Báo cáo thí nghiệm: ĐỊNH TÍNH ALKALOID TRONG DƯỢC LIỆU BẰNG PHẢN ỨNG HÓA HỌC VÀ BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG2KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID4XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO CÓ TRONG DƯỢC LIỆU9XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ IOD, CHỈ SỐ ACID, CHỈ SỐ XÀ PHÒNG VÀ CHỈ SỐ ESTER CỦA CHẤT BÉO11
BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU BÀI ĐỊNH TÍNH ALKALOID TRONG DƯỢC LIỆU BẰNG PHẢN ỨNG HĨA HỌC VÀ BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG I) Kết định tính Phương pháp chiết xuất alkaloid ● Chiết xuất alkaloid dung môi hữu môi trường kiềm ● Chiết xuất alkaloid nước acid ● Chiết xuất alkaloid cồn acid Định tính thuốc thử chung: cho biết có alkaloid hay khơng ❖ Theo thứ tự 1,2,3,4 định tính alkaloid với TT Bouchardat, TT ● Dragendorff, TT Valse - Mayer, TT Bertrand ống chứng Chiết xuất alkaloid dung môi hữu môi trường kiềm ● Chiết xuất alkaloid nước acid ● Chiết xuất alkaloid cồn acid Sắc ký lớp mỏng: cho biết có alkaloid a) Bản sắc ký Alkaloid Vong nem phương pháp chiết UV 365 nm b) Bản sắc ký Alkaloid dược liệu theo thứ tự 1,2,3,4 Bách bộ, Vong nem, Lá sen, Bình vơi UV 254nm UV 365nm TT Dragendorff * Sự phát UV 254 nm, 365 nm thuốc thử Dragendorff - UV 254 nm: tắt huỳnh quang rõ rệt với hầu hết alkaloid UV 365 nm: phát huỳnh quang rõ rệt với hầu hết alkaloid Thuốc thử Dragendorff: cho vết màu vàng cam II) Trả lời câu hỏi Tại Phương pháp 1, dược liệu phải làm ẩm với NH4OH trước chiết, PP2 không cần qua bước làm ẩm? - Để chuyển alkaloid dạng muối thể sinh vật thành dạng base tự tan dung môi hữu người ta thường ngâm tẩm mẫu dung dịch kiềm lỗng dung dịch amoniac - Ngồi ra, dược liệu làm ẩm trương nở, giúp cho dung môi thấm vào tế bào, kéo hoạt chất dễ dàng Tại định tính với thuốc thử chung phải sử dụng alk dạng muối nước acid - Vì thuốc thử alkaloid bền dung dịch kiềm, nên dung dịch thử cần có mơi trường từ trung tính đến acid nhẹ để quan sát thay đổi hoạt chất cho thuốc thử vào rõ ràng Ngoài dạng muối nước acid, lượng tạp chất kèm với alkaloid thấp, đảm bảo cho việc thực phản ứng định tính So sánh khả màu với thuốc thử chung phương pháp chiết khác - Trong phương pháp, phương pháp chiết xuất nước acid cho kết với thuốc thử rõ Giải thích: ● Phương pháp - Chiết xuất dung môi hữu môi trường kiềm: Dịch chiết xuất tinh khiết, lẫn tạp, hoạt chất chiết Do đó, kết thử màu không rõ ràng ● Phương pháp - Chiết xuất nước acid: Alkaloid tự nhiên tồn dạng muối, nước acid hòa tan alkaloid, giúp kéo triệt để hoạt chất dược liệu dịch chiết Bên cạnh đó, tạp hịa tan chloroform bị tách khác pha, giúp dịch chiết tinh sạch, cho kết phản ứng màu rõ ràng ● Phương pháp - Chiết xuất cồn acid: Cồn dung mơi vạn năng, cồn gần chiết alkaloid tạp chất cách không chọn lọc, gây không rõ ràng kết phản ứng Tại phải sử dụng dịch alk dạng base để định tính sắc ký lớp lỏng - Alkaloid dạng base có lẫn tạp chất, giúp phân đoạn sắc ký rõ ràng Vai trò amoniac pha động SKLM? - Amoniac chất kiềm yếu, thêm vào để hệ dung môi pKa + 2, làm gọn vết alkaloid ( tránh kéo vệt ) BÁO CÁO THỰC TẬP BUỔI KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID Dược liệu Định tính thuốc thử chung, thuốc thử đặc hiệu Định tính thuốc thử chung Định tính thuốc thử đặc hiệu Định tính • strychnin Mã tiền Chè • Định tính brucin • Phản ứng Murexid • Phản ứng Vitali – Mori Cà độc dược Hoàng đằng Sắc ký lớp mỏng so với chuẩn Trinh nữ hoàng cung UV 254nm UV 365nm Thuôc thử Dragendorff BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU BÀI KIỂM NGHIỆM TINH DẦU Tìm tạp chất Tìm H2 O Tìm dầu mỡ Tìm alcol Bột Na2SO4 bị chảy ướt ống nghiệm có chứa tinh dầu Tinh dầu có nước Sau hơ nhẹ bếp điện cho bay hết tinh dầu tờ giấy cịn lại vết mờ Có dầu mỡ tinh dầu Mực nước dâng lên cao ban đầu chưa cho tinh dầu vào tinh dầu có alcol Định tính thành phần số tinh dầu Định tính menthol tinh dầu Bạc hà Định tính eugenol có tinh dầu Hương nhu, Đinh hương Sau cho 3-5 giọt acid sulfuric đậm đặc vài tinh thể vanilin vào xuất màu đỏ cam, thêm giọt nước chuyển sang màu tím có menthol tinh dầu Sau thêm giọt dung dịch sắt (III) clorid 3% vào dung dịch xuất màu xanh rêu có eugenol tinh dầu Định tính cineol tinh dầu Tràm Tạo thành cineol phosphat chức kem, trắng ngà đến đỏ cam có cineol tinh dầu Định tính định lượng aldehyd tinh dầu Sả Sau cho dung dịch NaHSO3 bão hòa đặt cốc nước đá, vừa làm lạnh vừa khuấy kỹ khơng tạo thể chất giống kem phản ứng âm tính Định tính - Định lượng aldehyd toàn phần phương Lagneau - Hỗn hợp chuyển từ màu hồng sang màu vàng bền vững 15 phút Kết quả: Hàm lượng (%) aldehyd toàn phần là: X===15,77 (%) Với a: số ml dung dịch KOH 0,5 N mẫu thử b: số ml dung dịch KOH 0,5 N mẫu trắng P: khối lượng tinh dầu Sả Soi bột Mã tiền Mảnh nội nhũ Lơng che chở đơn bào Chè Biểu bì mang lỗ khí Hoằng đằng Sợi mơ cứng vách dày Cà độc dược Hạt phấn BÁO CÁO THÍ NGHIỆM DƯỢC LIỆU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO CÓ TRONG DƯỢC LIỆU Xác định hàm lượng chất béo có dược liệu Khối lượng đậu phộng = 10,07 g Khối lượng becher = 110,58 g Khối lượng sau cô = 112,58 g Khối lượng chất béo dược liệu = 112,58 – 110,58 = g Hàm lượng (%) chất béo dược liệu = x100 = 19,86 (%) Kiểm định dầu mỡ a) Định tính dầu Đậu phộng - Có tinh thể khơng màu bình hình thành tinh thể kali arachidat b) Định tính vitamin A dầu gan cá - Thêm vài giọt anhydrid acetic, lắc nhỏ vài giọt dd SbCl bão hòa cloroform vào hỗn hợp xuất màu xanh da trời bền Phản ứng Carr - Price Phản ứng định tính với acid sulfuric đậm đặc XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ IOD, CHỈ SỐ ACID, CHỈ SỐ XÀ PHÒNG VÀ CHỈ SỐ ESTER CỦA CHẤT BÉO Chỉ số acid = 5,61 x = 0,112 Trong đó: a : số ml dung dịch KOH 0,1 N dùng b: lượng chất thử tính gam Chỉ số xà phịng = =184, 72 Trong đó: a: số ml dung dịch HCl 0,5 N dùng cho mẫu trắng b: số ml dung dịch HCl 0,5 N dùng cho mẫu thử c: lượng chất thử tính gam Chỉ số ester - Nhỏ giọt H2SO4 đậm đặc vào xuất màu tím xanh chuyển sang nâu Chỉ số ester tinh theo công thức: CSE = CSX – CSA = 184,72 – 0,112 = 184, 61 ... đằng Sợi mơ cứng vách dày Cà độc dược Hạt phấn BÁO CÁO THÍ NGHIỆM DƯỢC LIỆU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO CÓ TRONG DƯỢC LIỆU Xác định hàm lượng chất béo có dược liệu Khối lượng đậu phộng = 10,07... Cà độc dược Hoàng đằng Sắc ký lớp mỏng so với chuẩn Trinh nữ hoàng cung UV 25 4nm UV 365nm Thuôc thử Dragendorff BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU BÀI KIỂM NGHIỆM TINH DẦU Tìm tạp chất Tìm H2 O Tìm... chất kiềm yếu, thêm vào để hệ dung môi pKa + 2, làm gọn vết alkaloid ( tránh kéo vệt ) BÁO CÁO THỰC TẬP BUỔI KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID Dược liệu Định tính thuốc thử chung, thuốc thử đặc