Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học của dây chìa vôi

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ THU HIỀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA DÂY CHÌA VƠI KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2018 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ THU HIỀN Mã sinh viên: 1301141 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA DÂY CHÌA VƠI KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Vũ Văn Điền HVCH Hoàng Sỹ Hùng Nơi thực Bộ môn Dược học cổ truyền HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực hồn thành khóa luận này, tơi nhận nhiều quan tâm giúp đỡ tận tình từ thầy cơ, gia đình bạn bè Tơi xin bày tỏ kính trọng cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Văn Điền, giảng viên môn Dược học cổ truyền, người trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành khóa luận Đồng thời, tơi xin gửi lời cảm ơn tới HVCH Hoàng Sỹ Hùng, học viên cao học khóa 21, trường Đại học Dược Hà Nội, quan tâm giúp đỡ hướng dẫn tơi q trình nghiên cứu để hồn thành khóa luận Ngồi ra, xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô, bạn anh chị môn Dược học cổ truyền đồng hành giúp đỡ q trình thực khóa luận Cuối lời cảm ơn chân thành sâu sắc nhất, tơi muốn gửi tới gia đình bạn bè, người ủng hộ động viện học tập sống Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2018 Sinh viên, Phạm Thị Thu Hiền MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Cissus 1.1.1 Đặc điểm hình thái phân bố 1.1.2 Thành phần hóa học, cơng dụng tác dụng sinh học 1.1.2.1 Thành phần hóa học 1.1.2.2 Công dụng tác dụng sinh học 1.2 Tổng quan loài Cissus modeccoides Planch 11 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố 11 1.2.2 Thành phần hóa học 12 1.2.3 Công dụng tác dụng dược lý 12 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên liệu phương tiện nghiên cứu 13 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 13 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 13 2.1.2.1 Hóa chất, dung môi 13 2.1.2.2 Trang thiết bị 13 2.2 Phương pháp nghiên cứu 14 2.2.1 Nghiên cứu thực vật 14 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 14 2.2.2.1 Định tính nhóm chất 14 2.2.2.2 Nghiên cứu chiết xuất, phân lập hợp chất 14 Chương THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 16 3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 16 3.1.1 Đặc điểm thực vật dây Chìa vơi (Cissus modeccoides Planch.) 16 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu dây Chìa vơi (Cissus modeccoides Planch.) 17 3.1.3 Đặc điểm soi bột dây Chìa vơi (Cissus modeccoides Planch.) 21 3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 23 3.2.1 Định tính nhóm chất 23 3.2.1.1 Chiết xuất phân lập chất 30 3.2.1.2 Phương pháp chiết xuất 30 3.2.1.3 Phân lập phương pháp sắc ký cột 32 3.3 Bàn luận 36 3.3.1 Về đặc điểm thực vật 36 3.3.2 Về thành phần hóa học 37 Kết luận 39 Kiến nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ 13 Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy C-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13) H-NMR Proton Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) BMI Chỉ số khối thể COX-2 Cyclooxygenase-2 DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer DPPH 2,2 – diphenyl – - picrylhydrazyl EtOH Ethanol HBV DNA Tải lượng vi rút viêm gan B HMBG1 High mobility group box MeOH Methanol MPO Myeloperoxidase MS Mass Spectroscopy (Phổ khối lượng) NMR Nuclear magnetic resonance spectrometry (phổ cộng hưởng từ hạt nhân) SKLM Sắc ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo TGF-β Transforming growth factor beta TT Thuốc thử v/v Volume to volume ratio DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1-1 Phân bố số loài chi Cissus Bảng 1-2 Thành phần hóa học số loài chi Cissus Bảng 3-1 Kết định tính nhóm chất 29 Bảng 3-2 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR N4R64 35 hyperoside [500/125 MHz, δ (ppm)] DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ STT Tên hình Hình 3-1 Cơ quan sinh dưỡng dây Chìa vơi (Cissus Trang 16 modeccoides Planch.) Hình 3-2 Vi phẫu thân dây Chìa vơi (Cissus modeccoides 19 Planch.) Hình 3-3 Vi phẫu dây Chìa vơi (Cissus modeccoides 21 Planch.) Hình 3-4 Bột thân dây Chìa vơi (Cissus modeccoides 22 Planch.) Hình 3-5 Bột dây Chìa vơi (Cissus modeccoides Planch.) 23 Hình 3-6 Sắc ký đồ N4R64 so sánh với cao phân đoạn 33 ethyl acetat Hình 3-7 Cấu trúc hóa học N4R64 36 ĐẶT VẤN ĐỀ Chi Cissus chi thuộc họ Vitaceae, gồm nhiều lồi có tác dụng dược lý kháng tiểu đường, kháng khuẩn, chống viêm, giảm đau, chữa gãy xương, [18]; có 350 lồi phân bố chủ yếu khu vực nhiệt đới châu Phi, châu Á, châu Úc châu Mỹ có 12 lồi sử dụng để điều trị bệnh [35], Việt Nam có 14 lồi, có số lồi dùng để làm thuốc [6] Dây Chìa vơi – Cissus modeccoides Planch., có tên gọi khác Bạch phấn đằng, Rau chua, có sẵn Việt Nam, mọc khắp nơi vùng trung du đồng miền núi [2], sử dụng để chữa phong thấp, sưng tấy, đau lưng, đau nhức xương, ung nhọt sưng lở, trĩ bỏng; sử dụng kết hợp với nhiều dược liệu khác thuốc để chữa phong thấp, đau xương, tê mỏi; chữa rắn độc cắn hay chữa mụn nhọt ổ gà nách [2] Tuy nhiên, nước nước ngồi có nghiên cứu dây Chìa vơi Vì vậy, để góp phần xây dựng sở liệu dây Chìa vơi làm sở cho việc khai thác sử dụng dược liệu bền vững, an toàn hiệu hơn, bước đầu tiến hành nghiên cứu đề tài ‘Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học dây Chìa vơi’ thực với mục tiêu sau: Mô tả đặc điểm thực vật, vi phẫu soi bột thân, dây Chìa vơi thu hái Bắc Giang Nghiên cứu định tính nhóm chất hữu phân lập thành phần dây Chìa vơi CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Cissus Vị trí phân loại: Theo hệ thống phân loại thực vật Armen Takhtajan (2009) [38], chi Cissus có vị trí phân loại sau: Giới thực vật (Plantae) Phân giới thực vật bậc cao (Kormobionta) Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp hoa hồng (Rosidae) Bộ Nho (Vitales) Họ Nho (Vitaceae) Chi Cissus 1.1.1 Đặc điểm hình thái phân bố Đặc điểm hình thái Cây bụi leo, có tua đối diện với Lá đơn, thường có răng, có chia thùy; kèm 2, nhỏ Cụm hoa có cuống, thành tán hay ngù, đối diện với lá; hoa có cuống Đài hình đấu Cánh hoa 4, xếp van, tách đỉnh hoa nở Nhị 4, đối diện với cánh hoa, đính xung quanh đĩa; bao phấn hướng Đĩa mật nguyên, lượn sóng hay chia thùy Bầu dính suốt chiều cao với đĩa mật; ơ, nỗn cong; vòi dạng cột; đầu nhụy rõ Quả mọng nạc; hạt độc nhất, có hai hố nhỏ gốc [6] Phân bố Chi Cissus có khoảng 350 loài, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới Châu Phi, Châu Á, Úc, Trung - Nam Mỹ Bắc Mỹ (Mexico); 15 loài (hai loài đặc hữu) Trung Quốc [35] Ở Việt Nam, chi Cissus có 14 lồi [1] có số lồi dùng làm thuốc Phân bố số loài chi Cissus có Việt Nam [6] tóm tắt bảng sau: 29 Mushtaq A Khan, Shah G Nabi, et al (1986), "Pallidol, a resvertrol dimer from Cissus pallida", Phytochemistry, 25(8), pp 1945-1948 30 Neeraj Verma, G Amresh, et al (2013), "Pharmacological Evaluation of hyperin for antihyperglycermic activity and effect on lipid profile in diabetic rats", Indian Journal of Experimental Biology, 51, pp 65-72 31 Oben Julius E, Enyegue Damaris Mandob, et al (2007), "The effect of Cissus quadrangularis (CQR-300) and a Cissus formulation (CORE) on obesity and obesity-induced oxidative stress", Lipids in Health and Disease, pp 32 Oben Julius, Kuate Dieudonne, et al (2006), "The use of Cissus quadrangularis formulation in the management of weight loss and metabolic syndrome", Lipids in Health and Disease pp 33 Queen Okeh, Bernard Egwu Igiri, et al (2017), "Phytochemical Screening and Antimicrobial Activity of the Plant of Cissus Ibuensis (Hook f.)", SCIOL Biomedicine, 1(1), pp 19-24 34 Quilez AM, Saenz MT, et al (2004), "Phytochemical analysis and antiallergic study of Agave intermixta Trel and Cissus sicyoides L.", Journal of Pharma and Pharmacology, 56(9), pp 1185-1189 35 Ren Hui, Wen Jun Flora of China, pp 173-184 36 Sanghyun Lee, Sang Hoon Jung, et al (2004), "Anti inflammatory activity of hyperin from Acanthopanax chiisanensis roots", Archives of Pharmacal Research, 27(6), pp 628-632 37 Shah Unnati (2011), "Cissus quadrangularis L.: Phytochemicals, traditional uses and pharmocological activities - a review", International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3, pp 41-44 38 Takhtajan Armen L (2009), Flowering Plants, Springer, ISBN 978-14020-9608-2, pp 39 Viana Glauce SB, Medeiros Ana Carolina C, et al (2004), "Hypoglycemic and anti-lipemic effects of the aqueous extract from Cissus sicyoides", BMC Pharmacology, pp 40 WANG Y -H., ZHANG Z -K., et al (2006), "Stilbene C-glucosides from Cissus repens ", Journal of Asian Natural Products Research 9, pp 631636 41 Xu Fengming, MATSUDA Hiisashi, et al (2009), "Structures of New Flavonoids and Benzofuran-Type Stilbene and Degranulation Inhibitors of Rat Basophilic Leukemia Cells from the Brazilian Herbal Medicine Cissus sicyoides", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 57(10), pp 1089-1095 42 YH Xie, P Deng, et al (2009), "Studies on the chemical constituents from Cissus assamica [Article in Chinese]", Zhong Yao Cai, 32(2), pp 210213 43 Yongliang Chen, Lihong Ye, et al (2018), "Hyperoside protects human kidney-2 cells against oxidative damage induced by oxalic acid", Molecular Medicine Reports, pp 44 Yuehu Wang, Zhongkai Zhang, et al (2006), "Lignans and triterpenoids from Cissus repens (Vitaceae)", Acta Botanica Yunnanica 28(4), pp 433437 45 Zhang Ning, Ying Mei-Dan, et al (2014), "Hyperoside, a Flavonoid Compound, Inhibits Proliferation and Stimulates Osteogenic Differentiation of Human Osteosarcoma Cells", PLoS One, 9(7), pp 46 Zi-lin Li, Jing Hu, et al (2013), "The effect of hyperoside on the functional recovery of the ichemic/reperfused isolated rat heart: Potential involvement of the extracelluler signal-regulated kinase 1/2 signaling pathway", Free Radical Biology and Medicine, (57), pp 132-140 47 Murphy K.N Chidambara, Vanitha A., et al (2003), "Antioxidant and antimicrobial activity of Cissus quadrangularis L.", journal of Medicinal Food, 6, pp 99-106 PHỤ LỤC PHỤ LỤC TIÊU BẢN CÂY DÂY CHÌA VƠI (Cissus modeccoides Planch.) PHỤ LỤC - PHỔ 1H-NMR-N4R64 Hình PL2.1 Cơng thức cấu tạo N4R64 PHỤ LỤC - PHỔ 13C-NMR-N4R64 PHỤ LỤC - PHỔ 13C-DEPT - N4R64 PHỤ LỤC – PHỔ MS – N4R64 ... đề tài Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học dây Chìa vơi’ thực với mục tiêu sau: Mô tả đặc điểm thực vật, vi phẫu soi bột thân, dây Chìa vôi thu hái Bắc Giang Nghiên cứu định tính... Planch Tây, Ninh Bình, Thanh Hóa, Quảng Nam tỉnh Tây Nguyên 1.1.2 Thành phần hóa học, cơng dụng tác dụng sinh học 1.1.2.1 Thành phần hóa học Các nghiên cứu thành phần hóa học cho thấy lồi chi Cissus... Chương THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 16 3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 16 3.1.1 Đặc điểm thực vật dây Chìa vơi (Cissus modeccoides Planch.) 16 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu dây Chìa