Được sự giúp đỡ của trường Đại Học Công Nghệ Miền Đông và đặc biệt là thầy ThS. DS VÕ SỸ NHẬT bộ môn kiểm nghiệm, nên chúng em đã có được những quãng thời gian học tập bổ ích. Chúng Em xin được gửi lời cám ơn đến Nhà trường và Thầy đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ chúng em trong suốt quá trình học tập vừa qua.Trong thời gian học tập vừa qua, do chúng em còn thiếu những kinh nghiệm thực tế nên không thể tránh khỏi những thiếu sót. Vì vậy chúng em kính mong nhận được sự chỉ dạy và giúp đỡ của các thầy để em hoàn thành tốt hơn bài báo cáo của mình, cũng như sau này khi ra đời bước vào nghề chúng em được trang bị một hành trang kiến thức vững vàng và một kỹ năng hành nghề vững chắc.Một lần nữa chúng em xin chân thành cảm ơn
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ MIỀN ĐÔNG KHOA DƯỢC TIỂU LUẬN CHUYÊN ĐỀ MÔN KIỂM NGHIỆM “QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CEPHALEXIN TRONG VIÊN NANG CỨNG BROWN BURK” ĐỒNG NAI, Ngày 19 Tháng 04 Năm 2018 LỜI CẢM ƠN Được giúp đỡ trường Đại Học Công Nghệ Miền Đông đặc biệt thầy ThS DS VÕ SỸ NHẬT môn kiểm nghiệm, nên chúng em có quãng thời gian học tập bổ ích Chúng Em xin gửi lời cám ơn đến Nhà trường Thầy tận tình hướng dẫn giúp đỡ chúng em suốt trình học tập vừa qua Trong thời gian học tập vừa qua, chúng em thiếu kinh nghiệm thực tế nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót Vì chúng em kính mong nhận dạy giúp đỡ thầy để em hoàn thành tốt báo cáo mình, sau đời bước vào nghề chúng em trang bị hành trang kiến thức vững vàng kỹ hành nghề vững Một lần chúng em xin chân thành cảm ơn ! DANH SÁCH NHÓM SINH VIÊN THỰC HIỆN TIỂU LUẬN MỤC LỤC A TRẢ LỜI 10 CÂU HỎI KIỂMNGHIỆM .1 B QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG CEPHALEXIN TRONG VIÊN NANG CỨNG BROWN BURK I TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG Điều kiện sắc ký Tiến hành II ĐỀ CƯƠNG THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂNTÍCH Tóm tắt kết thẩm định Báo cáo kết thẩm định A TRẢ LỜI 10 CÂU HỎI KIỂM NGHIỆM Câu 1: Có cần phải thẩm định Quy Trình Phân Tích xác định giới hạn chất bảo quản? Nếu có có cần phải thẩm định đầy đủ tiêu quy trình định lượng dược chất? Có, lượng chất bảo quản nhỏ nên thẩm định lại giới hạn phát thường phải nhỏ giới hạn chất phân tích Câu 2: Phương pháp HPLC xác định hàm lượng dược chất tiêu độ hòa tan tiêu định lượng khác thông số thể tích tiêm mẫu bước song phát hiện, dung mơi pha mẫu có cần thiết tiến hành thẩm định Quy Trình Phân Tích riêng quy trình? Nếu lượng thay đổi 50%, phải bắt buộc cần tiến hành thẩm định QPT riêng quy trình Câu 3: sử dụng mẫu tự tạo gồm dược chất + tá dược để thẩm định độ quy trình định lượng, sử dụng dược chất dạng nguyên liệu thay cho chất chuẩn dược chất để chuẩn bị mẫu tự tạo? có cần cung cấp COA lơ ngun liệu dược chất dùng? Theo quy định phải dùng chất chuẩn, nay, có phòng thí nghiệm công ty dùng nguyên liệu thay cho chất chuẩn bắt buộc phải có COA Câu 4: Khi thẩm định qui trình thử độ hòa tan, tiến hành mẫu tự tạo xử lý mẫu bình định mức mà khơng hòa tan mẫu thiết bị thử độ hòa tan có khơng? Có thể thay đổi lượng cân độ pha loãng mẫu đảm bảo nồng độ dung dịch đem phân tích theo qui định Quy Trình Phân Tích khơng? Khơng Câu 5: Thẩm định Quy Trình Phân Tích sắc ký lớp mỏng có yêu cầu nộp ảnh chụp sắc ký đồ thu được, sở thiết bị chụp ảnh sắc ký đồ chụp máy ảnh khơng? Chụp hình máy ảnh Câu 6: Thuốc thành phẩm có chứa 03 dược chất quy trình định lượng xây dựng để định lượng đồng thời 03 dược chất Để thẩm định độ đặc hiệu Quy Trình Phân Tích này, mẫu giả dược bao gồm thành phần tá dược có đủ khơng? Có cần phải đánh giá ảnh hưởng dược chất với quy trình định lượng đồng thời dược chất không? Để làm độ đặc hiệu phải làm mẫu: 1/ giảdược, 2/ dượcchất, 3/ 3dượcchất + tádược Không cần làm ảnh hưởng dược chất với trình định lượng đồng thời dược chất Câu 7: Khoảng xác định phương pháp suy từ tính tuyến tính độ khơng phải thực phân tích lặp lại dung dịch lần nồng độ qui định ( ví dụ : định lượng tiêm lặp lại lần mẫu thử nồng độ 80% 120%)? Có thể suy từ tính tuyến tính độ Câu 8: Có cần phải thẩm định thêm tiêu cho quy trình phát vết nội tiết tố không? Nếu phương pháp tương tự phương pháp định lượng dược chất thành phẩm? Có, giới hạn phát nội tiết tố có nhỏ giới hạn phát dược chất Câu 9: Hai thuốc thành phẩm có cơng thức tương tự nhau, khác tá dược màu bao phim Tiêu chuẩn thành phẩm thuốc áp dụng Quy Trình Phân Tích sử dụng chung số liệu thẩm định Quy Trình Phân Tích cho thành phẩm không? Biết sắc ký đồ thu từ dung dịch thử thuốc giống hệt Không thể sử dụng chung số liệu thẩm định quy trình phân tích Bắt áp dụng phải làm riêng thành phẩm Câu 10: Có thể sử dụng kết thẩm định độ tiến hành 03 mức nồng độ mẫu tự tạo, mức nồng độ lặp lại 03 lần để đánh giá độ lặp lại Quy Trình Phân Tích không? Nếu được, cần đánh giá kết nào? Được, Có thể sử dụng kết thẩm định độ tiến hành mức độ mẩu tự tạo, mức độ nồng độ lặp lại 03 lần để đánh giá độ lặp lại QTPT B QUI TRÌNH ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG CEPHALEXIN 250mg TRONG VIÊN NANG CỨNG BROWN BURK I TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG Định lượng: hàm lượng cephalexin (C16H17N3O4S) phải từ 90,0 % đến 110,0 % so với lượng ghi nhãn Số tiêu chuẩn (TC : 08 – Z8 – 07 – 18) Điều kiện sắc ký: Máy HPLC HITACHI CHROMASTER + Pha động: Hòa tan 1,0 g natri pentansulfonat 1015 ml hỗn hợp nước, acetonitril, methanol triethylamin (850 : 100 : 50: 15), điều chỉnh tới pH 3,0 ± 0,1 acid phosphoric (TT) + Detector: UV 254nm + Cột phenomenex C18: 25cm x 4,6mm, µm + Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút + Thể tích tiêm: 20µl Tiến hành: 2.1 Hóa chất, chất chuẩn:Kali dihydrophosphat (TT) - Ninhydrin (TT) - n-Hexan (TT) - Methanol (HPLC) - Tetradecan (TT) - Acetonitril (HPLC) - Acid citric (TT) - Triethylamin (TT) - Aceton (TT) - Pentasulfonat (TT) - Dinatri hydrophosphat (TT) - Acid phosphoric (TT) - Chuẩn viện kiểm thuốc Thành Phố Hồ Chí Minh: CEPHALEXIN Lơ: QT006 140916, Hàm lượng nguyên trạng: 92,8% - Chuẩn 1-hydroxybenzotrazol 2.2 Thiết bị, dụng cụ: - Máy Agilent technologies Infility II với detector DAD - Cột Phenomenex C18 : 25cm x 4,6 mm, 5µm - Cân phân tích METTLER TOLEDO AB204 – S - Các dụng cụ thuỷ tinh xác: bình định mức, pipet… 2.3 Đối tượng nghiên cứu: Mẫu thử:Viên nang cứng Brown Burk Cephalexin 250 mg (Đỏ – Vàng): Lơ:010318 NSX: 290318 HD: 290320 Trung bình bột thuốc viên: 402,7mg Công thức bào chế viên nang cứng Brown Burk Cephalexin 250 mg (đỏ – vàng): Thành phần cho đơn vị thành phẩm nang Cephalexin monohydrat 262,95mg (cephalexin) (250 mg) Tinh bột sắn 55,05mg Magnesi stearat 5mg Lactose 77 mg Mẫu placebo: chuẩn bị mẫu thử khơng có thành phần cephalexin monohydrat (khoảng 137,05mg /viên) II ĐỀ CƯƠNG THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂNTÍCH TĨM TẮT KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH: Chỉ tiêu thẩm định Kết thẩm định Định tính + Vết sắc ký đồ dung dịch thử dung dịch đối chiếu giống vị trí, màu sắc kích thước + Sắc ký đồ dung dịch placebo khơng cho vết ví trí vết sắc ký đồ dung dịch chuẩn + Sắc ký đồ dung dịch thử cho pic có thời gian lưu 5,387 phút tương ứng thời gian lưu 5,386 phút pic cephalexin săc ký đồ dung dịch chuẩn + Sắc ký đồ mẫu trắng dung dịch placebo không cho pic khoảng thời gian lưu pic cephalexin Phương pháp sắc mỏng + Định tính Phương pháp sắc kí lỏng Định lượng cephalexin (phương pháp HPLC) Tính đặc hiệu Xem kết mục định tính “phương pháp sắc ký lỏng” lần tiêm sắc ký dung dịch chuẩn RSD-Qc RSD-thời gian lưu Tính tương thích hệ thống Độ phân giải Hệ số tương đồng RF chuẩn cephalexin Tính tuyến tính + Độ lặp lại Phương trình hồi qui Hệ số tương quan r % y-intercept Hàm lượng (%) KNV RSD (%) KNV Độ xác: y= Hàm lượng (%) RSD (%) + Độ xác trung gian Hàm lượng KNV Giá trị F-test Trung bình RSD (%) Ftn Fc TLPH (%) Độ RSD (%) Nồng độ 80% Nồng độ 100% Nồng độ mức nồng 120% độ Khoảng xác định 80% -120% so với nồng độ định lượng 3.Độ hòa tan (phương pháp HPLC) Tính đặc hiệu lần đo độ hấp thụ dung dịch chuẩn RSD Tính tương thích hệ thống Hệ số tương đồng RF chuẩn cephalexin Tính tuyến tính + Độ lặp lại Phương trình hồi qui Hệ số tương quan r % y-intercept Hàm lượng (%) KNV RSD (%) KNV Độ xác: y= Hàm lượng (%) RSD (%) + Độ xác trung gian Hàm lượng KNV Giá trị F-test Trung bình RSD (%) Ftn Fc TLPH (%) Độ Khoảng xác định RSD (%) Nồng độ 60% Nồng độ 80% Nồng độ 100% Nồng độ 120% mức nồng độ 60% -120% so với nồng độ định lượng *Ghi chú: TLPH: Tỉ lệ phục hồi BÁO CÁO KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH: 2.1 ĐỊNH TÍNH: 2.1.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng: - Bản mỏng: Silica gel, khơng có chất kết dính, chuẩn bị sau: Đặt mỏng bình sắc ký có chứa hỗn hợp dung mơi n-hexan tetradecan (95 : 5) ngập khoảng cm, để dung môi di chuyển theo chiều dài mỏng, sau lấy mỏng khỏi bình sắc ký để dung môi bay - Dung môi khai triển: Dung dịch acid citric 0,1 M - dung dịch dinatri hydrophosphat 0,1 M - dung dịch ninhydrin aceton có nồng độ g 15 ml (60 : 40 : 1,5) - Chuẩn bị mẫu: Bảng 1: Lượng cân mẫu dùng khảo sát: Mẫu Mẫu placebo Mẫu đối chiếu Mẫu thử 16,5mg mẫu 64,6mg chuẩn Lượng cân 48,3mg bột thuốc placebo cephalexin - Kết quả: Dung dịch thử Dung dịch đối chiếu Dung dịch placebo - Nhận xét: Trên sắc ký mỏng thu được: + Dung dịch placebo khơng cho vết vị trí vết sắc ký đồ dung dịch chuẩn + Vết sắc ký đồ dung dịch thử dung dịch đối chiếu giống vị trí, màu sắc, hình dáng kích thước - Kết luận: phương pháp sắc ký lớp mỏng có tính đặc hiệu 2.1.2 Phương pháp sắc ký lỏng: * Điều kiện sắc ký: Máy HPLC HITACHI CHROMASTER - Chuẩn bị mẫu: Bảng 2:chuẩn bị dung dịch dùng khảo sát: Dung dịch Placebo Chuẩn Lượng cân 55,1 mg mẫu placebo 107,9mg chuẩn cephalexin Thử Mẫu trắng 162,0 mg bột Nước thuốc - Kết quả: Hình 2: Sắc ký đồ mẫu trắng Hình 3: Sắc ký đồ dung dịch mẫu placebo Hình 4: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn Hình 5: Sắc ký đồ dung dịch thử - Nhận xét: + Sắc ký đồ dung dịch thử cho pic có thời gian lưu 5,387 phút tương ứng thời gian lưu 5,386 phút pic cephalexin săc ký đồ dung dịch chuẩn + Sắc ký đồ mẫu trắng dung dịch placebo không cho pic khoảng thời gian lưu pic cephalexin - Kết luận: phương pháp sắc ký lỏng có tính đặc hiệu 2.2 ĐỊNH LƯỢNG: * Điều kiện sắc ký: Máy HPLC HITACHI CHROMASTER + Pha động: Hòa tan 1,0 g natri pentansulfonat 1015 ml hỗn hợp nước, acetonitril, methanol triethylamin (850 : 100 : 50: 15), điều chỉnh tới pH 3,0 ± 0,1 acid phosphoric (TT) + Detector: UV 254nm + Cột phenomenex C18: 25cm x 4,6mm, µm + Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút + Thể tích tiêm: 20µl a Tính đặc hiệu: : xem mục định tính “2.1.2 phương pháp sắc ký lỏng” b Tính tương thích hệ thống: Bảng 3: Kết lần tiêm sắc ký thu từ chuẩn (1): Chuẩn Lần Lần Lần Lần Lần Lần Trung Bình RSD (%) CEPHALEXIN Thời gian Diện tích lưu pic (Sc) (phút) 7339,01 9,726 7345,89 9,719 7357,11 9,711 7348,66 9,709 7340,61 9,706 7346,95 9,700 Lượng cân chuẩn: 107,9 mg 1-HYDROXYBENZOTRIAZOL Diện tích pic (Snc) Thời gian lưu (phút) 2655,16 2657,65 2664,84 2664,04 2662,82 2664,3 5,395 5,394 5,391 5,393 5,393 5,391 Độ phân giải Tỉ số Qc = Sc / Snc 14,32 14,31 14,30 14,29 14,30 14,28 2,764 2,764 2,761 2,758 2,757 2,758 7346,37 9,712 2661,47 5,393 2,760 0,09 0,10 0,15 0,03 0,12 Bảng 4: Kết lần tiêm sắc ký thu từ chuẩn (2): CEPHALEXIN Chuẩn Lần Lần Lần Trung Bình RSD (%) Lượng cân chuẩn: 107,8 mg 1HYDROXYBENZOTRIAZOL Độ phân giải Tỉ số Qc = Sc / Snc 14,21 14,21 14,21 2,732 2,728 2,732 Diện tích pic (Sc) Thời gian lưu (phút) Diện tích pic (Snc) Thời gian lưu (phút) 7283,60 7288,45 7283,60 9,657 9,654 9,657 2666,30 2670,14 2673,21 5,388 5,386 5,386 7285,06 9,657 2669,88 5,387 2,729 0,04 0,03 0,13 0,02 0,10 - Hệ số tương đồng: + Chuẩn Cephalexin: *Kết luận: hệ thống sắc ký chọn phù hợp cho việc định tính định lượng cephalexin, với kết thu theo Bảng 5: Bảng 5: Tóm tắt kết khảo sát tính tương thích hệ thống: lần tiêm sắc ký dung dịch chuẩn RSD-Tỉ số Qc 0,12% RSD-thời Cephalexin 0,10% gian lưu 1-hydroxybenzotriazol 0,03% Độ phân giải pic chuẩn pic chuẩn nột 14,28- 14,32 Hệ số tương đồng RF 0,989 c Tính tuyến tính: Bảng 6: Kết khảo sát tính tuyến tính: Dung dịch Lượng cân chuẩn (mg) Nồng độ cephalexin (mg/ml) Cephalexin (Sc) Diệ n tích pic 1hydroxybenzotriaz ol (Snc) 50% 26,9 75% 40,4 100% 53,9 125% 67,4 150% 80,8 0,1997 0,2999 0,4002 Lần 3670,54 5527,95 7306,81 Lần Trun g bình Lần 3671,75 5531,97 7301,58 3671,15 5529,96 7304,20 0,5999 10910,2 10916,2 10913,2 2661,68 2653,55 2658,35 2662,43 2656,52 2658,21 0,5004 9106,6 9109,7 9108,1 2656,4 2658,9 Lần Trun g bình 2662,06 2655,04 2658,28 2657,7 3,427 Tỉ số Qc = Sc / Snc 1,379 2,083 2,748 Phương trình hồi quy tuyến tính y = 6,7805x + 0,0350 Hệ số tương quan: r = 0,9999 (R2 = 0,9999 → r = 0,9999) %y-intercept = 0,0350/ 2,748 * 100 = 1,27% 2660,83 2663,04 2661,94 4,100 Tỉ số Qc TÍNH TUYẾN TÍNH - CEPHALEXIN 4.500 4.000 f(x) = 6.78x + 0.04 3.500 R² = 3.000 2.500 2.000 1.500 1.000 0.500 0.000 0.1500 0.2000 0.2500 0.3000 0.3500 0.4000 0.4500 0.5000 0.5500 0.6000 0.6500 Nồng độ cephalexin (mg/ml) Hình 6: Đồ thị biểu diễn tương quan tuyến tính tỉ số Qc nồng độ cephalexin - Kết luận: Kết khảo sát tính tuyến tính cho thông số đáp ứng yêu cầu, kết thu theo bảng 7: Bảng 7: Tóm tắt kết khảo sát tính tuyến tính: Phương trình hồi qui y =6,7805x + 0,0350 Hệ số tương quan r 0,9999 % y-intercept 1,27% d Độ xác: d.1: Độ lặp lại: Bảng 8: Kết khảo sát độ lặp lại: Kiểm nghiệm viên - Ngày thực hiện: 05/04/2018 Nồng độ dung dịch chuẩn: 0,4005 mg cephalexin/ml Diện tích pic: 7364,37 Diện tích pic Tỉ số Lượn QT = Mẫu g cân Cephalexin (Sc) 1-hydroxybenzotriazol (Snc) Sc / thử thử St (mg) Trung Trung Lần Lần Lần Lần bình bình 7426,5 7425,7 2653,9 2654,7 Mẫu 161,5 7424,85 2655,49 2,797 0 7368,4 7366,9 2652,8 2651,8 Mẫu 162,3 7365,38 2650,78 2,778 7385,3 7388,4 2659,5 2659,9 Mẫu 161,3 7391,44 2660,27 2,778 7293,8 7294,1 2667,3 2666,8 Mẫu 161,9 7294,39 2666,38 2,735 8 Mẫu 161,7 7262,06 7260,9 7261,5 2667,19 2668,5 2667,8 2,722 Hàm lượn g (%) 101, 100, 100, 98,7 98,4 Mẫu Trun g bình RSD (%) 162,2 7336,31 7334,9 7335,6 2668,38 2667,6 5 2668,0 2,749 99,1 161,8 99,7 0,24 1,14 d.2 Độ xác trung gian: thực kiểm nghiệm viên với điều kiện sắc ký, chất chuẩn kiểm nghiệm viên * Khảo sát tính tương thích hệ thống: Chuẩn Lần Lần Lần Lần Lần Lần Trung Bình RSD (%) Bảng 9: Kết lần tiêm sắc ký thu từ chuẩn (1) kiểm nghiệm viên 1: Lượng cân chuẩn: 107,7mg CEPHALEXIN 1-HYDROXYBENZOTRIAZOL Độ phân Tỉ số Qc = Thời gian Diện tích Diện tích pic Thời gian lưu giải Sc / Snc lưu pic (Sc) (Snc) (phút) (phút) 7468,02 9,313 2600,78 5,503 12,46 2,871 7472,31 9,214 2601,35 5,488 12,41 2,872 7466,65 9,194 2603,14 5,48 12,42 2,868 7468,52 9,202 2604,24 5,484 12,43 2,868 7467,27 9,200 2604,01 5,483 12,42 2,868 7465,75 9,199 2606,73 5,783 12,43 2,864 7468 9,220 2603,375 5,487 2,869 0,03 0,50 0,08 0,15 0,11 Bảng 10: Kết lần tiêm sắc ký thu từ chuẩn (2) kiểm nghiệm viên 1: Chuẩn Lần Lần Lần Trung Bình RSD (%) Lượng cân chuẩn: 107,6 mg CEPHALEXIN 1-HYDROXYBENZOTRIAZOL Diện tích pic Thời gian lưu Diện tích pic Thời gian lưu (Sc) (phút) (Snc) (phút) 7453,60 9,196 2642,06 5,483 7452,96 9,193 2643,06 5,483 7449,11 9,187 2645,90 5,482 7451,89 9,192 2643,67 5,483 0,03 0,05 0,08 0,01 Độ phân giải Tỉ số Qc = Sc / Snc 12,44 12,43 12,42 2,821 2,820 2,815 - Hệ số tương đồng: + Chuẩn Cephalexin: * Nhận xét: Hệ thống sắc ký chọn phù hợp cho việc định tính định lượng cephalexin, kết thu theo bảng 11: Bảng 11: Tóm tắt kết khảo sát tính tương thích hệ thống: lần tiêm sắc ký dung dịch chuẩn RSD-Tỉ số Qc 0,11% 0,50% RSD-thời gian Cephalexin lưu 1-hydroxybenzotriazol 0,15% Độ phân giải pic chuẩn pic chuẩn 12,41- 12,46 nội Hệ số tương đồng RF 0,984 * Khảo sát độ lặp lại: Bảng 12: Khảo sát độ lặp lại kiểm nghiệm viên 2: Kiểm nghiệm viên - Ngày thực hiện: 06/04/2018 Nồng độ dung dịch chuẩn: 0,3998 mg cephalexin/ml Diện tích pic: 7468,09 Diện tích pic Lượng Cephalexin (Sc) 1-hydroxybenzotriazol (Snc) Tỉ số Mẫu cân QT = thử thử Trung Trung Sc / Lần Lần Lần Lần (mg) bình bình St Mẫu 162,5 7448,18 7439,88 7444,03 2639,25 2639,98 2639,62 2,820 Mẫu 161,8 7313,14 7311,21 7312,18 2643,53 2643,83 2643,68 2,766 Mẫu 162,0 7478,76 7478,75 7478,76 2637,85 2640,53 2639,19 2,834 Mẫu 161,5 7366,72 7367,70 7367,21 2639,04 2640,10 2639,57 2,791 Mẫu 162,2 7385,96 7384,60 7385,28 2650,74 2650,41 2650,58 2,786 Mẫu 161,9 7382,36 7379,86 7381,11 2643,33 2642,59 2642,96 2,793 Trung 162,0 bình RSD 0,21 (%) * Khảo sát độ xác trung gian: Hàm lượng cephalexin Kiểm Kiểm Mẫu thử ngiệm viên nghiệm viên 101,2 101,4 99,9 Mean 100,6 98,7 98,4 102,2 101,0 100,4 Variance Observations df 99,1 100,8 F P(F