Định lượng đồng thời cloramphenicol, dexamethason và trong chế phẩm thuốc nhỏ mắt bằng kỹ thuật đạo hàm phổ tỷ đối và trung bình trung tâm phổ tỷ đối

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ Tr−êng đại học dợc hà nội NGUYN PH HONG NH LNG ĐỒNG THỜI CLORAMPHENICOL, DEXAMETHASON VÀ NAPHAZOLIN TRONG CHẾ PHẨM THUỐC NHỎ MẮT BẰNG KỸ THUẬT ĐẠO HÀM PHỔ TỶ ĐỐI VÀ TRUNG BÌNH TRUNG TÂM PHỔ TỶ ĐỐI LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2011 BỘ GIÁO DỤC V O TO B Y T Trờng đại học dợc hµ néi NGUYỄN PHÚ HỒNG ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CLORAMPHENICOL, DEXAMETHASON VÀ NAPHAZOLIN TRONG CHẾ PHẨM THUỐC NHỎ MẮT BẰNG KỸ THUẬT ĐẠO HÀM PHỔ TỶ ĐỐI VÀ TRUNG BÌNH TRUNG TÂM PHỔ TỶ ĐỐI LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH KIỂM NGHIỆM-ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60.73.15 Người hướng dẫn khoa học: TS Vũ Đặng Hoàng HÀ NỘI 2011 LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Vũ Đặng Hoàn, người trực tiếp hướng dẫn tận tình giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn quan tâm, giúp đỡ Thầy, Cô, anh chị kỹ thuật viên mơn Hóa phân tích – Độc chất trường Đại học Dược Hà Nội trình làm thực nghiệm môn Em xin cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo Sau Đại học tạo cho em điều kiện tốt để hồn thành q trình học tập trường Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp giúp đỡ, ủng hộ em trình học tập Hà Nội, tháng 11 năm 2011 Học viên Nguyễn Phú Hoàng MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 12 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ TỬ NGOẠI – KHẢ KIẾN (UV- VIS) 12 1.1.1 Định luật Lambert – Beer 12 1.1.2 Phương pháp quang phổ đạo hàm 12 1.1.2.1 Phương pháp phổ đạo hàm 13 1.1.2.2 Phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối giao điểm không 14 1.1.2.3 Phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối số chia đôi 15 1.1.3 Phương pháp trung bình trung tâm phổ tỷ đối 16 1.2 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 18 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 ĐỐI TƯỢNG – NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ 21 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.2 Nguyên liệu thiết bị 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời CLO, DEX NAP phương pháp quang phổ UV 22 2.2.2 Ứng dụng phương pháp quang phổ nêu định lượng đồng thời CLO, DEX NAP chế phẩm 23 2.2.3 Xử lý kết thực nghiệm 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 24 3.1 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 24 3.1.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 24 3.1.1.1 Dung dịch chuẩn 24 3.1.1.2 Dung dịch thử 25 3.1.2 Xây dựng phương pháp 25 3.1.2.1 Chọn bước sóng định lượng 25 3.1.2.2 Khảo sát khoảng tuyến tính 44 3.1.2.3 Đánh giá độ lặp lại phương pháp 46 3.1.2.4 Đánh giá độ phương pháp 49 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG 51 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 54 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 59 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CLO: Cloramphenicol DEX: Dexamethason GNT 0: Giao điểm HPLC: High Performance Liquid Chromatography MeOH: Methanol NAP: Naphazolin ĐH: Đạo hàm PTĐ: Phổ tỷ đối SCĐ: Số chia đôi STT: Số thứ tự TBTT : Trung bình trung tâm TLTK: Tài liệu tham khảo DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng Tên bảng Trang 3.1 Kết khảo sát khoảng tuyến tính Collydexa 35 3.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính Pollydoxancol 36 3.3 Độ lặp lại phương pháp (Collydexa) 37 3.4 Độ lặp lại phương pháp (Polydoxancol) 38 3.5 Độ phương pháp (Collydexa) 39 3.6 Độ phương pháp (Polydoxancol) 40 3.7 Kết định lượng thuốc nhỏ mắt Collydexa 43 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ STT Hình Tên hình Trang Phổ hấp thụ (a), phổ đạo hàm bậc 1(b) CLO (A-B) DEX; Phổ hấp thụ (c), phổ đạo hàm bậc CLO NAP Phổ hấp thụ dung dịch CLO, DEX, NAP, hỗn 15-16 hợp (CLO, DEX, NAP), chế phẩm phổ cộng (A- B) (CLO + DEX + NAP) 3.1 3.2 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn DEX (A), dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP) Collydexa (B), Polydoxancol (C), với số chia NAP 17 3.3 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn NAP (A), dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP) Collydexa (B), Polydoxancol (C), với số chia DEX 10 18 3.4 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn CLO (A); dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP) Collydexa (B), Polydoxancol (C), với số chia NAP 19 3.5 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn NAP (A), dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP) Collydexa (B), Polydoxancol (C), với số chia CLO 20 20 3.6 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn DEX (A), dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP) Collydexa (B), Polydoxancol (C), với số chia CLO 20 21 3.7 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn CLO (A), dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, 22 STT Hình Tên hình Trang NAP) Collydexa (B), Polydoxancol (C), với số chia DEX 10 3.8 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), CLO 40 Collydexa (A), CLO 50 Polydoxancol (B), với số chia hỗn hợp (DEX 5, NAP 5) 23 10 3.9 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), CLO 40 Collydexa (A), CLO 50 Polydoxancol (B), với số chia hỗn hợp (DEX 10, NAP 5) 24 11 3.10 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), DEX 10 Collydexa (A), DEX 10 Polydoxancol (B), với số chia hỗn hợp (CLO 5, NAP 5) 25 12 3.11 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), DEX 10 Collydexa (A), DEX 10 Polydoxancol (B), với số chia hỗn hợp (CLO 40(50), NAP 5) 26 13 3.12 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), NAP Collydexa (A), NAP Polydoxancol (B), với số chia hỗn hợp (CLO 10, DEX 10) 27 14 3.13 Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), NAP Collydexa (A), NAP Polydoxancol (B), với số chia hỗn hợp (CLO 40(50), DEX 10) 28 15 3.14 Phổ trung bình trung tâm lần dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), CLO 40 Collydexa (A), CLO 50 Polydoxancol (B), với 29 STT Hình Tên hình Trang số chia NAP DEX 10 16 3.15 Phổ trung bình trung tâm lần dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), CLO 40 Collydexa (A), CLO 50 Polydoxancol (B), với số chia DEX 10 NAP 30 17 3.16 Phổ trung bình trung tâm lần dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), DEX 10 Collydexa (A), DEX 10 Polydoxancol (B), với số chia CLO 40(50) NAP 31 18 3.17 Phổ trung bình trung tâm lần dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), DEX 10 Collydexa (A), DEX 10 Polydoxancol (B), với số chia NAP CLO 40 (50) 32 19 3.18 Phổ trung bình trung tâm lần dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), NAP Collydexa (A), NAP Polydoxancol (B), với số chia CLO 40(50) DEX 10 33 20 3.19 Phổ trung bình trung tâm lần dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp (CLO, DEX, NAP), NAP Collydexa (A), NAP Polydoxancol (B), với số chia DEX 10 CLO 40(50) 34 21 3.20 Sắc ký đồ định lượng CLO DEX 41 22 3.21 Sắc ký đồ định lượng NAP 42 Bảng 3.3 Độ lặp lại phương pháp (Collydexa) ĐH PTĐ GNT CLO (%) λ DEX (%) ĐH PTĐ SCĐ NAP (%) CLO (%) DEX (%) TBTT PTĐ NAP (%) CLO (%) DEX (%) NAP (%) 247,0 247,3 255,7 255,8 239,6 239,9 256,0 256,5 249,5 253,6 221,3 221,6 270,9 276,8 243,4 245,1 229,5 103,1 102,9 104,2 104,2 100,6 99,1 97,7 98,5 104,4 104,6 97,9 96,8 98,5 98,9 103,7 104,1 96,0 102,7 102,4 102,4 104,1 99,9 98,5 97,5 97,4 103,7 105,2 98,5 99,7 99,8 98,5 104,2 103,6 95,4 102,4 102,7 101,2 102,5 98,7 98,4 97,9 99,2 104,8 104,1 97,3 97,7 97,7 99,2 103,5 103,8 96,1 102,2 102,4 104,0 102,8 99,2 99,7 96,8 97,7 104,2 103,9 96,4 97,6 96,5 100,5 104,0 102,9 94,8 103,2 103,5 104,7 103,7 99,8 100,9 98,6 98,3 105,1 104,7 95,8 96,4 98,7 97,8 103,0 103,3 96,0 102,9 102,3 103,2 104,3 100,5 101,6 97,6 98,8 103,6 103,8 96,7 97,4 98,9 99,0 104,3 104,7 96,1 TB 102,7 102,7 103,3 103,6 99,8 99,7 97,8 98,3 104,3 104,4 97,1 97,6 98,4 99,0 103,8 103,7 95,7 SD 0,39 0,42 1,31 0,77 0,74 1,31 0,58 0,67 0,59 0,54 0,99 1,14 1,13 0,89 0,49 0,63 0,55 0,38 0,41 1,26 0,74 0,74 1,31 0,60 0,69 0,57 0,52 1,00 1,17 1,15 0,90 0,47 0,61 0,57 (nm) RS D Bảng 3.4 Độ lặp lại phương pháp (Polydoxancol) ĐH PTĐ GNT CLO (%) ĐH PTĐ SCĐ NAP (%) CLO (%) DEX (%) TBTT PTĐ NAP (%) CLO (%) NAP (%) λ (nm) 247,0 247,3 239,6 239,9 254,5 256,6 242,6 245,6 222,5 222,5 269,3 277,0 248,0 110,2 112,9 128,7 134,2 103,7 102,4 101,7 102,2 92,4 96,3 101,1 97,3 95,4 111,7 111,2 129,0 135,7 102,3 101,5 102,4 101,3 93,1 97,2 101,9 96,5 96,2 110,1 112,6 127,7 132,1 102,5 101,7 102,1 101,8 93,5 97,7 102,2 98,1 94,7 112,3 112,8 128,5 132,9 104,1 103,1 100,8 102,7 92,7 96,4 100,7 96,2 95,1 109,5 110,5 126,8 134,5 102,6 100,8 100,3 102,5 93,2 95,9 101,5 95,8 95,8 109,3 110,7 130,2 131,8 103,4 101,6 101,6 100,9 91,8 97,8 102,7 95,4 96,6 TB 110,5 111,8 128,5 133,5 103,1 101,9 101,5 101,9 92,8 96,9 101,7 96,6 95,6 SD 1,21 1,11 1,16 1,52 0,73 0,80 0,79 0,70 0,62 0,79 0,73 1,00 0,71 RSD 1,1 0,99 0,90 1,14 0,71 0,78 0,78 0,69 0,67 0,82 0,72 1,03 0,74 3.1.2.4 Đánh giá độ phương pháp Độ phương pháp xác định thơng qua % tìm lại lượng chất chuẩn CLO, DEX NAP (10% so với hàm lượng ghi nhãn) thêm xác vào dung dịch mẫu thử lô 370711 chế phẩm Collydexa (bảng 3.5), lô 040611 chế phẩm Polydoxancol (bảng 3.6) Bảng 3.5 Độ phương pháp (Collydexa) ĐH PTĐ GNT CLO (%) λ DEX (%) ĐH PTĐ SCĐ NAP (%) CLO (%) DEX (%) TBTT PTĐ NAP (%) CLO (%) DEX (%) NAP (%) 247,0 247,3 255,7 255,8 239,6 239,9 256,0 256,5 249,5 253,6 221,3 221,6 270,9 276,8 243,4 245,1 229,5 104,4 105, 100,7 100.6 86,6 85,7 99,4 101,6 98,9 100,4 100,5 99,3 101,4 100,8 100,1 100,3 99,8 105,2 106, 99,8 101.3 85,9 87,3 100,7 99,7 99,5 99,2 100,5 101,2 99,5 102,1 99,2 101,6 99,5 104,5 105, 99,5 100.7 87,5 86,2 99,6 102,3 100,5 100,9 99,7 101,6 100,8 101,7 99,4 100,8 100,9 104,3 104, 100,3 99.7 88,2 85,2 99,8 101,3 99,4 98,3 99,5 100,8 101,6 101,4 98,9 99,5 101,3 105,7 104, 100,7 98.9 85,9 88,5 99,3 101,7 99,8 99,1 100,8 98,4 101,3 99,6 99,3 99,8 99,3 101,7 102, 101,2 101.9 89,1 87,1 98,8 102,5 98,7 100,7 100,9 101,7 101,7 102,3 99,6 101,7 100,2 TB 104,3 104, 100,4 100,5 87,2 86,7 99,6 101,5 99,5 99,8 100,3 100,5 101,1 101,3 99,4 100,6 100,2 SD 1,38 1,19 0.63 1,08 1,30 1,20 0,64 1,00 0,65 1,05 0,58 1,35 0,82 0,99 0,41 0,92 0,79 RSD 1,33 1,13 0.63 1,08 1,49 1,39 0,64 0,98 0,65 1,05 0,58 1,34 0,81 0,98 0,41 0,91 0,79 (nm) Bảng 3.6 Độ phương pháp (Polydoxancol) ĐH PTĐ GNT CLO (%) λ ĐH PTĐ SCĐ NAP (%) CLO (%) DEX (%) TBTT PTĐ NAP (%) CLO (%) NAP (%) 247,0 247,3 239,6 239,9 254,5 256,6 242,6 245,6 222,5 222,5 269,3 277,0 248,0 104,7 102,2 109,6 110,3 99,6 101,7 93,8 97,3 96,5 98,3 100,3 101,6 95,8 103,8 104,6 107,8 112,6 100,4 101,5 94,9 97,1 97,5 97,2 99,6 102,4 96,5 105,9 105,8 108,5 113,1 99,4 102,5 93,5 96,7 95,7 98,8 99,2 105,3 98,2 103,3 103,8 109,9 110,9 99,8 101,6 93,7 95,8 97,7 97,4 98,5 103,5 97,5 104,2 102,3 106,8 114,2 98,7 99,7 96,6 98,5 95,8 98,6 99,3 102,9 93,4 102,1 103,5 108,7 113,7 98,8 102,3 95,8 96,8 96,9 95,9 99,9 103,6 95,3 TB 104,0 103,7 108,6 112,5 99,5 101,6 94,7 97,0 96,7 97,7 99,5 103,2 96,1 SD 1,29 1,38 1,15 1,56 0,64 0,99 1,27 0,88 0,84 1,09 0,62 1,26 1,71 RSD 1,24 1,33 1,06 1,38 0,64 0,98 1,34 0,91 0,87 1,12 0,63 1,22 1,77 (nm) 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG Từ kết xây dựng phương pháp, định lượng đồng thời CLO, DEX NAP chế phẩm Collydexa 02 lô 370711 040111 phương pháp quang phổ xây dựng - Tiến hành định lượng đồng thời 02 lô chế phẩm phương pháp HPLC theo tiêu chuẩn sở Công ty cổ phần dược phẩm Hà Nội: + Định lượng CLO DEX phương pháp HPLC: o Pha động: Methanol – dd đệm KH2PO4 0,02M (50 : 50) o Cột sắc ký C18 (5µm; 4,6 x 150 mm) o Detector UV: 254 nm o Tốc độ dòng: 1ml/phút o Thể tích tiêm: 20 µl Hình 3.20 Sắc ký đồ định lượng CLO DEX + Định lượng NAP phương pháp HPLC: o Pha động : Methanol – dd đệm NH4NO3 pH 9,5 (93 : 7) o Cột sắc ký Silica (5µm; 4,6 x 150 mm) o Detector UV: 265 nm o Tốc độ dòng: 1ml/phút o Thể tích tiêm: 20 µl Hình 3.21 Sắc ký đồ định lượng NAP Mỗi lơ định lượng 06 lần, kết định lượng trình bày Bảng 3.5 Kết trung bình lô chế phẩm độ lặp lại phương pháp quang phổ so sánh với kết phương pháp HPLC tương ứng, với mức tin cậy 95% Kết trình bày bảng 3.7 Bảng 3.7 Kết định lượng thuốc nhỏ mắt Collydexa Hoạt chất Lô 370711 CLO 040111 370711 DEX 040111 370711 NAP 040111 Hàm lượng % so với nhãn (trung bình ± SD) HPLC λ (nm) 98,8 247,0 ± 1,01 247,3 96,3 247,0 ± 0,92 247,3 104,3 255,7 ± 0,75 255,8 100,5 255,7 ± 0,93 255,8 96,6 239,6 ± 0,84 239,9 92,8 239,6 ± 0,87 239,9 ĐH PTĐ GNT λ (nm) 102,7 ± 0,39 (t = 8,823; 256,0 F = 6,707) 102,7 ± 0,42 (t = 8,733; 256,5 F = 5,783) 99,5 ± 0,31 (t = 6.745; F 256,0 = 8,807) 98,9 ± 0,40 (t = 4,868; F 256,5 = 5,290) 103,3 ± 1,31 (t = 1,623; 249,5 F = 3,051) 103,6 ± 0,77 (t = 1,595; 253,6 F = 1,054) 99,3 ± 1,02 (t = 2,129; F 249,5 = 1,203) 99,7 ± 1,11 (t = 1,353; F 253,6 = 1,425) 99,8 ± 0,74 (t = 7,002; F 221,3 = 1,289) 99,7 ± 1,31 (t = 4,880; F 221,6 = 2,432) 96,7 ± 0,93 (t = 7,501; F 221,3 = 1,143) 95,9 ± 0,88 (t = 6,136; F 221,6 = 1,023) + Với p = 0,95; F(5,5)(0,05) = 5,050; n=6; t10(0,05) = 2,228 ĐH PTĐ SCĐ λ (nm) 97,8 ± 0,58 (t = 2,103; 270,9 F = 3,032) 98,3 ± 0,67 (t = 1,011; 276,8 F = 2,272) 95,8 ± 0,83 (t = 0,988; 270,9 F = 1,229) 96,1 ± 1,13 (t = 0,336; 276,8 F = 1,509) 104,3 ± 0,59 (t = 0; F = 243,4 1,616) 104,4 ± 0,54 (t = 0,265; 245,1 F = 1,930) 99,5 ± 0,84 (t = 1,955; 243,4 F = 1,226) 100,2 ± 0,67 (t = 0,641; 245,1 F = 1,927) 97,1 ± 0,99 (t = 0,943; F = 1,389) 229,5 97,6 ± 1,14 (t = 1,730; F = 1,842) 93,3 ± 0,91 (t = 0,973; F = 1,094) 229,5 94,0 ± 1,04 (t = 2,168; F = 1,429) TBTT PTĐ 98,4 ± 1,13 (t = 0,646; F = 1,252) 99,0 ± 0,89 (t = 0,364; F = 1,288) 95,6 ± 0,7 (t = 1,483; F = 1,727) 96,1 ± 0,96 (t = 0,368; F = 1,089) 103,8 ± 0,49 (t = 1,367; F = 2,343) 103,7 ± 0,63 (t = 1,500; F = 1,417) 99,3 ± 1,0 (t = 2,152; F = 1,156) 101,2 ± 1,13 (t = 1,172; F = 1,476) 95,7 ± 0,55 (t = 2,196; F = 2,333) 93,3 ± 0,9 (t = 0,978; F = 1,070) Chương BÀN LUẬN 4.1 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP 4.1.1 Khảo sát phổ hấp thụ Kết khảo sát phổ hấp thụ cho thấy, có chồng phổ Cloramphenicol phổ Dexamethason Naphazolin khoảng bước sóng 200 – 325 nm Do đó, khơng thể định lượng riêng CLO, DEX NAP hỗn hợp thành phần phương pháp quang phổ hấp thụ thông thường Chế phẩm Polydoxancol có hình dạng phổ lệch nhiều bước sóng độ hấp thụ so với phổ cộng phổ dung dịch hỗn hợp có nồng độ tương đương (CLO 50, DEX 10, NAP 5) Phổ hấp thụ Collydexa gần giống phổ hấp thụ hỗn hợp chuẩn chứa CLO, DEX NAP với nồng độ tương ứng (CLO 40, DEX 10, NAP 5) khoảng bước sóng 220 – 280 nm 4.1.2 Chọn bước sóng Làm trơn phổ: Đã tiến hành khảo sát hệ số làm trơn phổ với nhiều tỷ lệ khác nhau; tỷ lệ (Order: 3, No of Coefficients: 125) cho phổ thu sau xử lý tối ưu Với tỷ lệ lựa chọn, phổ làm trơn với tín hiệu nhiễu chấp nhận giữ nguyên hình dạng phổ ban đầu, khơng làm ảnh hưởng đến khoảng bước sóng khảo sát Lấy đạo hàm: Thực phép lấy đạo hàm bậc phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối giao điểm đạo hàm phổ tỷ đối số chia đôi với hệ số (Order: 5, No of Coefficients: 9); phép lấy đạo hàm với hệ số đảm bảo tính cộng tính phổ đạo hàm với vùng bước sóng lựa chọn Chọn bước sóng: - Phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối giao 0: + Collydexa: Với số chia khảo sát, xác định bước sóng định lượng DEX 255,7 nm 255,8 nm, khơng xác định bước sóng cho định lượng CLO NAP + Polydoxancol: Không lựa chọn bước sóng định lượng phù hợp cho thành phần CLO, DEX NAP - Phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối số chia đôi: + Định lượng CLO: Đã khảo sát số chia (DEX 5, NAP 5) (DEX 10, NAP 5), xác định bước sóng định lượng CLO cho chế phẩm Collydexa 256,0 nm 256,5 nm; cho Polydoxacol 254,5 nm 256,6 nm + Định lượng DEX: Xác định bước sóng định lượng DEX số chia (CLO 40(50), NAP 5) (CLO 5, NAP 5) 249,5 nm 253,6 nm cho Collydexa, không xác định bước sóng định lượng DEX Polydoxancol + Định lượng NAP: Xác định bước sóng định lượng NAP số chia (CLO 40(50), DEX 10) (CLO 10, DEX 10) 221,3 nm 221,6 nm cho Collydexa, khơng chọn bước sóng định lượng NAP Polydoxancol - Phương pháp trung bình trung tâm phổ tỷ đối: + Định lượng CLO: Đã khảo sát cặp số chia (lần phổ hấp thụ dung dịch chuẩn NAP số chia lần phổ trung bình trung tâm lần dung dịch chuẩn DEX 10) cặp số chia (lần phổ hấp thụ dung dịch chuẩn DEX 10 số chia lần phổ trung bình trung tâm lần dung dịch chuẩn NAP) Từ kết khảo sát xác định bước sóng định lượng CLO số chia 270,9 nm 276,8 nm cho Collydexa, Polydoxancol 269,3 nm + Định lượng DEX: Xác định bước sóng định lượng DEX cặp số chia (lần phổ hấp thụ dung dịch chuẩn CLO 40(50) số chia lần phổ trung bình trung tâm lần dung dịch chuẩn NAP 5) cặp số chia (lần phổ hấp thụ dung dịch chuẩn NAP số chia lần phổ trung bình trung tâm lần dung dịch chuẩn CLO 40(50)) 243,4 nm 245,1 nm cho Collydexa; không xác định bước sóng định lượng DEX Polydoxancol + Định lượng NAP: Xác định bước sóng định lượng NAP cặp số chia (lần phổ hấp thụ dung dịch chuẩn CLO 40(50) số chia lần phổ trung bình trung tâm lần dung dịch chuẩn DEX 10) 229,5 nm cho Collydexa, với Polydoxancol không chọn bước sóng phù hợp Khi đảo cặp số chia này, khơng xác định bước sóng định lượng NAP cho Collydexa Polydoxancol 4.1.3 Đánh giá phương pháp Khoảng tuyến tính: Kết khảo sát khoảng tuyến tính phương pháp (bảng 3.1 & 3.2) cho thấy, phương pháp xây dựng có khoảng nồng độ tuyến tính phù hợp, với hệ số R2 > 0,990 Độ lặp lại: Các phương pháp xây dựng có độ lặp lại cao (< 2,0%, bảng 3.3 & 3.4) tất bước sóng lựa chọn Độ đúng: - Với phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối giao điểm 0: + Khi định lượng CLO chế phẩm Collydexa kết kiểm tra độ cho thấy, với bước sóng lựa chọn 247,0 247,3 nm cho kết định lượng với độ thấp: 104,3% bước sóng 247,0 nm, 104,9% bước sóng 247,3nm; so sánh với kết định lượng phương pháp HPLC cho thấy, có khác hàm lượng phương pháp với độ tin cậy 95% Với chế phẩm Polydoxancol cho kết tương tự (bảng 3.6) + Áp dụng bước sóng chọn 239,6 239,9 nm định lượng NAP cho kết với độ độ tin cậy không đạt yêu cầu cho Collydexa Polydoxancol + Kết định lượng DEX Collydexa bước sóng 255,7 255,8 nm có độ độ lặp lại cao So sánh với phương pháp HPLC, kết phân tích thống kê toán học với mức tin cậy 95% cho thấy, khơng có sai khác đáng kể độ độ lặp lại phương pháp - Với phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối số chia đôi: + Collydexa: Kết định lượng thành phần cho thấy áp dụng phương pháp vào định lượng CLO, DEX NAP với bước sóng lựa chọn có độ độ lặp lại cao; kết phân tích thống kê cho thấy khơng có sai khác đáng kể độ độ lặp lại phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối số chia đôi phương pháp HPLC Khi so sánh kết định lượng CLO, DEX NAP với số chia phổ hấp thụ dung dịch hỗn hợp thành phần có nồng thành phần với kết định lượng với số chia phổ hấp thụ dung dịch hỗn hợp thành phần có nồng thành phần khác nhau, kết phân tích thống kê cho thấy khơng có khác đáng kể định lượng số chia + Polydoxancol: Kết định lượng có độ đạt yêu cầu định lượng CLO bước sóng 254,5 nm 256,6nm Với DEX NAP cho kết định lượng với độ thấp - Với phương pháp trung bình trung tâm phổ tỷ đối: + Collydexa: Khi áp dụng phương pháp vào định lượng CLO, DEX NAP cho kết với độ độ lặp lại cao thành phần So sánh với phương pháp HPLC cho thấy, hai phương pháp có độ độ lặp lại Việc đảo số chia định lượng CLO DEX nồng độ chọn cho thấy không làm ảnh hưởng đến độ độ lặp lại kết định lượng thành phần này; với NAP chúng tơi khơng tìm bước sóng định lượng với cặp số chia (lần phổ hấp thụ dung dịch chuẩn DEX 10 số chia lần phổ trung bình trung tâm lần dung dịch chuẩn CLO 40) không đạt yêu cầu độ độ lặp lại + Polydoxancol: Kết kiểm tra cho thấy, định lượng CLO với độ đạt yêu cầu bước sóng 269,3 nm Như vậy, với chế phẩm thuốc nhỏ mắt nghiên cứu: - Đã xây dựng phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối số chia đôi trung bình trung tâm phổ tỷ đối định lượng đồng thời thành phần CLO, DEX NAP chế phẩm Collydexa - Không xây dựng phương pháp định lượng đồng thời thành phần chế phẩm Polydoxancol 4.2 ỨNG DUNG PHƯƠNG PHÁP Để định lượng đồng thời thành phần CLO, DEX NAP chế phẩm thuốc nhỏ mắt Collydexa Công ty cổ phần dược phẩm Hà Nội, áp dụng phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối số chia đơi, phương pháp trung bình trung tâm phổ tỷ đối phương pháp HPLC vào định lượng 02 lơ (040111 370711) Kết phân tích thống kê tốn học với mức tin cậy 95% trình bày bảng 3.7 (test t so sánh giá trị trung bình, test F so sánh phương sai) cho thấy khơng có sai khác đáng kể độ độ lặp phương pháp quang phổ chọn sắc ký lỏng hiệu cao Do phương pháp quang phổ áp dụng công tác kiểm nghiệm thuốc nhỏ mắt Collydexa KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN Qua q trình nghiên cứu đề tài, chúng tơi rút số nhận xét sau: - Các phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối số chia đôi trung bình trung tâm phổ tỷ đối xây dựng cho phép định lượng đồng thời trực tiếp CLO, DEX NAP hỗn hợp với độ lặp lại độ cao Về mặt thống kê toán học kết định lượng đồng thời CLO, DEX NAP chế phẩm thuốc nhỏ mắt Collydexa hai phương pháp quang phổ có tương đồng độ xác (độ độ lặp lại) so với phương pháp HPLC sở xây dựng - Các phương pháp quang phổ xây dựng ứng dụng công tác kiểm nghiệm nhờ ưu điểm: + Kỹ thuật xử lý mẫu đơn giản, không cần phải chiết tách; + Dữ liệu xử lý phần mềm đơn giản phổ biến Excel; + Dung môi sử dụng nước cất: dễ kiếm, rẻ tiền khơng độc; + Có thể định lượng đồng thời thành phần, với độ lặp lại cao ĐỀ XUẤT Trên sở kết đạt được, chúng tơi có đề nghị ứng dụng phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối số chia đôi trung bình trung tâm phổ tỷ đối vào cơng tác kiểm nghiệm thuốc nhỏ mắt Collydexa sở sản xuất nhằm góp phần giảm chi phí, giảm độc hại lệ thuộc vào phương pháp sắc ký TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT: Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, tr 140-142, tr 208-210 Bộ Y tế (2006), Dược thư Việt Nam, tr 115, 135 Bộ Y tế, Phân Viện Kiểm nghiệm (1998), Tài liệu tập huấn kỹ thuật kiểm nghiệm thuốc, tr 1-15 Bộ mơn Hóa phân tích (2006), Hóa phân tích II, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr 41-46, tr 125-146, tr 173-209 Công ty cổ phần dược phẩm Hà Nội, Tiêu chuẩn sở số 06/2011-DPHN Trần Tử An (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, NXB Y học, tr 68-79 Đào Hữu Hồ (2007), Xác suất thống kê, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, tr 126-133, tr 168-185 Đặng Trần Phương Hồng, Trịnh Văn Quỳ (2000), Định lượng cloramphenicol, dexamethason natri photphat naphazolin nitrat thuốc nhỏ mắt Collydexa quang phổ tử ngoại đạo hàm tỷ đối, Kỷ yếu viện kiểm nghiệm thuốc trung ương, tr 148-152 Huỳnh Kim Thoa, Võ Thị Thu Thủy (1998), Định lượng nhanh đồng thời dexamethason, chloramphenicol naphazolin số chế phẩm thuốc nhỏ mắt phương pháp HPLC, Tạp chí dược học số 6, tr 20-23 10 Thái Nguyễn Hùng Thu (2007), Định lượng trực tiếp dung dịch nhiều thành phần quang phổ đạo hàm tỷ đối, Tạp chí dược học số 8, tr 3538 11 Nguyễn Tường Vy, Đỗ Ngọc Thanh (2003), Định lượng đồng thời sulfamethoxazol trimethoprim viên nén Trasepton phương pháp quang phổ đạo hàm tỷ đối, Tạp chí dược học số 12, tr 28-29 TIẾNG ANH: 12 British Pharmacopeia (2008), Vol I, pp 1117-1119, Vol II, pp 16531654 13 The United States Pharmacopeia 30 (2007), Vol II, pp 1266-1270, 1272, 1285-1288, 1575, 2325-2329 14 Abbas Afkhami., Morteza Bahram (2005), Mean centering of ratio spectra as a new spectrophotometric method for the analysis of binary and ternary mixtures, Talanta, Vol 66, pp 712–720 15 J J Berzas Nevado, C Guiberteau Cabanillas, A M Contento Salcedo (1995), Spectrophotometric resolution of ternary mixtures of salicylaldehyde, 3-hydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzaldehyde by the derivative ratio spectrum-zero crossing method, Talanta, Vol.42, Issue 12, pp 2043-2051 16 Erdal Dinỗ, Emine Baydan, Murat Kanbur, Feyyaz Onur (2002), Spectrophotometric multicomponent determination of sunset yellow, tartrazine and allura red in soft drink powder by double divisor-ratio spectra derivative, inverse least-squares and principal component regression methods, Talanta, Vol 58, Issue 3, pp 579-594 17 T Galeano Dıaz., A Guiberteau., J M Ortız Burguillos and F Salinas (1997), Comparison of Chemometric Methods: Derivative Ratio Spectra and Multivariate Methods (CLS, PCR and PLS) for the Resolution of Ternary Mixtures of the Pesticides Carbofuran Carbaryl and Phenamifos After Their Extraction into Chloroform, Analyst, Vol 122, pp 513–517 ... kỹ thuật đạo hàm phổ tỷ đối trung bình trung tâm phổ tỷ đối với mục tiêu sau: - Xây dựng phép định lượng đồng thời hỗn hợp ba thành phần CLO, DEX NAP kỹ thuật đạo hàm phổ tỷ đối trung bình trung. .. VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ Tr−êng đại học dợc hà nội NGUYN PH HONG NH LNG ĐỒNG THỜI CLORAMPHENICOL, DEXAMETHASON VÀ NAPHAZOLIN TRONG CHẾ PHẨM THUỐC NHỎ MẮT BẰNG KỸ THUẬT ĐẠO HÀM PHỔ TỶ ĐỐI VÀ TRUNG BÌNH... quang phổ đạo hàm 1.1.2.1 Phương pháp phổ đạo hàm [4] Phương pháp phổ đạo hàm kỹ thuật chuyển đổi phổ hấp thụ dựa phép lấy đạo hàm bậc nhất, bậc hai bậc cao Cơ sở phương pháp phổ đạo hàm: Theo định