Nghiên cứu quy trình nuôi trồng nấm cordyceps militaris trên một số loại côn trùng được sử dụng làm thực phẩm tại khu vực tây bắc việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC TÂY BẮC LÊ VĂN CƢỜNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI TRỒNG NẤM Cordyceps militaris TRÊN MỘT SỐ LOẠI CÔN TRÙNG ĐƢỢC SỬ DỤNG LÀM THỰC PHẨM TẠI KHU VỰC TÂY BẮC VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC Sơn La - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC TÂY BẮC LÊ VĂN CƢỜNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI TRỒNG NẤM Cordyceps militaris TRÊN MỘT SỐ LOẠI CÔN TRÙNG ĐƢỢC SỬ DỤNG LÀM THỰC PHẨM TẠI KHU VỰC TÂY BẮC VIỆT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Dƣơng Minh Lam Sơn La - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận văn Thạc sĩ “Nghiên cứu quy trình ni trồng nấm Cordyceps militaris số loại côn trùng sử dụng làm thực phẩm khu vực Tây Bắc Việt Nam” kết nghiên cứu tôi, không chép Các số liệu, kết luận văn việc nghiên cứu phân tích tổng hợp cách trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Nếu sai, tơi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm TÁC GIẢ LUẬN VĂN Lê Văn Cƣờng LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực đề tài, nhận quan tâm, dạy nhiệt tình thầy cô giáo, bạn bè người thân Em xin gửi tới PGS.TS Dương Minh Lam lòng biết ơn sâu sắc lời cảm ơn chân thành, người thầy kính mến ln tận tình hướng dẫn, dạy bảo, động viên tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt luận văn Em xin gửi lời cảm ơn tới quý thầy cô tham gia giảng dạy hướng dẫn em, cảm ơn em sinh viên, anh chị em cao học nghiên cứu sinh, thầy cô giáo nghiên cứu Phòng thí nghiệm Khoa Sinh Hóa - Trường ĐH Tây Bắc Phòng thí nghiệm Vi sinh trường ĐHSP Hà Nội, cảm ơn bạn học viên lớp K4 cao học Sinh học thực nghiệp Trường ĐH Tây Bắc Các nghiên cứu luận văn thực với hỗ trợ kinh phí từ đề tài "Nghiên cứu nuôi trồng thử nghiệm Đông trùng hạ thảo tỉnh Sơn La, Điện Biên, Lai Châu", Mã số: KHCN-TB.03C/13-18, thuộc Chương trình Khoa học Công nghệ trọng điểm cấp Nhà nước giai đoạn 2013-2018 “Khoa học Công nghệ phục vụ phát triển bền vững vùng Tây Bắc” Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè tập thể cán giáo viên Trường TH, THCS & THPT Chu Văn An - Trường ĐH Tây Bắc ủng hộ động viên tôi, tạo động lực cho tơi q trình học tập nghiên cứu Một lần nữa, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc với giúp đỡ nhiệt tình, quý báu đó! Sơn La, ngày 15 tháng năm 2017 Tác giả luận văn Lê Văn Cƣờng MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu 3 Nội dung nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Giả thuyết khoa học Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phương pháp nghiên cứu: Thời gian địa điểm nghiên cứu: CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm sinh học Cordyceps militaris 1.2 Giá trị dược liệu Cordyceps militaris 1.3 Lịch sử vấn đề nghiên cứu 12 1.3.1 Trên giới 12 1.3.2 Ở Việt Nam 13 1.4 Đặc điểm giá thể sử dụng thí nghiệm đề tài 14 1.4.1 Đặc điểm ong mật nội (Apis cerana) 14 1.4.2 Đặc điểm sâu chít (Brihaspa atrostigmella Moore) 15 1.4.3 Đặc điểm sâu tre (Omphisa fuscidentalis) 15 1.4.4 Gạo lứt 16 1.5 nh hưởng điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển Cordyceps militaris 17 1.5.1 Điều kiện giá thể 17 1.5.2 Điều kiện vật 18 1.5.3 n đề thoái h a gi ng nu i c y or yc ps mi itaris 18 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Vật liệu nghiên cứu 20 2.1.1 Chủng n m Cordyceps militaris 20 2.1.2 Ong mật nội, sâu chít, sâu tre, gạo lứt 20 2.1.3 Hóa ch t, thiết bị 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp vi sinh 20 2.2.2 Phương pháp h a sinh 28 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Sinh trưởng Cordyceps militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội (Apis cerana) 30 3.1.1 Sinh trưởng or yc ps mi itaris giai đoạn từ đến 10 ngày sau c y gi ng 30 3.1.2 Sinh trưởng Cordyceps militaris sau 20 ngày, 40 ngày, thời điểm thu hoạch 34 3.1.3 Quy trình ni trồng n m or yc ps mi itaris m i trường có bổ sung sản phẩm ong mật nội 45 3.2 Sinh trưởng Cordyceps militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu chít (Brihaspa atrostigmella Moore) 48 3.2.1 Sinh trưởng or yc ps mi itaris giai đoạn từ đến 10 ngày sau c y gi ng 48 3.2.2 Sinh trưởng Cordyceps militaris sau 20 ngày, 40 ngày 52 3.2.3 Quy trình nuôi trồng n m or yc ps mi itaris m i trường có bổ sung sản phẩm sâu chít 61 3.3 Sinh trưởng Cordyceps militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu tre (Omphisa fuscidentalis) 63 3.3.1 Sinh trưởng or yc ps mi itaris giai đoạn từ ngày đến 10 ngày sau c y gi ng 63 3.3.2 Sinh trưởng Cordyceps militaris sau 20 ngày, 40 ngày, thời điểm thu hoạch 68 3.3.3 Quy trình ni trồng n m or yc ps mi itaris m i trường có bổ sung sản phẩm sâu tre 75 3.4 So sánh sinh trưởng Cordyceps militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội, sâu chít sâu tre 77 3.4.1 Trên m i trường giá thể nguyên 77 3.4.2 M i trường giá thể có bổ sung gạo lứt ch t inh ưỡng 78 3.4.3 Hàm ượng A nosin or yc pin m i trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội, sâu chít sâu tre 80 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 83 Kết luận 83 Đề nghị 84 TÀI LIỆU THAM KHẢO 84 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT CT: C.militaris: Công thức môi trường nuôi cấy Cordyceps militaris NBRC 100741 (NBRC – National Institute of Technology and Evaluation Biological Resource Center) C.sinensis: Cordyceps sinensis PDA: Potato Dextrose Agar SDAY: Sabouraund Dextrose Agar plus Yeast Extract Cs: Cộng HPLC: High Performance Liquid Chromatography PL: Phụ lục i DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Sinh trưởng C militaris sau từ - 10 ngày mơi trường ni cấy có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội 30 Bảng 3.2 Sinh trưởng C militaris sau 20 ngày, 40 ngày thời điểm thu hoạch mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội 35 Bảng 3.3 Sinh trưởng C militaris sau từ - 10 ngày môi trường ni cấy có bổ sung sản phẩm từ sâu chít 48 Bảng 3.4 Sinh trưởng C militaris sau 20, 40 ngày thời điểm thu hoạch môi trường nuôi cấy có bổ sung sản phẩm từ sâu chít 52 Bảng 3.5 Sinh trưởng C militaris sau từ - 10 ngày môi trường nuôi cấy có bổ sung sản phẩm từ sâu tre 64 Bảng 3.6 Sinh trưởng C militaris sau 20, 40 ngày thời điểm thu hoạch mơi trường ni cấy có bổ sung sản phẩm từ sâu tre 68 ii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Kích thước, thời điểm xuất mầm thể C.militaris môi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội 32 Hình 3.2 Số lượng thể C.militaris thời điểm xuất mầm mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội 34 Hình 3.3 Kích thước thể C.militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội 37 Hình 3.4 Khối lượng thể C.militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội 38 Hình 3.5 Số lượng, khối lượng thể C.militaris bình ni cấy mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội 40 Hình 3.6 Số lượng thể C.militaris thời điểm nhú mầm thời điểm thu hoạch môi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội 41 Hình 3.7 Sự sinh trưởng C.militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm ong mật nội 45 Hình 3.8 Kích thước, thời điểm xuất mầm thể C.militaris môi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu chít 50 Hình 3.9 Số lượng thể C.militaris thời điểm xuất mầm thể mơi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu chít 51 Hình 3.10 Kích thước thể C.militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu chít 55 Hình 3.11 Khối lượng thể C.militaris mơi trường có bổ sung sản phầm từ sâu chít 56 Hình 3.12 Số lượng, khối lượng thể C.militaris bình ni cấy mơi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu chít 56 iii 0.6 0.53 0.48 0.5 0.4 0.37 0.3 0.27 0.22 M1 (gam) 0.24 0.21 0.2 0.14 0.14 0.1 0.13 0.14 0.11 0.1 0.09 0.08 0.04 CT0 CT01 CT02 CT03 CT04 CT05 CT06 CT08 CT09 CT10 CT11 CT12 CT13 CT14 CT15 CT16 CT17 Hình 3.25 Khối lƣợng thể C.militaris m i trƣờng có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội, sâu chít sâu tre Chú thích: M1(gam): kh i ượng thể thời điểm thu hoạch Từ đồ thị ta thấy khối lượng thể C.militaris mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội, sâu chít sâu tre khác Thể đạt khối lượng cao môi trường CT0, CT06, CT09 thấp môi trường CT01, CT02, CT13 CT14 Khối lượng thể tỉ lệ thuận với kích thước thể mơi trường tương ứng Điều phản ánh sinh trưởng C.militaris môi trường CT0, CT06 CT09 tốt so với mơi trường lại Trong mơi trường CT0, CT06 CT09 có đầy đủ chất dinh dưỡng cần thiết cho phát triển hệ sợi C.militaris, hình thành phát triển thể C.militaris 3.4.3 Hàm ượng Adenosin or c pin mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội, sâu chít sâu tre Hàm lượng Adenosin Cordycepin có thể số môi trường nghiên cứu thể hình sau: 80 18 16.05 16 14 12 10 Adenosin (mg/g) 8.17 Cordycepin (mg/g) 5.46 4.84 0.57 1.72 0.97 0.25 0.17 0.19 A B CT06 CT09 CT16 Hình 3.26 Hàm lƣợng Adenosin Cordycepin thể đƣợc nuôi cấ m i trƣờng CT06, CT09, CT16 số m i trƣờng đối chứng (A B) Chú thích: A: Kết nghiên cứu TS Phạm Văn Nhã (Khoa Sinh Hóa, Trường ĐH Tây Bắc, Việt Nam); B: Kết nghiên cứu Liu et al (2014) [5] Hàm lượng Adenosin Cordycepin sử dụng thị cho chất lượng Cordyceps spp [5] Kết biểu đồ hàm lượng Adenosin Cordycepin mơi trường có sử dụng sản phẩm từ ong mật nội, sâu chít sâu tre khác khác với hàm lượng hai chất mơi trường nhân tạo có bổ sung sản phẩm từ nhộng tằm dâu kén vàng (A môi trường nhà khoa học giới (B) Hàm lượng Adenosin ba mơi trường thí nghiệm đề tài (CT06, CT09 CT16 thấp so với đối chứng (A B), khác biệt cho thấy hàm lượng Adenosin phụ thuộc vào nguồn chất dinh dưỡng môi trường nuôi cấy Nhiều nghiên cứu hàm lượng giảm dần chuyển từ giai đoạn hệ sợi sang giai đoạn phát sinh thể 81 giảm mạnh thể đạt kích thước tối đa chuyển sang già hóa Các nghiên cứu đề tài tiến hành phân tích hàm lượng Adenosin thời điểm thu hoạch (thời điểm thể đạt kích thước tối đa có dấu hiệu già hóa nên hàm lượng Adenosin giảm mạnh so với giai đoạn trước Hàm lượng Cordycepin thu từ nghiên cứu đề tài (CT06, CT09 CT16) cao Trong tự nhiên hàm lượng Cordycepin gây nhiều tranh cãi, hàm lượng biến động lớn nghiên cứu khác Điểm chung nghiên cứu cho hàm lượng Cordycepin giai đoạn thể cao so với giai đoạn hệ sợi có liên quan nhiều đến nồng độ oxi điều kiện nuôi cấy [5] Với kết khẳng định thể tạo (tại thời điểm thu hoạch) từ môi trường nghiên cứu đề tài (CT06, CT09, CT16) có chứa hợp chất quan trọng Adenosin Cordycepin, hàm lượng Cordycepin tương đối cao hàm lượng Adenosin thể thời điểm thu hoạch thấp Điều nuôi cấy C.militaris môi trường CT06, CT09 CT16 với mục đích thu Adenosin cần tiếp tục nghiên cứu xác định giai đoạn phù hợp vòng đời C.militaris 82 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Đề tài nghiên cứu sinh trưởng Cordyceps militaris 19 môi trường (công thức) khác nhau, nhận thấy: Cordyceps militaris có khả sinh trưởng phát triển nhiều loại môi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội, nấm sinh trưởng tốt mơi trường CT0 (kích thước 5cm x 3,67mm; khối lượng thể 0,37g; suất bình ni 14,47g) CT06 (kích thước 5,74 cm x 4,79mm; khối lượng thể 0,48g; suất bình ni 17,42g) mơi trường CT01 (kích thước 2,71cm x 2,11mm; khối lượng thể 0,09g; suất bình ni 5,87g) Cordyceps militaris có khả sinh trưởng phát triển nhiều loại môi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu chít, nấm sinh trưởng tốt mơi trường CT09 (kích thước 7,25cm x 3,81mm; khối lượng thể 0,53g; suất bình ni 25,58g) mơi trường CT13 (kích thước 5cm x 2,02mm; khối lượng thể 0,1g; suất bình ni 8,7g) Cordyceps militaris có khả sinh trưởng phát triển nhiều loại môi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu tre nấm sinh trưởng tốt mơi trường CT16 (kích thước 2,49cm x 1,56mm; khối lượng thể 0,14g; suất bình ni 9,84g) mơi trường CT15 (kích thước 1,91cm x 1,21mm; khối lượng thể 0,13g; suất bình ni 2,52g) Cordyceps militaris sinh trưởng, phát triển mơi trường có bổ sung sản phẩm từ ong mật nội sâu chít tốt mơi trường có bổ sung sản phẩm từ sâu tre 83 Trên môi trường nguyên (nhộng ong mật nội, sâu chít, sâu tre) Cordyceps militaris có khả sinh trưởng phát triển tốt môi trường nhộng ong mật nội (kích thước 3,57cm x 2,13mm; khối lượng thể 0,21g) sâu chít (kích thước 5,82cm x 2,03mm; khối lượng thể 0,27g) sinh trưởng phát triển môi trường sâu tre (kích thước 0,31cm x 0,47mm; khối lượng thể 0,04g) Đề nghị + Tiếp tục nghiên cứu xác định quy trình ni trồng C.militaris cho thể có chất lượng tốt giá thể sẵn có địa phương + Tiếp tục nghiên cứu làm rõ mối liên hệ tốc độ phân hóa hệ sợi hình thành thể với chất môi trường dinh dưỡng + Tiếp tục nghiên cứu xác định thời điểm thu hoạch thể cho chất lượng tốt 84 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn (2012), Giáo trình m đun tìm hiểu đặc điểm sinh học ong mật, tr.8-9 Phạm Qu nh Mai, Nguyễn Tiến Đạt, Khuất Đảng Long, (2015) “Giá trị dinh dưỡng kinh nghiệm chế biến từ trùng thành ăn Việt Nam”, Hội nghị khoa học toàn qu c Sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 6, tr.1178-1183 Hoàng Thị Hồng Nghiệp, Nguyễn Thế Nhã, (2015) “Kết nghiên cứu bước đầu giá trị dinh dưỡng sâu tre (Omphisa fuscidentalis Hampson)”, Khoa học cơng nghệ lâm nghiệp, (4), tr.81-85 Hồng Thị Hồng Nghiệp, Nguyễn Thế Nhã, (2015) “Một số đặc điểm hình thái sinh học sâu tre (Omphisa fuscidentalis Hampson)”, Khoa học công nghệ lâm nghiệp, (4), tr.4033-4039 Phạm Văn Nhã (2017 , “Nghiên cứu nuôi trồng thử nghiệm Đông trùng hạ thảo tỉnh Sơn La, Điện Biên, Lai Châu”, Khoa học công nghệ ph c v phát triển bền v ng vùng Tây B c, ĐHQGHN, tr.1-179 Cung Thị Tố Qu nh, Nguyễn Hồng Dũng, Lại Quốc Đạt, (2013) “Nghiên cứu quy trình sản xuất gạo mầm (gạo GABA) từ gạo lứt Việt Nam”, Khoa học công nghệ, 51 (1) tr.63-71 Phạm Quang Thu, Lê Thị Xuân, Nguyễn Mạnh Hà (2012 , “Nghiên cứu đặc điểm sinh học hệ sợi nuôi cấy khiết chủng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris (L.:Fr Link”, Viện khoa học lâm nghiệp Việt Nam Phạm Quang Thu (2009 “Phát nấm nhộng trùng thảo Cordyceps militaris Vườn Quốc gia Hồng Liên, tỉnh Lào Cai”, Nơng nghiệp phát triển nông thôn, (9) tr 109 - 112 85 Phạm Quang Thu (2009 “Điều tra phát nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps nutans pat Phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử - Sơn Động - Bắc Giang”, Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, 133 tr 91 - 94 10 Phạm Quang Thu (2009) “Phát nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps gunnii (Berk) Berk.) vườn quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc”, Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, 135 tr 96 - 99 11 Nguyễn Thị Liên Thương, Trịnh Diệp Phương Danh, Nguyễn Văn Hiệp, 2015 Nấm Đông trùng hạ thảo or yc ps mi itaris Đặc điểm sinh học, giá trị ược liệu các yếu t ảnh hưởng đến q trình ni trồng n m 12 Phạm Thị Thu ctv (2010), “Nghiên cứu phát triển nguồn nấm trùng Beauveria, Metarhizium để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng phát triển nguồn nấm Cordyceps sp làm thực phẩm chức cho người”, Báo cáo khoa học, Bộ Nông nghiệp & PTNT 13 Phạm Thị Thùy (2010 , “Kết điều tra nghiên cứu nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps sp Việt Nam”, Tạp chí nơng nghiệp phát triển nơng thơn, (5) tr.55 – 58 14 Lê Văn Vẻ, Trần Thu Hà, Nguyễn Thị Bích Thùy, Ngơ Xn Nghiễn (2015 , “Bước đầu nghiên cứu nuôi trồng nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris L.ex Fr.) Việt Nam”, Khoa học Phát triển ,13 (3) tr 445-454 Tiếng Anh 15 Ahn, J., Park, S.J., Lee, S.G., Shin, S.C and Choi, D.H (2000 , “ Cordycepin: selective growth inhibitor derived from liquid culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp.”, J Agric Food Chem, 48 (7), pp 2744 86 16 Bhushan S., Weimin Z., Yongjie Z and Xingzhong L.P., 2012 The medicinal fungus Cordyceps militaris: researchand development Mycol 11:599-614 17 Chiang Mai J Sci 2014 Optimization of Solid-state Fermentation for Fruiting Body Growth and Cordycepin Production by Cordyceps militaris, 41(4): 858-872 18 Dong JZ, Lei C, Ai XR et al., (2012) Selenium enrichment on Cordyceps militaris Link and analysis on its main active components Applied Biochemistry and Biotechnology 166:1215-1224 19 He, N., Xiao, H.Z., Hai, H.L and en, F.H (2008 , “ Guangdong Provincial Key Lab Of Biotechnology for Plant Development”, College of Life Sciences, South China Normal University, Guangzhou 510631, China, pp 469-480 20 Hong, I.P., Kang, P.D., Kim, K.I., Nam, S.H., Lee, M.Y., Choi, I.S., Kim, N.S., Kim, H.K., Lee, K.G and Richard A.H.(2010), Mycobiology 2010 Jun; 38 (2), pp 128-132 21 Kim S.W., Hwang H.J., Xu C.P., (2003) Optimization of submerged culture process for the production of mycelial biomass and exopolysaccharides by Cordyceps militaris C738 Journal of Apply Microbiology 94:120–126 22 Kobayasi Y., 1982 Keys to the taxa of the genera Cordyceps and Torrubiella Transactions of the Mycological Society of Japan 23:329– 364 Herbal, New York 23 Paul M.K., Paul F.C., David W.M and Stalpers J.A., 2008 Dictionary of the Fungi; CABI Peng Zh.,Yongliang X., Guohua X., Chenghui X., Xiao H., Siwei Zh., Huajun Zh., Yin Huang, Yan Zh., Shengyue W., Guo-Ping Zh., Xingzhong L., Raymond J St L And Chengshu W., (2011) Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional chinese medicine Genome Biology 12: 116 87 24 Sato, H and Shimazu, M (2002 , “Stromata production for Cordyceps militaris (Clavicipitales: Clavicipitaceae) by injection of hyphal bodies to alternative host insects”, Appl Entomol Zool , 37, pp 85-92 25 Sung, M.S., Park, I.J., Lee, J,O., Han, S.K., Lee, W.H., Choi, S.K and Shrestha, B (2006 , “Selection of Superrior Strains of Cordyceps militaris with Enhanced Fruiting Body Productivity”, Mycobiology 2006 Jun, 34 (3): 131-137 26 Tuli, H.S., Sharma, A.K and Sandhu, S.S (2014), Optimization of fermentation conditions for cordycepin production using Cordyceps militaris, 3936, pp 35-36 27 Wang L., Zhang W.M and Hu B., 2008 Genetic variation of Cordyceps militaris and its allies based on phylogenetic analysis of rDNA ITS sequence data Fungal Divers 31:147-155 28 Xiong C.H., Xia Y.L., Zheng P., (2010) Developmental stage-specific gene expression profiling for a medicinal fungus Cordyceps militaris Mycology 1:25–66 29 Ying, X.Z., Peng, L., Chen, H., Shen, Y., Yu, K and Cheng, S (2014), “Cordycepin prevented IL-β-induced expression of inflammatory mediators in human osteoarthritis chondrocytes”, International Orthopaedics, 38 (7), pp 1519–1526 30 Yoo, H.S., Shin, J.W., Cho, J.H., Son, C.G., Lee, Y.W., Park, S.Y and Cho, C.K (2004 , “ Effect of Cordyceps militaris extract on angiogenesis and tumor growth”, Acta Pharmacol; 25 (5), pp 657-665 31 Zheng, P., Xia, Y., Xiao, G., Xiong, C., Hu, X., Zhang, S., Zheng, H., Huang, Y., Zhou, Y., Wang, S., Zhao, G,P., Liu, X., Raymond, J and Chengshu, W (2011) “Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional chinese medicine” Genome Biology2011;12 (11): R116 88 Tài liệu Website 32.Nghĩa Bùi (2014 , http://phanhoa.net/mat-ong-bao-loc/thanh-phan-dinhduong-trong-100gr-mat-ong-that/ 33.https://en.wikipedia.org/wiki/Brihaspa_atrostigmella 34.Nhật Viên (2009), http://dantri.com.vn/suc-khoe/sau-chit-dong-trung-hathao-viet-nam-1250104200.htm 35.https://www.thaythuoccuaban.com/vithuoc/sauchit.htm 36.Phạm Qu nh Mai (2017), http://www.vast.ac.vn/tin-tuc-su-kien/tin-khoahoc/trong-nuoc/2891-dieu-tra-da-dang-tai-nguyen-con-trung-o-vung-taybac-de-xuat-giai-phap-phat-trien-khai-thac-su-dung-ben-vung 37.https://vi.wikipedia.org/wiki/Gạo_lứt 89 PHỤ LỤC Một số hình ảnh mơ tả hoạt động, vật liệu sử dụng trình nghiên cứu: H.2 PL H.3 PL H.4 PL Tổ ong mật Sâu chít Sâu tre H.5 PL H.6 PL H.7 PL H.8 PL Món ăn từ Tổ ong Món ăn từ Món ăn từ nhộng ong mật ngâm rượu sâu chít sâu tre H.9 PL H.10 PL H.11 PL H.12 PL Cân điện tử Bếp điện Hóa chất Máy lắc H.14 PL H.15 PL H.16 PL Máy hấp khử trùng Môi trường H.1 PL Nhộng ong mật H.13 PL Dụng cụ (1 Dụng cụ (2 H.17 PL H.18 PL H.19 PL H.20 PL Bốc cấy Giá đặt mẫu Giống dụng Vật dụng đặt mẫu vật dụng (ra sáng) cụ cấy giống tối H.22 PL H.23 PL H.24 PL sáng H.21 PL Giám sát sinh Giám sát sinh Giám sát sinh Thu hoạch thể trưởng trưởng trưởng C.militaris (1) C.militaris (2) C.militaris (3) H.25 PL H.26 PL H.27 PL H.28 PL Kiểm tra chiều Kiểm tra đường Kiểm tra cân Kiểm tra cân nặng cao thể kính thể nặng của thể thể bình nuôi cấy C.militaris H.29 PL H.30 PL H.31 PL H.32 PL Kiểm tra số Đóng mẫu thể Kiểm tra độ pH Môi trường nuôi lượng thể quả gửi phân mơi trường cấy bị nhiễm bình tích số ni cấy nấm mốc xanh ni cấy hóa sinh H.33 PL H.34 PL H.35 PL H.36 PL Hiện tượng thối Cấy chuyển Mơi trường Giống mơi hóa giống giống từ mơi SDAY trường PDA H.39 PL H.40 PL Gạo lứt Hiện tượng chẻ thể trường PDA sang môi trường SDAY H.37 PL H.38 PL Thể sau 60 Sự xuất thể ngày sáng chậm hệ sợi q bơng Hình ảnh minh họa quy trình nghiên cứu tạo thể C.militaris 1- Giống môi 2- Giống môi 3- Cấy giống vào 4- Hệ sợi phát triển trường đặc trường lỏng môi trường điều kiện tối 5- Ra sáng tạo điều 6.a- Giám sát thường 6.b- Giám sát 7- Giám sát, thấy thể kiện để C.militaris xuyên (mẫu tốt tiếp thường xuyên đạt kích thước có hình thành thể tục trì) (mẫu nhiễm bệnh thể thu hoạch loại bỏ) Hàm lượng adenosin cordycepin Adenosine std Cordycepin STD TB sample Cordycepin Adenosine ... ĐẠI HỌC TÂY BẮC LÊ VĂN CƢỜNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI TRỒNG NẤM Cordyceps militaris TRÊN MỘT SỐ LOẠI CÔN TRÙNG ĐƢỢC SỬ DỤNG LÀM THỰC PHẨM TẠI KHU VỰC TÂY BẮC VIỆT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực. .. nấm Cordyceps militaris số loại côn trùng sử dụng làm thực phẩm khu vực Tây Bắc Việt Nam kết nghiên cứu tôi, không chép Các số liệu, kết luận văn việc nghiên cứu phân tích tổng hợp cách trung thực. .. Cordyceps militaris số loại côn trùng đƣợc sử dụng làm thực phẩm khu vực Tây Bắc Việt Nam Mục tiêu Đánh giá sinh trưởng phát triển nấm C militaris xây dựng quy trình kỹ thuật ni trồng số loại môi trường