KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG LÊN SỰ TĂNG TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY HỢP CHẤT THỨ CẤP CỦA CÂY DIỆP HẠ CHÂU ĐẮNG (Phyllanthus amarus (Schum. et Thonn.)) NUÔI CẤY MÔ BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG TỰ DƯỠNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG LÊN SỰ TĂNG TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY HỢP CHẤT THỨ CẤP CỦA CÂY DIỆP HẠ CHÂU ĐẮNG (Phyllanthus amarus (Schum et Thonn.)) NUÔI CẤY MÔ BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG TỰ DƯỠNG Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : PHẠM MINH DUY Niên khóa : 2006 – 2010 Tháng 7/2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG LÊN SỰ TĂNG TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY HỢP CHẤT THỨ CẤP CỦA CÂY DIỆP HẠ CHÂU ĐẮNG (Phyllanthus amarus (Schum et Thonn.)) NUÔI CẤY MÔ BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG TỰ DƯỠNG Hướng dẫn khoa học PGS.TS NGUYỄN THỊ QUỲNH Tháng 7/2010 Sinh viên thực PHẠM MINH DUY LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến lãnh đạo Viện Sinh Học Nhiệt Đới TP HCM lãnh đạo Phòng Cơng Nghệ Tế Bào Thực Vật cho phép tạo điều kiện thuận lợi cho thực đề tài sở Viện Phòng Tơi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Quỳnh, người tận tình dạy hướng dẫn thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn anh Nguyễn Như Hiến, chị Hoàng Ngọc Nhung, chị Trịnh Thanh Vân bạn Phạm Thành Thái, người giúp đỡ nhiều q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến thầy cô môn Công Nghệ Sinh Học, trường Đại học Nông Lâm chăm lo tạo điều kiện cho sinh viên học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến tất thầy cô trường Đại học Nông Lâm truyền dạy cho kiến thức quý giá lĩnh vực công nghệ sinh học Và cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cha mẹ tôi, người sinh thành nuôi dưỡng tôi, chăm lo, yêu thương, chia sẻ, động viên người dẫn dắt đến với lĩnh vực công nghệ sinh học Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng năm 2010 Phạm Minh Duy i TÓM TẮT Hiện nay, nhu cầu Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus (Schum et Thonn.)) ngày tăng cao, dẫn đến cần thiết phải nghiên cứu ứng dụng vi nhân giống quang tự dưỡng, phương pháp tiên tiến, vào sản xuất Diệp hạ châu đắng, với khảo sát ảnh hưởng điều kiện môi trường vật lý lên tăng trưởng tích lũy hợp chất thứ cấp lồi Đề tài thực khảo sát ảnh hưởng yếu tố cường độ ánh sáng, thời gian chiếu sáng, trao đổi khí hộp ni cấy, nồng độ CO2, nhiệt độ ẩm độ tương đối lên tăng trưởng tích lũy hợp chất thứ cấp Diệp hạ châu đắng vi nhân giống phương pháp quang tự dưỡng Trong thí nghiệm 1, nuôi cấy ba mức cường độ ánh sáng (80, 120 160 µmol m-2 s-1), hai mức thời gian chiếu sáng (8 16 giờ/ngày) hai mức số lần trao đổi khí (3,97 5,48 lần/giờ) hộp ni cấy Trong thí nghiệm 2, nuôi cấy hai mức nồng độ CO2 (400 µmol mol-1 1200 µmol mol-1) Trong thí nghiệm 3, nuôi cấy điều kiện nhiệt độ cao hai mức ẩm độ tương đối (50% 85%) Cường độ ánh sáng, thời gian chiếu sáng trao đổi khí tăng làm tăng trưởng tốt Nồng độ CO2 cao giúp cho tăng trưởng tích lũy hợp chất thứ cấp tốt Ẩm độ thấp kết hợp với điều kiện nhiệt độ cao giúp gia tăng nồng độ hợp chất lignan ii SUMMARY The thesis title: “Investigation on the effects of some environmental factors on growth and accumulation of secondary metabolites of photoautotrophically in vitro cultured Chanca Piedra (Phyllanthus amarus (Schum et Thonn))” Nowadays, the demand for Chanca Piedra plants (Phyllanthus amarus (Schum et Thonn.)) is rising, leading to the need of studying on the application of photoautotrophic micropropagation, an advanced method, on the production of Chanca Piedra, and investigating the effects of the physical environment factors on the growth and secondary metabolite accumulation of this plant The thesis investigated the effects of irradiance, photoperiod, air exchange rate of culture vessels, CO2 concentration, temperature and relative humidity on the growth and secondary metabolite accumulation of Chanca Piedra plants cultured in vitro photoautotrophically In the first experiment, plants was cultured under three levels of irradiance (80, 120 and 160 µmol m-2 s-1), two levels of photoperiod (8 h and 16 h/day) and two numbers of air exchanges (3,97 times h-1 and 5,48 times h-1) of culture vesssels In the second experiment, plants was cultured under two levels of CO2 concentration (400 µmol mol-1 and 1200 µmol mol-1) In the third experiment, plants was cultured under high temperature and two levels of relative humidity (50% and 85%) The increase in irradiance, photoperiod and numbers of air exchanges of culture vessels resulted in a better growth of the plants A high CO2 concentration also enhanced the plant growth and accumulation of secondary metabolites A low relative humidity in combination with high temperature increased lignan concentration of Chanca Piedra plants in vitro Tags: Chanca Piedra, photoautotrophic, environmental factors, growth, secondary metabolites iii MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn i Tóm tắt ii Summary iii Danh sách chữ viết tắt vi Danh sách bảng viii Danh sách hình ix Chương Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Nội dung thực Chương Tổng quan tài liệu 2.1 Sơ lược Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus (Schum et Thonn.)) 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Nguồn gốc phân bố 2.1.3 Hình thái sinh lý 2.1.4 Các nghiên cứu Diệp hạ châu đắng 11 2.1.5 Tình hình canh tác sản xuất thương mại 15 2.2 Tổng quan phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 17 2.2.1 Lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật 17 2.2.2 Phương pháp nhân giống in vitro 19 2.2.3 Nhân giống in vitro truyền thống (conventional micropropagation) 21 2.2.4 Nhân giống in vitro quang tự dưỡng (photoautotrophic micropropagation) 26 Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu 35 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 35 3.1.1 Thời gian nghiên cứu 35 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 35 iv 3.2 Vật liệu 35 3.2.1 Nguồn mẫu thí nghiệm 35 3.2.2 Các dụng cụ sử dụng thí nghiệm 35 3.2.3 Các thiết bị sử dụng thí nghiệm 36 3.2.4 Các hóa chất sử dụng thí nghiệm 36 3.2.5 Giá thể sử dụng thí nghiệm 37 3.2.6 Môi trường sử dụng thí nghiệm 37 3.3 Phương pháp nghiên cứu 39 3.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng, thời gian 39 3.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ CO2 lên tăng trưởng 41 3.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ ẩm độ lên tăng trưởng 44 3.4 Phương pháp tính số liệu 46 3.5 Phân tích thống kê 50 Chương Kết thảo luận 51 4.1 Kết 51 4.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng, thời gian 51 4.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ CO2 lên tăng trưởng 69 4.1.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ ẩm độ lên tăng trưởng 81 4.2 Thảo luận 89 4.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng, thời gian 89 4.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ CO2 lên tăng trưởng 95 4.1.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ ẩm độ lên tăng trưởng 98 Chương Kết luận đề nghị 100 5.1 Kết luận 100 5.2 Đề nghị 100 Tài liệu tham khảo 101 Phụ lục v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT % CK: % chất khô CĐAS: Cường độ ánh sáng Chl: Chlorophyll CIMAP: Central Institute of Medicinal and Aromatic Plants (viện Nghiên cứu Dược Liệu Hương Liệu (Ấn Độ)) FRLHT: Foundation for Revitalisation of Local Health Traditions (Tổ chức Bảo tồn y dược học cổ truyền Ấn Độ) GTTLK: Gia tăng trọng lượng khô GTTLT: Gia tăng trọng lượng tươi HBsAg: Hepatitis B virus Surface Antigen (Kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B) HBV: Hepatitis B virus (virus viêm gan B) HIV-1: Human immunodeficiency virus type (virus gây suy giảm miễn dịch người tuýp 1) IAA: Indol-3-acetic acid MS: Murashige and Skoog (1962) NLAS: Năng lượng ánh sáng Pn: Net photosynthesis rate (Hiệu suất quang hợp thuần) RuBP: Ribulose-1,5-bisphosphate RuBisCO: Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase oxygenase SA: Amonium Sulfate (đạm sulfate – (NH4)2SO4) SD: Stomatal density (mật độ khí khổng) SI: Stomatal index (chỉ số khí khổng) TGCS: Thời gian chiếu sáng TLK: Trọng lượng khô TLT: Trọng lượng tươi TP Hồ Chí Minh: Thành phố Hồ Chí Minh V: Thể tích vi WHsAg: Woodchuck Hepatitus virus surface Antigen (Kháng nguyên bề mặt virus viêm gan chuột chũi) WHV: Woodchuck Hepatitus virus (virus viêm gan chuột chũi) vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm 1a 40 Bảng 3.2 Bố trí thí nghiệm 1b 40 Bảng 3.3 Bố trí thí nghiệm 42 Bảng 3.4 Bố trí thí nghiệm 46 Bảng 4.1 Cường độ ánh sáng, thời gian chiếu sáng lượng ánh sáng 52 Bảng 4.2 Gia tăng trọng lượng tươi khô cây, tỉ lệ trọng lượng tươi khô 53 Bảng 4.3 Số lá/cây, chiều dài rễ, chiều cao đường kính thân Diệp 57 Bảng 4.4 Hàm lượng chlorophyll a, b, chlorophyll a + b tỉ lệ chlorophyll a/b 61 Bảng 4.5 Gia tăng trọng lượng tươi khô cây, tỉ lệ trọng lượng tươi khô 63 Bảng 4.6 Số lá/cây, chiều dài rễ, chiều cao đường kính thân Diệp 67 Bảng 4.7 Hàm lượng chlorophyll a, b, chlorophyll a + b tỉ lệ chlorophyll a/b 69 Bảng 4.8 Gia tăng trọng lượng tươi khô cây, tỉ lệ trọng lượng tươi khô 71 Bảng 4.9 Số lá/cây, chiều dài rễ, chiều cao đường kính thân Diệp 73 Bảng 4.10 Hàm lượng chlorophyll a, b, chlorophyll a + b tỉ lệ chlorophyll a/b 75 Bảng 4.11 Ảnh hưởng nồng độ CO2 in vitro khác lên tỉ lệ sống, gia 78 Bảng 4.12 Ảnh hưởng nồng độ CO2 in vitro khác lên số chồi, gia 80 Bảng 4.13 Hàm lượng chlorophyll a, b, chlorophyll a + b tỉ lệ chlorophyll a/b 81 Bảng 4.14 Gia tăng trọng lượng tươi khô cây, tỉ lệ trọng lượng tươi khô 84 Bảng 4.15 Gia tăng trọng lượng tươi khô cây, tỉ lệ trọng lượng tươi khô 84 Bảng 4.16 Số lá/cây, chiều dài rễ, chiều cao đường kính thân Diệp 86 Bảng 4.17 Số lá/cây, chiều dài rễ, chiều cao đường kính thân Diệp 87 Bảng 4.18 Hàm lượng chlorophyll a, b, chlorophyll a + b tỉ lệ chlorophyll a/b 89 viii Variable (khocay) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 13452.135 13452.135 70.610 0.0011 Within 762.053 190.513 Total 14214.188 Coefficient of Variation = 8.94% Variable (khothan) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 7654.082 7654.082 50.417 0.0021 Within 607.267 151.817 Total 8261.349 Coefficient of Variation = 11.36% Variable (khore) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 1053.375 1053.375 148.154 0.0003 Within 28.440 7.110 Total 1081.815 Coefficient of Variation = 6.03% Variable 10 (khot/r) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.010 0.010 0.054 Within 0.767 0.192 Total 0.778 Coefficient of Variation = 12.85% Variable 11 (%kho) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.000 0.000 0.088 Within 0.000 0.000 Total 0.000 Coefficient of Variation = 5.91% Bảng ANOVA số liệu Bảng 4.12 Variable 12 (choi) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 17.340 17.340 43.350 0.0028 Within 1.600 0.400 Total 18.940 Coefficient of Variation = 22.59% Variable 13 (la) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 543.402 543.402 38.304 0.0035 Within 56.747 14.187 Total 600.148 Coefficient of Variation = 18.18% Variable 14 (daire) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 11792.667 11792.667 313.080 0.0001 Within 150.667 37.667 Total 11943.333 Coefficient of Variation = 5.45% Variable 15 (caothan) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 1.500 1.500 0.021 Within 281.333 70.333 Total 282.833 Coefficient of Variation = 11.51% Variable 16 (dthan) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.009 0.009 21.160 0.0100 Within 0.002 0.000 Total 0.010 Coefficient of Variation = 6.41% Bảng ANOVA số liệu Bảng 4.13 Variable (a) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.082 0.082 12.250 0.0249 Within 0.027 0.007 Total 0.108 Coefficient of Variation = 0.67% Variable (b) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.000 0.000 0.000 Within 0.033 0.008 Total 0.033 Coefficient of Variation = 1.81% Variable (a+b) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.042 0.042 2.273 0.2062 Within 0.073 0.018 Total 0.115 Coefficient of Variation = 0.78% Variable (a/b) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.004 0.004 1.391 0.3035 Within 0.012 0.003 Total 0.017 Coefficient of Variation = 2.29% Thí nghiệm Bảng ANOVA số liệu Bảng 4.15 Variable (tuoicay) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 352.667 352.667 0.924 Within 1526.667 381.667 Total 1879.333 Coefficient of Variation = 3.53% Variable (tuoithan) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 2992.667 2992.667 2.127 0.2184 Within 5626.667 1406.667 Total 8619.333 Coefficient of Variation = 8.40% Variable (tuoire) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 24.000 24.000 0.278 Within 345.333 86.333 Total 369.333 Coefficient of Variation = 7.53% Variable (tuoithan/re) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.022 0.022 0.390 Within 0.222 0.055 Total 0.243 Coefficient of Variation = 6.13% Variable 10 (khore) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.135 0.135 10.125 0.0335 Within 0.053 0.013 Total 0.188 Coefficient of Variation = 1.43% Variable 11 (khocay) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 40.042 40.042 14.978 0.0180 Within 10.693 2.673 Total 50.735 Coefficient of Variation = 2.54% Variable 12 (khothan) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 37.500 37.500 14.940 0.0181 Within 10.040 2.510 Total 47.540 Coefficient of Variation = 2.81% Variable 13 (khothan/re) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.647 0.647 19.385 0.0117 Within 0.133 0.033 Total 0.780 Coefficient of Variation = 2.37% Variable 14 (%kho) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.000 0.000 25.920 0.0070 Within 0.000 0.000 Total 0.000 Coefficient of Variation = 2.45% Bảng ANOVA số liệu Bảng 4.17 Variable (la) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.082 0.082 0.101 Within 3.247 0.812 Total 3.328 Coefficient of Variation = 7.33% Variable (dthan) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.020 0.020 8.448 0.0438 Within 0.010 0.002 Total 0.030 Coefficient of Variation = 4.20% Variable (daire) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.667 0.667 0.007 Within 393.333 98.333 Total 394.000 Coefficient of Variation = 12.24% Variable (caothan) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 112.667 112.667 2.119 0.2192 Within 212.667 53.167 Total 325.333 Coefficient of Variation = 7.13% Bảng ANOVA số liệu Bảng 4.18 Variable (a) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 28.167 28.167 582.761 0.0000 Within 0.193 0.048 Total 28.360 Coefficient of Variation = 1.27% Variable (b) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 7.482 7.482 144.806 0.0003 Within 0.207 0.052 Total 7.688 Coefficient of Variation = 2.87% Variable (a+b) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 64.682 64.682 792.022 0.0000 Within 0.327 0.082 Total 65.008 Coefficient of Variation = 1.13% Variable (a/b) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.011 0.011 3.558 0.1323 Within 0.013 0.003 Total 0.024 Coefficient of Variation = 2.57% Phụ lục Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm Thí nghiệm 1a Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Bảng 4.2 GTTLT Duncan's Multiple Range Test LSD value = 24.73 s_ = 5.725 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 103.0 122.0 136.0 272.0 342.0 423.0 Ranked Order E DE D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 423.0 342.0 272.0 136.0 122.0 103.0 A B C D DE E GTTLK Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.777 s_ = 0.6429 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 9.400 10.50 11.10 21.30 30.30 35.10 Ranked Order D D D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 35.10 30.30 21.30 11.10 10.50 9.400 A B C D D D Tỉ lệ TLK thân/rễ Duncan's Multiple Range Test LSD value = 3.847 s_ = 0.8905 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 16.83 11.05 9.820 4.280 4.460 4.080 Ranked Order A B B C C C Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 16.83 11.05 9.820 4.460 4.280 4.080 A B B C C C % CK Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.005626 s_ = 0.001826 at alpha = 0.050 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.09900 0.09900 0.08800 0.08500 0.09300 0.08600 Ranked Order A A BC C B C Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.09900 0.09900 0.09300 0.08800 0.08600 0.08500 A A B BC C C Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Bảng 4.3 Số Duncan's Multiple Range Test LSD value = 1.209 s_ = 0.3924 at alpha = 0.050 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 4.800 5.400 5.800 7.500 8.400 10.70 Ranked Order C C C B B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 10.70 8.400 7.500 5.800 5.400 4.800 A B B C C C Chiều cao Duncan's Multiple Range Test LSD value = 4.707 s_ = 1.528 at alpha = 0.050 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 35.00 38.00 50.00 40.00 42.00 59.00 Ranked Order D CD B C C A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 59.00 50.00 42.00 40.00 38.00 35.00 A B C C CD D Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Bảng 4.4 Chl a + b Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.5521 s_ = 0.1278 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 26.60 24.60 23.60 28.30 27.30 26.90 Ranked Order C D E A B BC Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 28.30 27.30 26.90 26.60 24.60 23.60 A B BC C D E Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Hình 4.1 GTTLT thân Duncan's Multiple Range Test LSD value = 18.05 s_ = 4.179 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 87.00 105.0 114.0 176.0 220.0 273.0 Ranked Order E DE D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 273.0 220.0 176.0 114.0 105.0 87.00 A B C D DE E GTTLK thân Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.355 s_ = 0.5453 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 8.400 9.500 9.500 16.00 23.80 27.40 Ranked Order D D D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 27.40 23.80 16.00 9.500 9.500 8.400 A B C D D D Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Hình 4.2 TLT rễ Duncan's Multiple Range Test LSD value = 19.76 s_ = 4.574 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 16.00 17.00 22.00 95.00 122.0 149.0 Ranked Order D D D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 149.0 122.0 95.00 22.00 17.00 16.00 A B C D D D TLK rễ Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.6359 s_ = 0.1472 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.9000 1.000 1.500 5.200 6.500 7.700 Ranked Order D D D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 7.700 6.500 5.200 1.500 1.000 0.9000 A B C D D D Thí nghiệm 1a Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Bảng 4.5 GTTLT Least Significant Difference Test LSD value = 26.33 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 136.0 154.0 423.0 496.0 Ranked Order C C B A Mean Mean Mean Mean = = = = 496.0 423.0 154.0 136.0 A B C C Tỉ lệ TLT thân/rễ Least Significant Difference Test LSD value = 1.418 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 7.260 4.160 2.040 1.680 Ranked Order A B C C Mean Mean Mean Mean = = = = 7.260 4.160 2.040 1.680 A B C C GTTLK Least Significant Difference Test LSD value = 2.621 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 11.10 12.30 35.10 41.80 Ranked Order C C B A Mean Mean Mean Mean = = = = 41.80 35.10 12.30 11.10 A B C C Tỉ lệ TLK thân/rễ Least Significant Difference Test LSD value = 1.385 at alpha = 0.050 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 9.820 6.690 4.080 3.770 Ranked Order A B C C Mean Mean Mean Mean = = = = 9.820 6.690 4.080 3.770 A B C C Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Bảng 4.7 Chl a Least Significant Difference Test LSD value = 0.6126 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 16.60 20.30 18.90 21.50 Ranked Order D B C A Mean Mean Mean Mean = = = = 21.50 20.30 18.90 16.60 A B C D Chl b Least Significant Difference Test LSD value = 0.5876 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 7.000 8.900 8.000 8.500 Ranked Order C A B AB Mean Mean Mean Mean = = = = 8.900 8.500 8.000 7.000 A AB B C Chl a + b Least Significant Difference Test LSD value = 0.5876 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 23.60 29.20 26.90 30.10 Ranked Order D B C A Mean Mean Mean Mean = = = = 30.10 29.20 26.90 23.60 A B C D Chl a/b Least Significant Difference Test LSD value = 0.1331 at alpha = 0.050 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 2.360 2.240 2.380 2.520 Ranked Order BC C B A Mean Mean Mean Mean = = = = 2.520 2.380 2.360 2.240 A B BC C Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Hình 4.6 GTTLK thân Least Significant Difference Test LSD value = 2.173 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 9.500 10.20 27.40 32.10 Ranked Order C C B A Mean Mean Mean Mean = = = = 32.10 27.40 10.20 9.500 A B C C Bảng trắc nghiệm phân hạng kết Hình 4.7 TLT rễ Least Significant Difference Test LSD value = 15.96 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 22.00 34.00 149.0 197.0 Ranked Order C C B A Mean Mean Mean Mean = = = = 197.0 149.0 34.00 22.00 A B C C TLK rễ Least Significant Difference Test LSD value = 0.7700 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 1.500 2.100 7.700 9.800 Ranked Order C C B A Mean Mean Mean Mean = = = = 9.800 7.700 2.100 1.500 A B C C ... động viên người dẫn dắt đến với lĩnh vực công nghệ sinh học Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng năm 2010 Phạm Minh Duy i TÓM TẮT Hiện nay, nhu cầu Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus (Schum... PHÁP QUANG TỰ DƯỠNG Hướng dẫn khoa học PGS.TS NGUYỄN THỊ QUỲNH Tháng 7/2010 Sinh viên thực PHẠM MINH DUY LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến lãnh đạo Viện Sinh Học Nhiệt Đới TP HCM... khổng) TGCS: Thời gian chiếu sáng TLK: Trọng lượng khơ TLT: Trọng lượng tươi TP Hồ Chí Minh: Thành phố Hồ Chí Minh V: Thể tích vi WHsAg: Woodchuck Hepatitus virus surface Antigen (Kháng nguyên bề