược chất bị tác động của nhiệt và siêu âm, có thể ảnh hưởng tới độ bền, khó áp dụng khi chế tạo lượng lớn [3]

 Phương pháp Batzri và Korn:

Phương pháp này đơn giản, dễ thực hiện, tránh được tác động của siêu âm, liposom thu được có kích thước tương đối đồng nhất Tuy nhiên, hiệu suất tạo liposom thấp [3]

1.2.2.2 Một số nghiên cứu bào chế liposom acyclovir để cải thiện tính thấm của thuốc

Pavelic Z và cộng sự đã nghiên cứu bào chế liposom ACV nhằm mục đích kéo dài giải phóng dược chất và cải thiện sinh khả dụng của thuốc trong điều trị bệnh herpes sinh dục [37] Vào năm 2001, nhóm nghiên cứu đã tiến hành bào chế liposom bằng nhiều phương pháp, trong đó phương pháp pha loãng polyol cho hiệu suất liposom hoá cao nhất, đồng thời phương pháp này cũng làm liposom ổn định, nhất là khi phối hợp vào dạng gel với tá dược gel Carbopol Ngoài ra, phương pháp pha loãng polyol cũng đơn giản, dễ thực hiện và tốn ít thời gian [35] Tiếp theo, năm 2004, 2005 nhóm tác giả trên đã l n lượt phối hợp chloramphenicol và ACV vào liposom, bào chế dạng gel Carbopol chứa liposom choramphenicol và ACV, tiến hành đánh giá các chỉ tiêu của liposom như kích thước tiểu phân, phân bố kích thước tiểu phân, hiệu suất liposom hoá, độ ổn định của chế phẩm trong môi trường tương tự môi trường âm đạo ở người (pH 4,5) [36], [37] Đặc biệt, nhóm nghiên cứu đã bào chế và so sánh dạng liposom trung tính, liposom tích điện âm và liposom tích điện dương chứa ACV Các phospholipid khác nhau được dùng trong bào chế liposom như: phosphatidylcholin trứng (PC) /phosphatidylglycerol trứng (9:1) để bào chế liposom tích điện âm, PC bào chế liposom trung tính và PC/stearylamin 9:3 tạo

ra liposom tích điện dương Kết quả cho thấy, liposom tích điện âm và liposom tích điện dương có kích thước nhỏ hơn và đồng đều hơn (đường kính trung bình khoảng 300nm) liposom trung tính (đường kính trung bình 500nm), hiệu suất liposom hoá và hàm lượng ACV trong liposom của liposom tích điện cũng cao hơn liposom trung tính Liposom trung tính chỉ liposom hóa được 8% ACV, trong khi đó liposom tích điện âm và liposom tích điện dương có thể liposom hóa được một lượng dược chất lớn (từ 25-30%) Về độ ổn định, liposom tích điện dương ổn định nhất trong dịch âm đạo nhân tạo (pH 4,5 và 1% chất nh y),

còn liposom tích điện âm và liposom trung tính kém ổn định hơn Để cải thiện

độ ổn định, liposom được phân tán vào gel Carbopol 974P NF Sự kết hợp liposom trong gel thân nước đã cải thiện được độ ổn định và gợi ý cho khả năng ứng dụng dạng bào chế gel chứa liposom ACV trong điều trị bệnh Herpes sinh dục [37]

Ethosom là một hệ giải phóng thuốc có cấu trúc kiểu liposom đa lớp, được chế tạo từ phospholipid, ethanol và nước Horwitz E và cộng sự [28] nghiên cứu bào chế ethosom ACV và đánh giá hiệu quả điều trị bệnh herpes môi trên lâm sàng, đối chiếu với kem Zovirax 5% trên thị trường theo nghiên cứu ngẫu nhiên

mù đôi Kết quả nghiên cứu cho thấy khi sử dụng ethosom bào chế có hàm lượng ACV 5%, hiệu quả điều trị được cải thiện đáng kể, kết quả thể hiện qua các thông số lâm sàng được lượng giá như thời gian từ khi điều trị đến hình thành vẩy, thời gian tính đến khi vẩy bong trên các tổn thương do bệnh herpes so với dạng kem Zovirax 5% Kết quả nghiên cứu cho thấy hệ mang thuốc mới ethosom

đã cải thiện đáng kể hiệu quả điều thị lâm sàng của ACV trong điều trị herpes ở môi Những kết quả này liên quan đến khả năng thấm sâu vào trong da và khả năng dự trữ, duy trì ACV ở mức có tác dụng điều trị của hệ ethosom [44] Ethosom được cho là làm tan thành ph n lipid của da và giải phóng thuốc tại các

vị trí dọc theo đường thấm sâu của hệ nên có hiệu quả tốt trong cải thiện giải phóng thuốc qua da về cả số lượng và mức độ thấm sâu

Liposom đàn hồi cũng là một hệ giải phóng thuốc qua da đáng quan tâm Liposom đàn hồi khác liposom qui ước và niosom ở màng lipid đặc trưng với khả năng đàn hồi cao Năm 2008, Jain S.K và cộng sự [29] nghiên cứu bào chế liposom đàn hồi chứa natri acyclovir theo phương pháp cất quay truyền thống nhằm làm tăng khả năng giải phóng ACV qua da Phosphatidylcholin đậu nành hydrogen hóa và chất diện hoạt không ion hóa (Span 40/60/80) được cho vào bình nón và hòa tan trong hỗn hợp cloroform:methanol (2:1 tt/tt) Kết quả nghiên cứu cho thấy liposom đàn hồi chứa natri acyclovir có hiệu suất chế tạo cao hơn,

khả năng cải thiện thấm tốt hơn thể hiện qua tốc độ thấm dược chất cao hơn và giải phóng qua da có hiệu quả hơn so với liposom qui ước Nhóm tác giả còn

nghiên cứu tính thấm in vitro của natri acyclovir trong liposom đàn hồi được

thực hiện qua da chuột bằng thiết bị Frank Da vùng bụng của chuột được cạo sạch lông và đặt vào giữa ngăn cho và ngăn nhận của bình Frank, lớp sừng của

da được đặt quay lên trên phía ngăn cho, diện tích khuếch tán 1 cm2 Môi trường thử là dung dịch đệm phosphat đẳng trương pH 6,5 có chứa 20% PEG 400, nhiệt

độ 37±1oC, ngăn nhận được khuấy từ, thời gian thử 24 giờ, định lượng ACV từ các mẫu bằng phương pháp HPLC Kết quả cho thấy tốc độ thấm natri acyclovir

từ liposom đàn hồi qua da tăng g n 2 l n so với liposom qui ước chứa natri acyclovir (bào chế tương tự trong đó chất diện hoạt được thay thế bằng cholesterol) và 6,3 l n dung dịch dược chất tự do Quan sát về mức độ thấm sâu vào trong da bằng kính hiển vi lase quét đồng tiêu cự cho thấy liposom đàn hồi

có khả năng thấm sâu vào trong da cao hơn hẳn so với liposom qui ước Các

nghiên cứu in vivo cho thấy nồng độ natri acyclovir trong huyết tương đạt cao

gấp 4,2 l n so với liposom qui ước Các liposom đàn hồi chui qua lỗ chân lông ở lớp sừng một cách dễ dàng nhờ cơ chế tự đàn hồi vì thế có thể là hệ tiềm năng cải thiện thấm thuốc qua da

Vũ Thị Hồng Hạnh (2010) [12] đã nghiên cứu bào chế liposom acyclovir bằng phương pháp đông khô, pha loãng polyol và phương pháp tráng film Tác giả đã tiến hành bào chế và đánh giá một số chỉ tiêu của liposom như đánh giá kích thước tiểu phân, phân bố kích thước tiểu phân, xác định tỷ lệ liposom hoá Kết quả cho thấy phương pháp pha loãng polyol và tráng film cho kích thước liposom nhỏ, trung bình khoảng 0,4 µm, phương pháp đông khô cho kích thước tiểu phân lớn hơn 0,7 µm Tỷ lệ liposom hoá khi bào chế bằng phương pháp tráng film lớn nhất (30%), còn phương pháp đông khô và pha loãng polyol chỉ đạt 10%

Tóm lại, có nhiều phương pháp để bào chế liposom, mỗi phương pháp có những ưu, nhược điểm và khả năng ứng dụng riêng Phương pháp đông khô có rất nhiều ưu điểm nhưng c n nhiều thời gian và đòi hỏi thiết bị chuyên dụng, vì thế giá thành sản phẩm cao, thường thích hợp để bào chế dạng thuốc tiêm đông khô để đảm bảo vô khuẩn và độ ổn định của chế phẩm Phương pháp tráng film cho % dược chất được liposom hoá lớn theo tác giả Hạnh (2010) [12], nhưng lại gặp khó khăn trong kỹ thuật tráng film, kiểm soát nhiệt độ trong quá trình hydrat hoá Vì vậy, trong khuôn khổ ứng dụng liposom vào chế phẩm gel dùng ngoài, chúng tôi ưu tiên chọn phương pháp pha loãng polyol ACV là một hoạt chất tan nhẹ trong nước và alcol nhưng tan tốt trong propylen glycol, do đó rất thích hợp với phương pháp pha loãng polyol Ngoài ra, phương pháp pha loãng polyol cũng được cho là phương pháp tạo ra hiệu suất liposom hóa các hợp chất thân nước cao [37], thích hợp với dược chất ACV Mặt khác, phương pháp này có nhiều ưu điểm như phương pháp bào chế đơn giản, thời gian thực hiện ngắn Để hạn chế nhược điểm không ổn định của liposom, sau khi bào chế dưới dạng liposom xong thì phối hợp ngay vào dạng bào chế gel để đảm bảo độ ổn định của chế phẩm.

Chương 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ VÀ

2.1 Nguyên vật liệu và thiết bị nghiên cứu

2.1.1 Nguyên vật liệu

Bảng 2.4 Các nguyên vật liệu dùng trong nghiên cứu

STT Nguyên vật liệu Nguồn gốc Tiêu chuẩn

6 Kali dihydrophosphat (KH2PO4) Trung Quốc TKHH

9 Carboxy methylcellulose (CMC) Trung Quốc BP

16 Da thỏ Tự xử lý

17 Kem Acyclovir STADA® (Lô SX:00848) Đức BP

2.1.2 Thiết bị nghiên cứu

- Hệ thống đánh giá tính thấm qua màng Hanson Research

- Máy đo quang UV-VIS Hitachi U-1800

- Máy siêu âm Ultrasonics LC 60H

- Máy khuấy từ Ika® RH basic 1

- Máy đo pH Inolab

- Máy đo độ nhớt Brookfield

- Kính hiển vi điện tử truyền qua Jeol 1010

- Máy phân tích kích thước Zetasizer Nanoseries ZS90

- Cân phân tích, cân kỹ thuật Satorius

- Máy lọc nén, tủ sấy, tủ lạnh, nồi cách thuỷ, bếp điện, các dụng cụ thủy tinh trong bào chế và phân tích

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp đánh giá tính thấm của acyclovir qua da thỏ

- Lật ngược miếng da lại, dùng pank kẹp và dao lam từ từ bóc tách d n lớp

cơ mỡ ra khỏi da, chú ý không được làm thủng miếng da

- Cắt thành miếng nhỏ kích thước thích hợp để thử nghiệm trên hệ thống đánh giá tính thấm qua màng Hanson Research

- Rửa bằng nước muối sinh lý, đóng gói và bảo quản ở ngăn đá tủ lạnh, xử

lý da thỏ trước khi tiến hành thử nghiệm 1-2 ngày

 Đánh giá tính thấm in vitro của ACV qua da thỏ từ hệ dung môi:

Thử nghiệm được tiến hành trên hệ thống đánh giá tính thấm qua màng Hanson Research như minh họa ở hình 2.3

- Ngăn cho: 2ml dung dịch ACV 1500 µg/ml trong môi trường đệm phosphat pH 7,4 và các chất tăng thấm (nếu có) hoặc hỗn dịch liposom ACV

- Ngăn nhận: 7ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4

- Thiết bị được điều nhiệt ở 33 ± 0,5 ºC trong suốt thời gian tiến hành thí nghiệm

- Tốc độ khuấy từ: 400 vòng/phút

- Màng thử tính thấm: da thỏ

- Sau 30 phút lấy mẫu một l n trong thời gian 4 giờ, mỗi l n 1ml, ngay lập tức bổ sung 1ml dung dịch đệm vào ngăn nhận Tiến hành định lượng bằng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại-khả kiến ở bước sóng 252nm, so sánh với mẫu chuẩn 10µg/ml

- Mỗi thí nghiệm được làm ít nhất 3 l n và lấy kết quả trung bình

Hình 2.3 Hình ảnh thử nghiệm đánh giá tính thấm của ACV hệ dung môi

 Đánh giá tính thấm in vitro của thuốc qua da thỏ từ gel ACV

Tiến hành đánh giá tính thấm của ACV từ dạng gel qua da thỏ tương tự như trên nhưng thay dung dịch ACV trong ngăn cho bằng lượng gel được cân chính xác khối lượng, thời gian thử nghiệm 6 giờ

Hình 2.4 Hình ảnh thử nghiệm đánh giá tính thấm của ACV từ dạng gel

 Cách pha mẫu dung dịch ở ngăn cho:

Cân chính xác khoảng 75 mg ACV trong cốc có mỏ 100ml, cân tiếp các chất tăng thấm (nếu có) theo tỷ lệ % so với 50ml dung dịch, thêm 40ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4, khuấy đều, siêu âm đến khi dung dịch trong suốt, chuyển dung dịch trên vào bình định mức 50ml, thêm dung dịch đệm phosphat

pH 7,4 đến vạch, lắc kỹ, lọc qua giấy lọc thường Bỏ 10ml dịch lọc đ u, lấy

chính xác 2ml dịch lọc tiêm vào ngăn cho thiết bị Hanson research

 Xây dựng đường chuẩn:

Đường chuẩn ACV được xây dựng trong môi trường đệm phosphat pH 7,4

để đánh giá mối tương quan giữa nồng độ và mật độ quang của dung dịch ACV

- Dung dịch đệm phosphat pH 7,4: pha theo DĐVN IV

- Pha các dung dịch chuẩn ACV trong môi trường đệm phosphat pH 7,4: + Cân chính xác khoảng 100,0 mg ACV, hoà tan trong 80ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4 trong bình định mức 100 ml, siêu âm khoảng 1 giờ cho đến khi tan hết, thêm dung dịch đệm phosphat pH 7,4 đến vạch, lắc kỹ, lọc qua giấy lọc thường

+ Pha loãng bằng dung dịch đệm phosphat pH 7,4 thành các dung dịch

có nồng độ l n lượt 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 µg/ml Tiến hành đo độ hấp thụ tử ngoại của các dung dịch trên ở bước sóng 252nm

+ Mẫu trắng là dung dịch đệm phosphat pH 7,4

- Xây dựng phương trình hồi quy thực nghiệm, vẽ đồ thị biểu diễn sự tương quan giữa mật độ quang và nồng độ dược chất

 Công thức tính các thông số liên quan đến tính thấm của ACV qua da:

 Lượng ACV thấm qua da tại các thời điểm lấy mẫu:

m i = C i V + v j

Trong đó:

mi : lượng ACV thấm qua da sau i giờ (µg)

Ci : nồng độ ACV ở ngăn nhận tại thời điểm i (µg/ml)

Cj : nồng độ ACV tại ngăn nhận tại thời điểm ngay trước đó 30 phút

 Hệ số thấm biểu kiến của ACV:

Theo định luật Fick J = Kp.Cs từ đó suy ra công thức tính hệ số thấm biểu kiến Kp

Kp

Trong đó: Kp : hệ số thấm biểu kiến (cm/s)

Cs : nồng độ ban đ u của ngăn cho (µg/ml)

2.2.2 Phương pháp bào chế và đánh giá chất lượng liposom acyclovir

2.2.2.1 Bào chế liposom acyclovir

 Thành phần công thức:

- ACV

- Phospholipid: Phosphatidyl cholin hoặc lecithin

- Propylen glycol

- Đệm phosphat pH 7,4: pha theo DĐVN IV

 Phương pháp bào chế: phương pháp pha loãng polyol

- Hòa tan phospholipid và ACV trong 5g PG ở 60oC

- Thêm 5g hệ đệm phosphat pH 7,4 cũng đun nóng ở 60oC vào dung dịch trên, chú ý rót từ từ ở thành cốc, khuấy đều bằng đũa thuỷ tinh

- Pha loãng hỗn dịch trên với đệm phosphat pH 7,4 đến 100ml bằng cách nhỏ từ từ hỗn dịch bằng bơm kim tiêm với tốc độ 90 giọt/phút vào cốc đựng dung dịch đệm phosphat pH 7,4 còn lại, khuấy từ với tốc độ 600vòng/phút, nhiệt

độ 60o

C

- Tiếp tục khuấy từ trong 45 phút với tốc độ và nhiệt độ như trên

- Làm lạnh về nhiệt độ phòng

2.2.2.2 Đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng liposom acyclovir

 Đánh giá kích thước tiểu phân:

Kích thước và phân bố kích thước tiểu phân liposom được xác định bằng hệ thống kính hiển vi điện tử truyền qua Jeol 1010 và máy phân tích kích thước Zetasizer nanoseries ZS90

 Đánh giá hình thái tiểu phân:

Hình thái bên ngoài của tiểu phân liposom được xác định bằng hệ thống kính hiển vi điện tử truyền qua Jeol 1010

2.2.3 Phương pháp bào chế và đánh giá chất lượng gel acyclovir

2.2.3.1 Bào chế gel acyclovir 5%

 Thành phần công thức:

Bảng 2.5 Thành phần công thức gel ACV 5%

Thành phần Vai trò

ACV (tự do hay kết hợp với liposom) 5% Dược chất

Carbopol 974P hoặc carboxymethyl cellulose Tá dược tạo gel

TEA (trường hợp sử dụng Carbopol 974P) Chất trung hoà tạo gel

hoà tan nipagin, nipasol

 Phương pháp bào chế: phương pháp trộn đều đơn giản

 Chuẩn bị tá dược:

Ngâm Carbopol 974P hoặc carboxymethyl cellulose (CMC) trong nước cất hoặc hỗn dịch liposom cho trương nở hoàn toàn qua đêm Trong trường hợp dùng Carbopol 974P, thêm TEA, khuấy trộn thành gel đặc và trong

 Phối hợp dược chất vào tá dược:

+ Phân tán hỗn dịch (2) vào tá dược gel từ từ, khuấy đều để tạo gel đồng nhất

+ Tráng cốc bằng lượng nước cất còn lại để vừa đủ tạo thành 100g gel + Khuấy từ qua đêm để làm mất bọt trong quá trình bào chế

 Đóng gói: đóng vào hộp nhựa, đậy kín

2.2.3.2 Đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng gel acyclovir

 Xác định pH:

- Cân 2,5 g gel pha loãng trong nước cất vừa đủ 25ml

- Đo pH dung dịch thu được bằng máy đo pH

 Xác định độ nhớt:

Đun cách thuỷ gel chứa ACV ở 37±0,5o

C, đo độ nhớt của gel bằng máy đo

độ nhớt Brookfield, sử dụng kim số 4 với tốc độ quay 100 vòng/phút

 Định lượng ACV trong gel

Mẫu thử: Cân chính xác khoảng 1g gel trong cốc có mỏ 100ml, thêm 40ml

dung dịch đệm phosphat pH 7,4, khuấy đều, siêu âm đến khi dung dịch trong suốt Chuyển vào bình định mức 50ml, thêm dung dịch đệm phosphat pH 7,4 đến vạch, lắc kỹ, lọc qua giấy lọc thường Bỏ 10ml dịch lọc đ u, lấy chính xác 1ml dịch lọc cho vào bình định mức 100ml, thêm dung dịch đệm phosphat pH 7,4 đến vạch, lắc kỹ Đo độ hấp thụ tử ngoại của dung dịch ở bước sóng 252nm Song song tiến hành mẫu trắng (mẫu gel bào chế không có dược chất)

Mẫu chuẩn: Cân chính xác khoảng 50mg ACV trong cốc có mỏ 100ml, thêm 40ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4, sau đó tiến hành như mẫu thử Mẫu trắng là dung dịch đệm phosphat pH 7,4

Lượng ACV trong gel được tính theo công thức:

Trong đó: mt: khối lượng ACV trong gel

mc: khối lượng ACV trong mẫu chuẩn

Dt: mật độ quang của dung dịch thử

Dc: mật độ quang của dung dịch chuẩn

Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1 Nghiên cứu cải thiện tính thấm của acyclovir qua da

3.1.1 hảo sát mối tương quan gi a n ng độ acyclovir và mật độ quang

Khảo sát mối tương quan giữa nồng độ ACV và mật độ quang được tiến hành theo phương pháp ghi ở mục 2.2.1 Đo mật độ quang của dung dịch ACV ở các nồng độ khác nhau tại bước sóng 252nm

Bảng 3.6 Nồng độ và mật độ quang tương ứng của dung dịch ACV trong môi

trường đệm phosphat pH 7,4

C (µg/ml) 4 6 8 10 12 14 16

D 0,190 0,292 0,393 0,472 0,554 0,628 0,713

Hình 3.5 Mối tương quan giữa nồng độ và mật độ quang của dung dịch ACV

trong môi trường đệm phosphat pH 7,4

Nhận xét: Mối tương quan giữa mật độ quang và nồng độ dung dịch ACV

được biểu thị bằng đường thẳng y = 0,042x + 0,034 với hệ số tương quan R2

= 0,996 ≈1, chứng tỏ có tương quan tuyến tính giữa nồng độ dung dịch ACV và mật độ quang tương ứng, vì vậy có thể định lượng ACV với nồng độ và mật độ quang nằm trong khoảng tuyến tính đó bằng phương pháp đo quang

3.1.2 hảo sát ảnh hưởng của một số chất tăng thấm đến khả năng thấm của acyclovir qua da thỏ

Để so sánh ảnh hưởng của các chất tăng thấm đến tính thấm của ACV qua

da thỏ, luận văn sàng lọc ra một số chất có khả năng tăng thấm tốt ACV trong các nghiên cứu trước như DMSO, PG, Tween 80, NaLS và tiến hành thử tính

thấm in vitro của ACV qua da thỏ với sự hiện diện của các chất tăng thấm này

theo những tỷ lệ khác nhau Thử nghiệm được tiến hành trên hệ thống thử tính thấm qua màng Hanson research theo phương pháp ghi ở mục 2.2.1 Kết quả thu được thể hiện trong các tiểu mục dưới đây

3.1.2.1 Ảnh hưởng của dimethyl sulfoxid (DMSO)

Bảng 3.7 Ảnh hưởng của DMSO đến tính thấm của ACV qua da thỏ (n=3)

Thông số

Thời gian (giờ)

Chất tăng thấm Không

tăng thấm

DMSO 2%

DMSO 5%

DMSO 10%

2 253,12 280,59 316,93 429,70 2,5 273,60 301,46 334,34 462,88

3 293,71 313,23 349,51 490,91 3,5 313,12 331,51 360,69 529,26

4 320,54 347,96 382,15 551,84

J (µg.giờ -1 cm -2 ) 81,32 90,46 101,20 145,24

Kp (cm.giây -1 10 -5 ) 1,55 1,73 1,94 2,78

Mức độ tăng thấm (lần) 1 1,11 1,25 1,79

Hình 3.6 Ảnh hưởng của DMSO đến tính thấm của ACV qua da thỏ

Theo bảng số liệu 3.7, ACV tăng khả năng thấm qua da thỏ 1,11; 1,25 và 1,79 l n khi sử dụng l n lượt DMSO 2%, 5% và 10% Như vậy DMSO có khả năng làm tăng thấm ACV qua da thỏ, nồng độ DMSO càng cao thì khả năng tăng thấm càng tốt Xu hướng cải thiện tính thấm của ACV phù hợp với các nghiên cứu khác [15], [24] Mặc dù mức độ cải thiện tính thấm ACV của DMSO trong nghiên cứu này thấp hơn nhưng điều đó có thể lý giải do điều kiện thiết bị thí nghiệm khác nhau, hơn nữa kết quả nghiên cứu trên màng sinh học thường dao động lớn Đồ thị 3.6 cho thấy ACV tăng đáng kể cả tốc độ và mức độ thấm qua

da khi có sử dụng DMSO 10% Do đó, lựa chọn DMSO 10% cho nghiên cứu tiếp theo

Bảng số liệu trên cho thấy hệ số thấm trung bình của ACV là 1,55.10-5, cao hơn so với các kết quả nghiên cứu về tính thấm của ACV ở pH 7,4 qua tế bào Caco-2 (1,2.10-7-4,3.10-7) [20] hoặc tế bào da người (8,3.10-8) [46] Tuy nhiên, khả năng thấm của dược chất qua các loại da khác nhau thì khác nhau Ngoài ra,

so với da động vật, dược chất thường thấm kém hơn qua da người [47] Vì vậy