Nghiên cứu phát hiện sildenafil trong một số chế phẩm đông dược bằng sắc ký lớp mỏng

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - HOÀNG THỊ QUỲNH NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN SILDENAFIL TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - HOÀNG THỊ QUỲNH NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN SILDENAFIL TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn : TS Phạm Thị Thanh Hà ThS Ngô Quang Trung Nơi thực hiện: Phòng phân tích, kiểm nghiệm & TĐSHViện công nghệ dược phẩm Quốc Gia HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: TS Phạm Thị Thanh Hà ThS Ngô Quang Trung Là người thầy, người ln tận tình hướng dẫn tơi, giúp đỡ tơi q trình thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh, anh chị Phòng Phân tích, kiểm nghiệm tương đương sinh học Viện công nghệ Dược phẩm Quốc Gia, tạo điều kiện giúp đỡ để tơi hồn thành khóa luận Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô môn Trường Đại Học Dược Hà Nội, truyền dạy kiến thức niềm tự hào sinh viên trường Dược cho suốt năm học tập trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới bố mẹ, bạn bè, người bên cạnh ủng hộ suốt q trình học tập thực khóa luận Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2013 Sinh viên Hoàng Thị Quỳnh Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VÀ KÍ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan sildenafil 1.1.1 Công thức 1.1.2 Tính chất 1.1.3 Tác dụng Sildenafil 1.1.3.1 Cơ chế tác dụng Sildenafil 1.1.3.2 Dược động học 1.1.3.3 Chỉ định 1.1.3.4 Liều dùng 1.1.3.5 Tác dụng không mong muốn Sildenafil 1.1.3.6 Tương tác thuốc 1.1.4 Một số nghiên cứu phát Sildenafil chế phẩm đông dược 1.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng 1.2.1 Nguyên tắc 1.2.2 Pha tĩnh 1.2.3 Pha động 1.2.4 Kỹ thuật 10 1.2.4.1 Đưa chất phân tích lên mỏng 10 1.2.4.2 Khai triển sắc ký 11 1.2.4.3 Phát vết sắc ký đồ 12 1.2.5 Ứng dụng SKLM 13 1.2.5.1 Định tính 13 1.2.5.2 Thử tinh khiết 14 1.2.5.3 Định lượng 14 1.2.6 Ưu nhược điểm 14 1.2.6.1 Ưu điểm 14 1.2.6.2 Nhược điểm 15 1.3 Phương pháp xử lý mẫu 15 1.3.1 Chiết hệ dị thể rắn-lỏng 15 1.3.2 Chiết Soxhlet 16 1.3.3 Chiết pha rắn (SPE) 16 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Phương tiện nghiên cứu 17 2.1.1 Máy móc, thiết bị 17 2.1.2 Hóa chất thuốc thử 17 2.2 Đối tượng, nội dung phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích 20 3.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 20 3.1.2 Khảo sát điều kiện phát 21 3.1.3 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu 23 3.2.Đánh giá phương pháp 25 3.2.1 Độ chọn lọc 25 3.2.2 Độ lặp lại 26 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 3.2.3 Giới hạn phát (LOD) 29 3.3 Áp dụng phương pháp kiểm tra số mẫu 32 3.3.1 Quy trình xử lý mẫu thử điều kiện khai triển sắc ký 32 3.3.2 Xích Thố Vương 33 3.3.3 Xích Thố Vương 33 3.3.4 Xích Thố Vương 34 3.3.5 YANGCHUNSAMNOK 34 3.3.6 ELK Velvet Antler Bois d’ESLANS Velours 35 3.3.7 YANGCHUNSAMROK 35 3.4 Bàn luận 36 KẾT LUẬN 37 ĐỀ XUẤT 38 TLTK DANH MỤC CÁC CHỮ VÀ KÝ HIỆU VIẾT TẮT PDE-5 Phosphodiesterase-5 MeOH Methanol NO Nitơ (II) oxid cGMP cyclic Guanosine Monophosphate PAH Pulmonary Arterial Hypertension (tăng áp động mạch phổi) CYP Cytochrome P450 ED Erectile Dysfunction (rối loạn cương dương) SKLM Sắc Ký Lớp Mỏng IR Infrared (Hồng ngoại) HPLC High-performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) TLC Thin- Layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng) MS Mass spectra( khối phổ) HPTLC High-performance Thin- Layer chromatography( Sắc ký lớp mỏng hiệu cao) TLTK Tài liệu tham khảo SKĐ Sắc ký đồ UV Ultraviolet (Tử ngoại) SPE Solid Phase extraction (Chiết pha rắn) SC Sildenafil citrate SD Sildenafil S/N Signal/Noise LOD Limit of Detection (Giới hạn phát hiện) Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số phương pháp phát sildenafil Bảng 1.2 Một số chất thường làm pha tĩnh cho sắc ký lớp mỏng Bảng 1.3 Một số thuốc thử tạo màu sắc ký lớp mỏng 12 Bảng 2.1 Một số sản phẩm đông dược ứng dụng kiểm tra 18 Bảng 3.1 Kết tính độ lặp lại 29 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Sắc ký đồ khảo sát hệ dung mơi khai triển 20 Hình 3.2 Sắc ký đồ khảo sát điều kiện phát vết 22 Hình 3.3 Sắc ký đồ khảo sát dung mơi chiết 24 Hình 3.4 Sắc ký đồ đánh giá độ chọn lọc 26 Hình 3.5 Sắc ký đồ đánh giá độ lặp lại 27 Hình 3.6 Sắc ký đồ analog xác định độ lặp lại 28 Hình 3.7 Sắc ký đồ xác định giới hạn phát 30 Hình 3.8 Sắc ký đồ analog mẫu xác định giới hạn phát 31 Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu Xích Thố Vương 33 Hình 3.10 Sắc ký đồ mẫu Xích Thố Vương 33 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu Xích Thố Vương 34 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu YANGCHUNSAMNOK 34 Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu ELK Velvet Antler Bois d’ESLANS Velours 35 Hình 3.14 Sắc ký đồ mẫu YANGCHUNSAMROK 35 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, kinh tế ngày phát triển, người có điều kiện quan tâm đến sức khỏe nhiều Cùng xu hướng ưa chuộng sử dụng sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên với niềm tin chúng an toàn, hiệu Nắm bắt xu đó, sở sản xuất chế phẩm đơng dược đưa thị trường nhiều mặt hàng nhằm đáp ứng nhu cầu người tiêu dùng Tuy nhiên, nhà sản xuất nhiều mục đích lợi nhuận, giảm nhanh triệu chứng hay tạo cảm giác đánh lừa người tiêu dùng (tăng cân nhanh tác dụng giữ nước) , mà cố tình trộn trái phép thuốc tân dược vào chế phẩm đông dược Điều khơng thơng báo khiến người tiêu dùng sử dụng thuốc với liều lớn thời gian kéo dài, nguyên nhân gây tác dụng không mong muốn sau cho người dùng chí nguy hiểm đến tính mạng Các nhóm thuốc thường sử dụng là: glucocorticoid, nhóm giảm đau chống viêm khơng steroid, nhóm ức chế PDE-5…đây thuốc cho tác dụng nhanh mạnh mà chúng bị lạm dụng nhiều Chính mà nước ta có quy định cụ thể nghiêm cấm trộn trái phép thuốc tân dược vào chế phẩm đông dược, nhiên việc kiểm sốt gặp nhiều khó khăn Sildenafil chất thuộc nhóm ức chế PDE-5 Năm 1998, sildenafil với tên biệt dược Viagra FDA công nhận làm thuốc thuốc điều trị rối loạn cương dương giới Chính nhờ tác dụng mà việc lạm dụng thuốc tình hình trộn trái phép sildenafil vào chế phẩm đơng dược ngày gia tăng Trong báo cáo thường niên hội đồng dược điển Mỹ (USP) năm 2007 nêu rõ rằng: “trộn sildenafil dẫn chất” trở thành vấn đề mang tính tồn cầu [17] Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 27 mẫu SKĐ, đồng thời đánh giá diện tích pic vết mẫu nhờ trợ giúp phần mềm Videoscan Tính RSD Spic, yêu cầu RSD ≤ 5% Song song tiến hành sắc ký mẫu dung dịch chuẩn nồng độ mg/ml Tiến hành: + Chuẩn bị dung dịch chuẩn 1mg/ml: 3.1.3 + Chiết mẫu lai nhiễm Sildenafil mục 3.1.3 + Khai triển sắc ký với điều kiện lựa chọn mục 3.1 + SKĐ phát bước sóng 254nm phun thuốc thử Dragendroff màu để quan sát mắt thường - Kết trình bày hình 3.5: Hình 3.5: SKĐ đánh giá độ lặp lại 1: dd SD chuẩn 27: dịch chiết mẫu lai nhiễm SD 28 Xử lý kết phần mềm Videoscan Kết trình bày hình 3.6: Hình 3.6: SKĐ analog xác định độ lặp lại Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 29 Bảng 3.1: Kết đánh giá độ lặp lại STT vết Rf Svết Chuẩn 0.662 121861.4 0.628 86926.3 0.631 90249.3 0.643 90326.0 0.648 87284.7 0.645 97157.8 0.642 88347.6 TB RSD (%) 0.639 1.26 90048.6 4.18 Nhận xét độ lặp lại: Độ lặp lại: + Bằng quan sát: nhận thấy vết chấm lặp lại lần chiết có Rf tương đối nhau, diện tích cường độ vết tương tự + Bằng tính tốn: theo kết tính bảng 3.1 ta nhận thấy độ lặp lại quy trình chiết xuất chấp nhận RSD Rf = 1,26%, RSD Spic= 4,18%, thỏa mãn yêu cầu Kết luận: quy trình phân tích cho độ lặp lại phù hợp để tiến hành chiết xuất mẫu thử đem kiểm tra 3.2.3 Giới hạn phát (LOD) Giới hạn phát nồng độ thấp mà ta nhận biết vết qua quan sát mắt thường đem soi UV hay phun thuốc thử màu, tỷ số đáp ứng vết chất phân tích nhiễu đường khoảng lần 30 + Cách tiến hành: Thêm vào 1,0g bột mẫu thể tích xác dung dịch chuẩn gốc chứa mg – 0,5 mg – 0,25 mg – 0,125 mg Sildenafil citrate tiến hành xử lý mẫu quy trình xử lý mẫu lai nhiễm Sildenafil mục 3.1.3 Thu dịch chiết có nồng độ tính theo lý thuyết mg/ml – 0,5 mg/ml – 0,25 mg/ml – 0,125 mg/ml + Tiến hành khai triển sắc ký với điều kiện lựa chọn mục 3.1 + Kết thể hình 3.7: Hình 3.7: SKĐ xác định giới hạn phát 1: dung dịch Sildenafil chuẩn 1mg/ml 25: dịch chiết có nồng độ giảm dần + Sắc ký đồ analog mẫu trình bày hình 3.8: Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 31 Hình 3.8: SKĐ analog mẫu xác định LOD + Nhận xét:  Quan sát mắt thường soi UV hay phun thuốc thử màu ta nhận thấy vết phát nồng độ 0,25mg/ml ( 250 ng/µl × 2µl=500 ng/vết) 32  Kết pic hóa cho thấy nồng độ 0,125 mg/ml chiều cao pic lần nhiễu đường  chọn giới hạn phát hin l 0,125mg/ml ( 0,125 ng/àl ì 2àl=250ng/vt) Kt lun: Giới hạn phát xác định được: Biện pháp phát LOD Bằng quan sát 500 ng/vết Bằng máy 250 ng/vết Nhận xét chung: Sau tiến hành xây dựng đánh giá phương pháp ta lựa chọn điều kiện phù hợp để tiến hành kiểm tra số mẫu thử 3.3.Áp dụng phương pháp kiểm tra số mẫu 3.3.1 Quy trình xử lý mẫu thử điều kiện khai triển sắc ký - Tiến hành xử lý mẫu: Lấy lượng bột thuốc tương đương khối lượng viên nang mẫu thử, nghiền thành bột thô, cho vào ống nghiệm thủy tinh có nút xốy Thêm 0,5ml Na2C03 0,1M, lắc đều, để yên phút Thêm 10ml hỗn hợp dung môi diethyl ether : dicloromethan (6:4), lắc kỹ phút, đem siêu âm 20 phút Ly tâm 5000r/p × 5p Lọc, thu dịch chiết vào cốc có mỏ Tiến hành chiết lần tương tự lần với 5ml dịch chiết Gộp dịch chiết lần, đem cô cách thủy đến cắn, sau tùy vào lượng cắn thu đem hòa tan lượng MeOH phù hợp Thu dịch chiết đem chấm sắc ký Các dung dịch chuẩn, mẫu trắng, mẫu lai nhiễm chuẩn bị mục 3.1.3 - Tiến hành sắc ký theo điều kiện lựa chọn mục 3.1 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 33 3.3.2 Xích Thố Vương (Cơng ty cổ phần dược phẩm Gia Nguyễn)XGN1 - Tiến hành: mục 3.4.1, hòa tan cắn thu 1ml MeOH - Kết qủa thể hình 3.8: 1: dung dịch Sildenafil (SD) chuẩn 2: dịch chiết mẫu trắng 3: dịch chiết mẫu lai nhiễm SD 4: dịch chiết Xích Thố Vương Nhận xét: từ kết sắc ký đồ cho thấy, dịch chiết mẫu Xích Thố Vương khơng xuất vết vị trí SD  khơng có SD mẫu thử Hình 3.9: SKĐ mẫu XGN1 3.3.3 Xích Thố Vương (Công ty cổ phần dược phẩm Gia Nguyễn)XGN2 - Tiến hành: tương tự 3.4.1, hòa tan cắn thu 1ml MeOH - Kết thể hình 3.10: 1: dung dịch Sildenafil (SD) chuẩn 2: dịch chiết mẫu trắng 3: dịch chiết Xích Thố Vương 4: dịch chiết mẫu lai nhiễm SD Nhận xét: từ kết sắc ký đồ cho thấy, dịch chiết mẫu Xích Thố Vương khơng xuất vết vị trí SD  khơng có SD mẫu thử Hình 3.10: SKĐ mẫu XGN2 34 3.3.4 Xích Thố Vương (Cơng ty cổ phần đầu tư sản xuất Âu Cơ)-XAC - Tiến hành: tương tự 3.4.1, hòa tan cắn thu 1ml MeOH - Kết thể hình 3.11: 1: dung dịch Sildenafil (SD) chuẩn 2: dịch chiết mẫu trắng 3: dịch chiết mẫu lai nhiễm SD 4: dịch chiết Xích Thố Vương Nhận xét: từ kết sắc ký đồ cho thấy, dịch chiết mẫu Xích Thố Vương khơng xuất vết vị trí SD  khơng có SD mẫu thử Hình 3.11: SKĐ mẫu XAC 3.3.5 YANGCHUNSAMNOK (Korea General Mannyon Health Corporation)- Mã hóa YCS1 - Tiến hành: 3.4.1, hòa tan cắn thu 2ml MeOH lượng cắn thu nhiều - Kết thể hình 3.11: 1: dung dịch Sildenafil (SD) chuẩn 2: dịch chiết mẫu trắng 3: dịch chiết YANGCHUNSAMNOK 4: dịch chiết mẫu lai nhiễm SD Nhận xét: từ sắc ký đồ ta nhận thấy, dịch chiết mẫu YCS1 có xuất vết vị trí ngang với SD chuẩn, chế phẩm có chứa SD Hình 3.12: SKĐ mẫu YCS1 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 35 3.3.6 ELK Velvet Antler Bois d’ESLANS Velours (Uncle Bill Trading Inc Scarborough, Ontario M1B3V3, Canada)- EAV - Tiến hành: 3.4.1, hòa tan cắn thu 1ml MeOH - Kết : 1: dung dịch Sildenafil (SD) chuẩn 2: dịch chiết mẫu trắng 3: dịch chiết ELK 4: dịch chiết mẫu lai nhiễm SD Nhận xét: từ sắc ký đồ ta thấy, dịch chiết EAV khơng có vết xuất vị trí tương đương với SD chuẩn  khơng có SD mẫu thử Hình 3.13: SKĐ mẫu EAV 3.3.7 YANGCHUNSAMROK (Korea General Mannyon Health Corporation)– YCS2 - Tiến hành: trình bày phần 3.4.1, cắn thu hòa tan 5ml MeOH lượng cắn thu nhiều - Kết thể hình 3.14: 1: dung dịch Sildenafil (SD) chuẩn 2: dịch chiết mẫu trắng 3: dịch chiết YCS2 4: dịch chiết mẫu lai nhiễm SD Nhận xét: từ sắc ký đồ ta nhận thấy, dịch chiết mẫu YCS2 có xuất vết vị trí ngang với SD chuẩn  chế phẩm có chứa Sildenafil Hình 3.14: SKĐ mẫu YCS2 36 3.4 Bàn luận + Xây dựng quy trình chiết xuất: Sildenafil dễ tan dung mơi khơng phân cực nên sử dụng dung môi phân cực để chiết Trong đề tài, sử dụng hỗn hợp dung môi Diethyl ether : dicloromethan (6:4)và sử dụng kỹ thuật chiết hệ dị thể rắn-lỏng để chiết Sildenafil chế phẩm đông dược thấy đạt độ chọn lọc độ xác cao + Phương pháp sắc ký lớp mỏng Hiện nay, giới nước có nhiều phương pháp phân tích đại HPLC, LC-MS …Tuy nhiên, SKLM phương pháp có hiệu phân tích chất chế phẩm đơng dược từ việc nghiên cứu sàng lọc ban đầu (định tính) bán định lượng định lượng, phương pháp đơn giản rẻ tiền nhất, dùng cho hầu hết chất ứng dụng cho cở sở kiểm nghiệm tuyến chưa có đủ trang thiết bị đại Trong khóa luận này, chúng tơi sử dụng phương pháp SKLM để phát Sildenafil trộn trái phép vào chế phẩm đông dược, sử dụng điều kiện SKLM khảo sát để tiến hành kiểm tra số mẫu thử Qua áp dụng khảo sát mẫu thử, nhận thấy mẫu khơng có Sildenafil, mẫu có chứa Sildenafil mẫu kiểm tra Trung tâm kiểm nghiệm Hà Nội phương pháp LC-MS cho kết tương đồng Chứng tỏ phương pháp SKLM xây dựng có độ tin cậy đảm bảo dùng phương pháp cho kiểm tra sàng lọc ban đầu trước tiến hành phương pháp phức tạp, đắt tiền hơn tiết kiệm chi phí dễ triển khai, áp dụng Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 37 KẾT LUẬN Sau hồn thành khóa luận “ Nghiên cứu phát Sildenafil số chế phẩm đông dược sắc ký lớp mỏng”, chúng tơi có số kết luận sau: + Đã xây dựng điều kiện xác định Sildenafil trộn trái phép chế phẩm đông dược, cụ thể là:  Điều kiện sắc ký: hệ DMKT MeOH : chloroform (4:1)  Điều kiện phát hiện: phát soi λ= 254nm, λ= 366nm, thuốc thử Dragendroff, 10% H2SO 4/EtOH-soi 366nm  Xử lý mẫu: dung môi chiết diethyl ether : dicloromethan (6:4), quy trình chiết hệ dị thể rắn lỏng + Đã đánh giá phương pháp độ chọn lọc, độ lặp lại Kết đáp ứng yêu cầu + Đã xác định giới hạn phát hiện: quan sát máy, kết LOD = 0,25mg/ml quan sát mắt thường soi λ=254nm, LOD= 0,125 mg/ml xác định máy + Đã áp dụng phương pháp kiểm tra mẫu đông dược, có mẫu có chứa Sildenafil  cần kiểm sốt chặt chẽ chế phẩm đơng dược thực phẩm chức Sau hoàn thành khóa luận, đạt mục tiêu đề 38 ĐỀ XUẤT Sử dụng phương pháp xây dựng khóa luận để tiếp tục khảo sát phát Sildenafil mẫu đông dược dùng để hỗ trợ tăng cường chức sinh lý cho nam giới, nhà thuốc đông y gia truyền sở sản xuất- phân phối thuốc Trên sở điều kiện sắc ký xây dựng được, tiếp tục nghiên cứu, phát triển phương pháp để phát chất khác nhóm ức chế men PDE-5 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tiếng Việt Bộ y tế (2007), Hóa phân tích, tập 2, Nhà xuất y học, Hà Nội Kurt Randerath, Nguyễn Hữu Bảy (dịch ) (1974), Sắc ký lớp mỏng, NXB Y học, tr 6-7, 22-45, 70-126 Đỗ Quốc Hùng, Bùi Thế Long (2009), “Sildenafil biện pháp điều trị tăng áp động mạch phổi”, Tạp Chí Thơng Tin Y Dược, (8), tr 9-11 Trần Việt Hùng, Phạm Thanh Kỳ, Trịnh Văn Quỳ (2004), “ Nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật nhóm phospho dược liệu trồng trọt sử dụng Việt Nam ˮ, Tạp chí kiểm nghiệm thuốc số 3/2004 Phạm Luận (2001), Giáo trình sở kỹ thuật xử lý mẫu phân tích, Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Hà Nội, tr 46-54, 54-55, 56 Lê Thị Quỳnh Nga (2011), Xây dựng phương pháp phân tích phát số chất ức chế men phosphodiesterase – trộn trái phép thuốc đông dược thực phẩm chức năng, Luận văn thạc sĩ dược học, Trường Đại Học Dược Hà Nội Hoàng Thanh Tâm (2008), Xây dựng phương pháp phát số chất thuộc nhóm glucocorticoid trộn trái phép mỹ phẩm, Luận văn Thạc sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội Đinh Văn Thành (2006), Nghiên cứu ứng dụng chiết pha rắn để định lượng Vitamin D số chế phẩm Multivitamin sắc ký lỏng hiệu cao, Luận văn thạc sĩ dược học, Đại Học Dược Hà Nội B Tiếng Anh Abourashed EA, Abdel-Kader MS, & Habib AAM (2005), “HPTLC determination of sildenafil in pharmaceutical products and aphrodisiac herbal preparations”, JPC-Journal of Planar Chromatography-Modern TLC, 18(105), pp 372-376 10 American Society of Health-System Pharmacists (2009), AHFS Drug Information, vol 8, pp 1801-1814 11 Elke Hahn – Deinstrop (1999), Applied Thin – chromatography, Wiley VCH, Germany, pp 53-57, 61-63, 87-92, Layer 99- 112 12.Jie W, Ming P, Jin L, Wei Z, & Hai-xia T (2004), “ Identification of sildenafile in medicinal substances and in traditional Chinese medicines by infrared spectrophotometry ”, Central South Pharmacy, 3, 005 13 Joseph Sherma (2003), Handbook of Thin – layer chromatography, NewYork, chapter (pp 99-135), chapter 18 (pp 535-565) 14 Merck & Co JNC (2006), The Merck Index, 14 th edition, pp 85588567 15 Moriyasu TAKAKO, Shigeoka SUTEMI, Kishimoto KIYOKO, Ishikawa FUSAKO, Nakajima J, Kamimura HISASHI, & Yasuda ICHIRO (2001), “ Identification system for Sildenafil in health foods”, Yakugaku zasshi: Journal of the Pharmaceutical Society of Japan, 121(10), pp 765-769 16 Quintero A, Caldera A, Milano B, Odreman I, Hurtado A, Manzanares L, & Villamizar J (2009), “Validation of an HPLC method for sildenafil citrate analysis in human plasma samples”, Die Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 64(12), 796-799 17 Samuel R Gartz, PhD (2007), E.D Drugs and analogs: Charactrization of phosphodiesterase – inhibitor in suspect Couterfeit and herbal products, USP Annual Scientific Meeting 18 Sean C Sweetman, BPharm, FrPharm (2009), Martindale – the complete drug reference Thirty-six edition, vol 2, pp 2193 19 Singh S, Prasad B, Savaliya AA, Shah RP, Gohil VM, & Kaur A (2009), “Strategies for characterizing sildenafil, vardenafil, tadalafil and their analogues in herbal dietary supplements, and detecting counterfeit products containing these drugs”, TrAC Trends in Analytical Chemistry, 28(1), pp 13-28 20 Steiner MK, Preston IR, Klinger JR, & Hill NS (2005), “Pulmonary hypertension: inhaled nitric oxide, sildenafil and natriuretic peptides”, Current opinion in pharmacology, 5(3), pp 245-250 21.Todd P Semla, BCPS, FCCP Judith L.Beizer, PharmD, FASCP Martin D.Higbee, CGP, Geriatric dosage handbook, Vol 2, pp 16001602 22 Wei F, Shi Y, Cheng XL, Xiao XY, Ma SC, & Lin RC (2010), “Simultaneous Determination of Eight PDE5-Is Potentially Adulterated in Herbal Dietary Supplements with TLC and HPLCPDA-MS Methods”, Planta Medica, 76(05), P19, pp 1288-1303 23 Zun-xi WEI (2007), “Determination of sildenafil citrate in health products by HPLC and TLC”, Anhui Medical and Pharmaceutical Journal, 12, 022, pp 372-376 ... đích góp phần công tác nghiên cứu phát thuốc tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược tiến hành đề tài: Nghiên cứu phát sildenafil số chế phẩm đông dược sắc ký lớp mỏng Với mục tiêu cụ thể... lieu mien mien phi phi 1.1.4 Một số nghiên cứu phát Sildenafil chế phẩm đông dược Qua số tài liệu cho thấy có nhiều nghiên cứu để phát Sildenafil chế phẩm đông dược thực phẩm chức giới Việt Nam [6],... BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - HOÀNG THỊ QUỲNH NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN SILDENAFIL TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn