XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ AMYLASE THEO PHƯƠNG PHÁP WOLHGEMUTH

1. MỤC ĐÍCH:Để xác định hàm lượng enzyme ít nhất có thể phân giải hoàn toàn một lượngtinh bột xác định dựa vào phản ứng với iot.2. NGUYÊN LÝ:Một đơn vị Wolhgemuth là lượng enzyme ít nhất sau 30 phút ở 300C khi cóion clo có khả năng phân giải 1mg tinh bột tan đến các sản phẩm không màutạo với dung dịch iot. Hoạt độ amylase được biểu diễn bằng số đơn vị hoạtđộ trên 1ml canh trường lỏng hay 1ml dịch trích canh trường rắn hoặc trên1g canh trường khô hay chế phẩm khô.

SINH VIÊN: NGUYỄN MẠNH LỚP : HÓA_K36 NHÓM :3 BÁO CÁO THỰC HÀNH HÓA KỸ THUẬT BÀI XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ AMYLASE THEO PHƯƠNG PHÁP WOLHGEMUTH MỤC ĐÍCH: Để xác định hàm lượng enzyme phân giải hoàn toàn lượng tinh bột xác định dựa vào phản ứng với iot NGUYÊN LÝ: Một đơn vị Wolhgemuth lượng enzyme sau 30 phút 300C có ion clo có khả phân giải 1mg tinh bột tan đến sản phẩm không màu tạo với dung dịch iot Hoạt độ amylase biểu diễn số đơn vị hoạt độ 1ml canh trường lỏng hay 1ml dịch trích canh trường rắn 1g canh trường khô hay chế phẩm khơ DỤNG CỤ VÀ HĨA CHẤT: Như giáo trình thầy biên soạn Xác định hoạt độ amylase theo phương pháp wolhgemuth.trang TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: 4.1 Pha dung dịch gốc 4.1.1 Dung dịch tinh bột 0.1% Cân 0.1 g tinh bột trộn với nước cất (khoảng 10ml) thêm 80 ml nước cất sôi, khuấy cho tan hết, để nguội thêm nước cất vào cho đủ 100 ml 4.1.2 Dung dịch iot 0.02 N -Cân g KI hòa tan 30 ml nước cất -Thêm 0.25 g iot, xảy phản ứng: KI +I2 ⬌ KI3 Rồi, lắc cho tan hết, chuyển toàn vào bình định mức 100 ml thêm nước vào đến vạch định mức 4.1.3 Dung dịch enzyme gốc từ malt Lấy mẫu malt nghiền nhỏ, mẫu để xác định độ ẩm, mẫu để xác định hoạt độ amylase - Cân 5-10 g malt cho vào bình nón dung tích 250 ml Thêm vào 10 ml đệm phốt phát (pH =4.8-4.9) 90 ml nước cất - Giữ hỗn hợp 60 phút 300C, dùng đũa thủy tinh khuấy dung dịch - Lọc thu dung dịch gốc enzyme 4.2 TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: -Lấy 10 ống nghiệm khô lau sạch, cho vào ống ml dung dịch NaCl 0.1 % Thêm vào ống thứ ml dung dịch enzyme, lắc -Lấy ml ống chuyển qua ống thứ 2, lắc lấy ml ống thứ 2, chuyển qua ống thứ làm tương tự với ống lại, đến ống thứ 10 Cuối lấy ml dung dịch ống 10 bỏ - Cho vào ống ml dung dịch tinh bột 0.1 %, lắc giữ 300C 30 phút - làm nguội, cho vào ống nghiệm giọt dung dịch iot 0.02N, lắc ống Sau để ống đứng yên khoảng phút, quan xem ống nghiệm không tạo màu với iot LƯU Ý: Ở cho ống dung dịch NaCl, để tạo môi trường cho enzyme phân giải muối muối acid mạnh,nên nước NaCl phân ly hoàn toàn, tạo thành ion Cl- KẾT QUẢ VÀ TÍNH TỐN: 5.1 KẾT QUẢ Ống nghiệm Hiện tượng Không màu Không màu Không màu 10 Không màu Khơng màu Tím nhạt Tím Tím đậm Tím đậm Tím đậm 5.2 TÍNH TỐN: Qua số liệu trên, thấy từ ống nghiệm tới ống nghiệm không tạo màu với iot, bắt đầu ống nghiệm tạo màu với iot Do hoạt độ enzyme là: 32 * =64 đơn vị Trong đó: -20 độ pha lỗng dung dịch enzyme ống thứ -2 số miligam tinh bột ống nghiệm Vậy hoạt độ ml dung dịch enzyme : 25 *2 = 64 đơn vị -10 10 ống nghiệm - ống nghiệm thứ có độ pha lỗng lớn nhất, khơng tạo màu với iot - 25 độ pha loãng ống nghiệm thứ có độ pha lỗng lớn số ống không tạo màu với iot ...Lấy mẫu malt nghiền nhỏ, mẫu để xác định độ ẩm, mẫu để xác định hoạt độ amylase - Cân 5-10 g malt cho vào bình nón dung tích 250 ml Thêm vào 10 ml đệm... ống nghiệm tạo màu với iot Do hoạt độ enzyme là: 32 * =64 đơn vị Trong đó: -20 độ pha loãng dung dịch enzyme ống thứ -2 số miligam tinh bột ống nghiệm Vậy hoạt độ ml dung dịch enzyme : 25 *2... 25 *2 = 64 đơn vị -10 10 ống nghiệm - ống nghiệm thứ có độ pha lỗng lớn nhất, khơng tạo màu với iot - 25 độ pha loãng ống nghiệm thứ có độ pha lỗng lớn số ống không tạo màu với iot