Nghiên cứu thành phần hóa học tầm gửi cây nghiến phần 1 Nghiên cứu thành phần hóa học tầm gửi cây nghiến phần 1 Nghiên cứu thành phần hóa học tầm gửi cây nghiến phần 1 Nghiên cứu thành phần hóa học tầm gửi cây nghiến phần 1 Nghiên cứu thành phần hóa học tầm gửi cây nghiến phần 1 Nghiên cứu thành phần hóa học tầm gửi cây nghiến phần 1
giọt dung dịch NaOH 10%, lắc đều không thấy xuất hiện màu đỏ cam. (Phản ứng âm tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có glycosid tim. • Định tính Saponin: - Quan sát hiện tượng tạo bọt: Cho khoảng Ig dược liệu đã tán nhỏ vào ống nghiệm 20ml. Thêm 5ml nước cất đun cách thuỷ 5-10 phút. Lọc qua bông vào ống nghiệm 20ml thêm nước cất vừa đủ lOml. Bịt ống nghiệm bằng ngón tay cái lắc mạnh theo chiều dọc 5 phút, để yên và quan sát hiện tượng tạo bọt. Sau 15 phút, cột bọt vẫn bền vững. - Phản ứng phá huyết: Chuẩn bị làm kính máu: đun 3-4g gelatin với nước muối sinh lý (Natriclorid 0.9%) ở 60°c. Điều chỉnh dung dịch gelatin có pH =7. Hỗn hợp 5 ml Gelatin ở trên với 1,2 ml máu đã loại fibrin. Đun ấm 40°c rồi rót vào lam kính làm thành lớp mỏng. Dùng miếng giấy lọc tròn (đường kính 5 mm), tẩm dung dịch dược liệu rồi đặt lên mặt gelatin. Sau 12-24 giờ quan sát thấy có một vòng dung huyết.( Phản ứng dương tính). - Phản ứng phân biệt 2 loại Saponin: Qio vào 1 ống nghiệm lớn 0,5g bột dược liệu, thêm 5ml cồn 90°. Đun cách thủy đến sôi, lọc nóng lấy dịch lọc làm các thí nghiệm sau: + Ống 1: ƠIO 5ml dd. NaOH 0,1N + 5 giọt dịch lọc trên. + Ống 2: Cho 5ml dd. HCl 0,1N + 5 giọt dịch lọc trên. Lắc mạnh cả 2 ống nghiệm trong 3 phút. Để yên, quan sát cột bọt: thấy cột bọt ở ống 1 cao hơn ở ống 2 . - Phản ứng Salkowski: Cho vào ống nghiệm 2g bột dược liệu thêm lOml cồn 90°, đun sôi cách thuỷ, lọc nóng. Lấy Iml dịch chiết cho vào ống nghiệm nhỏ, thêm vài giọt H2SO4 đậm đặc nhỏ theo thành ống nghiệm. Mặt phân cách xuất hiện màu đỏ tím đỏ, lắc đồng nhất.(Phản ứng dương tính ). 23 Sơ bộ kết luận: Dược liệu có saponin Steroid. • Định tính Flavonnid: Cân khoảng 5g dược liệu cho vào bình nón lOOml, thêm 50ml cồn 90°. Đun cách thuỷ 10 phút, lọc nóng, dùng dịch lọc làm các phản ứng sau: - Phản ứng Cyanidin: Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm thêm một ít bột Magie kim loại và 5 giọt HCl đậm đặc. Lắc đều thấy xuất hiện màu hồng.(Phản ứng dương tính). - Phản ứng vói Kiềm: + Phản ứng với NHg! Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, sấy khô rồi hơ lên miệng lọ có chứa Amoniac đặc đã mở nút. Thấy màu vàng của vết dịch chiết đậm lên.( Phản ứng dương tính). + Phản ứng với NaOH: Cho vào ống nghiệm Iml dịch chiết, thêm vài giọt dd. NaOH 10%, thấy xuất hiện tủa vàng và màu vàng của dịch chiết tăng lên rõ rệt.( Phản ứng dương tính). -Phản ứng với FeClji Cho vào ống nghiệm Iml dịch chiết, thêm 3 giọt FeClj 5% thấy màu của dịch chiết chuyển từ xanh nhạt sang xanh đen. (Phản ứng dưcmg tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu có Flavonoid. • Định tính Coumarin: - Vi thăng hoa: Cho Ig dược liệu vào một nắp chai bằng nhôm. Hơ lên ngọn lửa đèn cồn đến khi bay hết hơi nước trong dược liệu. Đặt lên trên miệng nắp nhôm một lam kính trên có để một miếng bông ướt. Đặt nắp nhôm trực tiếp lên nguồn nhiệt. Sau 5 phút lấy lam kính ra để nguội, soi dưới kính hiển vi. Thấy có tinh thể hình kim (Phản ứng dưoỉng tính). - Phản ứng mở - đóng vòng Lacton. Lấy khoảng lOg dược liệu cho vào bình nón lOOml, thêm 50ml cồn 90° đun cách thuỷ 5 phút, lọc nóng qua giấy lọc. Dịch lọc thu được dùng làm các phản ứng: 24 Qio vào 2 ống nghiệm mỗi ống Iml dịch chiết cồn: Ống 1 : Thêm 0,5ml dd. NaOH 10% Ống 2: Để nguyên. Đun cả 2 ống trên nồi cách thuỷ khoảng 2 phút, để nguội và quan sát. Ống 1 : Tủa đục. Ống 2: Trong suốt. Thêm vào cả hai ống nghiệm mỗi ống 2ml nước cất, lắc đều thấy: Ống 1 : Trong suốt Ống 2: Có tủa đục. Acid hoá ống 1 bằng vài giọt HCl đậm đặc, ống 1 sẽ trở lại đục như ống 2.(Phản ứng dương tính). - Phản ứng chuyển dạng đồng phân Cis - trans: Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy lọc, nhỏ chồng tiếp vài giọt dd. NaOH 1 0 %, sấy nhẹ. Qìe 1 nửa phần diện tích vết chất bằng một đồng xu rồi chiếu ánh sáng tử ngoại trong vài phút, bỏ đồng xu ra sẽ thấy phần không bị che có huỳnh quang sáng hofn, nếu tiếp tục chiếu thì sau vài phút cả hai nửa vết chất đều phát quang như nhau.( Phản ứng dưofng tính). - Phản ứng Diazo hoá; Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ, thêm 2ml dd. NaOH 10%, Đun cách thuỷ đến sôi, để nguội. Thêm vài giọt TT Diazo mới pha. Thấy trong ống nghiệm xuất hiện kết tủa đỏ gạch.( Phản ứng dưofng tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu có coumarin. • Định tính Aỉcaloid: Cho khoảng 3g dược liệu đã làm nhỏ vào một cốc nhỏ dung tích 50ml, thấm ẩm bằng dd amoniac đặc, sau khoảng 30 phút cho dược liệu vào túi giấy lọc rồi đưa vào bình Soxhlet, chiết kiệt alcaloid bằng 50 ml chloroíom. Sau đó 25 cất thu hồi dung môi thu được cắn. Hòa tan cắn bằng 3 ml dd. H2SO4 IN, chia dịch chiết này vào ba ống nghiệm mỗi ống 1 ml dịch chiết. - Ông 1 : Nhỏ 2 - 3 giọt thuốc thử Mayer, không thấy xuất hiện tủa trắng.(Phản ứng âm tính). - Ông 2: Nhỏ 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat, không thấy xuất hiện tủa nâu. (Phản ứng âm tính). - Ông 3: Nhỏ 2 - 3 giọt thuốc thử Dragendorff, thấy có xuất hiện tủa đỏ cam.( Phản ứng dương tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có alcaloid. • Định tính Tanin: Cho vào ống nghiệm 2g dược liệu, thêm lOml nước cất, đun sôi trong 5 phút. Để nguội, lọc lấy dịch lọc. Chia dịch lọc vào 3 ống nghiệm mỗi ống 2 ml để làm các phản ứng định tính. - Ống 1: Nhỏ 2 giọt dd. FeClj 5% . Thấy dung dịch chuyển từ xanh nhạt sang xanh đen.( Phản ứng dương tính). - Ống 2: Nhỏ 2 giọt dd. Chì acetat 10%. Thấy xuất hiện tủa bông.( Phản ứng dương tính). - Ống 3: Nhỏ 5 giọt dd. Gelatin 1%. Không thấy xuất hiện tủa bông trắng.(Phản ứng âm tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có tanin. • Định tính Anthranoìd: - Phản ứng Bomtrager: Lấy khoảng 3g dược liệu cho vào bình nón dung tích 50ml. Thêm vào đó 20ml H2SO4 IN, đun sôi cách thuỷ 15 phút. Để nguội, lọc qua bông vào một bình gạn, lắc với 5ml Chloroform, gạn lấy phần Qiloroform để tiến hành phản ứng: 26 Lấy Iml dịch chiết cho vào ống nghiệm, thêm Iml dd. N H 4 O H 10% lắc đều, lớp amoniac không xuất hiện màu đỏ mận. Tiếp tục cho từng giọt dd NaOH 10% vào lắc nhẹ, lớp dung môi cũng không xuất hiện màu hồng. (Phản ứng âm tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có anthranoid. • Định tính Acid hữu cơ: - Cho Ig dược liệu vào ống nghiệm, thêm 5ml H2O cất. Đun sôi trực tiếp trong 10 phút, để nguội rồi lọc. Thêm vào dịch lọc một ít tinh thể Na2C0 3 , không thấy có bọt khí bay lên. (Phản ứng âm tính). - Cho khoảng Ig dược liệu vào ống nghiệm, thêm 5ml cồn 90°, đun sôi nhẹ trong vài phút, để nguội rồi lọc. Thêm vào dịch lọc một ít tinh thể NajSOj. Không thấy có bọt khí bay ra. (Phản ứng âm tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có acid hữu cơ. • Định tính đường khử: Lấy khoảng 2g dược liệu cho vào ống nghiệm to, thêm 5ml cồn 90° , đun cách thủy 10 phút, lọc lấy dịch. Cho Iml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm 3 giọt thuốc thử Fehling A và 3 giọt thuốc thử Fehling B, thấy xuất hiện màu xanh lá. Đun cách thủy 10 phút thấy có tủa đỏ gạch ở dưới đáy ống nghiệm.( Phản ứng dương tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu có đường khử. • Định tính acid amỉn: Cho khoảng 2g dược liệu vào ống nghiệm to, thêm lOml H2O cất đun sôi 5 phút, lọc nóng. Lấy 2ml dịch lọc cho vào một ống nghiệm khác thêm 3 giọt thuốc thử Ninhydrin 3%, đun cách thuỷ sôi 10 phút thấy xuất hiện màu tím đậm. (Phản ứng dương tính) Sơ bộ kết luận: Dược liệu có acid amin. • Định tính chất béo: 27 Lấy khoảng 5g dược liệu cho vào bình nón dung tích 50ml. Đổ ngập Ether dầu hoả, đun cách thuỷ 15 phút, lọc lấy dịch lọc để làm phản ứng. Nhỏ 1 giọt dịch lọc lên miếng giấy lọc, hơ nóng cho bay hết hơi dung môi, không thấy để lại vết mờ trên miếng giấy lọc .(Phản ứng âm tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có chất béo. • Định tính Caroten: Cho vào ống nghiệm to 2ml dịch chiết Ether dầu hoả, bốc hơi trên nồi cách thủy đến cắn. Thêm vài giọt H 2 SO 4 đậm đặc vào cắn. Dịch lỏng không chuyển màu xanh. (Phản ứng âm tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có caroten. • Định tính Sterol Cho vào ống nghiệm Iml dịch chiết Ether dầu hoả, bốc hơi trên nồi cách thuỷ đến cắn. Thêm vào Iml Anhydrid acetic, lắc kỹ cho tan hết cắn. Để ống nghiệm nghiêng 45°. Thêm từ từ Iml H 2 SO 4 đậm đặc theo thành ống nghiệm. Mặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng có màu xanh. (Phản ứng dương tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu có sterol. • Định tính Polysaccharid. - Pha TT Lugol: 0,5 g I2 và l,Og KI pha trong lOOml H2O cất. Đựng trong lọ màu. - Cho 2g bột dược liệu vào một cốc có mỏ, Thêm lOml nước cất đun cách thủy sôi 5 phút, lọc nóng. Cho vào 2 ống nghiệm. Ống 1: 4ml dịch chiết và 5 giọt TT Lugol Ống 2: 4ml nước cất và 5 giọt TT Lugol Quan sát thấy ống 1 có màu xanh đậm, ống 2 có màu vàng. (Phản ứng âm tính). Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có polysaccharid. 28 • Định tính muối canxi Cho 2g bột dược liệu vào 1 ống nghiệm lớn, thêm lOml nước cất, đun cách thủy đến sôi, để nguội, lọc. Cho dịch lọc vào 2 ống nghiêm nhỏ, mỗi ống 2ml. - Ống 1: Thêm vào một ít tinh thể NâoCOy Không thấy xuất hiện tủa đục. -Ống 2: Thêm vào một ít tinh thể (NH4)2C2 0 4 . Không thấy xuất hiện kết tủa. Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có ion Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong lá và rễ dược liệu xích đồng nam được tóm tắt ở bảng 2 .1 . Bảng 2.1: kết quả định tính các nhóm chất trong lá và rễ cây XĐN STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả Sơ bộ kết luận 1 Glycosid tim Phản ứng Liebermann ++ Không có Phản ứng Legal - Phản ứng Baijet - 2 Flavonoid Phản ứng Cyanidin +++ Có Phản ứng với NaOH +++ Phản ứng vód N H 3 +++ Phản ứng vói FeClg 5 % +++ 3 Saponin Quan sát hiện tượng tạo bọt +++ Saponin steroid Phản ứng Salkowski +++ Phản ứng phá huyết ++ Phản ứng phân biệt hai loại Saponin Phản ứng mở - đóng vòng lacton ++ 29 4 Coumarin Phản ứng chuyển dạng đồng p^ân cis - ttans ++ Có Vi thăng hoa + Phản ứng vód thuôc thử Diazo +++ 5 Anthranoid Phản ứng Bomtrager - Không có Phản ứng với NajCOj - 6 Acid hữu cơ Phản ứng vói NajCOj - Không có Phản ứng vói FeClg 5% +++ 7 Tanin Phản ứng với gelatin 5% - Không có Phản ứng vói chì acetat ++ 8 Đường khử Phản ứng vói TT Fehling A và Fehling B +++ Có Phản ứng vói '1'1' May er - 9 Alcaloid Phản ứng với r r Dragendoff + Không có Phản ứng với ri' Bouchardat — 1 0 Acid amin Phản ứng vói I'l Ninhydrin 3% ++ Có 11 Chất béo Tạo vết mờ trên giấy - Không có 1 2 Carolen Phản ứng v ó i H 2 SO4 đặc — Không có 13 Sterol Phản ứng Liebeiiiiann ++ Có 14 Polysaccharid Phản ứng vói r i . Lugol — Không có 15 Ion Ca^-^ Phản ứng vối Na2C0 3 - Không có Phản ứng với (NH4)2C2 0 4 - 30 Ghi chú: (-) : Phản ứng âm tính. (+) : Phản ứng dương tính. (++) : Phản ứng rõ. (+++): Phản ứng rất rõ. Nhận xét: Qua các phản ứng định tính thấy trong lá và rễ dược liệu xích đồng nam đều có chứa một số thành phần tương tự nhau như: Flavonoid, coumarin, saponin, đường khử, acid amin, sterol và không có glycosid tim, anthranoid, acid hữu cơ, tanin, alcaloid, chất béo, caroten, polysaccharid, ion Trong đó flavonoid, saponin là các nhóm chất được tập trung nghiên cứu. 2.I.2.2. Nghiên cứu Flavonoid ở lá và rễ XĐN ❖ Chiết xuất Flavonoid Cân chính xác khoảng 20g dược liệu lá hoặc rễ đã xác định độ ẩm bằng máy XM 120 Precica cho kết quả (Độ ẩm của lá = 9.58%, rễ = 8.89%). Cho vào túi làm bằng giấy lọc, đặt túi vào bình Soxhlet. Chiết bằng Chloroform đến khi dịch chiết không còn màu xanh. Lấy túi dược liệu ra khỏi bình Soxhlet. Để bay hết hơi Chloroform tới khô rồi lại đặt vào bình, chiết tiếp bằng methanol đến khi dịch chiết trong suốt (Thử không cho màu vàng vói NaOH IN). Tập trung dịch chiết methanol, đem cất thu hồi dưói áp suất giảm, tiếp tục bay hơi trên nồi cách thủy đến khô thu được cắn B. Hoà tan cắn B vào nước nóng, đun cách thuỷ 30 phút. Lọc nóng qua bông sau đó lọc tiếp qua giấy lọc gấp nếp. Lọc và tráng nhiều lần để loại tạp chất. Để nguội, gộp dịch lọc vào bình gạn, lắc với ethyl acetat nhiều lần cho tói khi phần ethylacetat trong suốt, không màu (Thử không cho màu hồng với phản ứng Cyanidin). Gộp dịch chiết Ethylacetat, cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm. Thu được cắn Flavonoid.(Cắn F). Quá trình chiết xuất được biểu diễn ở sơ đồ sau. 31 Hình 2.7; Sơ đồ chiết xuất flavonoid 32 [...]... 0.10 934 .2 31.94 2 0.063 0.0 0.094 763.6 26 .11 19.0 0.107 379.7 12. 98 3 0.165 4 0 .21 1 Q.o 0 .22 6 26 9.1 8.86 5 0 .24 4 70 .2 0 .27 0 308.7 10.56 6 0 .27 6 27 4.7 0 .27 8 27 9.6 9.56 Total Height 29 24. 92 Total Area: 340 32. 7 m End Rf H 0.031 11.3 0. 120 164.7 0 .29 4.5 0 .24 4 70 .2 0 .27 6 27 4.7 0.305 7.0 34 area A 8571.9 128 77.7 423 47 27 29.3 3463.8 21 554 I%1 25 .19 37.94 12. 44 8. 02 10.18 6.33 Subst Name T tack 4 Hỡnh 2. 11:... 0.693 829 .1 0.695 630.1 10 0.766 24 0.4 0J6Q 24 9.9 Total Height 5363. 32 Total Area: 80641 m 22 . 32 5 .29 2. 31 3 .25 10.86 1873 8.87 11.97 11.75 4.66 35 End Rf H 0.037 25 .4 0.079 28 .2 0.104 1.8 0.157 19.9 0 .23 4 105 .2 0.614 374.4 0.638 474 .2 0.675 641 .2 0.7 32 355.0 0.793 53.6 . 0. 020 1197.0 22 . 32 0.037 25 .4 122 78.4 15 .23 2 0.049 0.0 0.065 28 3.8 5 .29 0.079 28 .2 2063.3 2. 56 3 0.079 28 .2 0.091 123 .8 2. 31 0.104 1.8 937.8 1.16 4 0.108 0.0 0.138 174.5 3 .25 0.157 19.9 25 43.6. 934 .2 31.94 0.031 11.3 8571.9 25 .19 2 0.063 0.0 0.094 763.6 26 .11 0. 120 164.7 128 77.7 37.94 3 0.165 19.0 0.107 379.7 12. 98 0 .2 9 4.5 423 47 12. 44 4 0 .21 1 Q.o 0 .22 6 26 9.1 8.86 0 .24 4 70 .2 2 729 .3 8. 02 5. 27 29.3 8. 02 5 0 .24 4 70 .2 0 .27 0 308.7 10.56 0 .27 6 27 4.7 3463.8 10.18 6 0 .27 6 27 4.7 0 .27 8 27 9.6 9.56 0.305 7.0 21 554 6.33 Total Height 29 24. 92 Total Area: 340 32. 7 34 Ttack4 C HO O ) Hình 2. 11: Đồ